Memoria

INFLUENCIA DEL SISTEMA DE CULTIVO EN LA
MORFOLOGIA Y PRODUCTIVIDAD DE ULVA

OHNOI: FOTOBIORREACTORES, CULTIVO DE
FRAGMENTOS DE TALO EN TANQUES Y CUERDAS
DE CULTIVO
Trabajo Final de Grado
–
Ingeniería de Sistemas Biológicos
Autor: Andrea Escribano Prófumo

Supervisor: Joan Oca Baradad
Castelledefels, 10 de enero de 2019

Influencia del sistema de cultivo en la morfología y productividad de Ulva ohnoi: fotobiorreactores, cultivo de
fragmentos de talo en tanques y cuerdas de cultivo. 1
Resumen
La existencia y el consumo de macroalgas, actualmente representa una parte importante de los
recursos marinos de mayor explotación. Sus principales aplicaciones están en el uso de estas
como biofiltros, productos cosméticos y alimenticios, ya que contienen altos valores
nutricionales en compuestos bioactivos, actúan como antioxidantes y antitumorales. También,
son emulsionantes y contienen pocas calorías, permitiendo un aporte calórico casi nulo en los
alimentos.
Dada la gran cantidad de recursos naturales y los posibles usos que contienen las algas, el
objetivo de este trabajo se basa en la valoración de la morfología, la tasa de crecimiento y la
productividad de Ulva ohnoi, cultivando: fragmentos circulares e irregulares en
fotobiorreactores, fragmentos de talo en tanques e integración de cuerdas de cultivo sin
sembrado previo en un sistema IMTA (Acuicultura Multitrófica Integrada). Para llevar a cabo
esta valoración, se realizó una medición del grosor, de la biomasa y un tratamiento de imágenes
en muestras aleatorias de cada tipo de cultivo, proporcionando el posterior análisis de la
relación de aspecto y circularidad.
Los resultados mostraron una tasa de crecimiento máxima de !"Á$ = 0.93d-1 en el 4o día, en
fotobiorreactores para fragmentos irregulares. Lo que induce a pensar que, una buena
producción de Ulva ohnoi seria un cultivo previo de fragmentos irregulares en fotobiorreactores
y uno posterior en tanques. Por otro lado, indistintamente de la morfología inicial de cultivo del
alga, existe un aumento destacable de la elongación de los talos y una elevada perdida de
circularidad en los tres tipos de cultivo, por lo que toda muestra tiende a obtener morfologías
irregulares. Cabe destacar también que, cuanto mayor es la manipulación que reciben las
muestras, mayores son los valores de grosor obtenidos. Finalmente, es posible obtener biomasa
en cuerdas de cultivo sin un sembrado inicial, aunque es importante tener en cuenta el tiempo
previo necesario y hacer una buena selección de los cabos según su composición.
Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

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Abstract
The existence and consumption of macroalgae currently represents an important part of the
marine resources of greater exploitation. They main applications are in the use of these as
biofilters, cosmetics and food products, since they contain high nutritional values in bioactive
compounds, they act as antioxidants and antitumor agents. Also, they are emulsifiers and
contain few calories, allowing almost no caloric intake in food.
Given the great amount of natural resources and the possible uses that contain the algae, the
objective of this work is based on the assessment of the morphology, the growth rate and the
productivity of Ulva ohnoi, cultivating: circular and irregular fragments in photobioreactors,
fragments of talus in tanks and integration of cultivation ropes without previous seeding in an
IMTA system (Integrated Multitrophic Aquaculture). To carry out this assessment, a thickness,
biomass and image treatment were performed on random samples of each type of crop,
providing the subsequent analysis of the aspect ratio and circularity.
The results showed a maximum growth rate of !"Á$ = 0.93d-1 on the 4th day, in photobioreactors
for irregular fragments. What induces to think that, a good production of Ulva ohnoi would be a
previous crop of irregular fragments in photobioreactors and a later one in tanks. On the other
hand, regardless of the initial morphology of the alga culture, there is a remarkable increase in
the elongation of the talus and a high loss of circularity in the three types of culture, so that
every sample tends to obtain irregular morphologies. It should also be noted that the greater
the handling received by the samples, the greater the thickness values obtained. Finally, it is
possible to obtain biomass in ropes of culture without an initial seeding, although it is important
to consider the necessary previous time and make a good selection of the ropes according to
their composition.

Resum
L'existència i el consum de macroalgues, actualment representa una part important dels
recursos marins de major explotació. Les seves principals aplicacions són l'ús d'aquestes com
biofiltres, productes cosmètics i alimentaris, ja que contenen alts valors nutricionals en
compostos bioactius, actuen com antioxidants i antitumorals. També, són emulsionants i
contenen baixes calories, permetent una aportació calòrica gairebé nul·la en els aliments.
Donada la gran quantitat de recursos naturals i els possibles usos que contenen les algues,
l'objectiu d'aquest treball es basa en la valoració de la morfologia, la taxa de creixement i la
productivitat de Ulva ohnoi, cultivant: fragments circulars i irregulars en fotobiorreactors,
fragments de tal·lus en tancs i integració de cordes de cultiu sense sembrat previ en un sistema
IMTA (Aqüicultura Multitrófica Integrada). Per dur a terme aquesta valoració, es va realitzar un
mesurament del gruix, de la biomassa i un tractament d'imatges en mostres aleatòries de cada
tipus de cultiu, proporcionant el posterior anàlisi de la relació d'aspecte i circularitat.
Els resultats van mostrar una taxa de creixement màxima de !"Á$ = 0.93d-1 al 4t dia, en
fotobiorreactors per fragments irregulars. El que indueix a pensar que, una bona producció de
Ulva ohnoi seria un cultiu previ de fragments irregulars en fotobiorreactors i un de posterior en
tancs. D'altra banda, indiferentment de la morfologia inicial de cultiu de l'alga, hi ha un augment
destacable de l'elongació dels tal·lus i una elevada pèrdua de circularitat en els tres tipus de
cultiu, de manera que tota mostra tendeix a obtenir morfologies irregulars. Cal destacar també
que, com més gran és la manipulació que reben les mostres, majors són els valors de gruix
obtinguts. Finalment, és possible obtenir biomassa amb cordes de cultiu sense un sembrat
inicial, tot i que és important tenir en compte el temps previ necessari i fer una bona selecció
dels caps segons la seva composició.

