3.

5
DETERMINACIÓN DE ACETAMINOFÉN EN UN JARABE POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
(HPLC)

Adrián Espinal. 0827108. adferes@hotmail.com

Vanessa Morales García.0824540. sweetvane89@hotmail.com
Universidad del Valle. Facultad de Ciencias Naturales y Exactas.
Universidad Santiago de Cali, Marzo 06 de 2010
del Valle

3.5
RESUMEN

Se determinó el contenido de acetaminofén por medio del método de patrón externo utilizando
Cromatografía de alta eficiencia en fase reversa, en donde la fase móvil era una mezcla de
Metanol - agua. Para esto se determinaron las áreas picos de estándares de 4.000, 8.000, 12.00,
16.00 y 20.00 ppm y del analito en la muestra diluida. Por medio de una curva de calibración se
halló que la concccentración de acetaminofén presente en la muestra era de 415.9 mg/tableta
± 14.15݉݃ .Y el equipo, columna????
4.5
DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Concentración, ppm (x) Área (y) ±0.0001

4,000±0.045 366.9
8,000±0.058 714.1
12,00±0.075 1078.4
16,00±0.102 1469.5
20,00±0.180 1829.3
Concentración muestra
8.869 803.6

Curva Regular, HPLC

2000
y = 92.0050x - 12.4200
1500 R² = 0.9996
Área

1000
(y) área
500
0 Lineal ((y) área)
0 5 10 15 20 25
concentración, ppm

Grafica 1. Curva regular de calibración

La ecuación de la línea recta es

803.60±0.0001=ሺ92.005±3.2229ሻX+(-12.420±42.758)

Despejando se obtuvo:

X=8.8693±0.116190

mg 25.00ml±0.04 0.10000L±0.0001
8.8693 ൗL × × ×0.5628g=0.41597g
1.500ml±0.010 20.00mg±1.01

La concentración por tableta es de 415.970mg

Intervalo de confianza

I.C.= 415.9mg ± 14.15mg

DISCUSIÓN DE RESULTADOS 3.0

El método de HPLC es muy útil porque permite el estudio de numerosas muestras en un corto
período de tiempo manteniendo un alto nivel de precisión y reproducibilidad. En la práctica se
utilizaron soluciones patrón, las cuales se filtraron con una membrana para evitar obstrucciones de
partículas presentes en la fase móvil. Al graficar las áreas obtenidas frente a las concentraciones
se obtuvo un coeficiente de correlación de 0.999. Al reemplazar los valores en la ecuación de la
recta se halló la concentración la cual fue de 415.9mg/tableta, muy cercano al valor real
(500mg/tableta); lo cual indica que los errores fueron mínimos y se comprobó que el método de
HPLC tiene una gran precisión y una buena separación del analito de los demás componentes de
la muestra. Se cree que hubo una dispersión simétrica de velocidades de las moléculas del analito
en la fase móvil; además al trabajar a presiones y temperaturas constantes se evaporaron la gran
mayoría de los excipientes en la muestra quedando solo el analito de interés. Este método permite
la medición de fuerzas interactivas. La unión del analito y la fase estacionaria es proporcional a la
superficie de contacto en todo el segmento no-polar de la molécula de analito en asociación con el
ligando en el eluyente acuoso. La energía liberada en este proceso es proporcional a la tensión
superficial y la superficie hidrofóbica del analito y el ligando, respectivamente . La retención se
puede disminuir mediante la adición de un disolvente menos polar (metanol) en la fase móvil para
reducir la tensión superficial del agua. Al disminuir el tamaño de la partícula se origina una
disminución de la altura del plato y como consecuencia hay un aumento de la eficiencia. Se piensa
que debido al tamaño de la columna el análisis fue mucho más rápido disminuyendo el consumo
de solvente lo cual es apropiado pues el grado de pureza de este aumenta su costo y por ende se
dificulta su obtención.
Al comparar este método con el de ultravioleta se puede inferir que las soluciones empleadas en
la práctica de UV estaban bien preparadas dado que la cromatografía es un método mucho más
sensible y confiable a la hora de separar y cuantificar compuestos que el anterior demostrando que
los errores cometidos en la práctica anterior fueron al momento de manipular las celdas e
introducirlas en el equipo.

CONCLUSIONES 2.5

• Es necesario realizar una curva de calibración pues hay un volumen fijo y el área de cada pico
aumenta a medida que aumenta la concentración de tal modo se logra la cuantificación del
analito de interés.

