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BIOQUIMICA Y MICROBIOLOGIA
DETERMINACION Y PROPIEDADES QUIMICAS
DE LOS CARBOHIDRATOS
INTEGRANTES:
- ARGUMÉ SANDOVAL, JOSÉ
- BARRERA YAUCE, NICK
- CARHUAPOMA LA SERNA, JOSE
DOCENTES:
- PhD. NIETO JUAREZ, JESSICA
- Ing. ROJAS OROSCO, JANET
LIMA – PERÚ,
2019
Tabla de contenido
I. OBJETIVOS ............................................................................................................................. 2
II. FUNDAMENTO TEÓRICO ....................................................................................................... 2
III. REACCIONES QUIMICAS......................................................................................................... 4
IV. PARTE EXPERIMENTAL .......................................................................................................... 6
Prueba de Lugol......................................................................................................................... 6
Prueba de Fehling...................................................................................................................... 7
Prueba de Barfoed .................................................................................................................... 8
Hidrolisis de Sacarosa ................................................................................................................ 9
Hidrolisis del almidón .............................................................................................................. 11
V. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................................... 13
VI. ANEXO ................................................................................................................................. 14
APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA ............................................................................................... 14
VII. CUESTIONARIO ................................................................................................................... 14
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INFORME N°1: DETERMINACIÓN Y PROPIEDADES QUÍMICAS DE LOS CARBOHIDRATOS
I. OBJETIVOS
Carbohidratos
Los carbohidratos constituyen la mayor parte de la materia orgánica de la Tierra y tienen varias
funciones en los seres vivos. Sirven como almacén de energía, combustibles e intermediarios
metabólicos. Algunos carbohidratos, como el almidón en los vegetales y el glucógeno en los
animales, pueden liberar con rapidez glucosa, el combustible energético primario indispensable
para las funciones celulares (Chavarria, 2013). Se pueden clasificar de la siguiente manera:
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Figura 1. Clasificación de los carbohidratos (Fuente: Chavarria, 2013)
Prueba de Molisch
La prueba de Molish permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; está
basada en la formación de furfural o derivados de éste (originado por los ácidos concentrados
que provocan una deshidratación de los azúcares) a partir de los carbohidratos para obtener el
furfural que se combina con el -naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Es una
reacción muy sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa al 0.0001% dan
positiva la prueba. También sirve para el reconocimiento general de carbohidratos donde
polisacáridos y disacáridos se hidrolizan formando monosacáridos formando un color púrpura
violeta.
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Prueba de Fehling
Esta prueba se realiza con el reactivo de Fehling, también conocido como Licor de Fehling, es
una disolución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como
reactivo para la determinación de azúcares reductores. El ensayo con el licor de Fehling se
fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos. Éste se oxida a ácido y
reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color
rojo. (De Jaime, 2010)
Prueba de Barfoed
Esta prueba se realiza con el fin de diferencias a los monosacáridos de los disacáridos reductores,
estos últimos reaccionan más lentamente con el acetato cúprico, debido probablemente a su
mayor tamaño molecular, aunque también pueden estar implicados otros factores más
complejos.
Hidrolisis de la sacarosa
La sacarosa es un disacárido que no posee carbonos anoméricos libres por lo que carece de
poder reductor y la reacción con el licor de Fehling es negativa. Sin embargo, en presencia de
HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molécula de agua y se
descompone en los monosacáridos que la forman, glucosa y fructosa, que sí son reductores.
Almidón
Reacción de Lugol
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Reacción de Barfoed
Reacción de Fehling
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IV. PARTE EXPERIMENTAL
Prueba de Lugol
a) Observaciones
El reactivo de Lugol tiene un color oscuro.
Se muestra un cambio de color en la superficie de la papa, mas no en la de la
zanahoria en solido ni en la uva como sólido.
Si hay una pequeña coloración en el extracto de zanahoria (cabe mencionar que
la zanahoria sólida y el extracto provienen de lugares diferentes, es decir son de
diferente grupo de laboratorio).
b) Resultados y Discusión
La prueba de Fehling dio positiva para la muestra de papa, esto quiere decir que
hay presencia de polisacáridos, en este caso almidón. El cambio de color es
debido a la presencia de amilosa, cuya forma helicoidal permite alojar al yodo
dentro de su hélice, formando un complejo color azul-violeta.
