UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CATEDRA DE BIOTECNOLOGÍA GENERAL

BIOTECNOLOGÍA MICROBIANA
Docentes:
• Dr. Segundo Eloy López Medina
• Dr. Roger Veneros Terrones
• Ms.C. Jordan De La Cruz Castillo
• Ms.C. Armando Efraín Gil Rivero
• Blgo. Alfaro Aguirre Elky Thali
 1. DEFINICIÓN
La Biotecnología microbiana estudia los microorganismos y los
procesos que derivan de los mismos a gran escala, con el fin de obtener
productos de interés para el ser humano.

La biotecnología microbiana comenzó con los procesos de

fermentación alcohólica , posteriormente comenzó la producción de
agentes farmacéuticos como los antibióticos, la producción de aditivos
alimentarios , enzimas y sustancias químicas industriales.
 FASES DE LA BIOTECNOLOGÍA
MICROBIANA
Condiciones no estériles

6000 ac (vino y cerveza) 1914-1918 (acetona y glicerol) 1928 (penicilina- Fleming) 1970 ( Ing. Genética)

1860 (Pasteurización) Condiciones estériles

Biotecnología microbiana
moderna (ingeniería
Biotecnología microbiana
genética):
tradicional:
 Fabricación de
 Fermentaciones
hormonas.
alcohólicas
 Vacunas
 Producción de
productos
farmacéuticos ,
aditivos alimentarios,
enzimas y sustancias
químicas industriales
HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA
-Biotecnología Clásica-
HIDROMIEL

CERVEZA, VINO INÓCULO

QUESO, VINAGRE,
YOGURT

• DOMESTICACIÓN DE MICROORGANISMOS
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA
-Biotecnología Clásica-
2050 AC-Asiria
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA

Uso de Spirulina por los aztecas (TENOCHTITLAN)

HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA
-
Un microorganismo siempre es útil
(1860)
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA

1914-1918: Fermentación acetona-butanol

Producción de glicerol
Producción de ácido cítrico
1929 : Fleming descubre la penicilina
1939-2945: Florey y Chain desarrollan su purificación
Desarrollo del FERMENTADOR
 HISTORIA DE LA BIOTECNOLOGIA
MICROBIANA

Años 80: Técnicas de INGENIERIA GENÉTICA

Años 90: Clonación. Seres vivos transgénicos
Años 70: Biomateriales, Biopolímeros, Biocombustibles…
Química combinatoria
Genómica, Proteómica, Metagenómica…
Bionanotecnología
 Otras aplicaciones de la Biotecnología Microbiana

En agricultura, la biotecnología , se
emplea en la biofertilización, los
géneros mas conocidos son: Bacterias
(Pseudomonas,Bacillus, Lactobacillus,
Azotobacter, Azospirillum, Rhizobium),
levaduras (Saccharomyces, Candida) y
hongos (Glomus, Trichoderma).

Organismos como Agrobacterium

tumefaciens son empleados para
modificar genéticamente a las plantas.
Plantas modificadas tienen genes de
tóxinas de Bacillus thuringiensis.
En Biorremediación de suelos y aguas se usa la habilidad de microbios, para
degradar y descontaminar distintos compuestos en suelos y aguas de
naturaleza urbana e industrial.
 Características de los microorganismos

-Fáciles de cultivar.
-Gran velocidad de división.
-Gran versatilidad metabólica , lo que les permite
usar una gran variedad de medios de cultivo.
-Producción de un gran numero de compuestos
interesantes.
- Es relativamente fácil manejar su genoma.
 Microorganismos Industriales

No todos los microorganismos tienen uso industrial. De los microorganismos que se aíslan de
la naturaleza se seleccionan aquellos que fabrican uno o más productos de interés
específicos. Si bien los microorganismos que se utilizan en la industria han sido aislados de
la naturaleza por métodos tradicionales, estos son modificados mucho antes de ingresar a la
industria. Estas modificaciones se pueden llevar a cabo genéticamente.
 2. Selección de microorganismos de interés industrial

El éxito o fracaso de un proceso comienza con el microorganismo

utilizado, en la elección del mismo se deberían tener en cuenta
ciertos criterios generales que se indican a continuación:

1. La cepa a utilizar debe ser genéticamente estable.

2.Su velocidad de crecimiento debería ser alta.
3. La cepa debe estar libre de contaminantes.
4. Sus requerimientos nutricionales deberían ser satisfechos a partir
de medios de cultivo de costo reducido.
5. Debe ser de fácil conservación, sin pérdida de sus características
particulares.
6. Debería llevar a cabo el proceso completo en un tiempo corto.
7. Si el objetivo del proceso es un producto, éste debería ser de alto
rendimiento y de fácil extracción del medio de cultivo.
8. Debe ser susceptible a la manipulación genética.
Los microorganismos que se utilizan en un proceso, pueden ser obtenidos por aislamiento a partir de
fuentes naturales.