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Sumario
ÍNDICE DE FIGURAS ______________________________________________________________ 5
ÍNDICE DE TABLAS _______________________________________________________________ 7
SÍMBOLOS Y ACRÓNIMOS _________________________________________________________ 8
AGRADECIMIENTOS ______________________________________________________________ 9
1. INTRODUCCIÓN ___________________________________________________________ 10
1.1. ALGAS ................................................................................................................................. 10
1.1.1. MACROALGAS ............................................................................................................ 10
1.1.2. MACROALGAS EN LA INDUSTRIA............................................................................... 12
1.2. Ulva ohnoi .......................................................................................................................... 13
1.3. CULTIVO DE MACROALGAS ............................................................................................... 15
1.4. CULTIVO DE MICROALGAS ................................................................................................. 17
2. OBJETIVOS _______________________________________________________________ 19
3. MATERIAL Y MÉTODOS _____________________________________________________ 20
3.1. Procedencia y recolección de Ulva ohnoi .......................................................................... 20
3.2. Experimentos ..................................................................................................................... 20
3.2.1. Fotobiorreactores ...................................................................................................... 21
3.2.2. Fragmentos de talo en tanques ................................................................................. 26
3.2.3. Cuerdas de cultivo...................................................................................................... 28
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN __________________________________________________ 31

4.1. FOTOBIORREACTORES ....................................................................................................... 31
4.1.1. Análisis macroscópico ................................................................................................ 31
4.2. FRAGMENTOS DE TALO EN TANQUE................................................................................. 48
4.3. CUERDAS DE CULTIVO ....................................................................................................... 58
CONCLUSIONES ________________________________________________________________ 69
BIBLIOGRAFÍA __________________________________________________________________ 71
Referencias bibliográficas .............................................................................................................. 71
Bibliografía complementaria ......................................................................................................... 74
ANEXOS _______________________________________________________________________ 75
Índice de figuras
Figura 1-1. Ejemplos de macroalgas (diamantevoyance.com, 2018) ...........................................11
Figura 1-2. Morfología de Ulva ohnoi (A. Escribano 2018) ...........................................................14
Figura 1-3. Morfología de Ulva ohnoi (A. Escribano 2018) ...........................................................14
Figura 1-4. Composición celular de Ulva ohnoi (A. Escribano 2018) ............................................14
Figura 3-1. Estructura del fotobiorreactor (A. Escribano 2018) ...................................................21
Figura 3-2. Ilustración de la trayectoria que sigue el flujo de agua marina en el tanque NA1 (A.
Escribano, 2018) .........................................................................................................................27
Figura 4-1. Composición de las imágenes capturadas en cada muestreo de la fase experimental
fragmentos circulares para cada fotobiorreactor .......................................................................31
Figura 4-2. Observación de pequeñas obstrucciones en la zona basal del
fotobiorreactor............................................................................................................................32
fragmentos irregulares para cada biorreactor ............................................................................33
Figura 4-4. Composición de gráficos sobre la evolución de la superficie en el tiempo de 20
muestras para ambas fases experimentales en el cultivo en fotobiorreactores ..........................36
Figura 4-5. Composición de gráficos sobre la evolución del perímetro en el tiempo de 20
Figura 4-6. Evolución morfológica de las muestras del fotobiorreactor 2 desde del inicio hasta
final de ambas fases experimentales ...........................................................................................37
Figura 4-7. Composición de gráficos sobre la evolución de la circularidad en el tiempo de 20
Figura 4-8. Composición de gráficos sobre la evolución de la elongación en el tiempo de 20
Figura 4-9. Evolución de la Tasa de crecimiento de las 20 muestras cultivadas en
fotobiorreactores durante la fase experimental fragmentos circulares ......................................42
fotobiorreactores durante la fase experimental fragmentos irregulares ....................................43
Figura 4-11. Composición de gráficos sobre la evolución de la densidad de cultivo, superficie y
grosor de ambas fases experimentales en el cultivo en fotobiorreactores ..................................48

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Figura 4-12. Evolución morfológica en el tiempo de las muestras en el cultivo de fragmentos de

talo en tanques ...........................................................................................................................49
Figura 4-13. Evolución de la superficie en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas en el cultivo
de fragmentos de talo en tanque ................................................................................................52
Figura 4-14. Evolución del perímetro en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas en el cultivo
Figura 4-15. Evolución de la circularidad en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas en el
cultivo de fragmentos de talo en tanque .....................................................................................54
Figura 4-16. Evolución de la elongación en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas en el
cultivo de fragmentos de talo en tanque .....................................................................................55
Figura 4-17. Evolución de la tasa de crecimiento de las muestras empleadas en el cultivo de
fragmentos de talo en tanque .....................................................................................................56
Figura 4-18. Gráfico sobre la evolución de la densidad de cultivo, superficie y grosor del cultivo
Figura 4-19. Composición de imágenes sobre: 1) inicio del experimento y 2) momento de
extracción de las cuerdas de cultivo en el primer muestreo ........................................................58
Figura 4-20. Composición de imágenes de las cuerdas de cultivo en cada muestreo realizado en
el experimento cuerdas de cultivo ..............................................................................................59
Figura 4-21. Composición de imágenes sobre las diferentes muestras de alga de las diferentes
cuerdas de cultivo y flotante en el 1er muestreo ..........................................................................60
cuerdas de cultivo y flotante en el 2. o muestreo .........................................................................62
cuerdas de cultivo y flotante en el 3.er muestreo .........................................................................64
Figura 4-24. Evolución del grosor de las diferentes muestras en los diferentes tipos de cuerdas
de cultivo y flotante .....................................................................................................................66
Figura 4-25. Evolución del grosor y la densidad de cultivo de las diferentes muestras en los
diferentes tipos de cuerdas de cultivo y flotante .........................................................................67
Índice de tablas
Tabla 4-1. Análisis de la superficie y perímetro de los resultados obtenidos en ImageJ de las
muestras analizadas en el cultivo en fotobiorreactores ..............................................................35
Tabla 4-2. Resultados de la tasa de crecimiento para ambas fases experimentales de cultivo en
fotobiorreactores ........................................................................................................................44
Tabla 4-3. Resultados de biomasa, densidad de cultivo y productividad en el tiempo para ambas
fases experimentales del cultivo en fotobiorreactores de cada muestreo ..................................46
Tabla 4-4. Análisis de la superficie y perímetro de los resultados obtenidos en ImageJ de las
muestras analizadas en el cultivo en tanque ...............................................................................51
Tabla 4-5. Resultados de biomasa, densidad de cultivo y productividad en el tiempo del cultivo
en tanque para cada muestreo ...................................................................................................57
Tabla 4-6. Resultados de biomasa del 1er muestreo en cuerdas de cultivo ..................................61
Tabla 4-7. Resultados de biomasa del 2o muestreo en cuerdas de cultivo ...................................63
Tabla 4-8. Resultados de biomasa del 3er muestreo en cuerdas de cultivo ...................................64
Tabla 4-9. Resultados promedios del grosor de las muestras en cuerdas de cultivo ....................65