En la zanahoria y uva no hubo cambio de color por el ello que estas muestras no
presentan almidón. Estas muestras no tienen la capacidad de formar complejos
porque su principal carbohidrato es la fructosa.
En el extracto de zanahoria hubo un pequeño cambio de color inicial. Esto se
puede deber a dos cosas. La primera es que, al ser un extracto comprado en una
juegueria, el cuchillo manejado en la jugueria no se lava después de cada corte,
esto quiere decir que si o si, debió haber restos de algún componente que
contiene amilosa. La segunda es que la fruta no estaba totalmente madura, la
madures y presencia de almidón son inversamente proporcional, mientras
mayor sea la madurez, menor o casi nada será el contenido de almidón.
c) Conclusiones
Se comprobó la presencia de almidón en la papa con Lugol y que la reacción es
inmediata.
No hay reacción con muestras que tengan fructosa.
d) Recomendaciones
Para poder comparar solo con observaciones, sería bueno llevar más muestras
que tengan almidón como yuca, arroz choclo, etc.
Las muestras no deben estar contaminadas, lavar cuchillo después del corte.
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Prueba de Fehling
a) Observaciones
Las muestras de glucosa, fructosa, maltosa, lactosa y sacarosa son incoloras.
Al añadir el reactivo de Fehling a las 5 muestras, la solución resultante adquiere
una coloración azul intensa.
b) Resultados y Discusión
La prueba de Fehling dio positiva para las muestras de glucosa, fructosa, maltosa
y lactosa; esto se confirmó por la presencia de un precipitado de color rojo, el
cual se debe a la reducción del ión Cu2+ a Cu+, esta reducción se fundamenta en
el poder reductor del grupo carbonilo presente en las aldosas, pues presentan
la estructura química abierta necesaria para actuar como agentes reductores,
también este poder reductor está presente en algunas cetosas (tal como la
fructosa).
La diferencia de tonalidades en los distintos precipitados de las muestras se
puede explicar debido a que la prueba fue realizada cualitativamente, esto
quiere decir que no se utilizaron cantidades exactas de muestras y reactivos,
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por ende, obteniendo así mayor precipitado en algunas muestras lo que justifica
la intensidad de la tonalidad rojiza.
La prueba de Fehling dio negativa para la muestra de sacarosa, esto se justifica
por el hecho de haber presentado un cambio de coloración (ausencia de
reacción química), la sacarosa al ser un azúcar constituido por una molécula de
glucosa y de fructosa, tiene un enlace entre el primer carbono de la glucosa y el
segundo carbono de la fructosa, por lo que no quedan grupos reductores
disponibles siendo así un azúcar no reductor.
c) Conclusiones
Se aprendió a identificar azucares reductores mediante la prueba de Fehling.
La prueba de Fehling da positiva cuando aparece un precipitado de color rojizo,
y da negativa cuando la solución permanece en coloración azul.
Se concluye que la glucosa, fructosa, maltosa y lactosa son azucares reductores,
mientras que la sacarosa es un azúcar no reductor.
d) Recomendaciones
Se recomienda tener cuidado al momento de manipular las muestras, ya que
unas malas manipulaciones pueden llevar a la contaminación de una de las
muestras y así obtener un resultado no esperado.
Prueba de Barfoed
a) Observaciones
Las muestras de glucosa, fructosa, maltosa, lactosa y sacarosa son incoloras.
Al añadir el reactivo de Barfoed a las muestras, estas adquieren una coloración
azul suave
Al calentar en baño maría las muestra, luego de aproximadamente 3 minutos la
solución de fructosa empezó a tornarse de color rojizo.
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b) Resultados y Discusión
El resultado obtenido fue positivo para la fructosa, ya que reacciono formando
el precipitado rojo en un tiempo menor a 7 minutos, lo que nos indica que la
fructosa es un monosacárido reductor ya que debido a la cinética de la reacción
un monosacárido reductor reacciona más rápido que un disacárido reductor.
Se obtuvieron resultados negativos para las muestras de glucosa, maltosa,
lactosa y sacarosa; ya que estos no presentaron evidencias de reacción lo que
nos llevaría a decir que estos son disacáridos reductores lo cual es cierto para la
maltosa y la lactosa, sin embargo, la glucosa es un monosacárido reductor y la
sacarosa es un disacárido no reductor
c) Conclusiones
Se aprendió a diferenciar un monosacárido reductor de un disacárido reductor
mediante la prueba de Barfoed.
