INTRODUCCIÓN

La Microbiología Ambiental permite dar a conocer diferentes aspectos de la participación

y aplicación de los microorganismos en los ecosistemas suelo, agua y aire; y entender la
importancia de su intervención, ya sea perjudicial o benéfica. Conocer los tipos de
interacciones existentes entre los diferentes grupos de microorganismos. Por esta razón,
qué mejor lugar para estimular estos aprendizajes que el laboratorio, donde al alumno se
le abre un mundo donde se pueda explicar experimentalmente todo lo que en las aulas se
enseña.
El presente informe se refiere al tema del reconocimiento de los instrumentos utilizados
en el laboratorio y los tipos de medio de cultivo. En el contenido se detallarán cada uno
de los equipos con nombre, uso y fotografía. Del mismo modo, los medios de cultivo que
son una técnica de laboratorio que consta de un gel o una solución que contiene los
nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el
crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas
plantas. Existe una variedad inmensa de medios de cultivo, pero en el informe se
describirán los más utilizados.

OBJETIVO
Que el estudiante emplee las instrucciones para realizar trabajos en el laboratorio de
microbiología.

RESUMEN
El estudiante que trabaje en el laboratorio de microbiología debe familiarizarse con los
métodos básicos usados en microbiología. La observación directa y la experimentación
son sin duda los métodos ideales que debe poner en práctica sea cual fuere el campo de
la ciencia a la que dedique su actividad. La palabra laboratorio significa lugar de trabajo,
y precisamente por observación de los microorganismos, y por lectura de lo que otros
han investigado y aprendido, como puede el principiante llegar a aprender los misterios
que encierra el fascinante mundo de los microbios. Tres características básicas de los
microorganismos hacen necesario el empleo de técnicas especiales en la investigación
microbiológica, a saber:
1) Su tamaño diminuto.
2) La aparente ausencia de diferencias individuales.
3) Su amplia distribución en la naturaleza.
Como los microorganismos pululan por doquiera en el medio ambiente existe siempre el
peligro de que estudiarlos puedan diseminarse y contaminar el medio. Con el fin de hacer
frente a estos problemas se debe siempre usar técnicas asépticas (ausencia de
microorganismos).
REGLAS DE LABORATORIO
Las siguientes técnicas deben observarse como medidas de seguridad para todos los que
laboran en el laboratorio.
1. Debe utilizarse bata de laboratorio, la cual debe retirarse al terminar la experiencia.
No usarla fuera del laboratorio.
2. Lápices, plumas o marcadores nunca deben introducirse a la boca.
3. Agujas de transferencia de cultivos y asas deben esterilizarse calentando todo el
alambre al rojo, antes y después de usarlo. En primera instancia, se debe mantener la
aguja arriba de la llama para evitar esparcir el cultivo de bacterias.
4. Si por accidente el cultivo se esparcen la mesa de trabajo u otro lugar, se debe
desinfectar el área con un agente desinfectante (ejem. Solución Lysol al 5%) y notificar
al instructor.
5. El medio inoculado debe ser debidamente identificado con nombre, identificación de
especie u otro.
6. El microscopio y sus partes se deben limpiar adecuadamente.
7. Todos los utensilios utilizados deben colocarse en el lugar destinado para tal efecto, al
finalizar el periodo de laboratorio.
8. El material desechable, papel algodón; etc. se eliminará en basureros adecuados.
9. La mesa de trabajo debe limpiarse con un desinfectante (5% Lysol) al inicio y al final
del laboratorio.
10. Cualquier accidente personal debe comunicarse inmediatamente al profesor.
11. Al final de sus tareas, todos los estudiantes deben lavarse las manos con jabón o un
desinfectante, si amerita. Algunos equipos de uso rutinario en el laboratorio donde se
utilizan prácticas microbiológicas son:
• Placas Petri
• Agujas de inoculación
• Pipetas serológicas
• Tubos de cultivo
• Portaobjetos
• Cubreobjetos

PROCEDIMIENTO
Identifique y dibuje cada uno de los equipos y accesorios de mayor uso en el laboratorio
de microbiología.
PREGUNTAS
Investigue la aplicación de cada uno de los equipos y accesorios utilizados en el
laboratorio.

INSTRUMENTOS
INSTRUMENTO IMAGEN USO
Agitador Sirve para mezclar o
revolver por medio de la
agitación de algunas
sustancias. También sirve
para introducir sustancias
líquidas de alta reacción por
medio de escurrimiento y
evitar accidentes.

Agitador orbital Utilizado para la mezcla, la

homogeneización y/o
preparación de
combinaciones de
sustancias.

Asa de Drigalsky Para realizar siembras

uniformes mediante
extensión de muestras
líquidas en la superficie de
placas Petri.

