UNIVERSIDAD NACIONAL ANDRES BELLO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE NUTRICIÓN Y DIETÉTICA

PRÁCTICO Nº 4

MEDICIÓN DE CLORUROS TOTALES EN ALIMENTOS

OBJETIVOS

Aplicar la técnica de volumetría por precipitación para determinar el contenido de cloruros totales en
diferentes alimentos.
Introducción
El análisis volumétrico o volumetría es una técnica que permite medir en forma cuantitativa una gran
variedad de compuestos en solución. Aplicada a alimentos, permite mediante una medición simple del
volumen de una solución de concentración conocida, determinar la concentración desconocida de
diferentes compuestos problema o analitos, tales como: acidez total en alimentos, contenido de calcio, de
vitamina C, de cloruros, etc.
La técnica ocupa instrumental sencillo y puede ser realizada a mano o con tituladotes automáticos. Para
realizarla a mano sólo requiere de un matraz donde colocar la muestra, pipetas para medir la muestra y
una bureta desde la cual agregar cuantitativamente la solución valorada, de concentración conocida o
patrón, (¿qué forma de expresión de concentración se usa en la solución patrón? ¿Por qué?) si se va a
titular la muestra con la solución patrón o, la muestra, si se va a titular el patrón con la muestra.

El procedimiento se conoce como valoración, volumetría, titulación y titración. Se basa en que la reacción
que se produce entre el componente de la solución patrón con el analito presente en la muestra es una
reacción estequiométrica. Es decir, que los componentes reaccionan cuantitativamente entre sí,
equivalente a equivalente. (Escriba un ejemplo y explique lo indicado)

En el proceso la solución patrón, o la muestra, según sea el caso se añade gota a gota hasta que ha
reaccionado con todo el analito, o el patrón. Entonces se mide el volumen agregado y mediante un
cálculo estequiométrico se calcula cantidad del compuesto problema y se expresa en al forma adecuada
para informar el contenido, generalmente en g/100 g o mg/100 g, dependiendo de la cantidad de
componente problema medido.

El final de la valoración se aprecia por un cambio notorio en la solución en el Erlenmeyer, generalmente

un cambio de color fácilmente visible o un cambio detectable por un instrumento, cambio de pH, cambio
de pendiente de una curva, cambio de potencial eléctrico de la solución, etc. Para visualizar dicho
cambio, es necesario agregar a la solución del Erlenmeyer una pequeña cantidad de una sustancia
llamada indicador

El final de la valoración, visualizado mediante el cambio del indicador o mediante el cambio instrumental,
se denomina punto de equivalencia o punto final. ¿Por qué?
Existen diferentes tipos de métodos volumétricos:

· Volumetría ácido-base: se basa en reacciones de neutralización. Busque un ejemplo de reacción

de interés en alimentos y escriba la ecuación.
· Volumetría redox, emplea reacciones de oxidación-reducción. Busque un ejemplo de reacción de
interés en alimentos y escriba la ecuación.
· Volumetría por precipitación: reacciones de solubilidad-precipitación. Busque un ejemplo de
reacción de interés en alimentos y escriba la ecuación.
· Volumetría de formación de complejos o complexometría: se basa en reacciones de
complejación. Busque un ejemplo de reacción de interés en alimentos y escriba la ecuación.

Parte experimental. Cloruros Totales en Queso.

El método es aplicable a: Carnes (conservas, embutidos), pescados, productos fritos y horneados.

Material:

Matraces Erlenmeyer de 250 ml.

Probetas de 100 ml.
Pipetas de 2, 5, 10 ml .
Bureta de 25 ml.
Agitadores magnéticos con calefacción o mecheros

Reactivos:

Nitrato de plata p.a.

Sulfato de hierro y amonio (alumbre férrica).
Acido nítrico concentrado.
Permanganato de potasio.
Tiocianato de amonio o tiocianato de potasio.
Agua destilada libre de cloruros.

