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A escala individual
A escala poblacional
Conteo en placa
Métodos gravimétricos (Peso seco)
Método espectrofotométrico
.
OBJETIVOS
Densidad óptica
Se Ajustó la absorbancia del espectrofotómetro ultravioleta visible a 660 nanómetros
(nm), se tomó una celda plástica de 1 cm, se limpió suavemente por fuera y se purgó con
medio YM sin inocular, luego se llenó la celda hasta cierto punto con este mismo medio ,
se introdujo la celda en uno de los cubículos, ubicándola de forma adecuada para que el
haz de luz del equipo la atravesara, se leyó el blanco que en este caso es el mismo
medio YM sin el inóculo con el fin de llevar el equipo a una absorbancia de cero, corregir
el ruido o interferencias que puedan presentarse durante la lectura de la muestra ,
posteriormente se retiró la celda del equipo, se purgó nuevamente la celda con la muestra
en este caso medio YM inoculado (medio YM con una levadura), se llenó la celda con
este mismo medio, se introdujo nuevamente la celda en el equipo de la misma forma
como se introdujo al momento de leer el blanco , y se procedió a leer la absorbancia de la
muestra. .
La lectura de la muestra se realizó por triplicado para verificar la variación en el tiempo, a
mayor turbidez, mayor población celular.
Para calcular la absorbancia de la muestra se usó la siguiente ecuación
Ec 2. Peso seco ( gLms )= ( Peso tubo+ muestra seca ) −( peso inicial tubo)
volumen muestra (¿ 0.005 L)
N ° células
Ec. 3. =( ( ∑ células en cuatro cuadros ) / 4)× 10000× FD
mL
CÁLCULOS Y RESULTADOS
Blanco Muestra
Reporte de resultados
Muestra (medio YM +
Grupo Tiempo (min) Blanco( medio YM) Absorbancia
Inoculo de levadura)
1 0 2,089 0,060 2,029
2 30 2,125 0,060 2,065
3 60 2,143 0,060 2,083
2,059
0,0275
cv 1,34
Absorbancia
2.090
2.080 f(x) = 0 x + 2.03
2.070 R² = 0.96
2.060
Absorbancia
2.050
2.040
2.030
2.020
2.010
2.000
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo
Grafica absorbancia vs tiempo. Se evidencia que hay crecimiento celular en el transcurso del tiempo
Grupo 1 Grupo 2
Tubo falcon + Tubo falcon +
Tubo falcon vacio Peso biomasa Tubo falcon vacio Peso biomasa
muestra seca muestra seca
5,9656 5,8324 26,64 5,8838 5,8566 5,44
7,3308 7,2888 8,40 5,9081 5,8769 6,24
7,2767 7,2446 6,42 5,9510 5,9205 6,10
Volumen muestra (l) 0,005 Volumen muestra (l) 0,005
13,82 5,93
11,15 0,43
cv 80,65 cv 7,21
Grupo 3
Tubo falcon +
Tubo falcon vacio Peso biomasa
muestra seca
4,8784 4,8501 5,66
5,9126 5,8619 10,14
5,9694 5,9387 6,14
Volumen muestra (l) 0,005
7,31
2,46
cv 33,63
Los tubos de cada equipo que contienen la biomasa seca presentaron datos bastante
dispersos, esto pudo haber sido por una mala homogenización al momento de tomar la
muestra o no se tomó el volumen de 5 ml correctamente, el único grupo que presentó
números con menos variabilidad fue el grupo 2
Conclusiones
Medir el blanco nos sirve para corregir desde un inicio la interferencias y ruido que puedan
modificar el valor verdadero de la muestra, ya tarado o descontado para que la
absorbancia obtenida en el uv-vis sea únicamente la absorbida por la masa obtenida en el
medio, este llego a ser hasta 2,083 en un tiempo de 60 minutos, concluyendo no solo que
el medio se encontraba más poblado de células, sino también sus etapas de crecimiento
más significativas en el tiempo que duro las tres muestras por medio de la gráfica de
absorbancia vs. Tiempo, también se logró identificar ciertas falencias en los métodos por
ejemplo que en el momento de definir la masa es difícil evitar contar las células muertas.
El método por gravimetría también nos arrojó datos, aunque cambiantes, suficiente para
poder evidenciar cualitativamente la presencia de células en el aumento del recipiente una
vez pasado por la centrifuga, en este método notamos el mayor coeficiente de variación
en las estadísticas que se realizaron.
En el conteo de cámara Neubauer nos permitió determinar cuantitativamente la
concentración de células en el medio, ya que este compromete el conteo individual de
cada microorganismo presente en la muestra.