Universidad de San Buenaventura

Rectoría General
Vicerrectorías Académicas
Direcciones de Investigación

Convocatoria Corporativa 001 – 2018 de innovación y transferencia tecnológica y de

conocimiento para el fortalecimiento de grupos de investigación e investigadores

Anexo 3.
Propuesta de investigación

Toda propuesta deberá contener, un componente científico-técnico, un componente presupuestal y

financiero, y explicitar la organización, funciones y responsabilidades de cada integrante para lograr el
desarrollo del proyecto y obtención de los productos; como se describe a continuación.

1 ESTRUCTURA DEL COMPONENTE CIENTÍFICO - TÉCNICO:

Título Estandarización molecular de indicadores microbiológicos de
contaminación en ecosistemas de playas.
Población beneficiaria Usuarios de aguas recreacionales / Entes gubernamentales en salud
y ambiente.
Duración del Proyecto (en 12 Meses
meses)
Lugar de ejecución Cartagena
Palabras claves Indicadores microbiológicos. Playas. Arena. Diagnóstico molecular

1.1 Línea estratégica:

Tecnología – Innovación - Desarrollo – Gestión

Sociedad - Educación - Desarrollo Humano

Paz y Posacuerdo
Política, Estado y Gobierno
Hábitat, Ambiente y Territorio
Salud Pública, prevención de la enfermedad, promoción de la salud. X

1.2 Grupos de investigación participantes

Sede USB-Cartagena
Nombre del Grupo de Investigación GIMA
Clasificación del Grupo de Investigación A
Líder del grupo de investigación Piedad Franco
Área de conocimiento Ciencias Biológicas / Microbiología
Línea de investigación Calidad Ambiental e Indicadores
 Sede USB-Cali
Nombre del Grupo de Investigación Biotecnología
Clasificación del Grupo de Investigación B
Líder del grupo de investigación Raúl Alberto Cuervo
Área de conocimiento Ciencias Biológicas / Biotecnología
Línea de investigación Biología Molecular

1.3 Investigadores participantes

Investigador 1 Investigador 2 Investigador 3 Investigador 4
Nombre Gustavo Echeverri Raúl Cuervo Piedad Franco Marina Morales / Claudia
Completo Consuegra
Documento 10.249.768 1.107.039. 618 63.501.713 21.222.812 / 45.502.586
identidad
Correo gecheverri@usbctg.edu.co rcuervo@usbcali.edu.co pfranco@usbctg.edu mmorales@usbctg.edu.co /
electrónico .co cconsuegra@usbctg.edu.co
Celular 3157063516 3163425661 3013713116 3157354437 / 3114156697
Dirección Diag 32 80D-81
Ciudad Cartagena Cali Cartagena Cartagena
Link del https://scienti.colciencias https://scienti.colcienci https://scienti.colcie https://scienti.colciencias.gov.co
Cvlac .gov.co/cvlac/visualizado as.gov.co/cvlac/visuali ncias.gov.co/cvlac/ /cvlac/visualizador/generarCurri
r/generarCurriculoCv.do? zador/generarCurriculo visualizador/generar culoCv.do?cod_rh=0000336149
cod_rh=0000379166 Cv.do?cod_rh=000039 CurriculoCv.do?cod
4491 _rh=0001359173 https://scienti.colciencias.gov.co
/cvlac/visualizador/generarCurri
culoCv.do?cod_rh=0000738190
Línea de Calidad ambiental e Biología molecular Calidad ambiental e Calidad ambiental e indicadores.
investigación indicadores. indicadores.
Grupo de GIMA BIOTECNOLOGÍA GIMA GIMA
investigación

1.4 Auxiliares de investigación participante

Nombre Completo
Documento identidad
Correo electrónico
Celular
Dirección
Ciudad
Adscrito a semillero
Tema del trabajo de grado
Nombre estudiante Nombre estudiante
María José Plaza Nicole Arrieta / Álvaro Herrera
1.047.506. 615 1.100. 401.741 / 1.052.085.605
mria1412@hotmail.com nicolearrieta151@hotmail.com /
alvarojherrerad@hotmail.com
3045871193 3164232080 / 3007126776
Villa del sol Mz E L1 Ato 401 La Princesa Mz 27 L7 / Alto Bosque
Cartagena Cartagena / Cartagena
SI ( x ) NO ( ) ¿Cuál? SICS SI ( x ) NO ( ) ¿Cuál? SICS / SICS
Parásitos en arena de playa Actividad antimicrobiana computacional
de fitocompuestos / Indicadores
bacterianos en quesos.
2 ESTRUCTURA DEL PROYECTO:

2.1 Resumen
Las playas son ecosistemas costeros con atractivo turístico, y como sitio público, están expuestas a
diferentes fuentes de contaminación (seres humanos, animales, vertimientos, desembocaduras de agua
dulce, entre otros) que pueden generar riesgos microbiológicos; evaluar la calidad microbiológica de la
arena y agua, permite ver el estado sanitario de las zonas costeras, siendo una herramienta de control para
la salud pública ambiental. Algunos microorganismos indicadores de contaminación fecal que se analizan
en aguas (coliformes totales, coliformes fecales, hongos y levaduras, E. coli, Enterococcos, Staphylococcus
aureus, Candida albicans, parásitos, Salmonella, Shiguella, Vibrio, entre otros), asi como tambien en arenas
(coliformes fecales y enterococos, E. coli, Bacteroides, Clostridium, F+ colifago, Candida albicans, helmintos y
protozoos, Staphylococcus aureus, Vibrio, Pseudomonas, Shiguella, Campylobacter, Enterovirus y hongos
filamentosos). E. coli , Enterococos, C. albicans y Strongyloides spp. son indicadores de contaminación fecal y
patógenos usados para determinar el grado de contaminación de playas recreacionales, e indican la
presencia de microrganismos patógenos que pueden relacionarse con enfermedades gastrointestinales y
dermicas. Para el análisis de estos indicadores, se han usado métodos tradicionales en cultivos
microbiológicos, que requieren de un tiempo prolongado, y métodos no convencionales o moleculares,
donde se incluye el PCR (Polimerase Chain Reaction), donde en pocas horas se obtienen resultados. Se
propone en este estudio estandarizar un marcador molecular múltiple que determine estos indicadores
en muestras de arena y/o agua de playas.
2.2 Planteamiento de la pregunta o problema de investigación
Las playas son ecosistemas costeros de gran importancia, en donde confluyen ecosistemas acuaticos y
terrestres, que pueden ser delimitados a través de diferentes zonas para una mejor gestión (Milanés, C et
al. 2017), encontrando zonas submareal, intermareal y supramareal (Boehm, AB et al. 2014. Solo-
Gabriele, SM et al. 2016. Shash, AH et al. 2011). También se emplean términos de playa sumergida y
playa emergida (Hurtado, YP et al 2009). Así mismo, en el ordenamiento de playas se delimitan zonas
paralelas o perpendiculares a la línea de costa (zona de servicios turísticos, zona de sistema de enlace y
articulación del espacio público, zona de transición, zona de reposo, zona activa, zona de bañistas, zona
de deportes náuticos y zona para el tránsito de embarcaciones), que se dan de acuerdo a la tipología y
dimensiones de la playa (Icontec. NTS-TS 001-2. 2011).
Dichas zonas, permiten obtener diferentes arenas según la zona intermareal (arena húmeda) y zona
supramareal (arena seca), con características físico químicas y microbiológicas variadas en diversidad de
patógenos, no patógenos y microorganismos autóctonos (Boehm, AB et al. 2014). La arena y/o aguas
sirve como vehículo de exposición por ingestión y contacto de microorganismos patógenos en las playas,
aumentando el riesgo de salud sobre todo en niños (Solo-Gabriele, SM et al. 2016. Heaney, CD et al.
2009), evidenciándose indicadores fecales y patógenos, con concentraciones microbianas más altas en
arena que en la columna de agua por fenómenos de bioacumulación, entre otros (Abdallab, SA et al.
2005. Skalbeck, JD et al. 2010. Mancini, L et al. 2005).
Algunos microorganismos buscados en aguas, indicadores de contaminación fecal (Abdallab, SA et al.
2005), y patógenos como coliformes totales (Hurtado, YP et al 2009), coliformes fecales (Hurtado, YP et
al 2009), hongos y levaduras (Abdallab, SA et al. 2005. Gomes, DNF et al. 2008), E. coli (Hurtado, YP et
al 2009. Shibata, T et al. 2012. Sabino, R et al. 2014), Enterococcos (Abdallab, SA et al. 2005. Phillips,
MC et al 2011. Hurtado, YP et al 2009. Shibata, T et al. 2012. Sabino, R et al. 2014), Staphylococcus aureus,
Candida albicans, parásitos (Cavalcante, A et al. 2011), Salmonella (Abdallab, SA et al. 2005), Shiguella
(Abdallab, SA et al. 2005), Vibrio (Abdallab, SA et al. 2005) entre otros.
La calidad microbiológica de arenas, apoyada en algunas investigaciones que estan ayudando a que puedan
ser incluidos análisis en diferentes programas, como coliformes fecales y enterococos (Hurtado, YP et al
2009. Heaney, CD et al. 2014. Zanoli, MI et al. 2005. Shash, AH et al. 2011. Mika, KB et al 2009.
Velonakis, E et al. 2014), E. coli (Skalbeck, JD et al. 2010. Shash, AH et al. 2011. Velonakis, E et al. 2014),
Bacteroides (Heaney, CD et al. 2014. Mika, KB et al. 2009), Clostridium (Heaney, CD et al. 2014. Shash, AH
et al. 2011. Mancini, L et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014), F+ colifago (Heaney, CD et al. 2014. Zanoli,