Preparación de Soluciones:

1. Solución de nitrato de plata 0,1N

2. Indicador de alumbre férrico (sulfato de hierro (III) y amonio.
En un vaso de 50 ml, agregue 20 ml de agua destilada libre de cloruros acidificado con HNO3
concentrado, (5 ml de HNO3). Agregue alumbre férrica en cantidades crecientes hasta que no se
disuelva más sal en la cantidad de agua y queden cristales depositados al fondo del vaso.
Prepare esta solución en el día de uso. La solución debe ser amarillo claro. Si el precipitado de
sales es café significa que falta HNO3.
3. Solución saturada de permanganato de potasio.
Pese 5 g de permanganato de potasio en un vaso de 100 ml.
Agregue 50 ml de agua destilada libre de cloruros.
Agite con bagueta de vidrio hasta asegurarse de la máxima disolución.
4. Solución de tiocianato de amonio 0,1 N. Pese 7,612 g de tiocianato de potasio en un vaso de 250
ml, disuelva, vacíe y enrase en probeta de 1000 ml. Determine la concentración titulando una
alícuota con nitrato de plata 0,1 M o 0,1 N

Medición en muestra

1. Homogenice convenientemente la muestra en una mezcladora o corte la muestra en tiras muy

finas, pique y mezcle lo más posible.

2. Pese exactamente, 2 g de muestra en un vaso de precipitación de 250 ml.

 3. Agregue 100 ml de agua destilada libre de cloruros
4. Hierva por 10 minutos la muestra cubierta con placa de Petri para evitar pérdidas. Recupera
volumen si es necesario
5. Filtre en caliente la muestra total, por algodón hidrófilo en un matraz de 250 ml. Enjuegue con
una pequeña cantidad de agua destilada libre de cloruros
6. Agregue 5 ml de ácido nítrico concentrado. Agite
7. Agregue, con bureta, 25 ml de AgNO3 0,1 N (pre. Valorado). Agite
8. Enfríe totalmente el matraz, si es necesario ponga el matraz en agua fría.
9. Agregue 2 ml de solución saturada de sulfato de hierro y amonio (alumbre férrica). Agite
10. Titule de inmediato el exceso de AgNO3 con KSCN 0,1 M hasta que la solución tome un color
pardo-rojizo que permanezca por más de 30 segundos.

BLANCO DE MUESTRA (Hágalo en paralelo con la muestra)

Realice un blanco paralelo, reemplazando los 2 g de muestra por 2 ml de agua. Para ello, agregue los
25 ml de ácido nítrico caliente hasta ebullición por 5 minutos y agregue 10 ml de permanganato, siga
calentando por otros 10 minutos, si no decolora agregue cristales de ácido oxálico. Una vez decolorado
agregue los 10 ml de agua fría, los 2 ml de indicador y titule el blanco con tiocianato de potasio

Cálculos:

La reacción se produce entre le ión cloruro y el ión plata produciéndose un precipitado insoluble.
INVESTIGUE LA ECUACIÓN CORRESPONDIENTE A LA REACCIÓN.

Como usted agrega un exceso de reactivo de precipitación, es decir, más del necesario para
medir todo el cloruro de la muestra. Al titular con el tiocianato, Ud. realiza una retro-titulación, es
decir, titula lo que sobró de reactivo y no reaccionó con su analito problema, es decir el cloruro
en solución.

1 - Reste al gasto de tiocianato 0,1N del blanco el gasto correspondiente a la titulación que hizo en la
muestra. Así se obtiene el gasto de la muestra.
2 – Transforme el gasto de muestra en mili-equivalentes o en equivalentes de cloruro en la muestra.
3a- Exprese dichos mEq de cloruro en mg o g de cloruro en muestra
3b- Exprese dichos mEq de cloruro en mg o g de cloruro de sodio en muestra
4 – Exprese los mg de cloruro y de cloruro de sodio en muestra en gramos de cloruro y gramos de
cloruro de sodio por 100 g de muestra.

LAS FORMAS DE CALCULO Y DE TRANSFORMACION DE EQUIVALENTES A mg Y g ES MATERIA

DE QUÍMICA DE EDUCACIÓN MEDIA, POR LO TANTO NO DEBERAN PREGUNTAR LA FORMA DE
REALIZARLA SINO REESTUDIARLA DE MATERIAS ANTERIORES
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PRÁCTICO Nº 5

DETERMINACIÓN COLORIMETRICA DE CARBOHIDRATOS DISPONIBLES

OBJETIVO

Aplicar una técnica colorimétrica para medición de azúcares reductores en diferentes alimentos.

Aplicar una técnica de óxido-reducción utilizable para medición de azúcares reductoras en alimentos

INTRODUCCIÓN.

