MEDICINA VETERINARIA PREVENTIVA Y EPIDEMIOLOGÍA

SOBRE EL USO DE PRUEBAS DIAGNOSTICAS

Sergio Páez

1) Que es una prueba diagnóstica y explique de acuerdo a su uso o

aplicación, en que consiste cada uno de los tipos en que se dividen: Filtro o
tamiz y diagnósticas. De un ejemplo práctico de cada una según
corresponda, teniendo en cuenta que pueden ser expresadas como una
variable dicotómica, ordinal o continúa.
Una prueba diagnóstica es un proceso diseñado para detectar lesiones, antígenos,
Anticuerpos, sustancias tóxicas, organismos o marcadores genéticos. Debido a su
Uso, aplicación o ambos, las pruebas pueden ser: filtro o tamiz y diagnósticas. Las
Pruebas filtro son aplicadas a poblaciones aparentemente sanas, para detectar
Infección o enfermedad subclínica y las diagnósticas a poblaciones afectadas. Por
regla general, se dice que las pruebas filtro se llevan a cabo en poblaciones
grandes y son seguidas por pruebas diagnósticas en aquellos animales que
resulten positivos.

El resultado de una prueba puede ser expresado como una variable dicotómica,
ordinal o continua:
• Dicotómica: presencia de signos clínicos (sí/no).
-Gestante (sí o no).
-Aislamiento viral (sí o no).
-Serología positiva (sí o no).

• Ordinal: Títulos serológicos (1:4, 1:8, 1:16., 1:32, 1:64)

146 • Epidemiología veterinaria (Capítulo 9)

• Continuas: Conteo celular.

Cantidad de enzimas en suero

Ejemplos:

1. DIAGNOSTICO DE BRUCELOSIS

PRUEBA DE BPA (Prueba en placa con antígeno bufferado)

SEROAGLUTINAClON EN TUBO (SAT prueba lenta o de Wright) 2
mercaptoetanol, RIVANOL Y FIJACIÓN DE COMPLEMENTO. La prueba de BPA
se utilizará como prueba tamiz.
Es una prueba cualitativa de aglutinación en placa que presenta la ventaja de ser
realizada en una sola dilución. El resultado se expresa como POSITIVO o
NEGATIVO. Los animales se clasifican como negativos o reaccionantes debiendo
estos últimos ser sometidos a pruebas complementarias para su diagnóstico
definitivo. Los sueros que resulten positivos al BPA serán procesados por la
prueba de seroaglutinación (SAT) en tubos y 2 mercaptoetanol (2-ME). Otra
aternativa para los sueros positivos a BPA es la prueba de Rivanol, pero
reservada para utilizarse en lugares donde se carezca de laboratorios con
suficiente infraestructura o cuando por condiciones de manejo no se pueda
esperar los resultados por períodos de 72 horas. La técnica de Rivanol no debe
ser empleada para animales de importación o exportación, exposiciones
ganaderas o envíos a la Patagonia.

La prueba de 2 mercaptoetanol se basa en la propiedad que tiene la droga de

inactivar las inmunoglobulinas IgM. Debe hacerse siempre en forma paralela y
simultanea con la aglutinación lenta en tubos. La diferencia entre los títulos finales
de ambas pruebas se interpreta como la capacidad aglutinante del suero debido a
la presencia de anticuerpos anti IgM. La presencia de IgM se asocia generalmente
con infección activa por lo que toda reacción en esta prueba debe ser considerada
como indicativa de infección. Los animales vacunados ocho o más meses antes
de la realización de la prueba suelen tener solamente anticuerpos sensibles al
mercaptoetanol.

Los animales reaccionantes a esta prueba se deben considerar infectados

aunque tengan antecedentes de vacunación, siempre que ésta haya sido
efectuado por lo menos ocho meses antes.
Los resultados negativos a la prueba de 2 mercaptoetanol no son concluyentes
porque en el período inicial de la enfermedad la mayoría de los anticuerpos
presentes son del grupo IgM.