MI et al. 2005), Candida albicans (Zanoli, MI et al. 2005. Shash, AH et al. 2011. Mancini, L et al. 2005.
Cavalcante, A et al. 2011. Velonakis, E et al. 2014), helmintos y protozoos (Zanoli, MI et al. 2005. Shash,
AH et al. 2011. Mancini, L et al. 2005. Cavalcante, A et al. 2011. Paqued, I et al. 2007. Morales, M et al.
2014. Velonakis, E et al. 2014), Staphylococcus aureus (Shash, AH et al. 2011. Mancini, L et al. 2005.
Velonakis, E et al. 2014. Sabino, R et al. 2014), Vibrio (Mancini, L et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014),
Pseudomonas (Mancini, L et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014. Sabino, R et al. 2014), Shiguella (Mancini, L
et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014. Sabino, R et al. 2014), Campylobacter (Mancini, L et al. 2005. Velonakis,
E et al. 2014), Enterovirus (Mancini, L et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014), hongos filamentosos
(Mancini, L et al. 2005. Velonakis, E et al. 2014). La calidad microbiológica de aguas recreacionales y
arenas de playas deben llevarse a cabo a través de buenas estrategias de monitoreo vinculados a programas
integrados costeros, apoyados de investigación y direccionados por guías y estándares en calidad de agua
y actualmente tomando auge en calidad de arenas, especialmente con coliformes y enterococcus fecales,
Candida albicans y parasitos (Abdallah, SA et al. 2005; Mancini, L et al. 2005; Zanoli, MI et al. 2005;
Hurtado, YP et al 2009).
Las técnicas analíticas utilizadas para estos indicadores, son basadas en cultivos microbiológicos, con
tiempos largos para la obtención de los resultados, lo que ha permitido ir desarrollando técnicas
moleculares, basadas en PCR (Polimerase Chain Reaction) convencional y cada vez con más fuerza PCR
Multiplex, lo que daría resultados en minutos (Henegariu, O et al. 1997; Elnifro, EM et al. 2000). La
aplicación del PCR Multiplex en indicadores microbiológicos de calidad de playas, para indicadores
fecales de E. coli basadas en la diversidad de bacterias diarreogénicos (Fusco de Costa, AR et al. 2010;
Tobias, J et al. 2012; Seni, OD. 2015; Molina, F et al. 2015), Enterococcus (Lata, P et al. 2016; Arshadi,
M et al. 2018) e indicadores patógenos, Candida albicans (Neppelenbroek, KH et al. 2013; Arastehfar, A et
al. 2018) y el parásito Strongyloides (Sitta, RB et al. 2014; Llewellyn, S et al. 2016; Kivrak, E et al. 2017),
han venido desarrollándose a través de la investigación. En cuanto a el monitoreo con diferentes géneros,
utilizando Multiplex PCR, se evidenció con parásitos de suelos los helmintos Ascaris lumbricoides, Trichuris
trichura y Necator americanus de muestras de heces (Phuphisut, O el al. 2014), las seis bacterias más
importantes de intoxicación alimentaria Salmonella spp, Escherichia coli 0177:H7, Vibrio parahaemolyticus,
Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, and Listeria monocytogenes (Kobayashi, H et al. 2009), patógenos
trasmitidos por el agua Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitca y Shigella (Yanjiao, H et al. 2015) y
bacterias en alimentos Escherichia coli 0177:H7, Salmonella spp y Listeria monocytogenes (Nguyen, TT et al.
2016).
Por lo anterior, se plantea para esta investigación el siguiente interrogante: ¿Es posible desarrollar una
técnica de Multiplex PCR para visualizar los indicadores microbiológicos de playas Escherichia coli,
Enterococcus, Candida albicans y Strongyloides?
2.3 Justificación
La contaminación marina a nivel mundial es un problema de gran magnitud que muchas organizaciones
están velando para su control, como la ONU (Organización de Naciones Unidas), en la parte de salud
con OMS (Organización Mundial de la Salud) y en medio ambiente con PNUMA (Programa de Naciones
Unidas para el Medio Ambiente), OCDE; en Estados Unidos, EPA, es un referente a nivel regional de
mucha importancia, entre otros. En Colombia esta problemática de contaminación esta referenciada
frente a muchos sectores como el de Salud Pública, donde el CONPES 3550 de 2008 que aborda los
componentes de Salud Ambiental; desde el componente de medio ambiente, se aborde como un derecho
fundamental el tener un ambiente sano, y el sistema nacional ambiental a través del Ministerio de Medio
Ambiente, con las Corporaciones Ambientales están controlando estos impactos y que en el caso de
Cartagena son Cardique y la EPA-Cartagena; la contaminación marina también es vigilada por la DIMAR
(Dirección Marítima), y en donde los sectores productivos con relación al turismo, están representados
por ANDI, ACOPI, CAMACOL, entre otros.
Un problema como estos, en el caso de la contaminación microbiológica en playas, aborda un cuidado
ambiental de los turistas y ciudadanos, y los programas de monitoreo ambiental se hacen importantes,