Los carbohidratos son uno de los componentes mayoritarios de muchos alimentos,

especialmente los preparados. Se presentan en forma libre o unidos a otras moléculas como glucolípidos
o glucoproteínas. Se pueden clasificar de acuerdo al número de monómeros constituyentes como
monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos. Pueden ser de tipo digeribles para el humano y se
comportan como una fuente importante de Carbono, Hidrógeno, Oxígeno y energía. Otros son
indigeribles y forman parte de la fibra dietaria del alimento. Los carbohidratos también contribuyen con
importantes propiedades funcionales en muchos alimentos, como por ejemplo, dulzor, apariencia,
generación de sabores, aromas y colores, apariencia y textura. Es importante determinar el tipo y
concentración de carbohidratos en los alimentos por varias razones:

· Estándares de identidad: los alimentos deben tener una composición química de acuerdo a ciertas
regulaciones.
· Rotulación nutricional: para informar a los consumidores del contenido nutricional de los alimentos,
a fin de que elijan sus alimentos de acuerdo a su dieta.
· Detección de adulteración: cada tipo de alimento posee un carbohidrato característico.
· Calidad del alimento: las propiedades fisicoquímicas de los alimentos como dulzor, apariencia,
textura y estabilidad depende del tipo y concentración de carbohidratos presentes.
· Económicas: a nivel industrial se desea utilizar ingredientes que no resulten muy caros (los
azúcares son baratos comparados con otros ingredientes como proteínas y aceites).
· Procesamiento de alimentos: la eficiencia de varias operaciones de procesado de alimentos
depende del tipo y concentración de carbohidratos presentes.

FUNDAMENTO

Existen varios métodos para la determinación de carbohidratos disponibles en alimentos.

Estos incluyen:
1. Por diferencia. El contenido de carbohidrato disponible se calcula luego de haber determinado las otras
fracciones del alimento mediante el análisis proximal:
Carbohidratos disponibles como extracto no nitrogenado (ENN) (%) =

100 - (% humedad + % cenizas + % grasa + % proteína + % fibra cruda)

Hidratos de carbono disponibles (%) =

100 - (% humedad + % cenizas + % grasa total ácida o básica + % proteína + % fibra dietética total)

La ventaja de este procedimiento es que no se necesita una determinación separada de esos

carbohidratos. Tiene la desventaja de introducir potencialmente un gran error debido a los posibles errores
que se hayan efectuado en las determinaciones proximales. El uso de la determinación de fibra dietética
total permite tener una mejor estimación de este parámetro

2. Refractometría. Es una técnica que mide cuanta luz es refractada cuando pasa a través de una sustancia
transparente determinada. La luz desviada define un ángulo con el cual se determina el llamado índice de
refracción que es característico para cada sustancia. Este índice de refracción permite identificar una
sustancia desconocida o puede ser usado para medir la pureza de una sustancia. De modo semejante se
puede utilizar para determinar la cantidad de sustancia disuelta en un medio definido, debido a la
proporcionalidad que presenta en relación con la concentración de sustancia presente.

Este método se basa en la medición del índice de refracción de una solución preparada a partir del alimento
y, como tal, es útil para estimar los azúcares presentes en solución verdadera, ya que el índice de refracción
depende de su concentración.

El método es útil para la determinación rápida del contenido de azúcares en alimentos, tales como
jugos de uva, duraznos, mermeladas, miel, melazas y productos de tomate. En la práctica, se utilizan los
instrumentos conocidos como sacarímetros, los que están calibrados directamente en el porcentaje de
azúcar.

3. Polarimetría. Esta técnica se basa en la medición de la magnitud en que una sustancia interactúa con el
plano de la luz polarizada. El método de medición aprovecha entonces el hecho que la rotación óptica que
producen algunas sustancias sobre el plano de la luz polarizada es dependiente de la concentración de
éstas en solución. La concentración de soluciones clarificadas de azúcares se puede medir aprovechando
que la rotación óptica de los azúcares ópticamente activos es dependiente de la concentración de azúcar en
solución.

Cuando se usa este método para la determinación de lactosa en leche, requiere clarificación
de la solución antes de la medición.

4. Densidad. La densidad de las soluciones acuosas aumenta a medida que aumenta la concentración de
azúcares. De este modo, la concentración de carbohidrato se puede determinar midiendo la densidad
mediante densímetros o hidrómetros. Esta técnica se emplea rutinariamente en la industria para determinar
concentración de azúcares en jugos y bebidas.

5. Infrarrojo. Los carbohidratos contienen grupos químicos que absorben radiación infrarroja en longitudes
de onda donde ninguno de los otros constituyentes principales del alimento lo hacen, por lo que su
concentración se puede determinar midiendo la absorbancia en el infrarrojo a esas longitudes de onda. Los
instrumentos para el análisis en el infrarrojo no son destructivos y efectúan mediciones rápidas y son muy
apropiados para el análisis en línea o para el laboratorio de control de calidad donde se analizan muchas
muestras rutinariamente.