-UN SOSPECHOS0 debe ser chequeado y comprobarse su negatividad, de lo

contrario es POTENCIALMENTE animal POSITIVO. Para animales de exportación
o importación, exposiciones ganaderas, Patagonia y para rodeos libres sólo se
aceptan animales negativos NO SOSPECHOSOS.

2. LEPTOSPIROSIS BOVINA

La Leptospirosis es la enfermedad reproductiva más importante de los bovinos

Ocasiona grandes pérdidas económicas por infertilidad, abortos y mortalidad
neonatal. Los estudios en vacas de cría muestra una seroprevalencia nacional de
38% siendo Leptospira borgpetersenii tipo hardjobovis (24%) y L. interrogans sv.
pomona (5.6%) los serotipo más prevalentes. El bovino es un huésped de
mantenimiento de Leptospira borgpertersenii tipo hardjobovis y hospedador
accidental de la L. pomona, lo que tiene importancia a los efectos de la
interpretación de los títulos serológicos ya que estos tienden a ser a ser bajos en
el primer caso y altos en el segundo .
 La Leptospira borgpetersenii tipo hardjobovis sobrevive en el riñón y en el tracto
genital de la vaca, y se excreta por la orina durante años, siendo esta la principal
fuente de contaminación de los campos. El organismo sobrevive mejor en el medio
ambiente con temperaturas entre 7 °C y 36 °C y pH de 6-8. Pero el factor más
crítico que gobierna la supervivencia de la leptospira en el ambiente es la
humedad o agua superficial del suelo. Por esta razón la ocurrencia de la
enfermedad en nuestro país es más común en campos bajos con poco drenaje y
rara en zonas de sierras con pendientes pronunciadas. La Leptospira Pomona
infecta al bovino sólo accidentalmente a partir de otras especies reservorios, tales
como el cerdo y los roedores silvestres

El diagnóstico definitivo de la leptospirosis es el aislamiento de la Leptospira sp.

del feto y la vaca abortada. El aislamiento del feto es una prueba que tiene un
100% de especificidad, ya que es la prueba de oro de la enfermedad, pero su
sensibilidad es muy baja ya que la bacteria es muy lábil y de difícil aislamiento.

En nuestras condiciones de campo, el método de diagnóstico más empleado en

vacas es la serología por el test de microaglutinación en placa o MAT. Este es el
test estándar de la Leptospirosis pero se debe ser cuidadoso en la interpretación
de los resultados El test es analíticamente muy sensible y específico para detectar
la infección del animal con títulos de 1:200, pero es poco específico desde el punto
de vista diagnóstico ya que casi el 40% de las vacas normales tienen títulos de
1:200 en nuestro país (ver Cuadro 3). Para aumentar la especificidad del test para
el diagnóstico del aborto, se recomienda considerar positivos animales con títulos
altos, aunque el criterio varía entre países, en general títulos de ³ 1:800 para L
hardjobovis y ³ 1:3200 para L pomona se consideran indicadores de infección
aguda. Para aumentar el valor predictivo del MAT se recomienda hacer la prueba
en todas las vacas abortadas, no aleatoriamente en vacas sanas, aunque
generalmente 12 vacas es suficiente.

2) Que es una Prueba de Oro y en qué consiste? explique que son los
verdaderos positivos, falsos positivos, falsos negativos y verdaderos
negativos. Mencione cual es la prueba de Oro para cinco (5) enfermedades
zoonoticas diferentes a las relacionadas en el capítulo 9 del libro
Epidemiología Veterinaria

Prueba de Oro También denominada Gold estándar, diagnóstico estándar, prueba

definitiva o de referencia. Es considerada como un método o una combinación de
éstos, con el cual se determina absolutamente y sin error si un individuo o un hato
se encuentran infectado o enfermo, su resultado es considerado como el
diagnóstico definitivo de una enfermedad.