Los monosacáridos reductores tienen una velocidad de reacción más rápida que
los disacáridos reductores.
La fructosa es un monosacárido reductor lo cual se evidencia en la prueba de
Barfoed.
d) Recomendaciones
Se recomienda verificar los reactivos ya que no se obtuvieron los resultados
esperados por la teoría.
Se recomienda esperar hasta 30 minutos en el baño maría, ya que el tiempo de
reacción para los disacáridos reductores en la prueba de Barfoed puede llegar
hasta ese tiempo.
Hidrolisis de Sacarosa
a) Observaciones
La muestra de 1 mL de sacarosa es incolora.
Al añadir las 10 gotas de HClI(ac) 10% y 1 mL de reactivo Fehling no se observa
reacción alguna en ese instante, tan solo la coloración azulada propia del
reactivo de Fehling.
Al calentar en baño maría durante 10 minutos se obtuvo una coloración roja de
la solución en el tubo de ensayo.
Cuando se retiró el tubo de ensayo fuera del baño para que enfrié a temperatura
ambiente se observó claramente la formación de precipitado rojizo.
Además, se le realizó el mismo ensayo a una muestra de frugos diluido (1mL)
obteniéndose, luego del calentamiento a baño maría, una coloración rojiza aún
más intensa respecto a la del ensayo a la solución de sacarosa previamente
realizada.
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b) Resultados y Discusión
La coloración rojiza de las muestras (sacarosa y frugos), al tratarla con HCl(ac) al
10% y reactivo de Fehling, es producto de la precipitación del óxido de cobre
que se origina de los iones cu+ formados de la reducción de los iones cu2+ por
azucares reductores tal como la glucosa y fructuosa que constituyen a la
molécula de sacarosa.
Es importante mencionar que la coloración rojiza observada en las muestras, al
ser tratadas, no hubiera sido posible si no se hidrolizaba la sacarosa en el
proceso para obtener así la azúcar invertida (glucosa y fructuosa), función que
cumple el reactivo HCl(ac), donde los carbonos anoméricos que antes estaban
enlazados por un átomo de oxígeno ahora al reaccionar con moléculas de agua
da la azúcar invertida que ante la prueba de Fehling da positivo indicando la
presencia de azucares reductores.
La distinta tonalidad que se presenta al final en la coloración entre la muestra
de sacarosa y frugos diluido es debido a la presencia de gran cantidad de
sacarosa presente en la muestra de frugos además de otros posibles
carbohidratos reductores posibles que dan positivo a la prueba de Fehling y que
en conjunto da mayor cantidad de precipitado con respecto a la muestra de
sacarosa de tonalidad menos rojiza comparada con la del frugos.
c) Conclusiones
Se aprendió de forma experimental la hidrolisis de la sacarosa.
La prueba de Fehling es importante para identificar carbohidratos reductores.
Es importante complementar varias pruebas en serie para discernir aún más los
azucares presentes en las muestras.
d) Recomendaciones
Es importante manejar los reactivos de la manera adecuada, así como de la
limpieza correcta de los materiales para evitar la contaminación de las muestras
principalmente.
En cuanto a un análisis cualitativo detallado sería favorable realizar la prueba de
Seliwanoff que nos permitiría discernir entre la presencia de una aldosa
(glucosa) como de una cetosa (fructuosa) en las muestras.
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Hidrolisis del almidón
a) Observaciones
El reactivo de Lugol en la muestra de almidón al 1% cambia a un color azul
intenso. En presencia de temperatura alta, este color desaparece, pero aparece
rápidamente al dejar que se transfiera calor al ambiente. (tubo 1)
Al tomar muestras de los tubos 2,3 y 4 para aplicar Fehling se obtuvo lo siguiente.
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En el tubo 4 Fehling, se obtuvo un color de solución “naranja” con abundante
precipitado rojo. (Nota: se explicará el color “naranja” en discusiones)
b) Resultados y Discusión
Al hacer la hidrolisis de almidón, obtenemos como resultado la glucosa, este
monosacárido obtenido no puede reaccionar con Lugol porque no tiene la
propiedad de inclusión del yodo como la amilosa. Es por ello que se puede ver
como cambia la intensidad de color, el hecho de que haya un cambio de color
indica la presencia de almidón, pero el cambio de intensidad, nos indica que
parte del almidón se hidrolizo formando glucosa. Y si no hubo cambio de color
eso quiere decir que todo el almidón se hidrolizo completamente.