6. Métodos colorimétricos. Varios métodos se basan en que ocurre una reacción entre los azúcares y
varios reactivos que generan color, cuya intensidad está relacionada con la concentración del azúcar
presente y su absorbancia puede ser medida y comparada contra una serie de estándares. Este fundamento
es la base de una variedad de métodos colorimétricos para determinar azúcares en alimentos.

Los reactivos de uso más común son los siguientes:

a) Antrona. Esta produce un color verde azulino con cualquier carbohidrato en condiciones ácidas de
reflujo, incluyendo almidón, y se puede usar para la estimación de carbohidratos totales en alimentos. La
medición se efectúa a 620 nm. Existe una relación lineal entre la absorbancia y la cantidad de
carbohidrato presente en la muestra. El método determina azúcares reductores y no reductores debido a
la presencia de ácido sulfúrico que es fuerte oxidante. El método no es estequiométrico y es necesario
preparar una curva de calibración usando una serie de estándares de concentración conocida de
carbohidratos.

b) Fenol-ácido sulfúrico. Es un método colorimétrico que determina la concentración de carbohidratos

totales en el alimento. A la muestra con carbohidratos se agrega fenol y ácido sulfúrico. La solución se
vuelve amarillo anaranjada. La absorbancia a 420 nm es proporcional a la concentración de
carbohidratos de la muestra. El ácido sulfúrico convierte todos los azúcares no reductores en reductores,
de modo que el método determina el total de azúcares presentes.

c) Fehling. El cobre alcalino forma un complejo violeta en presencia de azúcares reductores. La

absorbancia es directamente proporcional al contenido de azúcares presentes.

d) Acido pícrico. Este reactivo reacciona con los azúcares reductores y es reducido por tales azúcares a
ácido picrámico de color rojo, cuyo color puede ser medido por colorimetría. Este reactivo es explosivo,
lo cual limita su uso.

e) Acido 3,5 dinitrosalicílico (DNS). El DNS es similar al ácido pícrico en cuanto a que sólo reacciona con
los azúcares reductores. Es reducido por tales azúcares al correspondiente compuesto amino,
generándose un producto café-rojizo cuyo color es proporcional al azúcar presente y se puede medir
contra una serie de estándares. Este reactivo es ampliamente utilizado en la determinación de azúcares
y otras fracciones de carbohidratos luego de la hidrólisis de cualquier fracción no reductora a azúcares
reductores. Por ejemplo, se puede usar en la determinación de sacarosa luego de una hidrólisis ácida a
monosacáridos reductores, glucosa y fructosa, y en las etapas finales de la estimación de fibra dietaria
como polisacáridos no amiláceos, luego de la hidrólisis de la fracción final de polisacáridos a azúcares
reductores.

7. Métodos de titulación. Los azúcares reductores se pueden determinar por métodos que incluyen la
titulación de una solución del azúcar que se va a estimar contra una solución estándar de reactivo, tal como
en los métodos de reducción de cobre. También los azúcares pueden hacerse reaccionar con un exceso de
agente oxidante, como cloramina-T, y el agente oxidante restante se titula con un reactivo apropiado. En el
método de Lane-Eynon, se usa una bureta para agregar la solución de carbohidrato a un matraz que
contiene una cantidad conocida de solución de sulfato de cobre hirviente e indicador azul de metileno. Los
azúcares reductores reaccionan con el sulfato de cobre. Una vez que todo el sulfato de cobre ha
reaccionado, un agregado adicional de azúcar reductor produce un cambio de color en el indicador, de azul
a incoloro. El volumen de solución de azúcar requerido para alcanzar el punto final se anota y la
concentración de azúcar se interpola en una curva de calibración confeccionada con una serie de soluciones
estándares de concentración conocida de carbohidratos.

8. Métodos gravimétricos. El método de Munson y Walker se utiliza para determinar azúcares reductores
en una muestra. Los carbohidratos se oxidan en presencia de calor y un exceso de sulfato de cobre y
tartrato alcalino en condiciones tales que se forma un precipitado de óxido de cobre. La cantidad de
precipitado es proporcional directamente a la concentración de azúcar reductor de la muestra. La
concentración de precipitado se determina gravimétricamente y se lee en una tabla el equivalente a azúcar
reductor.