• Para lograr una buena cuantificación del analito, es importante preparar unas buenas
soluciones estándar, ya que pueden significar una causa de error muy grande, además el
tratamiento de la muestra debe ser el adecuado porque se puede encontrar anomalías cuando
ésta eluya dentro de la columna.

• Se logró observar la alta precisión del método HPLC puesto que los porcentajes de error fueron
relativamente pequeños y la concentración de acetaminofén en la muestra resultó estar muy
cerca del valor real. Hay que mejorar las conclusiones.

PREGUNTAS 5.0
1 ¿Cuál es la composición de la columna C18 usada en la práctica? Explique.
R//.
El empaquetamiento se prepara con partículas de sílice, que se sintetiza por aglomeración de
partículas sub-micrónicas de sílice en condiciones que producen partículas más grandes y de
diámetro muy uniforme. La superficie de la sílice totalmente hidrolizada (hidrolizada por
calentamiento con HCl 0.1 M durante uno o dos días) está constituida por grupos silanol
químicamente reactivos. Los grupos SiOH presentes en la superficie del soporte poseen una gran
afinidad hacia las moléculas orgánicas polares y tienden a retenerlas por adsorción.

Los recubrimientos de la fase reversa más utilizados son los siloxanos, que se forman por reacción
de la superficie hidrolizada con un organoclorosilano:
Por lo general, el grupo R en estos recubrimientos es una cadena C8 (n-octilo) o una cadena C18
(n-octadecilo), dado que las cadenas más largas originan rellenos que muestran una mayor
1
retención. Además una mayor longitud de la cadena permite una mayor cantidad de muestra.

2. Si usted posee la opción de realizar un análisis por HPLC o cromatografía de gases, cuál
de los dos métodos recomienda? Por qué?
R//.
Recomendaría el método de acuerdo a la muestra que tenga por analizar. Si lo que se desea
analizar son muestras volátiles, de bajo peso molecular o no termolábiles lo ideal es trabajar con
cromatografía gaseosa, pero si lo que busco es separar especies no volátiles, con pesos
moleculares altos o termolábiles, tales como aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos,
hidrocarburos, carbohidratos, fármacos, antibióticos, etc., lo más conveniente es trabajar con
cromatografía líquida HPLC.

Cabe aclarar que ambas cromatografías pueden servir para compuestos con propiedades
intermedias con respecto a las requeridas en las dos cromatografías, pero para determinar cuál de
las dos técnicas se adapta más o da un resultado mejor es conveniente comprobarlos
experimentalmente. Pero si se trata de buscar la economía la cromatografía gaseosa es más
indicada, ya que la líquida requiere el uso de solventes de calidad HPLC, que son costoso y esto lo
que más se gasta en este tipo de cromatografía.

3. Explique por qué en HPLC realizar la cuantificación con curva de calibración es precisa
mientras que en cromatografía gaseosa es aconsejable realizarla con el uso de un patrón
interno.
R//.
En HPLC usar la curva de calibración es más preciso debido a que el flujo que se inyecta es un
poco mayor del que se inyecta en cromatografía gaseosa, además en HPLC el flujo es fijo ya que
el equipo consta de un loop, lo cual permite hacer fluir una misma cantidad de volumen en cada
inyección, mientras que en cromatografía gaseosa los volúmenes son muy pequeños y se
adicionan manualmente lo que dificulta garantizar la adición de un mismo volumen en cada
inyección, de esta manera se genera una incertidumbre frente a la inyección de la muestra
provocando un error relativo, por tal motivo es necesario adicionar un patrón interno para corregir
ese error de modo que se hace una relación de áreas (área del analito / área del patrón interno).
BIBLIOGRAFÍA 2.0

1. SKOOG, D.A. Fundamentos Química Analítica. 7ed. México. Editorial Mc Graw – Hill. 2000. pp.
770-772. pp. 829-830.

2. UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES. Página web:

http://www.qi.fcen.uba.ar/materias/ai/hplc2007.pdf

Resume 5% 3.5 0.18

Datos, càlculos y resultados 30% 4.5 1.35
Discuciòn de resultados 30% 3.0 0.90
Respuestas a la pregunta 20% 5.0 1.00
conclusiones 10% 2.5 0.25
Referencias 5% 2.0 0.10
Nota del trabajo 3.78
Descuento por tiempo de entrega 0
Descuento por tiempo formato 0
Descuento por cifras significativas 0.3
Nota final 3.48