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Símbolos y acrónimos
AR Relación de aspecto I.B1 Fragmentos irregulares
B Fotobiorreactor ffffffffffffff fotobiorreactor 1
BM Biomasa I.B1 Fragmentos irregulares
B1 Fotobiorreactor 1 ffffffffffffff fotobiorreactor 2
B2 Fotobiorreactor 2 I.B1 Fragmentos irregulares
B3 Fotobiorreactor 3 ffffffffffffff fotobiorreactor 3
C Circularidad L Litros
C.B1 Fragmentos circulares Ln Logaritmo neperiano
ffffffffffffff fotobiorreactor 1 m Metro
C.B2 Fragmentos circulares mm Milímetro
ffffffffffffff fotobiorreactor 2 P Perímetro
C.B3 Fragmentos circulares Pd Productividad
ffffffffffffff fotobiorreactor 3 S Superficie
cm Centímetro s Segundo
D.M. Diámetro mayor t Tiempo
D.m. Diámetro menor DBM Incremento de biomasa
d Día °C Grados centígrados
dw Peso seco µ Tasa de crecimiento
fw Peso fresco µMÄX Tasa de crecimiento máxima
g Gramo % Porcentaje
h Hora
Agradecimientos
A mi familia, por apoyarme incondicionalmente y animarme siempre a seguir adelante; a Joan
Oca por las horas de dedicación y ayuda aportada para realizar este trabajo; a Samuel Machado
y Sheila Alcalá por toda la ayuda y consejos prestados en el laboratorio; a Ingrid Masaló por la
ayuda en el entendimiento del uso de ImageJ; a Marta Ginovart por guiarme y ayudarme en la
interpretación y análisis de datos; a Antoni M. C. Verdú por su ayuda en la descripción de la
morfología de las algas; a Jaume Fullana por la ayuda prestada en el diseño 3D de los diferentes
tanques.

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1. Introducción
1.1. ALGAS
El origen de las algas es un debate que, hasta día de hoy, no se ha podido resolver. No existe
ningún estudio que demuestre la posibilidad de abarcar todas las especies de algas dentro de
un mismo reino. Si bien es cierto, las especies de algas existentes en la actualidad son
descendientes de diferentes linajes evolutivos, lo que provoca una gran diversidad genética y
una amplia biodiversidad dentro de las características principales que a estas las definen:
morfológicas, fisiológicas, taxonómicas, bioquímicas y ecológicas (Hurd, Harrison, Bischof, &
Lobban, n.d.).
Gracias a diversos estudios sobre este tipo de organismos, se pueden clasificar entre macroalgas
y microalgas, pudiendo afirmar que son: organismos eucariotas que, realizan una fotosíntesis
oxigénica, unicelulares o pluricelulares, autótrofos en su mayoría, pudiendo identificar especies
de algas heterótrofas, debido a la pérdida de sus pigmentos fotosintéticos. Presentan un
crecimiento generalizado y localizado, su reproducción es asexual (bipartición en unicelulares y
esporas o fragmentación en pluricelulares) y sexual (gametofítica y esporofítica) (APROMAR,
2014).
Las algas, además del gran interés que producen a nivel ecológico, son las principales
productoras primarias, siendo el punto de partida de las cadenas alimenticias y un recurso
económico natural, el cual nos proporciona un amplio abanico de usos: biofiltros,
bioestimulantes, medicinales, productos cosméticos, aditivos alimentarios, etc.
1.1.1. MACROALGAS
Son organismos vegetales que proliferan en el fondo marino, cuyo ciclo biológico se desarrolla
en medios acuáticos. Se caracterizan por ser vegetales talofitos (Collado-Vides, 1996), viven
anclados en sustratos rocosos en zonas costeras. Las macroalgas forman un substrato de fijación
para muchos organismos sésiles y a la vez proporcionan un albergue a numerosas especies de
peces, crustáceos y moluscos, a los que dan un cobijo cuando huyen de depredadores (Corral,
Grizel, Montes, & Polanco, 2000).

Por otro lado, proporcionan protección a las costas contra agresiones erosivas y participan en la
descontaminación de fosfatos y nitratos procedentes de los aportes terrígenos.
En el siglo XIX, William Henry Harvey (1811 – 1866) clasificó empíricamente las macroalgas y
microalgas en tres diferentes grupos, basándose en el color del talo: algas verdes (phylum
Chlorophyta), algas rojas (phylum Rodophyta) y algas pardas (phylum Phaeophyta), recopilando
un total de 48.000 especies de algas (Guiry et al., 1996-2018).
Figura 1-1. Ejemplos de macroalgas

(diamantevoyance.com, 2018).
Sin embargo, distinguir estos tres “phyla”, implica muchas otras características que William
Henry Harvey no tuvo en cuenta: están provistas de diversos pigmentos, los cuales les
proporcionan un método autótrofo de alimentación, el tamaño que estas pueden alcanzar, se
posiciona desde unos pocos centímetros hasta sobrepasar los 30 metros de longitud; la
composición de las paredes celulares puede variar sustancialmente según la especie,
provocando una diferenciación de tejidos en la zona del talo y falso rizoma (Guiry, 2014-2018).
Según en las condiciones hidrodinámicas en las que se encuentren, estas adoptan diferentes
estrategias para adaptar la morfología del talo.

