UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

MÉTODO DEL (Catión 2,2, – azinobis 3 – etilenbenzotiazolino-6 ácido sulfónico) (ABTS +)

PRINCIPIO
La base del método es la generación de un cromóforo catiónico radical ABTS + de larga duración y la
capacidad relativa de los antioxidantes para extinguir el radical en relación con Trolox, un análogo de la
vitamina E. Por lo tanto, la actividad antioxidante equivalente de Trolox se define como la concentración
de Trolox con actividad antioxidante equivalente a una concentración de 1 mM de la sustancia bajo
investigación. El método se lleva a cabo como un ensayo de decoloración, apropiado para sistemas
lipófilos (y acuosos) en el que el antioxidante se agrega al catión radical preformado producido en la
oxidación de un electrón de ABTS y se aplica al control de antioxidantes lipófilos tales como carotenoides
y extractos lipofílicos de componentes nutricionales (Fellegrini, Ke, Yang y Rice-Evans, 1999).

Objetivo: Dar a conocer la metodología para evaluar la actividad antioxidante en recursos vegetales.

MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos e instrumentos: Espectrofotómetro Uv – Vis, balanza analítica, agitador magnético, vasos de
precipitación, matraz aforado, micropipetas, tips (1000 y 200 µL), embudos, papel filtro, tubos de ensayo,
gradilla, cubetas de poliestireno para espectrofotómetro (1.5 mL).

Reactivos: 2,2, – azinobis 3 – etilenbenzotiazolino-6 ácido sulfónico) (ABTS +); (±)-6-Hydroxy-2,5,7,8-

tetramethylchromane-2-carboxylic acid (Trolox); ácido cítrico, persulfato de potasio; etanol 96°.

Metodología

Preparación de soluciones de trabajo. Preparar las siguientes soluciones:

- Stock de ABTS+ (mezclar 5 ml de 7 mM ABTS en agua con 88 uL de 140 mM de persulfato de
potasio en agua; dejar a temperatura ambiente por 12 – 16 horas antes de uso, protegido de la luz)
- Solución de trabajo de ABTS+, diluir el stock en etanol ~1:70 (ajustar Abs= 0.9-1.2 a 734 nm)
- Soluciones de trabajo de ácido ascórbico a concentraciones de 2.5 - 20.0 mg/100 mL.
- Soluciones de trabajo de Trolox 0 – 20 uM

b. Curva estándar. Se hará reaccionar 100 μL de solución de trabajo o muestra con 900 μL de ABTS +
(diluido) por 10 minutos en oscuridad, la absorbancia será registrada a 734 nm.

c. Coeficiente de inhibición (IC50)

Se determinará mediante un análisis de regresión de inhibición versus la concentración necesaria de los
extractos, para inhibir el 50% del radical ABTS +. Se hará reaccionar 100 μL de muestra con 900 μL de
ABTS+, la absorbancia será registrada a 734 nm, a intervalos de 30 segundos durante 10 minutos.
 UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

El porcentaje de inhibición del radical DPPH será calculado de la siguiente manera:

|¿ f|
%INH ABTS=|¿ i|− ¿¿
|¿ i|× 100 ¿

Donde:
Absf es la absorbancia del radical ABTS+ al final de la reacción
Absi es la absorbancia del radical al inicio de la reacción.

El valor de IC50, se obtendrá, reemplazando 50 en el eje de Y, en la ecuación que se obtenga al final de

procesar los datos (Y = ax + b)

RESULTADOS
Expresar los resultados como promedio ± S.D, tanto para los porcentajes de inhibición, como para el IC50

REFERENCIA

Fellegrini, N., Ke, R., Yang, M., & Rice-Evans, C. (1999). Screening of dietary carotenoids and
carotenoid-rich fruit extracts for antioxidant activities applying 2, 2′-azinobis (3-ethylenebenzothiazoline-
6-sulfonic acid radical cation decolorization assay. In Methods in enzymology (Vol. 299, pp. 379-389).
Academic Press.