sometidos a técnicas recomendadas y estandarizadas, pero que representan gran cantidad de tiempo (días)
invertido mientras salen resultados, siendo indispensable el desarrollo de técnicas que consuman poco
tiempo (horas), para hacer gestión adecuada, como son el desarrollo de las técnicas moleculares, y sumado
a que pueden hacerse varios indicadores en una misma corrida. Colciencias a través de la política de
ciencia, tecnología e innovación, con la Ley 1286 de 2009, propicia el desarrollo de CTI en las
instituciones de educación superior, en donde la Universidad San Buenaventura Colombia se fortalece
en todas las sedes y toma sólidamente en un principio desde el PEB, que se transfiere a sus sedes,
incluidas la de Cartagena y Cali; USB-Cartagena, en la Facultad de Ciencias de la Salud, en el Programa
de Bacteriología, con el Grupo GIMA en la línea de investigación Calidad Ambiental e Indicadores, y la
USB-Cali, desde la Facultad de Ingenierías con el Programa de Ingeniería Agro Industrial y el Grupo de
Biotecnología con su línea de investigación de Biología Molecular, contribuirán y fortalecerán el
desarrollo de esta área de investigación en beneficio de la sociedad.
2.3.1 Articulación del proyecto.
Es importante resaltar que el componente de Playas está incluido en la política pública de Salud
Ambiental, por medio del CONPES 3550 de 2008.
2.4 Objetivos
Objetivo General: Estandarizar molecularmente una técnica para la detección simultánea de indicadores
microbiológicos de contaminación en arenas y/o aguas de playas (E. coli, Enterococcus, C. albicans,
Strongyloides).
Objetivos específicos: 1. Extraer y Amplificar el DNA de los microorganismos de estudio. 2.
Desarrollar ensayos tipo o prueba (en laboratorio) para hacer ensayos multiplex PCR. 3. Probar la técnica
con DNA total en arenas y/o aguas de playas de Cartagena.
2.5 Metodología Propuesta (máximo 400 palabras)
-Enfoque y tipo de estudio. Se desarrollará un estudio de enfoque cuantitativo y tipo de estudio
experimental. -Población y muestra. La población del estudio se centra en los indicadores
microbiológicos de contaminación con su DNA genómico, presentes en aguas y arenas de playas. La
muestra para el desarrollo y estandarización de una técnica molecular son las bacterias procariotas
Escherichia coli, Enterococos faecalis, la levadura Candida. albicans y el parásito Strongyloides spp. -Metodología
detallada. El flujo detallado se presenta a continuación:
-Cultivo de microorganismos target del estudio. Las cepas control tipo ATCC de bacterias y levadura,
se trasferirán a caldo nutritivo y caldo YPD, cultivándose a 37°C por 24 horas para bacterias y 30°C por
48 horas. –Amplificación de DNA de cada uno de los indicadores por PCR con primers
específicos. Se usarán los primers: E. coli B-glucuronidasa uidA13188F
CCGATCACCTGTGTCAATGT y uidA1698R GTTACCGCCAACGCGCAATA; Enterococcus faecium
específico humano espF TATGAAAGCACAAGTT y espR ACGTCGAAAGTTCGATTTCC; C.
albicans F- GTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTA y R-CCGTGCCACATTCCTCCGC;
Strongyloides spp. F-GGGCCGGACACTATAAGGAT y R-TGCCTCTGGATATTGCTCAGTTC. -
Extracción y preparación de DNA de cada microorganismo. Se extraerá DNA de cepas control
usando las indicaciones del fabricante del Kit de extracción, conservándose a -20°C –Optimización de
condiciones para Multiplex PCR. Se tomarán 25 ul de mix de reacción con Tris-HCL, KCl, Mg2,
dexoxinucleotidos y primers de microorganismos de estudio, llevándolos a PCR con denaturalización a
95°C por 4 min, con 35 ciclos de 94°C por 25 seg, 58°C por 45 seg, 72°C por 1 min. Visibilización de
amplicones en agarosa 1.5% con SYBN GREEN y/o bromuro de etidio. –Verificación Multiplex PCR
en muestras ambientales, arena y agua de playa de Castillogrande-Cartagena. Se tomarán
muestras en bolsas herméticas y se conservarán en nevera portátil con hielo, que se llevarán al laboratorio
y refrigeraran a 4°C. Extracción DNA total de arena y agua de playa, que se extraerá el DNA total con
Kit comerciales para suelo y se seguirán las instrucciones del fabricante. El PCR múltiple de DNA tota,
donde se hará amplificación con el DNA total de las muestras de arena y agua utilizando un control
interno de amplificación.
-Organización y análisis de datos. Se determinaran las mejores condiciones para la optimización de la
técnica molecular multiplex PCR, determinando control de amplificación amplificación interna de DNA
genómico con gen universal 16S Y 23S rRNA, buscando la especificidad (habilidad de distinguir los
microorganismos target con otros no target) y la sensibilidad (determinando límite de detección en las
diluciones seriadas de cultivos individuales de los target), aplicación a un simple y multiple PCR, como la
aplicabilidad en muestras de aguas y arenas marinas.
2.6 Cronograma de Actividades