Elegida la fuente de aislamiento, las posibilidades de éxito dependen de la técnica elegida para el mismo;
en este caso las alternativas son: a) aislamiento directo, o b) aislamiento en medio cultivo enriquecido.

a) Aislamiento directo: en este caso es

deseable que el medio que se utiliza
para el aislamiento permita la máxima
expresión del organismo. Si se busca
por ejemplo un organismo con acción
antimicrobiana, se puede crecer al
potencial productor, en una caja de
Petri.
b) Aislamiento en medio cultivo enriquecido: esta técnica consiste en incrementar en una
población de organismos de interés en relación al resto. De esta forma se busca favorecer el
crecimiento de un tipo dado de microorganismos mediante condiciones de cultivo adecuadas
al mismo, o de condiciones inapropiadas para el desarrollo de los otros. Esto se logra
mediante el empleo de sustratos específicos o ciertos inhibidores, realizando subcultivos
periódicos en medio fresco.
Fermentador o Biorreactor

Recipiente que permite el crecimiento controlado de microorganismos.

Las condiciones ambientales que se toman en cuenta en un biorreactor
son : Flujo de gases (por ejemplo, oxígeno, dióxido de carbono,
etc.), temperatura, pH y velocidad de agitación o circulación, todos
ellos son monitoreados y controlados. Se emplean bacterias u otros
organismos simples que pueden resistir la fuerza de agitación. También
son fáciles de mantener ya que requieren sólo soluciones simples de
nutrientes y pueden crecer a grandes velocidades.
 Conservación de Microbios Industriales

Objetivos:
1.- Mantener los cultivos viables a lo largo del tiempo.
2.- Mantenerla pureza genética, sin contaminaciones.
3.- Mantener los cultivos sin cambios en sus características, es
decir estables (Sin perdida de sus propiedades bioquímicas).
El conocimiento de las características del microorganismo es
esencial en la elección del método de preservación. Los métodos
de preservación más importantes son los siguientes:

Subcultivos
Consiste en proporcionar cada cierto tiempo al cultivo, un medio
nutritivo fresco. Este método es recomendable para lapsos de 15
días y 2 meses , debido a los inconvenientes que se presentan ,
estos son :
a) Riesgo de contaminación.
b) Alteraciones en el medio de cultivo durante la estancia en
frio, produciéndose desecación gradual.
Congelación

Debido a que la actividad metabólica de una célula se reduce considerablemente por mantenimiento a muy
baja temperatura, la congelación es una técnica de elección, ya sea para cortos o largos períodos de tiempo.
Las suspensiones celulares son colocadas en ampollas (vidrio o plástico) y selladas antes de colocarlas bajo
nitrógeno líquido(-196°C).Estudios afirman que una velocidad de congelación lenta y una rápida
descongelación rinden los mayores números de células viables.
La liofilización está considerada como el método más
adecuado para la preservación de microorganismos. La
técnica involucra el congelamiento de un cultivo seguido por
un secado bajo vacío, lo cual resulta en la sublimación de
agua de la suspensión celular. La ventaja es que la mayoría
de los organismos sobreviven al secado y el cultivo es
fácilmente mantenido aún a temperatura ambiente sin pérdida
significativa de viabilidad.

La técnica consiste en partir de un cultivo de fase

estacionaria , resuspender las células en un medio
crioprotector. Esta muestra es transferidas a una ampolla, la
cual es congelada a aproximadamente -40 °C y deshidratada
mediante una sublimación en vacío. El secado continúa hasta
llegar a valores de humedad del orden del 1%; luego, la
ampolla es sellada bajo vacío.
NOTA :

En general no es posible determinar para cada grupo de organismos el

método de conservación ideal, por lo que se trata de emplear el más
adecuado. De todos, la liofilización es el más utilizado, aunque algunos
organismos muestran altas tasas de mortandad.
 3.Mejoramiento de microorganismos industriales

En general los organismos aislados de la naturaleza productores de metabolitos de interés industrial

producen a los mismos en niveles muy bajos, por lo tanto se hace necesario incrementar estos
rendimientos para lograr una mayor rentabilidad de los procesos.Una forma de mejorar el rendimiento
es mediante la optimización del medio de cultivo. La otra posibilidad es el mejoramiento genético de
la cepa.

