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UNIVERSIDAD DE SANTANDER – UDES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FÍSICAS Y NATURALES


DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES

Biociencias II Bioquimica
TALLER DE ENZIMAS

MsC Leidy Viviana Novoa Lizarazo

CONCEPTOS GENERALES

Las enzimas prácticamente permiten el fenómeno de la vida al permitir que las rutas metabólicas o
las reacciones ocurran a la suficiente velocidad para que puedan ser acopladas en tiempo y espacio
a todas las actividades relacionadas con el concepto de vida, por tanto la regulación enzimática
desempeña un rol fundamental en el control de los procesos metabólicos.

Las enzimas son proteinas con función catalizadora, ellas aceleran la velocidad por la cual una
reacción llega al equilibrio, aumentando por lo tanto la transformación del sustrato en su producto.
Su función catalizadora la realiza sin afectar su configuración inicial, la constante de equilibrio de la
reacción, ni las características termodinámicas del sistema.

S + E ES P + Enzima Regenerada

Las enzimas interaccionan con el substrato a través de un sitio que se llama sitio activo, el cual esta
formado a su vez por el sitio de unión y el sitio catalítico. A la facilidad con la que el substrato
interacciona con la enzima se le llama AFINIDAD y la selectividad con la que interactúan solo con
ciertas y determinadas estructuras (sustratos) define la ESPECIFICIDAD.

CINETICA ENZIMATICA

La cinética se refiere al estudio de la velocidad de cambio de reactivos a productos durante una


reacción química. La velocidad de una reacción puede definirse como el cambio de la concentración
de substrato o producto por unidad de tiempo.

Al analizar la velocidad de una enzima en función de la concentración de sustrato se pude definir la


siguiente curva hiperbólica, en donde:
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Para las concentraciones bajas de sustrato, la velocidad de la reacción es directamente proporcional


a la concentración del sustrato (lineal), cinética de primer orden, para concentraciones intermedias
la velocidad del proceso deja de ser lineal cumpliéndose la cinética hiperbólica hasta alcanzar un
valor de velocidad en el que la cantidad de enzima se hace limitante (saturación) y se alcanza la
velocidad máxima (Vmax) de la reacción, para las concentraciones altas de sustratos la velocidad
de la reacción es prácticamente constante e independiente de la concentración de sustrato, así
aumentemos la concentración de sustrato la velocidad no va a variar, en este punto la cinética se
considera de orden cero.

La reacción enzimática la podemos dividir en dos etapas, una etapa de unión al sustrato y otra etapa
catalítica, donde se muestran las constantes instantáneas de velocidad (K1, K2, k3 y K4), al
interpretar esta ecuación vemos que cuando una enzima reacciona con su sustrato forma el
complejo ES a una constate de velocidad K1, la disociación del complejo ES en S+E la define la
constante de velocidad K2, mientras K3 representa la velocidad de formación del producto y
k2+k3/k1 = Km.

K1 K3
E + S ES E + P
K2

Concepto de Km
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El termino Km se relaciona con la afinidad de la enzima, el km indica cuan afín es una enzima con su
sustrato y representa la concentración de sustrato necesaria para obtener la mitad de la Vmax, de
manera general mientras menor sea el valor numérico de km mayor será la afinidad que la enzima
presenta por su sustrato, al definir afinidad permite por ejemplo predecir cuándo una enzima es
activa sobre dos sustratos, cuál de los dos sustratos será preferentemente catalizado por la enzima,
o cuando se comparan dos enzimas diferentes, cual presenta mayor afinidad hacia un determinado
sustrato.

Ecuación de Michaelis-Menten.

Donde,
Vo = velocidad inicial
Vmax = velocidad máxima
Km = constante de Michaellis-Menten
[S] = concentración de sustrato

Esta ecuación define una cinética enzimática (curva hiperbólica), se dedujo al estudiar la velocidad
de una enzima en función del sustrato y se basa en las siguientes tres suposiciones:

1. La concentración de ES permanece constante en el trascurso de la reacción.


2. Bajo condiciones de saturación toda la E está en forma de ES
3. Cuando toda la E se encuentra en la forma ES la velocidad de la reacción es máxima

La ecuación de Michaellis-Menten la podemos aplicar para analizar el comportamiento enzimático


con respecto al sustrato, al igual que para determinar valores de Km y Vmax, despejándolos en la
ecuación.

Analizando los conceptos revisados y haciendo una búsqueda bibliográfica, desarrolle las
siguientes preguntas:

1. En el musculo del adulto normal existe una enzima (E1) que cataliza la reacción S→P. En el
cerebro del adulto normal contiene otra enzima (E2) la cual cataliza la misma reacción. Se
desea conocer cuál de las dos enzimas presenta mayor afinidad hacia el sustrato.