Asas de siembra Se emplea para transportar,

arrastrar, trasvasar inóculos
desde la solución madre al
medio de cultivo (sólido o
líquido) o de un medio a otro
(resiembra). También sirve
para la realización de frotis.
Autoclave Sirve para esterilizar
material de laboratorio,
utilizando vapor de agua a
alta presión y temperatura,
evitando con las altas
presiones que el agua llegue
a ebullir a pesar de su alta
temperatura.
Balanza Mide la masa de un cuerpo o
sustancia.

Balón de base plana Utilizados para el

calentamiento uniforme de
distintas sustancias.

Baños de María Se utiliza para incubar

muestras en agua a una
temperatura constante
durante un largo período de
tiempo, también para
calentamiento de reactivos y
fusión de sustratos.
Centrífuga Utilizada en los laboratorios
como proceso de la
separación de la
sedimentación de los
componentes líquidos y
sólidos.

Contador de colonias Utilizado para contar

colonias de bacterias o de
otros microorganismos que
crecen en una placa de agar.

Cubre objetos Sirve para cubrir los objetos

que estén en el portaobjetos
que a su vez está en un
microscopio.

Cámara de anaerobiosis Se usan para conseguir una

atmósfera libre de oxígeno
para el cultivo de
microorganismos
anaerobios.
Cámara de seguridad Se usa para trabajar de
biológica modo seguro con materiales
contaminados con agentes
patógenos (bacterias,
virus...).

Cámara refrigerada Se utilizan para conservar

tanto materiales (medios de
cultivo, reactivos) como
microorganismos.
Generalmente están a una
temperatura fija de 4ºC.

Desionizador de agua Elimina los iones

inorgánicos presentes en el
agua mediante el uso de
resinas absorbentes de
iones.

Embudo Empleado para canalizar

líquidos y materiales
granulares en recipientes
con bocas estrechas.

Espátula Es utilizada principalmente

para tomar pequeñas
cantidades de compuestos o
sustancias sólidas,
especialmente las
granulares.

Fiola Se utiliza en la mayoría de

los casos para contener,
almacenar y medir líquidos.

Frasco gotero Se utiliza para trasvasar

pequeñas cantidades de
líquido vertiéndolo gota a
gota.
Gradillas Es utilizada para sostener y
almacenar gran cantidad de
tubos de ensayo o tubos
Eppendorf.

Cámara de siembra Se utiliza para realizar la

siembra de los
microrganismos en
condiciones de
esterilización.

Horno esterilizador Utilizados para esterilizar

artículos que pueden
soportar altas temperaturas
y no se queman ni degradan,
como material de vidrio o de
metal y sustancias estables
en polvo.

Incubadora Cámara de temperatura

controlada que se utiliza
para facilitar el desarrollo de
los microorganismos a su
temperatura óptima de
crecimiento (generalmente
35-37º).

Jeringas Dispositivo utilizado para

aspirar e inyectar sustancias
líquidas, útil en la obtención
y transporte de muestras.

Luna de Reloj Su utilidad más frecuente es

pesar muestras sólidas;
aunque también es utilizado
para pesar muestras
húmedas después de hacer
la filtración, también sirve
para el calentamiento de
sustancias o compuestos
químicos, hasta obtener
precipitados.
Lupa Lente convergente que
puede conseguir que la
imagen de un objeto se vea
ampliada, y, por lo tanto,
verla bajo un ángulo
aparente mayor, utilizada en
la observación de colonias.
Matraz Aforado Se emplea para medir un
volumen exacto de líquido
con base a la capacidad del
propio matraz, que aparece
indicada.

Matraz Erlenmeyer Recipiente de vidrio que

tiene forma de cono y un
cuello cilíndrico, es plano
por la base. Se utiliza para
calentar líquidos cuando hay
peligro de por evaporación.

Mechero de Bunsen El mechero o quemador

Bunsen es un instrumento
utilizado en los laboratorios
científicos para calentar,
esterilizar o proceder a la
combustión de muestras o
reactivos químicos.

Microscopio Instrumento que permite

observar objetos no visibles
al ojo humano, mediante un
sistema óptico compuesto
por lentes que forman y
amplifican la imagen del
objeto que se está
observando.
Mufla Horno que se utiliza para
calcinar y secar sustancias,
fundición y procesos de
control.
Pera de Decantación También llamado embudo
de decantación, es un
elemento de vidrio utilizado
para separar líquidos
inmiscibles.

PH-Metro Sensor utilizado para medir

el pH de un medio, basado
en métodos electroquímicos

Pinza para tubo de ensayo Sirven para sostener los

tubos de ensayos mientras
se calientan o se trabaja en
condiciones bajo las cuales
no es propicio tener
contacto directo con los
mismos.

Pipeta Tubo de vidrio graduado,

utilizado para trasvasar
pequeñas porciones de
líquido mediante un
mecanismo de succión.

