Práctica #02 Coloración de Bacterias y Estructuras Bacterianas

“AÑO DE LA UNIVERSALIZACIÓN DE LA SALUD”
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHAMNN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERÍA
CURSO: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
III CICLO-ESEN PRÁCTICA DE LABORATORIO
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

TEMA: COLORACIÓN DE FORMAS Y ESTRUCTURAS
BACTERIANAS
PRÁCTICA N° 02
ALUMNA:
Paola Azucena Salas Condori
CÓDIGO:
2019-122032
DOCENTE:
MBGO. LUIS LLOJA LOZANO
SEMESTRE:
Tercero
Tacna-Perú
2020
PRÁCTICA N° 02
COLORACIÓN DE FORMAS Y ESTRUCTURAS BACTERIANAS
INTRODUCCIÓN
Una de las características más importante de las bacterias es su morfología, definida por el
tamaño, la forma, el arreglo y la estructura. Existen bacterias en forma redondeada
denominadas cocos, en forma cilíndrica, denominadas bacilos y una tercera morfología como
son las que tienen forma de espirales, denominadas espirilos. A su vez cada categoría puede
subclasificarse con base a diferentes arreglos. Estas características pueden determinarse
examinando muestras al microscopio. Las células no teñidas son prácticamente transparentes,
pero pueden observarse al microscopio de luz haciendo preparaciones entre lámina y laminilla
o con microscopios especiales como, por ejemplo: de contraste de fases o de campo oscuro.
Cuando se dispone de un microscopio de luz, se pueden teñir las bacterias para facilitar su
visualización. Si se tiñe una muestra del cultivo extendida y fijada en una lámina portaobjeto
con un colorante dado, las células adquirirán el color del colorante añadido y podrá observarse
la forma, tamaño y el arreglo de las mismas. Este tipo de coloración se conoce con el nombre
de coloración simple.
Para obtener mayor información sobre la morfología y composición química de las bacterias,
debe recurrirse a tinciones diferenciales que involucran el uso de varios reactivos y éstas pueden
diferenciarse con base al color que retienen. Ej. Tinción de Gram y Tinción de Ziehl Neelsen.
I.OBJETIVO
• Conocer los diferentes colorantes y desarrollar las técnicas de tinción necesarias para la
observación microscópica de los diversos microorganismos.
• Observar las diferentes estructuras presentes en las bacterias.
II. MATERIALES Y EQUIPOS
• Mechero
• Asa bacteriológica
• Soporte para tinción
• Microscopio óptico
• Aceite de inmersión
• Láminas montadas
• Hisopos/mondadientes
• Muestra: Cepas bacterianas
• Colorantes: Verde de malaquita, cristal violeta, lugol, safranina, tinta china, fucsina,
Maneval, rojo de congo.
III. METODOLOGÍA
COLORANTES
Compuestos químicos que tienen la capacidad de comunicar su color a otros cuerpos y quedar
fijados a pesar de ser lavados con solventes ácidos o álcalis débiles.
COLORACIONES
La coloración es el proceso mediante el cual un cuerpo es teñido por una sustancia

colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la
solución colorante. Las coloraciones pueden ser:
Coloración negativa: los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno, aumentando

de este modo su contraste.
Coloración simple: se utiliza un solo colorante de cualquier tipo. Igual que la tinción negativa,
sólo nos permite observara la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células.
Coloración diferencial: intervienen dos o más colorantes y cada uno diferencia una
estructura. El colorante que se usa en segundo lugar es de color diferente al del primero,
denominándose colorante de contraste.
Coloraciones especiales: para coloración de esporas, núcleo, hongos, cápsulas, corpúsculos
metacromáticos, se utiliza colorantes fluorescentes. Ejm. Acridina, auramina, rodamina.
TÉCNICAS DE COLORACIÓN
FROTIS BACTERIANO
Extendido: la finalidad de esta operación es obtener una monocapa de células lo más separado
posible para poder observar a los microorganismos y a las agrupaciones en forma clara.
Secado: su finalidad es evaporar el líquido de extendido. Se lo hace por proximidad a una
fuente de calor si es que se desea observar y colorear estructuras no lábiles al calor. Si es
que se presenta, el caso de estructuras lábiles, el secado se hace al aire.
Fijado: la finalidad es coagular las proteínas protoplasmáticas en el portaobjetos y así los
microorganismos quedan adheridos al vidrio y resistan sin desprenderse, los tratamientos de la
tinción. La fijación produce el encogimiento de las células, lo que se soluciona con la
Coloración: que las hace distender, parece mayor en tamaño de lo que son.
COLORACIÓN DE GRAM
1. Se hace el frotis delgado y se deja secar al aire.

2. Se fija el extendido de bacterias en el portaobjeto.
3. Se coloca el frotis sobre un soporte para tinción y se cubre con una solución de cristal
violeta, durante 1 minuto.
4. Luego se enjuaga con agua.
5. Se cubre el frotis con la solución de yodo-yoduro de potasio. El yodo libre penetra en
las células y forma un complejo insoluble con el cristal violeta. Tiempo: 1 minuto.
6. Se enjuaga con agua.
7. Se efectúa la decoloración con alcohol acetona. Las células de algunas bacterias
consideradas como Gram negativas, son rápida y complemente decoloradas por el
disolvente orgánico, en cambio las bacterias Gram positivas, resisten la decoloración.
Tiempo: 15-20 segundos.