2.7 Resultados esperados (conforme al plan de desarrollo del grupo de investigación)

Están definidos por el nuevo conocimiento que se genere, por los desarrollos tecnológicos que se logren,
por el desarrollo de nuevos productos o procesos, o por la mejora significativa de aquellos existentes.
También hacen referencia a los desarrollos conceptuales y teóricos y a su impacto práctico en
aplicaciones. Deben ser coherentes con los objetivos y la metodología planteada. –La amplificación de
DNA individual de cada indicador de este estudio. –La amplificación directa de DNA de la mezcla de
indicadores escogidos. –Estandarización de una técnica Multiplex PCR. –Aplicación a una muestra de
arena y/o agua marina en playas.
2.8 Productos esperados (conforme al plan de desarrollo del grupo de investigación)
Aquellos que reflejan los resultados a obtener en la forma de artículos, libros, capítulos de libro, tesis de
doctorado, maestría o pregrado, desarrollo de registros de software, solicitud de patentes, prototipos, etc.
Es decir productos resultado de la generación de nuevo conocimiento, resultado de actividades de
Desarrollo tecnológico e innovación, productos resultados de actividades de apropiación social del
conocimiento y productos de actividades relacionados con la formación de recurso humano para la CTI.

Productos resultados de actividades de Generación de Nuevo conocimiento

Producto esperado Categoría Peso Relativo Peso
Artículo A2 6
Libro resultado de LIB_A 9
investigación.

Productos de desarrollo tecnológico e innovación

Producto esperado Categoría Peso Relativo Peso

Productos resultados de actividades de Apropiación Social del conocimiento

Producto esperado Categoría Peso Relativo Peso
Ponencia Oral en evento EC_A 10
nacional y/o internacional.
Articulación con Red RC_A 10
Proplayas.