Placa Petri Recipiente redondo de

vidrio o plástico, con tapa y
de variadas dimensiones,
utilizado principalmente
para el cultivo de
microorganismos.
Placa de Brewer Similares a las Placas Petri,
con la diferencia que su tapa
es más pesada, están
diseñadas para hacer
anaerobiosis, es decir
cultivo de microorganismos
anaerobios.

Porta Objetos Pieza delgada de vidrio

plano, generalmente de
dimensiones (75x25) mm y
1 mm de grosor, utilizada
para sostener objetos al
estudiarlos en un
microscopio.
Probeta Tubo de cristal alargado,
cilíndrico y graduado;
utilizado generalmente para
medir el volumen de los
líquidos depositados en él.

Rejilla de Asbesto Malla de metal utilizada para

repartir el calor
uniformemente cuando se
calienta sobre un mechero.

Soporte de Laboratorio Instrumento de laboratorio

donde se pueden instalar las
pinzas de laboratorio, con el
objetivo de sostener tubos
de ensayos, buretas, peras
de decantación y otras
cristalerías de laboratorio.
Termómetro Instrumento utilizado para
medir la temperatura de un
medio, clásicamente es un
tubo de vidrio con mercurio
en su interior y
exteriormente grabado con
los niveles indicativos de la
temperatura.

Tubo de ensayo Tubo cilíndrico hecho de

vidrio con un extremo
cerrado y redondeado,
utilizado como contenedor
de sólidos y líquidos a los
cuales se les someterá a
pruebas o reacciones.

Tubos de Durham Similares estructuralmente

a un tubo de ensayo común,
pero con la diferencia de que
están diseñados para
determinar la producción de
gases de microorganismos.

Vaso de precipitado Recipiente hecho de vidrio

borosilicatado, de fondo
plano, graduado y de
variadas dimensiones;
utilizado para preparar,
calentar, medir o trasvasar
sustancias.
 Vortex Dispositivo que se usa para
agitar tubos o frascos de
líquido.

MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de
cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán
otros ingredientes.

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

1. Disponibilidad de nutrientes adecuados:
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,
como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los
factores nutritivos lábiles.
2. Consistencia adecuada del medio:
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado
semisólido o sólido.
3. Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases:
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental.
4. Condiciones adecuadas de humedad:
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos.
5. Luz ambiental:
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.
6. pH:
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos.
7. Temperatura:
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y
43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertermófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y
los saprófitos tienen rangos más amplios.
8. Esterilidad del medio:
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)
 TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO
• Agar Verde Brillante
Es un medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de Salmonella. Incluye
lactosa, sacarosa y rojo fenol.

• Agar Sangre
Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con
importancia clínica excepto el de los más exigentes. Se prepara añadiendo un 5% de
sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar base.
 • Agar Chocolate
Es un medio enriquecido muy parecido al agar sangre; la diferencia es que los glóbulos
rojos están lisados y liberan al medio nutrientes como la hemoglobina, factor X (hemina)
y factor V (NAD). Se utiliza para el cultivo de bacterias exigentes que necesitan estos
factores para su desarrollo, como es el caso de Neisseria gonorrhoeae (agente causal de la
gonorrea) y varias especies del género Haemophilus.

• Agar MacConkey
Es un medio diferencial y selectivo muy utilizado para el aislamiento e identificación de
enterobacterias (bacilos gramnegativos). Llevan en su composición sales biliares y cristal
violeta que inhiben el crecimiento de grampositivos y hongos. Contienen también lactosa
y rojo neutro como indicador de pH.
 • Agar eosina-azul de metileno (EMB o Levine)
Es similar al MacConkey, pero contiene eosina y azul de metileno como indicadores. Se
utiliza para el aislamiento y diferenciación de enterobacterias fermentadoras y no
fermentadoras de lactosa. El crecimiento de E. Coli aparece oscuro y con brillo verde
metálico.

• Agar Sabouraud
Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de hongos. Algunos contienen
antibióticos que inhiben a la mayoría de las bacterias como, por ejemplo, SGC (Sabouraud
gentamicina y cloranfenicol).
 • Agar CLED (cistina-lactosa deficiente en electrolitos)
Es un medio diferencial utilizado para aislar microorganismos del tracto urinario en
muestras de orina (urocultivos). Las colonias amarillas pertenecen a bacterias lactosa+,
como por ejemplo E. Coli, y las colonias verdes, azules e incoloras a bacterias lactosa–.

• Medio Lowenstein-Jensen
Es un medio selectivo que se utiliza para el cultivo de especies de micobacterias
(Mycobacterium spp.) como Mycobacterium tuberculosis.
• Agar Cerebro - Corazón
Es un medio sólido rico en nutrientes, adecuado para el cultivo de varias variedades
exigentes de bacterias, hongos y levaduras. Se utiliza para el cultivo de una gran
variedad de microorganismos exigentes como estreptococos, meningococos y
neumococos. Además, es adecuado en el sector bacteriológico para aislar hongos
patógenos a partir de material clínico como muestras de infecciones oculares, líquido
cefalorraquídeo, sangre y médula ósea.