8. Se enjuaga con agua.
9. Luego se efectúa una coloración de contraste con safranina. Las células Gram positivas
conservan el color violeta inicial del complejo cristal violeta-yodo, mientras que las
bacterias Gram negativas, que han sido decoloradas aceptan el color rojo de la tinción
de contraste. Tiempo: 1 minuto.
10. Se coloca el preparado en posición vertical dejando que drene el agua y el frotis se
seque.
COLORACIÓN ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTE DE ZIEHL-NEELSEN
1. Prepara un extendido, secar, fijar por calentamiento.

2. Cubrir el portaobjeto con carbolfucsina.
3. Calentar lentamente hasta que desprenda vapor, durante 5 minutos. No dejar hervir, ni
permitir que el portaobjetos se seque.
4. Dejar enfriar.
5. Lavar con agua corriente.
6. Decolorar hasta que no salga más colorante.
7. Lavar con agua corriente.
8. Contra colorear con azul de metileno durante 20-30 segundos.
9. Lavar con agua corriente y dejar secar al aire.
Los microorganismos acidófilos son rojos, el fondo y los microorganismos no acidófilos son
azules.
COLORACIÓN DE ESPORAS (MÉTODO DE WIRTZ MODIFICADO)
1. Hacer una suspension bacteriana.

2. Fijar al calor, el calor ayuda a fijar la bacteria al vidrio.
3. Añadir verde de malaquita, que cubra toda la extensión.
4. Calentar con mechero de alcohol hasta desprendimiento de vapores por 3 a 5 veces.
5. Luego lavar.
6. Agregar safranina y dejarlo por 1 ó 2 minutos.
7. Lavar, secar y observar al microscopio.
COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO DE MANEVAL)
1. En un portaobjeto colocar 1 ó 2 gotas de colorante rojo de congo.

2. Tomar el cultivo bacteriano con el asa y hacer la suspensión en la gota de rojo de Congo.
3. Dejar secar T° ambiente (no se usa calor).
4. Agregar el colorante de Maneval y dejarlo por 1 o más minutos.
5. Dejar secar a T° ambiente (no lavar)
COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO TINTA CHINA O NIGROSINA)
1. Colocar 1 o 2 gotas de la tinta china o Nigrosina en el tercio de la lámina.

2. Luego con un asa suspender el germen en la tinta.

3. Posteriormente con otra lámina portaobjetos hacer un frotis.
4. Dejar secar a T° ambiente.
IV. RESULTADOS
• COLORACIÓN DE GRAM
Una vez seco el frotis se lleva a observar al microscopio, si observamos de color azul
violeta a la bacteria entonces serán Gram positivas y si observamos a la bacteria de
color rojo rosado entonces son bacterias Gram negativas.
Ejemplos de patógenos Gram positivos y Gramnegativos:
 Cocos gram positivos (redondos) -Staphylococcus aureus
 Cocos gram negativos - Neisseria meningitidis
 Bacilos gram positivos (varillas) - Bacillus anthracis
 Bacilos gram negativos - Escherichia coli
2)
1)
En la imagen 1 se observa un bacilo sacado de un cultivo, el bacilo es Escherichia coli,

es decir bacilo gramnegativo.
En la imagen 2 se observa un Estreptococos, es decir un bacilo gram positivo.
• COLORACIÓN ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTE DE ZIEHL-NEELSEN
Se observa a los microorganismos. Los que

se tiñen de un color rojizo serán considerados
ácido alcohol resistente positivos (AAR+).
Por el contrario, los microorganismos teñidos
de azul se consideran ácido alcohol resistente
negativos (AAR-).
• COLORACIÓN DE ESPORAS (MÉTODO DE WIRTZ MODIFICADO)
Se observa el cuerpo de la bacteria de color rojo rosado por la Safranina y la espora que
toma el color de verde malaquita.
La posición y la morfología de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un

carácter taxonómico útil para diferenciar especies dentro de un mismo género.
• COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO DE MANEVAL)
• COLORACIÓN DE CÁPSULAS (MÉTODO TINTA CHINA O NIGROSINA)
Se observan las cápsulas bacterianas por coloración con tinta Maneval (a) y con tinta
china (b). La tinta china y el rojo congo no penetran la cápsula, por lo que se pone de
manifiesto como una estructura transparente sobre un fondo oscuro.
b)
a)
La cápsula es una estructura fuerte de naturaleza polisacárida. Esta protege a los

microorganismos de la fagocitosis, y por tanto es una estructura difícil de penetrar.
Es por ello que las tinciones de cápsulas se fundamentan en el contraste. Los colorantes
tiñen el fondo de la preparación mientras que la cápsula queda incolora.
V. CONCLUSIONES
• Con la coloración Gram se puede diferenciar las bacterias Gram positivas de las
bacterias Gram negativas.
• La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar
microorganismos alcohol-ácido resistentes (AAR).
• Las esporas no se tiñen con las coloraciones convencionales debido a que poseen una
pared muy gruesa. La compleja composición de las esporas impide la entrada de la
mayoría de los colorantes.
• La tinción de cápsula es una técnica de coloración diferencial que tiene la propiedad de
resaltar la estructura polisacárida que rodea a ciertas bacterias y levaduras denominada
cápsula.
VI. BIBLIOGRAFÍA
• https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-de-
gram/
• https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
• https://www.lifeder.com/tincion-de-esporas/
• https://www.lifeder.com/tincion-de-
capsula/#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20c%C3%A1psula%20es,bacterias%20y%2
0levaduras%20denominada%20c%C3%A1psula.&text=El%20fondo%20se%20ti%C3%B1e%
20de,pone%20en%20evidencia%20esta%20estructura.

Práctica #02 Coloración de Bacterias y Estructuras Bacterianas

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Tiempo: 15-20 segundos.

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