Al hacer la prueba de Fehling observamos notable cambio en el color y en el
precipitado. Bien sabemos que el almidón es un azúcar no reductora, por ello
no debería reaccionar con Fehling, es por eso que en el tubo 2, aún se mantiene
el color del reactivo de Fehling , color azul, porque en esos 3 minutos en las que
previamente estuvo el almidón en temperatura alta, no fue lo necesario para
desaparecer el color del reactivo Fehling. En el tubo 3, ya no se aprecia el azul
intenso del reactivo, y se observa que hay mayor precipitado, porque la hay
menos almidón en esa muestra y más glucosa.
Finalmente, en el tubo 4 hay completamente glucosa, hay abundante
precipitado rojo y el color azul desapareció completamente. El color naranja que
se observa no es de la solución, o mejor dicho no se puede aseverar, ya que el
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precipitado rojo no está conglomerado en la base del tubo de ensayo, sino esta
por toda la solución y eso nos hace percibir que la solución es naranja.
c) Conclusiones
Para los tubos 2 y 3, el cambio de intensidad respecto al tubo 1 o patrón, indica
que cierta cantidad del almidón se transformó en glucosa. Y se confirma con el
ensayo de Fehling que en esos tubos están los dos carbohidratos, el almidón y
la glucosa.
Para el tubo 4, se ve el cambio de color al agregar el reactivo del Lugol, pero ese
color es propio del reactivo, si observamos bien es como si el reactivo Lugol se
hubiera diluido con agua. Entonces podemos confirmar que en el tubo 4 hay
solamente glucosa, confirmado con el ensayo de Fehling.
d) Recomendaciones
Un factor importante en esta operación es el tiempo, así que hay que
controlarlo bien.
Para corroborar que no hay almidón sino glucosa en el tubo 4, recomiendo que
se agregue una gota de la muestra de almidón, para observar si hay cambio de
color, y si lo hay, entonces se comprueba que en 30 min en baño María, el
almidón se hidrolizó completamente.
Para el tubo 4 Fehling, usar centrifugadora para que todo el precipitado este en
la base y así poder observar el color de la solución.
V. BIBLIOGRAFÍA
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VI. ANEXO
APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA
INTRODUCCIÓN
VII. CUESTIONARIO
1. Definir: (a) azúcar reductor y (b) azúcar no reductor, y luego en un cuadro enumerar las
diferencias que existen entre estos azúcares. Dar ejemplos para cada caso.
a) Azucares reductores: Son hidratos de carbono que pueden actuar como agentes
reductores debido a la presencia de grupos aldehídos libres o grupos cetónicos libres.
Ejm: Glucosa y Fructosa.
b) Azucares no reductores: Son hidratos de carbono que no pueden actuar como agentes
reductores debido a la ausencia de grupos aldehído libres o grupos cetónicos libres. Ejm:
Sacarosa.
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2. Realizar un diagrama de flujo sobre la marcha analítica cualitativa para identificar
carbohidratos en una muestra desconocida.
Prueba de Seliwanoff: Es una prueba química que se usa para distinguir entre aldosas y
cetosas. El reactivo consiste en resorcinol y ácido clorhídrico concentrado. Esta prueba está
basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas más rápido que las
aldosas. La cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para producir un color rojo. Es
posible que las aldosas reaccionen produciendo un leve color rosa. La fructosa da positiva a
esta prueba.
MUESTRA
Prueba de Molisch
Prueba de Lugol
Prueba de Fehling
Prueba de Barfoed
Prueba de Seliwanoff
Prueba de Fenilhidrazina
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3. ¿Qué prueba de ensayo se utiliza para identificar cualitativamente el monosacárido
reductor (D- glucosa)? Fundamente su respuesta (es decir, explicar el principio o en que
se basa dicha prueba de ensayo propuesto para identificar glucosa).
4. ¿Qué reacción de las realizadas se podría utilizar para identificar glucosa en orina?
Se podría utilizar la reacción de Barfoed, ya que esta sirve para identificar azucares reductores y
además pude distinguir entre monosacáridos y disacáridos reductores, al ser la glucosa un
monosacárido reductor, su tiempo de reacción debe ser menor a 5 minutos logrando así
identificar su presencia por medio de la aparición de un precipitado rojo.
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