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El talo puede variar entre colonial o pluricelular y a su vez cada tipo posee una serie de
variaciones en la morfología. Los talos coloniales pueden ser cenobios (todas las células tienen
la misma función) o verdaderas colonias (diferenciación de funciones vegetativas y
reproductivas); los talos pluricelulares pueden ser: trical (filamentos simples o ramificados que
crecen de modo intercalar o apicalmente), sifonodal (filamentos formados por división de
núcleos con una único septo entre ellos), plectenquimático (filamentos aglomerados) y
parenquimático (tejido compacto formado por división de células multiserialmente) (Cabral et
al., 2014).
1.1.2. MACROALGAS EN LA INDUSTRIA

El consumo de macroalgas bentónicas marinas por parte del ser humano está documentado
desde el año 2700 a.C. (APROMAR, 2014), normalmente en las zonas en las que era difícil el
acceso a otros recursos. En el extremo Oriente y en los países del Pacifico Asiático, las
macroalgas marinas durante siglos han sido y son cosechadas, para el consumo del ser humano
(McHugh, 2003), ya que poseen un alto valor nutricional debido a los diferentes compuestos
orgánicos e inorgánicos presentes en ellas como son: proteínas, carbohidratos, lípidos,
minerales y vitaminas; por sus propiedades curativas: resfriados, tumores, infecciones por
parásitos y tuberculosis (Dawes, 1998).
En Occidente, los intereses principales sobre las macroalgas son su valor nutricional y las
propiedades fisicoquímicas de diferentes moléculas contenidas en ellas. Estas moléculas tienen
capacidades emulsionantes o gelificantes. También tienen propiedades organolépticas como,
por ejemplo: la gran diversidad de texturas que pueden presentar, permitiendo a la población
hacer uso de las macroalgas en polvo, gelatina, crujiente, etc. Esto provoca que se puedan
substituir todas aquellas materias grasas contenidas en gran cantidad, en multitud de
preparaciones alimenticias como son: lácteos, salsas, carnes procesadas, dulces, etc.
En los últimos años ha habido un auge espectacular del consumo alimentario de macroalgas en
Europa. Este fenómeno viene precedido por la introducción accidental de especies foráneas, de
origen asiático, con una gran tradición gastronómica. Los usos de las macroalgas en la
alimentación, son extraordinariamente variados como, por ejemplo, el uso de láminas de alga
Phorphyra. Estas son enrolladas, envolviendo una bola de arroz y cualquier otro tipo de
ingrediente que dese el consumidor para formar el denominado “maki-sushi”. También usada
comúnmente, es el alga Undaria pinnatifida (“wakame”) como sustituto o acompañante de
verduras o ensaladas, inclusive el uso de esta con una morfología determinada para la correcta
presentación de platos. Este hecho provoca una revalorización del producto en el ámbito
gastronómico.
Por otro lado, se puede encontrar macroalgas y sustancias derivadas de estas, en todos aquellos
productos denominados “light”, ya que remplazan las harinas, huevos o mantequilla, logrando
texturizar sin ningún aporte calórico. En los alimentos clasificados como “bollería”, el uso de las
macroalgas proporciona un ahorro de costes para la industria, debido a la simplificación del
procedimiento de fabricación y por consecuente la mano de obra. Se puede identificar, si
nuestros alimentos contienen macroalgas o extractos de estas observando la etiqueta del
producto donde aparece E 400 o E 407.
Finalmente, a nivel industrial se practica la extracción de agar, carragenina y alginatos, con el

fin de utilizarlos como aditivos alimentarios (Cardozo et al., 2007). Son fuentes potenciales de
compuestos bioactivos, produciendo así, metabolitos secundarios implicados en una alta
variedad de actividades biológicas (propiedades antifungales, antivíricas, antibacterianas y
antioxidantes) (Chakraborty et al., 2015; Faulkner, 2002).
1.2. Ulva ohnoi

Ulva ohnoi es una especie vegetal que pertenece al conjunto de macroalgas verdes
(Clorophyceae) y por ende a la clase de Ulvophyceae. Geográficamente se encuentra ubicada en
la zona meridional, donde se puede encontrar aguas cálidas (20 – 25°C) y con alta intensidad
lumínica (Hiraoka et al., 2003).
Esta especie puede presentar ausencia de talo central, por lo que le permite mantenerse
libremente en suspensión (figura 1-2) o fijación sobre sustrato mediante un pequeño disco en la
zona basal (figura 1-3). Se caracteriza por presentar talos laminares distromáticos (el talo crece

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en superficie), pudiendo alcanzar entre 80 – 90µm en la zona basal y 30 – 55µm en la zona

intermedia-apical.
Figura 1-2. Morfología de Ulva ohnoi Figura 1-3. Morfología de Ulva ohnoi
(A. Escribano 2018). (A. Escribano 2018).
Por otro lado, en las figuras 1-2 y 1-3 se visualizan dos tipos de morfologías posibles que, esta
puede adoptar. En la figura 1-2, Ulva ohnoi presenta un talo laminar verde brillante, ovado
irregular con un margen ondulado. A diferencia de esta, en la figura 1-3, Ulva ohnoi presenta un
talo laminar verde oscuro, oblanceolado, ramificado y altamente festoneado.
A nivel celular, esta especie está formada por 2 capas de células cuadrangulares y poligonales,
como se visualiza en la figura 1-4.
Figura 1-4. Composición celular de Ulva ohnoi (A. Escribano 2018).

