Efecto de factores ambientales en el desarrollo de cepa bacteriana de

Escherichia coli

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Departamento de biología, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación.
Popayán-Cauca Universidad del Cauca

REULTADOS Y DISCUSIÓN
1. Determinación de la curva de crecimiento de un cultivo bacteriano
Tabla 1 Porcentaje de transmitancia obtenido en espectrofotómetro y valor de
absorbancia obtenido con base a Ecuación 2

T Tiempo
A
% (min)
95 0 0,02
94,5 20 0,02
94,5 50 0,02
91 75 0,04
88 99 0,06
85 119 0,07

Tiempo de generación
0.08
0.07
0.06
f(x) = 0 x + 0.02
Absorbancia

0.05
R² = 0.88
0.04
0.03
0.02
0.01
0.00
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (min)

Gráfica 1 Determinación de gráfica de tiempo de generación

2. Determinación de algunos factores ambientales en un cultivo bacteriano
Tabla 2 Efecto de factores ambientales en el desarrollo de cultivo de E. coli

Condición Cambios de pH
pH9 pH8

Crecimiento óptimo de muestra inoculada Crecimiento óptimo de cultivo, mucho

mayor que en pH 9
pH 7 pH 4

Baja tasa de crecimiento del cultivo Crecimiento reducido de microrganismos

Condición Cambios en la concentración de sales

[15] [10]

No se aprecia desarrollo de colonias No se aprecia la aparición de colonias, sin

 embargo el medio desarrolló dos burbujas
[5] [0,5]

No se aprecia el desarrollo de colonias Crecimiento reducido de cultivo de E coli