Productos resultados de actividades relacionadas con la formación de Recuso Humano para

la CTI.
Producto esperado Categoría Peso Relativo Peso
Trabajo de pregrado TP_A 10

NOTA: Consultar los productos acordes con la tipología del sistema de medición de Colciencias vigente.
Es requisito, que mínimo se plantee el desarrollo y obtención de dos (2) producto TOP.

2.9 Bibliografía:
Abdallah, SA et al (2005). Microbiological beach sand quality in the Gaza strip in comparison to seawater.
Polish Journal of Environmental Studies. 14 (6). 841-850.
Amer, L et al. (2000). Evaluación del método petrifilm para la determinación del recuento de
microorganismos aerobios mesofilos totales en drogas vegetales. Ars Pharmaceutica. 41 (4). 383-386.
AOAC Official Method 966.23.C (2000). Recuento de microorganismos aerobios mesófilos mediante
método tradicional de cultivo.
Arastehfar, A et al. (2018). Identification of nine cryptic species of Candida albicans, C. grabata and C.
parapsilosis complexes using one-step multiplex PCR. BMC Infectious Diseases, 18(480).
doi.org/10.1186/s12879-018-3381-5. 1-9.
Arshadi, M et al. (2018). Virulence determinants and antimicrobial resistence patters of Vancomicin-
resistant Enterococcus faecium isolated from different sources in southwest Iran. Iran J. Public Health, 47(2).
264-272.
Boehm, AB et al. (2014). Diversity and transport of microorganisms in intertidal sands of the California
Coast. Applied and Enviromental Microbiology. 80 (13). 3943-3051.
Cavalcante, A et al. (2011). Estudo da prevalencia de enteroparasitas em areia de praia no municipio de
Sao Vicente-SP-Brasil. Revista UNILISUS Ensino e Pesquisa. 8 (15). 5-19.
Elnifro, EM et al. (2000). Multiplex PCR: Optimization and application in diagnostic virology. Clinical
Microbiology Reviews, 13 (4). 559-570.
Fusco de Costa, AR et al. (2010). Desarrollo de PCR multiplex para detección y diferenciación de
categorías de Escherichia coli diarreogénicos. Rev. Pan-Amaz Saude, 1(2). 77-8
Gomes, DNF et al. (2008). Filamentous fungi isolated from sand and water of “Barrio Novo” and “Casa
Caiada” beaches, Olinda, Pernambuco, Brazil. Braziliam J. Biology. 68 (3). 577-582.
Heaney, CD et al. (2009). Contact with beach among beachgoers and risk of illness. American Journal of
Epidemiology. 170 (2). 164-172.
Heaney, CD et al. (2014). Water quality, weather and environmental factors associated with fecal indicator
organism density in beach sand at two recreational marine beaches. Science of the Total Environmental. 497-
498. 440-447.
Henegariu, O et al. (1997). Multiplex PCR: Critical parameters and step-by-step protocol. Biotechniques,
23. 504-511.
Hurtado, YP et al (2009). Selección y propuesta de parámetros para la determinación de la calidad
ambiental en playas turísticas del Caribe Colombiano. Ciencia en su PC. 4. 42-53.
Icontec. (2011). Norma Técnica Sectorial Colombiana NTS-TS 001-2. Destinos Turísticos de Playa.
Requisitos de Sostenibilidad.
ISO 4833-2. International Standard (2013). Microbiology of the Food chain horizontal method for the
enumeration of microorganisms. Part 2: colony count at 30°C by the surface plating technique. First Ed.
1-12.
Kivrak, E et al. (2017). Screening of inmunocompromised patients at risk of strongyloidiasis in western
Turkey using ELISA an real-time PCR. Turkish Journal of Medical Science, 47. doi:10.3906/sag-1605-
19. 897-901.
Kobayashi, H et al. (2009). Simultaneous enrichment of Salmonella spp, Escherichia coli 0177:H7, Vibrio
parahaemolyticus, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, and Listeria monocytogenes by single broth and screening
of the pathogens by multiplex real-time PCR. Food Sci. Technol. Res, 15(4). 427-438.
Lata, P et al. (2016). Multiplex PCR based genotypic characterization of pathogenic vancomycin resistant
Enterococcus faecalis recovered from an Indian river along a city landscape. SpringerPlus, 5 (1199). 1-11.
Llewellyn, S et al. (2016). Application of a multiplex quantitative PCR to assess prevalence and intensity
of intestinal parasite infections in a controlled clinical trial. PLOS Neglicted Tropical Diseases, 10(1).
DOI:10.1371/journal.pntd.0004380- 1-19.
Mancini, L et al. (2005). Microbiological quality of Italian beach sands. Microchemical Journal. 79. 257-261.