Los datos experimentales para estas dos enzimas son los siguientes:
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[Sustrato] (Moles /L) Velocidad Micromoles / min


E1 muscular E2 cerebro
5.0 x 10-6 5.4 4.0
1.3 x 10-5 12.0 9.4
1.5 x 10-5 14.0 10.6
3.0 x 10-5 22.8 18.0
5.0 x 10-5 30.0 25.0
1.0 x 10-4 40.0 35.0
2.0 x 10-4 48.0 44.4
2.0 x 10-3 60.0 70.0
2.0 x 10-2 60.0 70.0
2.0 x 10-1 60.0 70.0

a. Determine cual es la Vmax para cada enzima


b. Determine cual enzima tiene mayor afinidad por el sustrato. Justifique su respuesta.

2. Complete el siguiente cuadro respecto a la clasificación de las enzimas:

Clase Función (Tipo de reacción catalizada) Ejemplo


Reacciones de oxidoreducción

Transaminasas

Hidrolasas

Eliminación de grupos para formar


dobles enlaces
Reacciones de
isomerización
Ligasas

3. Observe el siguiente video https://www.youtube.com/watch?v=HS6hplUmoDI y


responda:
a. Que es el sitio activo de una enzima?
b. Como afecta la temperatura y el pH la acción catalítica de la enzimas?
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4. Las personas con intolerancia a la lactosa, ¿pueden comer yogurt?. Compare su respuesta
con la ingesta leche para las mismas personas. (Identifique la enzima, su función, cuál es
su sustrato, mecanismo de acción, analice el problema y de una respuesta.).

Inhibición y regulación Enzimática

La actividad de las enzimas puede inhibirse. Las moléculas que reducen la actividad de una enzima,
denominadas inhibidores, incluyen muchos fármacos, antibióticos, conservantes alimentarios y
venenos. Las investigaciones de la inhibición enzimática y de los inhibidores llevada a cabo por los
bioquímicos son importantes por varias razones. En primer lugar, y la razón más importante, en los
seres vivos la inhibición enzimática es un medio importante para regular las rutas metabólicas.
Habitualmente, para modular las velocidades de las reacciones enzimáticas específicas se emplean
pequeñas biomoléculas, de forma que se satisfagan las necesidades del organismo. En segundo
lugar, numerosos tratamientos clínicos se fundamentan en la inhibición enzimática. Por ejemplo,
muchos antibióticos y fármacos reducen o eliminan la actividad de enzimas específicas.

5. Se ensayó la acción de un inhibidor I a la concentración de 1nM, sobre la velocidad de una


enzima E en función de concentraciones del Sustrato S crecientes, obteniéndose los
siguientes datos:

Velocidad (nmol/min)
Sustrato (µM)
Con el Inhibidor Sin el Inhibidor
2,50 12,00 33,33
5,00 23,08 60,00
10,00 42,86 100,00
20,00 75,00 150,00
40,00 120,00 200,00
60,00 150,00 225,00
100,00 187,50 250,00
200,00 230,77 272,73
400,00 260,87 285,71
800,00 279,07 300
1600,00 300 300
3200,00 300 300
6400,00 300 300

a) Indique cual es la Vmax y el Km, en presencia y ausencia del Inhibidor.

b) Clasifique el Inhibidor.
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6. Un hombre de 50 años acude al hospital con fatiga general, rigidez de hombro y cefalea.
Mide 1,80 m y pesa 84 kg. La presión arterial es de 196/98 mmHg (valor normal, inferior a
140/90 mmHg; valor óptimo, inferior a 120/80 mmHg) y la frecuencia del pulso de 74. Se
diagnostica hipertensión y se administra captopril (un IECA). A los 5 días de tratamiento la
presión arterial es casi normal.
a. Que es la hipertensión arterial
b. ¿Cual es el mecanismo de acción del captopril?
c. ¿Que tipo de inhibición enzimática ejerce el captopril?

7. Mujer de 65 años de edad que presenta dificultad para abrir los párpados, visión doble y
pérdida de la fuerza muscular, se diagnostica miastenia gravis, una enfermedad de
extrema fatiga debido a la disminución de acetilcolina en el músculo, para el tratamiento
se administra fisostigmina un medicamento que incrementa la concentración de
acetilcolina. Teniendo en cuenta lo anterior, favor consultar:
a. ¿Que es la acetilcolina?
b. ¿Como se sintetiza y se cataboliza en nuestro organismo?
c. Cuál es el mecanismo de acción de la fisostigmina
d. Qué tipo de inhibición enzimática ejerce la fisostigmina
e. Como se afecta el Km y la Vmax en presencia de la fisostigmina

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