INFORME DE ENZIMAS

DIANA PARRA VERNAZA

BIOLOGIA CELULAR
UNIVERSIDAD ANTONIO NARIÑO
BOGOTÁ
2020

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1. Metodología

Se ha adaptado la guía para realizar una experiencia similar en casa, con materiales que se pueden conseguir
localmente en una droguería. Antes de iniciar, asegúrese de conseguir los materiales que se indican en la tabla 1 y
observe los siguientes videos para tener una orientación previa del trabajo.

1. Experimento Biología / Química con la Enzima Catalasa. Generación de Oxígeno.

https://www.youtube.com/watch?v=5_H9rtxUs3Q

2. Reconocimiento y desnaturalización de la Catalasa

https://www.youtube.com/watch?v=lDdKapD9QDU

3. Actividad enzimática 1: Catalasa

https://www.youtube.com/watch?v=eF3JsOYeN-k

Tabla 1. Materiales, reactivos y equipos requeridos.

Materiale Reactivos Equipos
s* *
Nomb Cantidad Nombre Fórmu Cantid
re la ad
Frascos plásticos para muestras 8 Agua oxigenada o H2O2 1 frasco Licuadora
de orina unidades peróxido de hidrógeno
Goteros 2 Agua H2O - Refrigerado
unidades r
Plato tintero o Trozo de vidrio 1 Vinagre o ácido acético CH₃CO - Estufa
OH
Cuchillo 1 Solución con soda NaHCO -
caustica o bicarbonato de ₃
soda
Licuado de hígado de res 50 mL
(1 pocillo tintero)
*Utilice los reactivos como vienen comercialmente o agregue una cantidad que permita soluciones concentradas.

3.1. Preparación del homogeneizado (se realiza en casa)

 Corte pedazos pequeños de hígado de res.
 Colóquelos en la licuadora, agregue poca agua y licue.
 Filtre el licuado utilizando un trozo de gasa (tela porosa), para obtener un homogeneizado de hígado
(HH).
 Deposite el homogeneizado de hígado (HH) en un frasco plástico (preferiblemente en uno de orina,
que venden en la droguería), y llénelo hasta las 3 cuartas partes del frasco.
 En casa, usando un gotero, coloque 3 gotas del homogeneizado de hígado sobre un plato tintero
(trozo de vidrio) y añada tres gotas de agua oxigenada (peróxido de hidrógeno).
 Consigne sus resultados y observaciones. Tome fotos.
Resultados
 En dos segundos se crearon burbujas al añadirle agua oxigenada
 Este efecto duro alrededor de 30s.
 Las burbujas fueron de tamaño mediano.
 Separa en 2s la catalasa el compuesto de agua oxigenada formando agua y oxígeno.
 Las burbujas no tienen un tamaño uniforme.

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3.2. Efecto de la temperatura sobre la Catalasa (ver video 2)
 Rotule tres frascos plásticos (1-3).
 Añada 1 cucharada sopera de homogeneizado de hígado a cada frasco.
 Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas por 15 minutos (tabla 2). La fracción cocida debe
dejarse reposar antes de adicionar el agua oxigenada.
 Añada 10 gotas de agua oxigenada a los tubos 1 a 3.
 Determine el tiempo de producción de burbujas en cada tubo y regístrelos resultados en la tabla.
 Compare sus resultados en términos de tiempo de reacción vs temperatura. Tome fotos.

 FRASCO NÚMERO 1:
este frasco duro 15 minutos en el refrigerador.
el frasco tomo como una especie de neblina.
Se agrego diez gotas de agua oxigenada.

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las burbujas duraron en crearse 2.57s a temperatura baja.

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 FRASCO NÚMERO 2:

o Este frasco se dejó en temperatura ambiente.

o Duro 15 minutos en esta temperatura y se agregó 10 gotas de agua oxigenada.

o Tardo 3.15s en reaccionar y separar la catalasa el agua y oxígeno.

o Este frasco reacciono un poco mas tarde que el frasco 1.

o Sus burbujas fueron de un tamaño mediano.

o No tuvo cambio de color el homogenizado.

o Las burbujas crecieron debajo de la superficie del frasco.

 FRASCO NÚMERO 3:

o en este frasco se uso una temperatura alta en el frasco durante 15 min.

o Tomo un tono café medio.

o El homogenizado desprendió un líquido transparente.

o No surgieron burbujas antes o después de aplicarle las 10 gotas de agua oxigenada.

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 o La mezcla creo un líquido amarillo.

Tabla 2. Tratamientos para observar el efecto de la temperatura sobre la catalasa.