Existen pruebas rápidas y económicas que pueden ser desarrolladas aunque

probablemente sean menos exactas que la prueba de oro. Para que una prueba
pueda ser evaluada se utiliza una tabla de 2 x 2, obteniendo datos de las cuatro
celdas
Donde:
a: Animales enfermos detectados por la prueba (verdaderos positivos).
b: Animales sanos que resultaron positivos a la prueba (falsos positivos).
c: Individuos enfermos no detectados por la prueba (falsos negativos).
d: Individuos sanos que resultaron negativos a la prueba (verdaderos negativos).

 NEOSPOROSIS EN BOVINOS: presencia de Neospora sp. detectada por

inmunohistoquímica en los tejidos fetales. Esta estrategia de diagnóstico es
100% específica, ya que las lesiones fetales y la inmunohistoquímica.
 Botulismo : sangre y contenido intestinal o heces de los enfermos, detectar la
toxina se utiliza suero o plasma de la sangre de los enfermos
 Influenza: La identificación del virus se realiza con la técnica de Inhibición de
la Hemaglutinación y en las aves con la técnica de Inhibición de la
Neuraminidasa. Hay tres métodos principales para detectar partículas o la
infección viral en un individuo: la detección del antígeno, el cultivo del virus y la
reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcripción reversa
(RRT-PCR).
 Tétanos: se puede contar con la detección de la toxina circulante en sangre,
inoculando a ratones y observando la sintomatología, efectuando pruebas de
neutralización, coloreando y observando al microscopio material de la herida y
cultivando este mismo en medios para anaerobios.
 Brucelosis: Prueba del antígeno amortiguado, rosa de bengala o prueba de la
tarjeta
 Carbunco bacteridiano: Prueba de precipitación de Áscoli También llamada
prueba de termo precipitación de Ascoli o reacción de Áscoli-Valenti: investiga
en los cadáveres la presencia de los antígenos polipeptídico y polisacárido del
Bacillus anthracis, lo cual, en caso de positividad, demuestra que la muerte se
produjo por este agente.

 Tuberculosis La Tuberculosis, es una enfermedad infectocontagiosa crónica,

producida por bacterias de morfología bacilar pertenecientes al
 género Mycobacterium, incluyendo las especies bovis, tuberculosis y avium,
que guardan una estrecha relación como las bacterias causantes de la
tuberculosis humana y aviar.

-La prueba cutánea de tuberculina o prueba de Mantoux (TST, por sus

siglas en inglés)
-prueba IGRA (ensayo de liberación de interferón gamma) es una prueba
de sangre que puede determinar si una persona está infectada con las
bacterias de la tuberculosis

3) Que es la exactitud o validez de una prueba diagnóstica? En que consiste

la Sensibilidad, la especificidad y el Punto de corte de una prueba?
Explique cuál es la fórmula para realizar el cálculo y dé el ejemplo práctico
con 3 enfermedades diferentes.

Exactitud o validez
La exactitud de una prueba describe que tan cercano es el resultado de ésta, con
el estado verdadero del individuo. Es decir, es el grado con que se refleja el valor
real de la variable en cuestión (enfermedad o infección). Una prueba exacta
siempre va a ser correcta, esto es, nunca van a existir resultados falsos positivos y
negativos. La mayoría de las pruebas no son 100% exactas en su habilidad para
identificar correctamente individuos infectados o no infectados.

 *La exactitud se utiliza para expresar el comportamiento general de una

prueba diagnóstica.
 Exactitud y precisión no son la misma cosa. Una prueba puede ser
precisa sin ser exacta, pero no puede ser exacta sin ser precisa.
 La exactitud tiene dos componentes importantes:
• Sensibilidad (Se).
• Especificidad (Es).
Para establecer dichas características, la prueba debe realizarse con muestras
procedentes de animales de los cuales se conoce el estado de salud: enfermos o
sanos.

Sensibilidad (Se)
Existen muchas definiciones en la literatura con relación a estos dos
componentes,
las más comunes se enuncian a continuación:
• “Es la habilidad de la prueba para detectar a los individuos enfermos”.
• “Es la probabilidad de que una prueba identifique correctamente aquellos
Individuos que están infectados”.
• “Es la probabilidad de un resultado positivo en individuos que se conoce son
positivos al evento de interés (enfermo, infectado)”.