9. Métodos enzimáticos. Estos métodos son rápidos, muy específicos y sensibles y son ideales para
determinar carbohidratos en muestras de alimento. Se requiere poca muestra. Los alimentos líquidos se
pueden analizar directamente (ej. vinos, cerveza, jugos clarificados de fruta, etc.) o si son sólidos se deben
dispersar en agua (pulpas de fruta, manjar, mermeladas, etc.).

Los fundamentos más comunes de estos métodos se basan en:

a) Permitir que la reacción enzimática llegue a término y medir la concentración del producto, el cual es
proporcional a la concentración inicial de sustrato.
b) Medir la velocidad inicial de la reacción catalizada puesto que la velocidad es proporcional a la
concentración de sustrato

Existe una gama de métodos disponibles en base a kits rápidos. En el caso de glucosa, una muestra
de solución del azúcar es tratada con una enzima, hexoquinasa, en presencia de ATP. Eso transforma la
glucosa en glucosa 6 fosfato. La glucosa 6 fosfato enseguida reacciona con NADP en presencia de glucosa
6 fosfato deshidrogenasa para formar NADPH cuya cantidad es proporcional a la concentración de glucosa 6
fosfato. El NADPH es medido por espectrofotometría a 340 nm y, a partir de la diferencia entre este valor y el
del reactivo blanco, se calcula el contenido de glucosa de la muestra original. Para determinar fructosa, éste
azúcar es convertido a glucosa por una isomerasa y se repite el procedimiento anterior.

La concentración de otros azúcares como maltosa, sacarosa y otros glucósidos se determina

efectuando una hidrólisis previa, para liberar glucosa (o fructosa) y enseguida aplicando el método descrito.
La sacarosa es tratada con invertasa y la maltosa con alfa-glucosidasa. Se debe tener presente que las
glucosidasas pueden actuar sobre otros oligosacáridos que no son el de interés y generar monosacáridos,
con la consecuente inexactitud en el análisis.

10. Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Es un método instrumental que se basa en la
separación de azúcares en solución sobre la base de sus características diferenciales de adsorción en una
columna apropiada a alta presión, los que luego son detectados por un detector adecuado, el cuál, en el
caso de azúcares, a menudo se basa en medidas de índice de refracción. Los azúcares presentes son
identificados por el tiempo de retención y cuantificados por las áreas bajo los pics.

El método tiene la ventaja de ser muy rápido, sensible y relativamente simple de operar, y permite la
identificación y cuantificación de azúcares individuales cuando están presentes en una mezcla en un
alimento, por ejemplo en yoghurts de fruta.

Fundamento de la determinación colorimétrica de azúcares reductores mediante el método del ácido

3,5 dinitrosalicílico.

Este método es aplicable a compuestos con grupo carbonilo libre, los llamados azúcares reductores.
Implica la oxidación del grupo funcional aldehído cuando está presente en la glucosa y del grupo funcional
cetona en la fructosa. El ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) en ambiente alcalino forma un producto de
reducción café rojizo, el ácido 3-amino-5-nitrosalicílico, cuando se calienta en presencia del azúcar reductor.
La intensidad del color desarrollado a 540 nm, que es proporcional a la cantidad de azúcar reductor, se
puede utilizar para determinar el contenido de carbohidrato disponible del alimento, luego de la hidrólisis de
los polisacáridos y oligosacáridos a azúcares reductores.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Muestras. Alimentos varios con contenido de azúcares natural o agregados

El método es aplicable a diferentes tipos de alimentos.

Material y equipos.

- Espectrofotómetro y cubetas para rango visible

- Matraces para ebullición
 - Pipetas
- Matraces de aforo
- Solución estándar de glucosa al 25 mg/ml
- Acido sulfúrico 1,5 M
- NaOH al 10%
- Reactivo DNS

IV. PROCEDIMIENTO

1. Preparación del alimento

1.1. Alimentos sólidos, ej. cereales para desayuno - hidrólisis de carbohidratos disponibles a
azúcares reductores:

a) Moler el alimento finamente en un mortero y pesar con precisión 0,1 a 0,2 g en un tubo de ebullición.
b) Agregar 10 mL de ácido sulfúrico 1,5 M y calentar en un baño de agua en ebullición por 20 minutos,
agitando ocasionalmente, para hidrolizar polisacáridos y otros azúcares no reductores.
c) Enfriar y agregar cuidadosamente 12 mL de NaOH al 10%. Mezclar y filtrar en un matraz de aforo de
100 mL, lavando el tubo hacia el matraz con agua destilada. Completar a volumen con agua destilada y
homogeneizar por inversión.