Mika, KB et al (2009). Pilot and bench scale testing of faecal indicator bacteria survival in marine beach
sand near point sourch. Journal of Applied Microbiology. 107. 72-84.
Milanés, C et al. (2017). Novel method to delimitate and dematcate coastal zone boundaries. Ocean and
Coastal Management. 144. 115-119.
Ministerio de la Proteción Social. Ministerio de Ambiente, Vivienda y desarrollo Territorial. República de
Colombia. Resolución 2115 (2007). Características, instrumentos básicos y frecuencias del sistema de
control y vigilancia para la calidad del agua para consumo humano.
Molina, F et al. (2015). Improve detection of Escherichia coli and coliform bacteria by multiplex PCR.
BMC Biotechnology, 15 (48). 1-9.
Morales, M et al. (2014). Contaminación de playas turísticas de la ciudad de Cartagena de Indias con
parásitos de importancia sanitaria 2012-2014. Tesis para optar título de Máster en Microbiología Clínica.
Universidad de San Buenaventura-Cartagena.
Neppelenbroek, KH et al. (2013). Identification of Candida species in the clinical laboratory: a review of
conventional, commercial and molecular technics. Oral Diseases. doi:10.1111/odi.12123. 1-16.
Nguyen, TT et al. (2016). Multiplex PCR for simultaneous identifications of Escherichia coli 0177:H7,
Salmonella spp y Listeria monocytogenes in food. 3 Biotch, 6(205). DOI 10.1007/s13205-016-0523-6. 1-9.
Novane, GT et al. (2005). Estudio comparativo de recuperación de formas parasitarias por tres diferentes
métodos de enriquecimiento coproparasitológico. Parasitología Latinoamericana. 60. 178-181.
Organización Mundial de la Salud, OMS (2006). Guías para el manejo de agua potable. Vol. 1. 3 Ed. ISBN
924154696-4. 398 págs.
Paqued, I et al. (2007). Prevalence of Toxocara spp., Toxacaris leonina and Ancylostomidae in public
parks and beaches in different climate zones Costa Rica. Acta Tropica. 104. 30-37.
Phillips, MC et al (2011). Relationships between sand and water quality at recreational beaches. Water
Research. 45. 6763-6769.
Phuphisut, O el al. (2014). Triplex polimerase chain reaction assay for detection of major soil-trasmitted
helmints Ascaris lumbricoides, Trichuris trichura y Necator americanus, in fecal samples. Southeast Asian J Trop
Med Public Health, 45(2). 267-275.
Sabino, R et al. (2014). Routine screening of harmful microorganisms in beach sands: implications to
public health. Science of the Total Environmental. 472. 102-109.
Seni, OD. (2015). Detección de cepas de Escherichia coli Shiga Toxigénica (STEC) y enteropatógena
(EPEC) basada en PCR multiplex. Revista La Técnica, 15. 78-89.
Shash, AH et al. (2011). Indicator microbes correlate with pathogenic bacteria, yeast and helminthes in
sand at subtropical recreational beach site. Journal of Applied Microbiology. 110. 1571-1583.
Shibata, T et al. (2012). Quantitative microbial risk assesment of human illness from exposure to marine
beach sand. Environmental Science and Technology. 46. 2799-2805.
Sitta, RB et al. (2014). Conventional PCR for molecular diagnosis of human strongyloidiasis. Parasitology.
doi:10.1017/S0031182013002035. 1-6.
Skalbeck, JD et al. (2010). Fecal indicator organism density in beach sands: impact of sediment grain size,
uniformity, and hidrologic factor son surface water loading. Journal of Great Lakes Research. 36. 707-714.
Solo-Gabriele, SM et al. (2016). Beach sand and the potencial for infectious disease transmission:
observations and recomendations. Journal of the Marine Biological of Association of the United Kingdom. 96 (1).
101-120.
Tobias, J et al. (2012). Simple and rapid Multiplex PCR for identification of the main human diarrheagenic
Escherichia coli. Microbiological Research, 167. 564-570.
Velonakis, E et al. (2014). Present status of effect of microorganisms from sand beach on public health.
Journal of Coastal Life Medicine. 2 (9). 746-756.
World Health Organization. (1997). Basic Laboratory methods in Parasitology. Genove
Yanjiao, H et al. 2015. Rapid identification of three waterborne pathogens in water samples by multiplex
touchdown PCR. International Conference on Mechanical Science and Engieening, ICMSE2015.
Zanoli, MI et al. (2005). Sanitary quality of sands from marine recreational beaches of Sao Paulo, Brazil.
Braziliam Journal of Microbiology. 36. 321-326.