Condición Efecto de ondas de luz UV

Zona irradiada con luz UV no evidencia desarrollo de colonias de E. coli

Discusión

 Determinación de la curva de crecimiento de un cultivo microbiano

La espectrofotometría es un método de análisis que relaciona la absorción de la luz por
parte de un compuesto y su concentración. Cada sustancia tiene su espectro de absorción el
cual recae sobre una curva que muestra la cantidad de energía radiante absorbida
(absorbancia) por la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético.
Ecuación 1: Expresión matemática de la transmitancia
P 100 P
T= ó %T =
Po Po
Siendo T la trasnmitancia, la razón entre la luz monocromática de una sola longitud de onda
transmitida (P) por una muestra y la energía incidente (Po) sobre esta. (Ecuación 1)
Ecuación 2: Expresión matemática de la absorbancia
A=−log T =−log %T
La absorbancia (A), es definida como la cantidad de energía radiante absorbida por una
sustancia ya sea pura o en solución, correspondiente al logaritmo negativo de la
transmitancia expresada como porcentaje (%T) (Ecuación 2)[ CITATION Mar05 \l 9226 ].
Tras la obtención de los valores de transmitancia en los diferentes intervalos de tiempo en
cada muestra se calculó la observancia con base a la Ecuación 2, consignando dichos en la
Tabla 1. Comparando los datos de tiempo (en minutos) bajo estimulo de crecimiento
(temperatura de 37°C) y absorbancia a 660 nm de seis muestras se realizó la Grafica 1, a
partir de la cual se obtuvo la ecuación que relaciona las variables en cuestión.
El coeficiente de determinación (R2) es la proporción o porcentaje de variación total en Y
respecto a su medida; es una medida acotada, siendo sus límites 0 ≤ R2 ≤ 1. Un R2 igual a
1 representa un ajuste lineal perfecto, el valor 0 indica la no representatividad del modelo
lineal [ CITATION Mar05 \l 9226 ]. Para el caso, el valor de R2 es de 0,87 e indica un
acercamiento lineal aceptable.
En cuanto a la línea de tendencia obtenida, se aprecian dos fases de la población bacteriana:
de latencia y logarítmica. Correspondientes a la adaptación y activación para la replicación
del material genético respectiva para la multiplicación celular , continuo a la manifestación
del crecimiento poblacional de la muestra. De esta forma la estimación del tiempo de
generación (g) definido como el tiempo que tarda en duplicarse la población (Ecuación 3)
es posible teniendo como referente los cambios significativos de microrganismo de la
disolución.
Ecuación 3: Expresión matemática del tiempo de generación.
Tiempo de generación = t(A1) - t(A2)
Donde t representa el tiempo en minutos y A1 y A2, dos puntos sobre la escala de
absorbancia que representa una duplicación del valor de turbidez.
Para este cálculo se utilizó los valores de absorbancia de 0,4 y 0, 6:
Tiempo de generación = t (A de 0,6) - t(A de 0,4)
Tiempo de generación = 99 - 75
g = 24
 Efecto de factores ambientales tales como pH y medo alcalino, en el desarrollo de
E. coli
Tras el aislamiento y descripción en 1885 por Escherich, E coli constituye la enterobacteria
más conocida del genero Escherichia. Es una bacteria Gram negativa; mesófila, es decir, la
temperatura de desarrollo óptimo es de 35 a 43 °C, sin embargo, prolifera con facilidad a
37 °C (temperatura corporal de animales en los que comúnmente se hospeda en el
intestino). Así pues, la temperatura constituye uno de los factores que ejercen control sobre
la proliferación de E. coli[ CITATION Jua16 \l 9226 ].
Por otro lado, el pH también puede influir en el crecimiento de la cepa bacteriana en
cuestión. Canet (2016) indica que un pH de 7,2 brinda las condiciones óptimas para la
proliferación de E. coli, y adicionalmente postula que a pH extremos inferiores a 3,8 o
superiores a 9,5 el desarrollo de E. coli se detiene. Lo anterior concuerda con lo obtenido
(Tabla 2), dónde el crecimiento más notable se observó en el medio de cultivo de pH 8,
mientras que en pH inferiores a dicho el crecimiento fue notablemente menor; caso similar
ocurrió en el medio de cultivo de pH 9 donde a pesar de que existió el crecimiento notable,
el cultivo ostenta una menor adaptación en contraposición al de pH 8.
Adicionalmente, según Velasco, Moreno y Giraldo (2013) en su estudio Efecto de la
presencia de sales inorgánicas sobre la inactivación fotocatalítica de E. coli en agua,
señalan que las sales tienen una fuerte influencia sobre la inactivación fotocatalítica de E.
Coli, y que cada sal y su concentración afectan la desinfección de forma diferente. Ahora
bien, algunas sales como el NaCl son muy usadas para mantener el equilibrio osmótico de
las células y su presencia en dosis no muy altas puede resultar nociva [ CITATION Vel13 \l
9226 ]Tal fue el caso registrado, dónde los medios de cultivo con concentraciones salinas
de 10, 15 y 5 no presentaron desarrollo de E. coli, mientras que el medio 0,5 evidencia la
proliferación baja del microorganismo tal como se aprecia en la Tabla 2.
Otro factor ambiental que influye en la inhibición del crecimiento bacteriano de E. coli, es
la exposición a los rayos UV. La eficiencia de esta radiación en la inactivación de esta
bacteria es debido a que afecta directamente el material genético ADN (Tarrán, 2002). Lo
anterior concuerda con los resultados obtenidos en la Tabla 2, en donde la zona de la caja
de Petri que fue sembrada con E. coli y posteriormente expuesta a la luz UV, no presentó
ningún crecimiento bacteriano.
Uno de los principales efectos que tiene la luz ultravioleta sobre esta bacteria es la
dimerización del ADN, debido a la inducción de la formación de dímeros de pirimidina que
alteran las hélices de ADN y los bloques de replicación de las células microbianas, que
destruyen la capacidad de reproducción y otras funciones de la célula (Márquez y Pretell
2013).
Dentro de las estrategias con que cuenta la bacteria Escherichia coli para enfrentar
situaciones adversas como la exposición a una fuente radiactiva, se encuentra la respuesta
SOS, propuesta inicialmente por Ranman en 1974. Consiste de un grupo de
aproximadamente 30 genes que tienen que ver con reparación y/o tolerancia a daño
genético y confiere a la célula mayores posibilidades de supervivencia (Courcelle et al.,
2001). En condiciones normales los genes de SOS se encuentran reprimidos, pero al ocurrir
lesiones en el ADN se genera una señal que indique la expresión de dichos genes.
Bibliografía

Canet, J. J. (19 de Enero de 2016). Escherichia Coli: características, patogenicidad y

prevención (I). Obtenido de Betelgeux Chisteyns Food Hygiene:
http://www.betelgeux.es/blog/2016/01/19/escherichia-coli-caracteristicas-
patogenicidad-y-prevencion-i/
Martínez, E. (2005). Errores frecuentes en la interpretación del coeficiente de
determinación lineal. Real Centro Universitario.
Velasco, E., Moreno, A. L., & Giraldo, S. A. (2013). Efecto de la presencia de sales
inorgánicas sobre la inactivación fotocatalítica de E. coli. Ingeniería y Ciencia:9, no
17, 193-208.
Márquez L, Pretell C, Minchón C. 2013. Irradiación UV-C en frutas tropicales
mínimamente procesadas. Sci. Agropecu. 4(3):147-167
Courcelle, J., A. Khordusky., P. P. Brown y P. Hanawalt (2001). Comparative gene
expressions profiles following UV exposure in wild-type and SOS-eficient
Escherichia coli. Genetics. 158: 41-64
Tarrán, E. P., 2002. Desinfección por luz ultravioleta. Revista Agua
latinoamericana, 2, 28-35.