1.2. Mermeladas, salsas, etc. - contenido de azúcar total:

a) Pesar con precisión 1,0 - 1,2 g de la pasta en un tubo de ebullición.

b) Agregar 10 mL de ácido sulfúrico 1,5 M y calentar en un baño de agua hirviendo por 20 minutos,
agitando ocasionalmente, para hidrolizar los azúcares no reductores.
c) Enfriar y agregar cuidadosamente 12 mL de NaOH al 10% y mezclar.
d) Filtrar en un matraz de aforo de 100 mL, lavar el tubo hacia el matraz con agua destilada y completar a
volumen con agua destilada. Mezclar bien invirtiendo el matraz varias veces.
e) Diluir 10 mL de esta solución a 250 mL con agua destilada en un matraz de aforo y mezclar bien
invirtiendo varias veces el matraz.

1.3. Mermeladas, salsas, jarabes, etc. - contenido de azúcares reductores:

a) Pesar con precisión 3 g de pasta en un matraz Erlenmeyer de 250 mL, agregar 50 mL de agua, entibiar
y agitar por 10 minutos.
b) Filtrar en un matraz de aforo de 100 mL, lavar el residuo en el matraz con una pequeña porción de agua
destilada. Homogeneizar invirtiendo el matraz varias veces.
c) Diluir 10 mL de esta solución a 250 mL con agua destilada en un matraz de aforo y mezclar bien.

2. Preparación de las soluciones estándar de glucosa

Preparar soluciones de glucosa de 0,25 – 0,5 – 0,75 – 1,0 – 1,25 y 1,5 mg de glucosa por ml, en
matraces aforados de 100 ml, a partir de una solución stock que contiene 25 mg/ml de glucosa, usando agua
destilada para diluir
3. Mediciones de absorbancia.

Tabla 1.- Esquema de marcado de tubos, agregado de reactivos y registro de lecturas de

absorbancia de experiencia a realizar.

Tubo Estándar Muestra Agua Reactivo Concentración Lecturas

destilada DNS de estándar por Absorbancia
tubo (mg)
1 1 ml 0 1 ml 0.25
2 1 ml 0 1 ml 0.50
3 1 ml 0 1 ml 0.75
4 1 ml 0 1 ml 1.00
5 1 ml 0 1 ml 1.25
6 1 ml 0 1 ml 1.50
7 0 1 ml 0 1 ml --
8 0 1 ml 0 1 ml --
B 0 0 1.0 ml 1 ml 0 mg

Soluciones estándar de glucosa. Pipetear 1 ml de agua destilada en un tubo de ensayo (blanco), y en

otros 6 tubos de ensayo rotulados pipetear 1 mL de cada solución estándar de glucosa 0,10 a 0,01%).
Agregar 1 mL del reactivo DNS a cada tubo.

Hidrolizado. Pipetear 1 mL del hidrolizado preparado en 1.1. o 1.2., o 1 mL de la solución preparada en 1.3.
en un tubo de ensayo y agregar 1 mL de reactivo DNS. AGREGAR EL REACTIVO CON CUIDADO
UTILIZANDO PROPIPETA O TORNILLO, SI LE CAE EN LAS MANOS LAVE INMEDIATEMENTE CON
ABUNDANTE AGUA HASTA ELIMINAR SENSACIÓN DE JABÓN EN LAS MANOS, SEGUIR LAVANDO
CON AGUA POR LO MENOS OTROS CINCO MINUTOS.

Estándares e hidrolizado. Calentar todos los tubos en un baño de agua en ebullición durante 5 minutos
para permitir que ocurra la reacción entre el azúcar reductor y el DNS. Enfriar, agregar a cada tubo 10 mL de
agua destilada y agitar bien. ANTES DE AGITAR TAPAR EL TUBO DE ENSAYO CON PARAFILM PARA
EVITAR QUEMARSE CON EL REACTIVO. Leer la absorbancia de cada solución a 540 nm. AL VACIAR
EL TUBO EN LA CUBETA, DEBE TENER CUIDADO PORQUE EL REACTIVO DE DNS ES CORROSIVO

Cálculos.

Determinar la curva estándar o patrón utilizando los valores de absorbancia obtenidos

para los diferentes estándares mediante regresión lineal. Use calculadora o computador para determinar
la ecuación de la recta.

Calcule la concentración de glucosa en la alícuota utilizada y calcule el contenido en porcentaje. Si el

valor obtenido en gramos por 100 gramos de muestra es menor de uno exprese el resultado en
miligramos de glucosa por 100 gramos de muestra