1.3. CULTIVO DE MACROALGAS

Actualmente, el cultivo de algas abarca más del 50% de producción de acuicultura en aguas
marinas, a diferencia de las aguas salobres, donde solo comporta aproximadamente el 13%
(APROMAR, 2014).
Las algas son buenas candidatas para ser cultivadas, debido a la maleabilidad de sus ciclos
reproductivos y variabilidad de su metabolismo (capacidad de producir diversas sustancias).
La técnica de cultivo se debe adecuar a la biología y características de la especie. Por lo tanto,

antes de empezar con el cultivo, son necesarios estudios biológicos básicos y estudios sobre los
factores influyentes en el cultivo (hidrodinámica, luz, temperatura, pH y salinidad
principalmente).
El desarrollo de las técnicas de cultivo de macroalgas, en el último siglo, se ha diversificado

extraordinariamente y la producción de las mismas ha aumentado exponencialmente. El
inconveniente está en que, debido a esta rápida evolución para una misma macroalga, se ha
desarrollado en diversos países un sin número de técnicas de manera paralela, dificultando
pues, los estudios de productividad ideal de las mismas.
Actualmente existen dos grandes grupos de cultivo de macroalgas:
- Cultivo extensivo
Es un cultivo de sostenimiento basado en una técnica de semicultivo. Gracias al aumento de
superficies de fijación, favorecen la extensión de poblaciones naturales. Este fenómeno se
consigue a partir de: diseminación de talos, trasplantamiento de talos fértiles, etc. con el
objetivo de que la especie se naturalice.
- Cultivo intensivo
Es un cultivo genuino, de elevada complejidad y el proceso de cultivo está controlado por el
hombre. En función de donde se realice y se desarrolle este tipo de cultivo, se podrá clasificarlo
en tres grupos: “outdoor” (instalaciones externas en el mar), “indoor-outdoor” (fases en

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instalaciones internas, complementadas con fases en instalaciones externas en el mar) y

“indoor” (instalaciones internas) (APROMAR, 2014).
o Cultivo intensivo en el mar (“outdoor”): solo puede llevarse a cabo sobre especies que se
reproducen mediante propagación vegetativa. Este cultivo se realiza manualmente. Se
fragmenta el alga y se realiza su siembra sobre diferentes tipos de sustratos. Esta técnica es
costosa en materiales, ya que requiere cuerdas, soportes, piquetas, etc. y mucha mano de
obra (no necesariamente especializada).
Esta técnica es común en países en vías de desarrollo y en zonas poco profundas debido a la
necesidad de mano de obra. Un gran inconveniente en este tipo de cultivo es el descontrol
completo de las variaciones naturales de los factores ambientales que, caracterizan el medio de
cultivo y la susceptibilidad a las patologías y pandemias.
o Cultivo intensivo mixto planta-mar (“indoor-outdoor”): la obtención de la semilla y el

sembrado, se realiza en un laboratorio, el desarrollo y la recolección se realiza en el mar.
Esta técnica es utilizada para aquellas especies las cuales no pueden ser cultivadas por
propagación vegetativa.
Este tipo de cultivo requiere también mano de obra, pero en este caso cualificada. También es
más independiente de los factores ambientales externos y adaptable a nuestras propias
necesidades. Pudiendo llegar a obtener cosechas mucho más homogéneas y de mayor calidad.
o Cultivo intensivo en planta (“indoor”): el cultivo se realiza en tierra. Es el cultivo más caro
con respecto a las anteriores técnicas de cultivo. Requiere una mecanización y control de
todos los procesos. La mano de obra es mínima, pero precisa de elevada cualificación. Está
compuesto por cuatro etapas: siembra de colectores a partir de elementos reproductores,
producción de pequeños organismos, precultivo y cultivo (Corral et al., 2000).
Este tipo de cultivo es usado nivel de laboratorio para estudios, ya que comporta baja
producción con respecto al resto de técnicas de cultivo, debido a la reducción de las dimensiones
de la instalación. Actualmente, esta técnica de cultivo está teniendo salida en el campo de la
biofiltración, en los efluentes de sistemas integrados multitróficos y en la producción de

materias primas de medio-alto valor añadido a nivel alimentario y farmacológico. Cabe destacar
que, Gregory Rorrer (2004) ha desarrollado un cultivo “indoor” a partir de fotobiorreactores
para el cultivo de células y tejidos de macroalgas. Este tipo de cultivo se utiliza mayoritariamente
para el cultivo de microalgas (apartado 1.4.).
1.4. CULTIVO DE MICROALGAS

Finalmente, existen otro tipo de cultivos para algas, utilizados a día de hoy, para el cultivo de
microalgas con la posibilidad de ser usados con macroalgas:
- Cultivos en sistemas abiertos

Pueden ser instalados en aguas superficiales naturales, estanques, lagos, lagunas y estanques
artificiales. No precisan de grandes inversiones ni mantenimiento. El control de los parámetros
es complicado, ya que no se puede controlar la temperatura del agua, CO2, iluminación,
presencia de contaminantes (Molina et al., 2010); provocando la incapacidad de obtener un
cultivo puro (un solo tipo de organismo). Por lo que se obtienen, bajos rendimientos y
productividades. Así pues, para este tipo de cultivo se utilizan especies que puedan crecer bajo
condiciones en las que para otros organismos les resultaría difícil desarrollarse (González, 2016).
En función de donde se realice y se desarrolle este tipo de cultivo, se puede clasificar en cuatro
tipos de sistemas abiertos:
o Balsas: piscinas artificiales, con una profundidad limitada y sin manipulación de las
condiciones naturales.
o Piscinas inclinadas: piscinas artificiales con turbulencia natural provocada por la gravedad,
pero con una elevada sedimentación de células en las partes donde la velocidad de flujo es
menor.
o Tanques circulares: tanques de hormigón, con una agitación circular provocada por una
pala.
o Raceways: canales ovalados, poco profundos en forma de circuito cerrado. El medio se
suele propulsar mediante paletas, hélices, inyectores de aire, etc. por lo cual, existe una