La sensibilidad es medida como: la proporción de individuos con la enfermedad

Que dan un resultado positivo.
a

a+c

Especificidad (Es)
La especificidad se puede definir de las siguientes formas:
• Es la habilidad de la prueba para detectar a los individuos sanos.
• Es la probabilidad de que una prueba identifique correctamente aquellos
individuos que no están enfermos.
• Es la probabilidad de un resultado negativo en individuos que se sabe que son
libres del evento de interés (enfermedad, infección).
La especificidad es medida como: la proporción de individuos no enfermos que
dan un resultado negativo.

b+d

Punto de corte
La distribución normal de una prueba exacta, sería como se muestra en la figura
9-1. Sin embargo, no existe prueba que tenga un 100% de exactitud debido a la
Influencia de factores biológicos, técnicos o humanos. Siempre en los resultados
obtenidos, existirán animales clasificados como falsos positivos y falsos negativos,
lo que origina que la curva de distribución de los valores de las poblaciones con y
sin la variable de interés se sobre pongan

El punto donde se sobreponen las dos curvas es conocido como punto de corte
(del inglés Cut-off value). Éste se puede definir de las siguientes maneras:
• El punto de corte es un punto en una escala de medida que clasifica los
resultados
en positivos a la prueba y negativos a la prueba.
• El punto de corte es aquel que divide los resultados en dos grupos: los infectados
y no infectados.

Para seleccionar el valor del punto de

corte se deben de considerar factores
tales como: el propósito de la prueba
(como prueba tamiz o como prueba
confirmatoria),
el costo relativo (económico, social o
político), que implica detectar cierto
número de falsos positivos o falsos
negativos y la disponibilidad de una
prueba confirmatoria con alta
especificidad. De igual forma, cuando se interpreten los resultados es conveniente
considerar los siguientes puntos:

Ejemplo

Existen varios exámenes para el diagnóstico de la paratuberculosis bovina, pero

ninguno es altamente confiable por sí mismos. Una prueba que se utiliza
ampliamente es para detectar anticuerpos contra las bacterias paratuberculosis
utilizando una prueba de ELISA.

Con el fin de determinar la sensibilidad y especificidad de la prueba ELISA

paratuberculosis, un proyecto de investigación se llevó a cabo en el que muestras
de suero de 824 vacas fueron probados por ELISA, y luego se sacrificaron las
vacas y varias pruebas adicionales (cultivo fecal, la cultura ganglio linfático,
histopatología , PCR) se realizaron sobre muestras de cada vaca para
proporcionar un diagnóstico definitivo de si cada vaca fue o no infectado. Los
resultados de este ensayo se describen en la siguiente tabla como el número de
vacas en cada una de cuatro categorías.

a = verdaderos positivos (animales infectados que dieron positivo

b = falsos positivos (animales infectados que presenten resultados negativos)
c = falsos negativos (animales no infectados que dieron positivo)
d = verdaderos negativos (animales no infectados que dieron negative)

Utilizando los datos anteriores, se puede calcular la sensibilidad y especificidad de

esta prueba ELISA:

sensibilidad

Especificidad
La prueba de ELISA evaluado en este ejemplo tiene una baja sensibilidad y alta
especificidad a moderada. Ahora puede interpretar mejor los resultados del
examen de la siguiente manera:

 Una vaca es prueba de ELISA positivo: Debido a que la prueba tiene una
alta especificidad, hay una probabilidad muy alta de que la vaca está
infectada realidad
 Una vaca es prueba de ELISA negativo: Debido a que la prueba tiene una
sensibilidad baja o moderada, hay una probabilidad clara de que se trata de
un falso negativo y la vaca en realidad puede estar infectada

La baja sensibilidad de este ELISA no debe interpretarse en el sentido de que este

es un no una prueba útil. Para paratuberculosis, no existen excelentes pruebas y
la prueba ELISA es una buena herramienta para determinar si la enfermedad está
presente. Sin embargo, debido a la sensibilidad de la prueba bajo, lo mejor es
probar varios animales en un solo rebaño en lugar de pruebas de un solo animal.