Tubos Temperatura Tiempo

1 Cocción 15 min
2 Temperatura ambiente 15 min
3 Refrigeración 15 min

1.1. Efecto del pH sobre la catalasa

 Rotule tres frascos de 1-3.
 Añada 1 cucharada de homogenizado de hígado a cada frasco.
 Añada 30 gotas o 1 mL de ácido acético o vinagre (Tubo 1), soda caustica o bicarbonato de sodio
(Tubo 2), agua (Tubo 3) (tabla 3) y agite suavemente hasta mezclar bien. Deje los tubos a temperatura
ambiente por 10minutos.
 Añada 10 gotas de agua oxigenada (peróxido de hidrógeno) a los tubos 1 a 3.
 Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se inicia la producción de
burbujas, en cada tubo y regístrelo en la tabla.
 Compare sus resultados en términos de tiempo de reacción vs pH. Tome fotos.

FRASCO NÚMERO 1:
 En este frasco se añadió 30 gotas al homogenizado de vinagre.
 Se agito levemente.

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  se dejo en temperatura ambiente por 10 min.
 se agregó 10 gotas de agua oxigenada
 No se crearon muchas burbujas.
 Las burbujas fueron de tamaño pequeño.
 Duraron en crearse 10s las burbujas.

FRASCO NÚMERO 2:
 Se le agrego 30 gotas de bicarbonato de sodio.
 se agito de forma leve.
 Este frasco se dejó en temperatura ambiente durante 10 min.
 Después de los 10 min se añadió 10 gotas de agua oxigenada.
 Creo burbujas grandes.
 no tuvo cambio de color.

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 

FRASCO NÚMERO 3:
 Se agrego 30 gotas de agua.
 Se agito de forma leve.
 Se dejo durante 10 min a temperatura ambiente.
 Luego se añadió 10 gotas de agua oxigenada.
 Se creo mas espuma que burbujas
 Su color permaneció.
 No creció esta espuma.

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 Tu Reactivo Tiempo (segundos)
bo
1 Ácido acético o vinagre 10 s
2 Soda caustica o bicarbonato 15 s
3 Agua 11 s

Tabla 3. Tratamiento del efecto del pH en la actividad de la catalasa

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2. Preguntas de Profundización

1. Diferencie entre cofactor y coenzima

a. Los cofactores son sustancias que aumentan específicamente la actividad de una enzima
mientras las coenzimas son moléculas que participan en las reacciones de oxido-reducción
que ocurren en el organismo.
2. ¿Qué es una enzima alostérica?
a. Las enzimas alostéricas son proteínas con múltiples lugares activos. Presentan
cooperatividad de unión del sustrato (homoalosterismo) y una regulación de su actividad
por otras moléculas efectoras (heteroalosterismo).
3. Defina centro activo y complejo enzima-sustrato
a. Centro activo: Es la región de la enzima que se une al sustrato, y tiene las siguientes
características:
 Es una parte muy pequeña del volumen total de la enzima.
 Están formados por aminoácidos que quedan próximos por los repliegues de la
cadena polipeptídica, aunque estuvieron lejanos en la cadena original.
 Tienen una cadena tridimensional en forma de hueco en el que encaja el sustrato.
b. Complejo enzima-sustrato:
 Es el intermediario que se forma cuando la molécula de sustrato interactúa con el
punto activo de una enzima. Tras la formación del complejo enzima-sustrato, la
molécula de sustrato sufre una reacción química y es transformada en un nuevo
producto.
4. ¿Es lo mismo el centro activo que el centro alostérico? Explique
a. No son lo mismo, aunque los dos sean un sitio de unión. El centro alostérico causa un
cambio en la conformación de la proteína que modifica la actividad de su centro activo.
5. ¿Qué diferencia hay entre la inhibición competitiva y no la no competitiva?
a. La inhibición competitiva, es aquel inhibidor que puede unirse a una enzima y bloquear la
unión del sustrato, por ejemplo, al pegarse al sitio activo. El inhibidor “compite “con el
sustrato por la enzima. En la inhibición no competitiva el inhibidor no bloquea la unión del
sustrato con el sitio activo, sino que se pega a otro sitio y evita que la enzima haga su
función, se dice que esta inhibición es “no competitiva” por qué el inhibidor y sustrato
pueden estar unidos a la enzima al mismo tiempo.
6. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?
a. La temperatura puede afectar la velocidad de la reacción enzimática, a valores superiores la
actividad disminuye sufre procesos de desnaturalización.
7. ¿Cómo se relacionan el pH y la actividad enzimática?
a. La actividad de una enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la reacción. La
relación del pH y la actividad de la coenzima depende del comportamiento ácido-base de la
enzima y del propio sustrato. El pH determina ciertos aspectos de la actividad enzimática.
8. Qué es la catalasa, donde se produce en la célula, que beneficios ofrece al organismo.
a. La catalasa es una enzima que cataliza la reacción de descomposición del peróxido del
hidrogeno en agua y oxígeno. Se produce en los peroxisomas y su beneficio en el organismo
 es romper las moléculas del agua oxigenada que se produce en el hígado para formar agua
y oxígeno para liberar en gas hacia la sangre.
5. Simulaciones virtuales