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agitación que provoca la circulación del cultivo favoreciendo el crecimiento y la

productividad.
- Cultivos en sistemas cerrados

A diferencia de los sistemas abiertos, es posible producir una sola cepa de microalga/macroalga,
ya que estos sistemas se encuentran aislados del exterior, por lo que se aporta un ambiente
controlado y una mayor rentabilidad al cultivo. Estos sistemas están predispuestos de un
equipamiento de agitación y control de la velocidad de esta, aireación, estabilización del pH,
iluminación e intercambio de calor (Posten, 2009). Presentan una mayor productividad, gracias
a la eficiencia de utilización y fijación del CO2 inyectado.
En función de donde se realice y se desarrolle este tipo de cultivo, se puede clasificar en dos
tipos de sistemas cerrados:
o Cámara de microalgas: son cultivos a pequeña escala para poder aumentar el volumen del
alga. Son cultivadas en ambientes asépticos, en el interior de recipientes en los cuales las
condiciones de temperatura, luz (artificial), aireación, etc. están controladas.
o Fotobiorreactores: es un sistema forzado al máximo para la obtención de un mayor
crecimiento de biomasa. Según el diseño del recipiente se pueden cultivar en
fotobiorreactores planos o tubulares, horizontales, verticales, inclinados o espirales,
serpentines (circulación en serie) y múltiples (circulación en paralelo); según el modo de
operación pueden estar agitados, ser reactores de una fase (intercambio de gases en una
cámara separada) y ser reactores de dos fases (intercambio de gases a lo largo del reactor).
En todos los diseños y modos de operación se tiene un control completo de las condiciones
del medio de cultivo, reduciendo las contaminaciones (González, 2016).
2. Objetivos
Dado el gran interés tanto productivo como nutricional de las algas, se plantea como objetivo
general de este trabajo final de grado analizar el comportamiento morfológico, evaluar la tasa
de crecimiento y productividad de Ulva ohnoi cultivada en: fotobiorreactores, cultivo en tanque
y cuerdas de cultivo con la finalidad de contribuir en la optimización del proceso productivo y
calidad del alga. Para ello, se llevarán a cabo tres tipos de experimentos con diferentes
condiciones morfológicas iniciales en sistemas de cultivo cerrado e IMTA con diversos objetivos
específicos:
1. Evaluación de la viabilidad de cultivo de Ulva ohnoi según su morfología inicial.

2. Análisis de los parámetros morfológicos: relación de aspecto y circularidad.
3. Evaluación de la capacidad de cultivo de Ulva ohnoi en cuerdas de cultivo sin sembrado
previo.
4. Comparación del grosor que adopta el alga según la manipulación recibida inicialmente y
durante el experimento.
5. Análisis de la evolución entre: grosor, superficie y densidad de cultivo durante el
experimento.

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20
3. Material y métodos
3.1. Procedencia y recolección de Ulva ohnoi

Los ejemplares de Ulva ohnoi fueron recolectados manualmente en el año 2015 de los efluentes
de las instalaciones del IRTA (Institut de Recerca y Tecnología Agroalimentaria), en Sant Carles
de la Ràpita (Tarragona).
Posteriormente, el Dr. Javier Cremades (Universidad de A Coruña) realizó una secuenciación

genética del genoma de la especie recolectada, a partir de la cual se determinó la especie: Ulva
ohnoi.
Finalmente, los ejemplares fueron trasladados a las instalaciones de la Escuela Superior de

Agricultura de Barcelona, con el fin de realizar diversos estudios sobre sus características
hidrodinámicas, lumínicas, etc. Los ejemplares fueron inoculados en tanques pertenecientes a
un sistema IMTA (anexo D), formado actualmente por 2 tanques destinados al mantenimiento
de Solea senegalensis, 5 tanques destinados al cultivo de algas y un biofiltro. La biomasa utilizada
para este estudio fue extraída de uno de los tanques de cultivo de estas instalaciones.
3.2. Experimentos
En este estudio se lleva a cabo tres diferentes tipos de cultivo en las instalaciones acuícolas
pertenecientes al grupo de recerca AQUAL (ESAB):
- fotobiorreactores
- fragmentos de talos en tanque
- cuerdas de cultivo
por lo que las condiciones de cultivo varían según el experimento realizado.
3.2.1. Fotobiorreactores
- Construcción y características de los fotobiorreactores
Inicialmente, no se disponía de ningún tipo de fotobiorreactor para poder realizar este

experimento. La elaboración de los fotobiorreactores (3 “replicas”) se llevó a cabo a partir de un
cilindro de metacrilato de 3L de volumen, 7cm de radio y 20cm de altura. Este material facilita
el traspaso de la luz por todas las paredes del fotobiorreactor. Contiene una base fija, en la cual
se realizó una pequeña perforación para instalar posteriormente el sistema de aireación
independiente, lo cual permite un movimiento libre de las muestras, desplazándose por toda la
columna de agua. Posteriormente, se les incorporó 3 soportes en la base inferior, elevándolo de
la base de apoyo unos centímetros.
La pieza interna del fotobiorreactor se construyó a partir de un cilindro de metacrilato, de 8 cm

de diámetro, adhiriendo uno de los extremos del cilindro a la parte cóncava de un embudo y el
otro extremo a una tapa. Esta evita la pérdida de una gran cantidad de agua marina, provocada
por la aireación y la evaporación de la misma (figura 3-1).
Figura 3-1. Estructura del fotobiorreactor (A. Escribano 2018).