4) En que consiste la Prevalencia aparente (PA) y la Prevalencia real (PR),

como se calcula y de 2 ejemplos prácticos de cada una, para 3
enfermedades zoonoticas diferentes a las citadas en la bibliografía y su
interpretación.
Prevalencia aparente: es la cantidad de individuos positivos a la prueba tamiz.
Se calcula sumando el numero de verdaderos positivos y el numero de falsos
positivos, dividiéndolo por el total de la población muestreada
Prevalencia real: cantidad de animales positivos a la prueba oro.
Se calcula sumando el numero de verdaderos positivos con el numero de falsos
negativos y dividiéndolo por el total de la población muestreada
Ejemplo 1: Leptospira
Se realizó un estudio epidemiológico transversal para conocer la prevalencia
aparente y real de leptospirosis en el ganado bovino y para evaluar el uso de la
prueba de ELISA como prueba tamiz. La prueba de Oro que se utilizó fue la
microaglutinacion. El estudio se realizó en 10 000 animales.

a. 145 verdaderos positivos

b. 53 falso positivos
c. 34 falsos negativos
d. 9748 verdaderos negativos

Exactitud: 9893/10000 x 100= 98.93%

Sensibilidad: 145/179 x 100= 81%

Especificidad: 9748/9801 x 100 = 99.45%
Prevalencia real: 179/10000 x 100 = 1.79%
Prevalencia aparente: 198/10000 x 100 = 1.98%
Interpretación
De los resultados obtenidos se puede observar que la exactitud de la prueba es
alta. La PA y PR son muy similares 1.98 y 1.79% de manera respectiva. Así
mismo, la Se (81%) relativa de la prueba de ELISA es muy baja; esto quiere decir,
que de cada 100 animales verdaderamente positivos, sólo 81 van a ser
clasificados de forma correcta como verdaderos positivos. Por otro lado, se
observa una Es alta (99.45%), lo que indica que de cada 100 animales negativos
99 van a ser clasificados como verdaderos negativos.

Así mismo, se puede observar un bajo número de individuos clasificados como

falsos negativos (34).

Ejemplo 2:

Se realizó un estudio epidemiológico transversal para conocer la prevalencia

aparente y real de babesiosis en el ganado bovino y para evaluar el uso de la
prueba de frotis sanguíneo como prueba tamiz. La prueba de Oro que se utilizó
fue la PCR. El estudio se realizó en 10 000 animales.

a. 486 verdaderos positivos

b. 23 falso positivos
c. 11 falsos negativos
d. 9480 verdaderos negativos

Exactitud: 9480/10000 x 100= 94.8%

Sensibilidad: 486/497 x 100= 97.8%

Especificidad: 9480/9503 x 100 = 99.8%
Prevalencia real: 497/10000 x 100 = 4.97 %
Prevalencia aparente: 509/10000 x 100 = 5.1 %
Interpretación
De los resultados obtenidos se puede observar que la exactitud de la prueba es
alta. La PA y PR son muy similares 5.1 y 4.97% de manera respectiva. Así mismo,
la Se (97.8%) relativa de la prueba de frotis sanguíneo es muy alta; esto quiere
decir, que de cada 100 animales verdaderamente positivos, 97 van a ser
clasificados de forma correcta como verdaderos positivos. Por otro lado, se
observa una Es alta (99.8%), lo que indica que de cada 100 animales negativos 99
van a ser clasificados como verdaderos negativos.
Así mismo, se puede observar un bajo número de individuos clasificados como
falsos negativos (11).

5.) En que consiste la Concordancia entre pruebas. Explique mediante 2

ejemplos prácticos.