La obtención de cepas modificadas genéticamente se puede realizar por 1) Selección natural de

variantes, 2) Mutación inducida, y 3) Recombinación genética.

1. Selección natural
Se debe tener en cuenta que en cada división celular hay una pequeña probabilidad de que
ocurra un cambio genético. La selección de variantes naturales, una práctica que todavía es
utilizada se refiere a la observación de las características morfológicas de las colonias, las
cuales, se asocian con mayor o menor productividad, lo que permite seleccionar y
posteriormente estudiar los clones aislados.
2. Mutación inducida.
El procedimiento de mutación mediante el empleo de un agente determinado implica dos
etapas, el tratamiento de la población con el mutágeno elegido y luego el aislamiento de los
mutantes para su posterior ensayo y selección. La elección de un agente mutagénico depende
en general de consideraciones prácticas.

Los agentes mutagónicos pueden ser agrupados en:

1) Físicos, como la luz ultravioleta, que es un mutágeno muy conveniente. La longitud de onda
puede variar de 200 a 300 nm y el tiempo de exposición entre 0.5 y 20 minutos, dependiendo
de la sensibilidad del organismo. Otros agentes como rayos X y rayos Gamma son actualmente
poco utilizados.
2) Químicos: Estos agentes se emplean en concentraciones del orden de 0.05 M con
exposiciones de 0.5 a 12 horas. Ejm: Acido nitroso, N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina
(NTG), 5-bromuracilo , 2-aminopurina, proflavina y naranja acridina.
 Recombinación genética

Una estrategia en un programa de mejoramiento sería reagrupar

las potencialidades de distintas variantes con el objeto de
seleccionar la mejor combinación de genes responsables de
codificar la producción de determinado metabolito. De manera
natural la recombinación se da atravez de la conjugación, en
donde la transferencia de material genético se realiza a través
del pili, teniendo algunas características de un proceso sexual.

Un pilus sexual interconecta dos bacterias de la misma

especie o de especie diferente construyendo un puente entre
ambos citoplasmas. Esto permite la transferencia de
plásmidos entre las bacterias. El intercambio de plásmidos
puede añadir nuevas características a la bacteria, por
ejemplo, resistencia a antibióticos.
Profase I- Paquiteno
El intercambio de material genético entre diferentes especies
puede también ser alcanzado por fusión celular. El primer paso
en este caso es la preparación de protoplastos, los cuales son
células que han perdido su pared celular externa y son limitadas
solamente por su membrana. Los protoplastos de los cultivos
que se desea fusionar, son mezclados y fusionados. La
incubación de protoplastos resulta en regeneración de la pared
celular y reversión a una célula de morfología normal, previa
fusión nuclear.
 Obtención de nuevas cepas por ingeniería genética

La ingeniería genética ha revolucionado el campo específico de la Biotecnología. A

través del procedimiento de clonado de ADN, genes de cualquier tipo pueden ser
tomados de su ambiente natural, analizados, alterados y reinsertados en el mismo tipo
de organismo o en otro diferente.

El éxito en la biotecnología microbiana consiste en incrementar

el rendimiento de un producto, aumentar su velocidad de
formación, eliminar productos indeseables.
Los plásmidos son moléculas de ADN extracromosómico generalmente
circular que se replican y transmiten independientes del
ADN cromosómico.​Están presentes normalmente en bacterias y en
algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras.

Los plásmidos se utilizan como vectores de clonación en ingeniería

genética por su capacidad de reproducirse de manera independiente del
ADN cromosomal así como también porque es relativamente fácil
manipularlos e insertar nuevas secuencias genéticas.

Enzimas denominadas endonucleasas de restricción, las cuales reconocen

y cortan el ADN en sitios bien definidos, generando fragmentos de
distintos tamaños.
Por aquel entonces, 60 años después del primer ensayo
realizado en humanos, la insulina que se administraba a los
diabéticos se obtenía de vacas y cerdos, con un efecto muy
similar al producido por la variante humana, pero también con
numerosos problemas de tipo alérgico

En 1963, la insulina se convirtió en la primera proteína en ser

sintetizada in vitro, por Meinhofer y colaboradores , pero con
un rendimiento bastante pobre, lo que impedía su utilización
masiva contra la diabetes.

Así llegamos a la insulina recombinante ya que, en el año

1978, gracias al desarrollo de la ingeniería genética se
consigue la síntesis de la insulina mediante técnicas
biotecnológicas (una vez más, es la primera proteína en la que
se llevan a cabo).El procedimiento llevado a cabo fue muy
ingenioso, utilizando las bacterias Escherichia coli.