3 IMPACTOS
Los impactos esperados son una descripción de la posible incidencia del uso de los resultados del proyecto
en función de la solución de los asuntos o problemas estratégicos regionales abordados. Se pueden lograr
en el corte, mediano y largo plazo, como resultado de la aplicación de los conocimientos o tecnologías
generadas y/o apropiadas en el área temática en la cual se inscribe el proyecto1. Haga una reseña de los
que apliquen en cada caso. Tenga en cuenta que obligatoriamente se deben señalar los impactos sobre el

1
Tomado de GUÍA-FORMATO PARA LA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN ACCIÓN PARA EL
FORTALECIMIENTO DE CAPACIDADES REGIONALES EN CIENCIA, TECNOLOGÍA E INNOVACIÓN. COLCIENCIAS
currículo de los programas de la facultad de acuerdo el área temática del proyecto.

 Impactos sobre el currículo de los programas de la facultad (obligatorio)

- Los resultados fortalecerán a corto plazo los cursos de Biotecnología en ambas facultades y en
Cartagena también el curso de Microbiología Ambiental; esto, impactará en los estudiantes
fortaleciendo su formación y motivación a la investigación en estas áreas.
- A corto plazo, se fortalecerá esta área para motivar a los estudiantes de los semilleros de
investigación de las 2 facultades.
- Se formarán en investigación los estudiantes que participarán como auxiliares de investigación
en la sede Cartagena. Así mismo será un referente de investigación para los estudiantes del curso
en metodología de investigación.

 Impacto sobre la productividad y la competitividad.

- A mediano o largo plazo, se podrá en el sector turístico hacer énfasis en la competitividad y
responsabilidad de hoteles por velar la calidad microbiológica ambiental de playas, teniendo
sistemas de monitoreo rápidos y económicos, traducidas las mejores en ventaja competitiva que
dará más productividad.

 Impactos en las agendas de desarrollo regionales. (obligatorio)

- A largo plazo, intervenir para propiciar un trabajo conjunto entre la secretaría de Salud de
Cartagena (DADIS), las Corporaciones Ambientales de Cardique y la EPA-Cartagena y el
gremio Turístico, frente a un Programa de Calidad Microbiológica de las Playas, en donde un
monitoreo de aguas y arena sea la herramienta necesaria para el seguimiento y control de playas.

 Impactos en la calidad de vida de la población.

- A mediano y/o largo plazo, propiciar en la ciudadanía y los turistas que hacen uso de playas, la
cultura de una “Playa Segura y Sana Microbiológicamente”.

 Impacto en las políticas públicas.

- A largo plazo, fortalecer la política pública de Salud Ambiental de Playas, según el CONPES
3550 de 2008.

 Implicaciones del no desarrollo del proyecto a partir del diagnóstico previo (análisis
situacionales).
- En el caso de esta investigación, basada en la estandarización de una técnica molecular, no
implicaría ninguna implicación de gran envergadura, que sin embargo en la aplicabilidad de la
técnica en muestras ambientales de este tipo, es de importancia.
4 PRESUPUESTO

RUBRO DESCRIPCIÓN JUSTIFICACIÓN VALOR

Trabajo de campo
Libros y suscripciones a
periódicos y revistas
Maquinaria y equipo
Equipo de computación y
comunicación
Impresiones en
Servicio de impresos y
papel fotográfico. 2.000.000
publicaciones
Publicación.
Útiles y papelería
Construcciones y edificaciones
Cepas control.
Kits de
extracción. Tubos
eppendorf, PCR,
Falcon 15 ml,
Falcon 50 ml,
Elementos de laboratorio 6.000.000
MixPCR,
colorante SYBR,
marcador peso
molecular, buffer
PBS, guantes,
otros.
Activos de menor cuantía
TOTAL 8.000.000
Nota: Contrapartidas USB-CTG: 5.200.000. USB-Cali: 5.000.000