La concordancia entre pruebas establece la similitud en los resultados que puedan

tener diversas pruebas diagnosticas para una misma enfermedad, logrando
establecer si se reemplaza una por la otra o si se intercalan en el proceso de
diagnostico de una enfermedad, ya que diagnosticar una enfermedad por medio
de una sola prueba, en algunos casos, resulta engorroso y poco preciso.

Ejemplo 1 se estudio el nivel de acuerdo entre dos pruebas de diagnóstico

serológico para toxoplasmosis en cerdos. El ELISA y la prueba de
hemaglutinación indirecta se evaluaron utilizando sueros sanguíneos recolectados
en mataderos de 303 cerdos en Sao Paulo, Brasil y 93 cerdos en Lima, Perú.

La prueba inmunoenzimática ELISA,ha mostrado claras ventajas sobre otras

pruebas. Se pueden analizar muchas muestras en forma simultánea con poco
equipo sofistica-do, comparado con la prueba de inmuno fluorescencia, y los
resultados obtenidos ofrecen mayor consistencia y son más confiables que
las obtenidas con la hemaglutinación. Ade-más, la prueba de ELISA tiene alta
sensibilidad y especificidad y puede detectar tanto infecciones recientes
como latentes de toxoplasmosis, detectando simultáneamente anticuerpos IgM e
IgG .

Ejemplo 2 comparación del resultado de las técnicas serológicas de tarjeta (RB)

y rivanol (RIV) con la prueba de ELISA (Enzime Linked Immunoabsorbent Assay)
cualitativo y cuantitativo para el diagnostico de la brucelosis.

evaluaron cuatro técnicas serológicas para el diagnóstico de infecciones causadas

por B. abortus en bovinos mostrando una sensibilidad relativa de ELISA con RB de
93% y especificidad relativa del 98%. AparicioBahena et al., (2003) realizo una
evaluación serológica y bacteriológica de un hato bovino con brucelosis y
revacunado con dosis de Brucella abortus cepa 19, observando una similitud en
resultados para sensibilidad 96.8%. Abalos et al., (1998) Utilizaron un ELISA para
el diagnóstico y estudio epidemiológico de Brucella abortus en Chile, calcularon la
sensibilidad relativa de RB comparado con ELISA (95.7%), resultado que
coinciden con el nuestro, y una especificidad relativa menor de (82.4%),
considerando que RB es un análisis muy sensible que da algunos falsos positivos
y que se tomaron en cuenta diferentes puntos de corte referidos por la (FAO,
1991) y ajustados según resultados obtenidos.

 6) Cuál es el objetivo de realizar pruebas múltiples? explique en qué

consiste cada una de ellas: Pruebas en serie y Pruebas Paralelas. De 2
ejemplos prácticos de cada una y cuáles son los criterios para seleccionar
una prueba?

PRUEBAS MÚLTIPLES
Algunas veces las pruebas no son suficientemente exactas lo que origina que se
tenga que utilizar algunas de ellas para tener mayor probabilidad de efectuar un
diagnóstico correcto. La combinación de pruebas es un recurso utilizado en
muchos diagnósticos para dar una respuesta acertada.

Pruebas en serie
Es un procedimiento en el cual se aplican varias pruebas en forma secuencial y de
Forma consecutiva, basado en los resultados para clasificar a los animales
positivos. Es decir, solo aquellos animales que son positivos a la prueba inicial son
analizados nuevamente. Se considerará que el individuo tiene la enfermedad
cuando el resultado de todas las pruebas es positivo. Para este tipo de pruebas se
recomienda incrementar la especificidad y el valor predictivo positivo.
Este tipo de pruebas son importantes para las campañas de erradicación, en
donde los animales positivos son eliminados de los hatos.

Pruebas paralelas
Este es un procedimiento en el cual se realizan dos o más pruebas en una
población al mismo tiempo. En este caso se considerará que el animal posee la
enfermedad cuando sea positivo a una o más de las pruebas aplicadas. Se
recomienda incrementar la sensibilidad y el valor predictivo negativo. Este proceso
es conveniente para evaluaciones rápidas o exámenes de rutina.