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22
La instalación lumínica constó de tres lámparas unidas a una base triangular y enfocadas de
manera que, toda la luz proyectada estuviese dirigida a todas las paredes de los
fotobiorreactores. Estaban programadas para iluminar durante un fotoperiodo de 12h.
Finalmente, se instaló un depósito opaco de 15L para el almacenaje de agua marina. Por lo que,
la instalación de fotobiorreactores es un sistema de cultivo cerrado, en el cual cada dos días es
necesario renovar el agua enriquecida con NH4+.
- Obtención de los fragmentos circulares y fragmentos irregulares
La biomasa de alga fue extraída de un tanque implantado en la instalación acuícola multitrófica

integrada, ubicada en la Escuela Superior de Agricultura de Barcelona. Esta biomasa fue dividida
en dos partes para poder realizar dos fases experimentales para el cultivo en fotobiorreactores:
o Fase experimental fragmentos circulares
Para llevar a cabo una morfología circular, se hizo uso de un taladracorchos para la perforación
del alga. De este modo, se obtuvieron círculos perfectos de Ulva ohnoi de 0.5cm de diámetro
aproximadamente. Una vez realizado los círculos, se introdujo 1g de biomasa en cada
fotobiorreactor.
o Fase experimental fragmentos irregulares

A diferencia de la anterior fase experimental, no era importante la similitud entre fragmentos
de Ulva ohnoi, cuanta mayor era la dispersión de morfología, mayor era el interés sobre ese
fragmento, ya que la finalidad es poder hacer una comparativa entre morfologías definidas y no
definidas.
Se realizó una serie de cortes continuos, con un chuchillo sobre talos grandes, hasta obtener
fragmentos minúsculos. Posteriormente, se hicieron pasar por una placa de metacrilato con
perforaciones de 0.5cm de diámetro, obligando a separar todos aquellos fragmentos con
diámetros superiores a este valor. Una vez realizada la selección, se introdujo 1g de biomasa en
cada fotobiorreactor.
- Condiciones de cultivo
Los fotobiorreactores se dispusieron uno al lado del otro, formando un triángulo de la misma
manera que estaban instalados los focos. La radiación PAR máxima medida fue de 340 µmoles
fotones m-2 s-1 con un periodo de 12h. Tanto la temperatura del agua, el pH y la saturación de
oxígeno fueron medidos con un sensor Oxyguard, obteniendo 18,9 ± 1°C, un pH 8 y un 98% de
oxígeno disuelto.
Se daba por finalizada la fase experimental una vez obtenidos 3g de biomasa por
fotobiorreactor. En el caso de los fragmentos circulares, estos fueron reinoculados en el
siguiente experimento: fragmentos de talos en tanque.
- Análisis de las característica y parámetros morfológicos
Para ambas fases experimentales, se llevó a cabo el mismo procedimiento de análisis

morfológico:
- El día de inicio de ambos experimentos, se seleccionaron aleatoriamente 20 muestras de

cada fotobiorreactor y se dispusieron sobre una hoja milimetrada, para poder ser
fotografiadas y analizadas con un tratamiento de imágenes. Posteriormente, se tomaba el
peso fresco de las muestras (fw) con una balanza industrial Serie PB6.
- El proceso indicado anteriormente, se realizó cada 2-3 días para ambos experimentos hasta
obtener 3g, obteniendo un total de 4 días muestreados.
- A través de todas las imágenes obtenidas a lo largo de las fases experimentales, se realizó
un tratamiento de imágenes con ImageJ, con el cual se obtuvo la superficie, el perímetro,
el diámetro mayor y menor (en el caso de los círculos) para cada muestra.
- Paralelamente, se midió el grosor de los fragmentos en cada muestreo gracias a un
micrómetro digital de KKmoon 0-25mm.
Los pasos a seguir para el análisis de las fotografías realizadas, están detallados en el anexo A.
Cabe destacar que ese proceso está adaptado a las necesidades de las imágenes y no es un
protocolo estricto, sino orientativo.
Durante el análisis de las imágenes se observaron diferentes dificultades:

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24
- Debido a la iluminación de las fotografías, el programa no detectaba las zonas más

minúsculas de las muestras o confundía zonas de la imagen como si fueran muestras a
analizar. Por eso a la hora de obtener los resultados, es necesario un foco de atención en
los datos que el programa está generando.
- Debido a la resolución de las imágenes, a la hora de hacer la selección perimetral de las
muestras a analizar, el programa hacía una selección no exacta, pero si muy aproximada.
Se realizó el mismo procedimiento para todos los fotobiorreactores en todos los muestreos,
obteniendo las mismas tablas con diferentes valores (anexo B).
A partir de los datos generados por el software, se llevo a cabo un análisis previo de estos.
Posteriormente, se realizó un análisis de los parámetros geométricos:
o Elongación o Relación de aspecto (AR) es la relación de las longitudes de los ejes de la

elipse, mayor y menor, que se ajusta a la superficie seleccionada.
Esta fue calculada a partir de la siguiente fórmula:
). +.
&' =
). ,.
Donde D.M. es el diámetro mayor y D.m. es el diámetro menor. Es un parámetro adimensional.

Para valores igual a 1, el parámetro indica un círculo perfecto y para valores mayores que 1, este
círculo empieza a deformarse.
Cabe destacar que, aunque las muestras de la fase experimental fragmentos irregulares no
tienen una forma definida, el software ha calculado cual es el diámetro mayor y menor en la
superficie talofita de las muestras de algas. De esta manera, se puede ver cuanta elongación
sufren las muestras.
o Circularidad (C) es la medida de cuanto se acerca la superficie seleccionada a un círculo.
Esta fue calculada a partir de la siguiente fórmula:

.
-=
/0
Donde S es la superficie y P es el perímetro. Es un parámetro adimensional.

Se sabe que para valores iguales a 0.08 se trata de un círculo perfecto y para valores inferiores,
este presenta deformaciones en su morfología.
Estos dos parámetros mencionados, son métodos similares de estudio sobre la morfología de
objeto basándose en medidas diferentes. El resultado que se obtendrá debería mostrar la misma
interpretación. Estos métodos se han realizado para conseguir un resultado más específico
sobre el estudio, ya que inicialmente para una fase experimental se inicia con círculos
“perfectos” y para la otra fase experimental se inicia con una morfología irregular.
- Determinación de la tasa de crecimiento, densidad de cultivo y productividad
Para ambas fases experimentales, se llevó a cabo el mismo procedimiento de determinación.
o La Tasa de Crecimiento (µ) indica el crecimiento o decrecimiento durante un periodo de

tiempo.
Esta fue calculada de acuerdo a D’Elia & De Boer (1978) (Liria et al., 2007):
.5
23( 5 6 )
.7
1 =
6
Donde t son el número de días transcurridos entre dos muestreos, 9

.7 es la superficie media
inicial y 9
.6 es la superficie media final de alga a los t días transcurridos. Se expresa en d-1.
o La Densidad de cultivo (r) fue calculada a partir de la siguiente fórmula:
;+
:=
.