• Agar Salmonella Shigella (Agar SS)

Es un medio selectivo y diferencial ampliamente utilizado en bacteriología sanitaria
para aislar Salmonella y Shigella de heces, orina. Debido a su fuerte poder inhibidor,
en el Agar SS puede emplearse un inóculo concentrado.
• Medio MIO (Movilidad-Indol-Ornitina)
Es un medio semisólido utilizado para la diferenciación del grupo de Enterobacterias
mediante motilidad, actividad de ornitina descarboxilasa y producción de indol.

• Medio SIM
Es un medio semisólido utilizado para la diferenciación de bacterias entéricas a través
de la producción de sulfuro, la formación de indol y la motilidad. La prueba de
reducción de azufre es útil para diferenciar organismos entéricos, especialmente
Salmonella y Shigella. La prueba de indol se usa para diferenciar las enterobacterias.
La prueba de motilidad es útil para probar una amplia variedad de organismos. El
medio también es útil en la diferenciación de Klebsiella de especies de Enterobacter y
Serratia.
• Agar Baird Parker
Es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial. Fue creado para la detección y
recuento de estafilococos coagulasa positivos (Staphylococcus aureus).

• Agar Rambach
Medio de cultivo cromogénico CHROMagar para detectar y aislar Salmonella SPP en
muestras clínicas y de alimentos. El medio contiene propilenglicol que es utilizado por
Salmonella formando ácido.
• Agar Brucella
Siendo rico en nutrientes y factores de crecimiento, es muy adecuado para cultivar y
aislar microorganismos exigentes. Se utiliza para aislar con éxito Brucella desde
diversas muestras contaminadas con microflora, tanto saprófitos como comensales,
en muestras clínicas y productos alimenticios. Este medio también se usa para
producir toxinas clostridiales y para el aislamiento de muchos anaerobios de origen
humano y animal.

• Agar XLD (Agar Xilosa Lisina Desoxicolato)

Se prepara según la formulación de la norma ISO 6579. Se recomienda para la
identificación de Salmonella en productos alimenticios, después del
preenriquecimiento en un medio fluido no selectivo como el Agua Peptona
Tamponada y enriquecimiento en un medio fluido selectivo como la Base de Caldo
Muller Kauffmann con Verde Brillante y Novobiocina.
• Agar Nutritivo Estándar I
Es un medio adecuado para el cultivo y enumeración de bacterias exigentes. La
adición de sangre, fluido de ascitis o suero lo hace también adecuado para cultivar
estreptococos, neumococos y otros microorganismos. Se emplea para la enumeración
y el aislamiento de bacterias, y también como una base de alto grado para preparar
medios de cultivo especiales.

• Agar papa dextrosa

Son medios comunes de cultivo microbiológico que se preparan a partir de infusión
de patata y dextrosa. El agar papa dextrosa es el medio más utilizado para el
crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia vegetal
muerta en descomposición.
• Agar Mueller Hinton
Se desarrolló originalmente para el cultivo y aislamiento de cepas patógenas de
Neisseria. Se vio que este medio era útil para identificar cepas de gonococos sensibles
y resistentes a la sulfonamida. Sin embargo, el agar Mueller Hinton ahora se utiliza en
pruebas de susceptibilidad de discos antimicrobianos.

• Agar Tripticasa soya (TSA)

Es un medio multiuso, producido por la digestión enzimática de soya y caseína. Es la
base de otros tipos de agar, por ejemplo, el agar sangre está hecho de TSA enriquecido
con sangre. TSA permite crecer muchas bacterias semifastidosas incluyendo algunas
especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria, y Vibrio.
 CONCLUSIONES
• Al conocer las diferentes reglas que se deben seguir al ingresar al laboratorio, se
deberá ser responsable y seguir cada una de ellas. Dependerá de cada estudiante
que cada experiencia sea exitosa.
• Al empezar cada actividad, la zona de trabajo debe de limpiarse y desinfectarse
con los utensilios adecuados. Lo mismo se realizará al finalizar el experimento.
• Los instrumentos a usar deben pasar por la autoclave para ser esterilizados, antes
de empezar la actividad y después de finalizarla.
• Por medio de las investigaciones pertinentes, se ha podido establecer que se han
preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes y para que las bacterias
crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones. Además, los medios de cultivo, según su consistencia, pueden ser:
líquidos, sólidos y semisólidos. Por otro lado, están aquellos según su origen:
naturales, semisintéticos y sintéticos. Por último, según su composición están:
comunes, enriquecidos y selectivos.