1. http://www.bio-alive.com/animations/biochemistry.htm
2. https://www.mhhe.com/biosci/genbio/virtual_labs_2K8/labs/BL_02/index.html

6. Informe
Presente un informe (documento Word) incluyendo los resultados obtenidos en el procedimiento previamente
descrito, análisis de resultados y la solución de las preguntas de profundización.
Incluya un análisis breve de los resultados o aprendizaje en las simulaciones virtuales (numeral 5). Incluya las
fotos de cada ensayo.

INFORME:

ANALISIS DEL PUNTO 3.

1. En el primer procedimiento se licuo el hígado, se filtro en una gasa para que se creara una mezcla
homogenizada esta se vertió en una muestra de orina. Luego se tomo una muestra del homogeneizado
con un gotero, se uso solo tres gotas estas se pusieron en un plato tintero y se le agrego encima tres
gotas de agua oxigenada.
Se tomo el tiempo de reacción, esta reacción fue una serie de burbujas en la superficie de la mezcla.
 Estas burbujas duraron 30 minutos, despues se creo una capa amarilla con pocas burbujas y la Esto
efecto se hizo, ya que la catalasa ha roto las moleculas de agua oxigenada en H 2 O y O 2
El homogenizado se torno oscura.

2. Para el experimento dos, este procedimiento se puso en tres diferentes frascos y temperaturas para
mirar la relacion de la temperatura con la activida enzimatica pero con el mismo tiempo (10 min).

Al observar cada frasco se pudo determinar que cada uno tiene un diferente tiempo de reacción
alcompuesto, van a tener un margen de error pequeño en segundo, la reaccion va a ser mas que otra
dependiendo de este factor.

Tambien se pudo observar la desnaturalizacion de la catalasa en cada frasco.

3. En el experimento número 3 se agregraron diferentes reactivos en cada frasco con homogenizado

como: el vinagre, bicarbomato de sodio y agua. Cada frasco espero durante 10 minutos a temperatura
ambiente, se aplico agua oxigenada. Esta reaccion causo burbujas en los diferentes frascos; cada
frasco obtuvo un tamaño diferente es burbujas.
Al esperar varios minutos se noto unas manchas blancas en cada frasco.
El fin de este experimento es observar el efecto del pH sobre la catalasa.

El vinagre es un acido este no tuvo gran impacto con el agua oxigenda y la homogenizacion.
El bicarbotato es un basico, este junto con el agua oxienada crearon burbujas grandes con mayor
volumen.
El agua al prinpio no causo gran cambio en la homogenizacion, pero al añadir aua oxigenada este
produjo burbuja de tamaño mediano.
ANALISIS DEL PUNTO 5:

Primer simulador:
Este simulador de laboratorio nos enseña, la cinetica quimica y
enzimatica y su relacion, pero de acuerdo al complejo de la
enzima con sustratos unidos, la cinetica enzimatica solo se
correlacionan bien con la cinetica quimica el los casos
extremos con sustrato muy limitado o gran exceso de sustrato.
Segundo simulador:
En el segundo simulador en la parte izquierda podemos encorntrar, como el pH hace efecto en las enzimas. Pone
un claro ejemplo de como los lacteos pueden afectar a personas con problemas de intolerancia a la lactosa; estas
personas no tienen suficientes enzimas que rompan la lactosa.
En el simulador de la parte derecha nos muestra como la lactosa y la galactosa pueden alterar el pH generando
aumento o disminucion de la produccion de moleculas formadas por minuto.
Bibliografía:

https://es.slideshare.net/CARLOSANTONIOALAYO/enzimas-2008-i
https://es.slideshare.net/CARLOSANTONIOALAYO/enzimas-2008-i
https://biologia-geologia.com/biologia2/452_el_centro_activo_de_las_enzimas.html
http://avalon.utadeo.edu.co/servicios/ebooks/biologia_conceptos/files/assets/basic-html/page98.html

https://www.biodic.net/palabra/complejo-enzima-sustrato/#.Xp9m_shKjIU
https://glosarios.servidor-alicante.com/genetica/centro-alosterico
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/32%20INVERTASA%20CINETICA.pdf
https://www.youtube.com/watch?v=MOOnlgqYl-w&t=123s