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26
Donde BM es la biomasa en peso fresco de las muestras de alga en cada muestreo y S es la

superficie de la sección horizontal total del tanque. Se expresa en gfw m-2.
o La Productividad (Pd) fue calculada a partir de la siguiente fórmula:
∆;+
/< = 6
.
Donde ∆;+ es el incremento de biomasa en peso fresco, t es el número de días transcurridos

entre dos muestreos y S es la superficie de la sección horizontal del tanque. Se expresa en gfw
día m-2.
Finalmente, se ha querido estudiar la evolución existente de las medidas de grosor y superficie

de cada muestra tomada a lo largo del experimento con la densidad de cultivo.
3.2.2. Fragmentos de talo en tanques
- Características del tanque
Este experimento se llevó a cabo en un tanque (NA1) con una superficie cuadrada de 0.64m2 y
una sección semicircular de 172L, de polietileno de alta densidad (figura 3-2). Este contenía 3
focos, ubicados a 50 cm aproximadamente de la superficie, los cuales iluminaban todo el tanque
durante un periodo de 12h. Este tanque forma parte de un sistema acuícola multitrófico
integrado, por lo que es un tanque con un sistema de renovación constante de agua marina.
Figura 3-2. Ilustración de la trayectoria que sigue el flujo de agua marina en el tanque
NA1 (A. Escribano, 2018).
- Obtención de los fragmentos
Para este experimento se reutilizaron los fragmentos cosechados en el cultivo de alga en

fotobiorreactores, de la fase experimental fragmentos circulares. Se partió aproximadamente
de 9g de biomasa total de Ulva ohnoi, con una morfología aparentemente elíptica en su mayoría.
La biomasa de alga recolectada en los fotobiorreactores se reinoculó en el tanque anteriormente

mencionado en el apartado 3.2.1., con un sistema de aireación mediante burbujeo continuo, en
la parte inferior del tanque. El tanque tenía instalado 3 entradas diferentes de agua de mar
proveniente del sistema enriquecida en NH4+, ya que el sistema tiene integrado dos tanques con
7 lenguados cada uno.
En este tipo de tanque, las algas pueden moverse libremente por todo el volumen de agua,
siguiendo por lo general un movimiento elíptico provocado por la aireación (figura 3-2). La
radiación PAR máxima se encuentra en la superficie, con 211 µmoles fotones m-2 s-1 y un
fotoperiodo de 12h. Gracias al sensor de Oxyguard, la temperatura media del agua fue de 19,1±
2°C, un pH 9 y un porcentaje de saturación de oxigeno del 101%.

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- Determinación de la tasa de crecimiento, densidad de cultivo y productividad
Esta determinación se realizó siguiendo el mismo proceso de análisis, utilizado para el cultivo en
fotobiorreactores indicado en el apartado 3.2.1.
- Análisis de las características y parámetros morfológicos
El día de inicio, se tomó una muestra del peso fresco (fw) con una balanza industria Serie PB6 y
se escogieron 20 muestras aleatorias. Estas se dispusieron sobre una hoja milimetrada, para
poder realizar un tratamiento de imágenes a partir de las fotos capturadas. Este proceso se
realizó cada semana, durante un periodo aproximado de 6 semanas.
A partir de las imágenes obtenidas a lo largo del cultivo, se realizó un tratamiento de imágenes
con ImageJ para 4 de los 6 muestreos realizados, a partir del cual se obtuvo la superficie, el
perímetro, el diámetro mayor y menor para cada muestra. Paralelamente, se midió el grosor de
los fragmentos en cada muestreo con un micrómetro digital de KKmoon 0-25mm.
A partir de los datos generados por el software y los valores de grosor obtenidos, se realizó y se
analizó del mismo modo en que se ejecutó para el cultivo de Ulva ohnoi en fotobiorreactores
indicado en el apartado 3.2.1.
3.2.3. Cuerdas de cultivo
- Características del tanque
El tanque (NA2) utilizado para este cultivo contiene las mismas características que el tanque
utilizado para el cultivo de fragmentos de talo (apartado 3.2.2.). La única diferencia entre ambos
experimentos en el ámbito de la instalación, es la introducción de cuerdas de cultivo: dos
cuerdas de poliéster ubicadas en los extremos y 3 cuerdas centrales de esparto.
- Obtención de las muestras
En este último experimento, no fueron inoculados ningún fragmento de alga. Se realizó una
hipótesis sobre la posible presencia de esporas de Ulva ohnoi, suspendidas en el agua recirculada
del sistema, con la finalidad de poder observar posteriormente el anclaje y desarrollo de los
organismos vegetativos en los cabos.
El tanque está provisto de 3 entradas continuas de agua marina proveniente del sistema IMTA
enriquecida en NH4+.
En este tipo de cultivo, las algas tenían dos opciones de crecimiento: ancladas en las cuerdas de
cultivo y desarrollarse libremente por todo el volumen de agua, siguiendo por lo general un
movimiento elíptico provocado por la aireación.
La radiación PAR máxima se encuentra en la superficie con 211 µmoles fotones m-2 s-1 con un
periodo de 12h. La temperatura media del agua fue 17,8°C con una mínima de 13,7°C y una
máxima de 22,1°C, un pH 8 y porcentaje de saturación de oxigeno del 103%.
Para estas condiciones y para el diseño experimental planteado, se realizaron ajustes de

densidad de la especie de cultivo cada dos semanas. Una vez el alga se ancló y se desarrolló en
las cuerdas de cultivo, cada periodo de 21 días, se cosechaba la biomasa total, se escurría, se
pesaba y se eliminaba del cultivo. Posteriormente, se reinoculaban las cuerdas de cultivo,
conteniendo únicamente los falsos rizomas anclados a ellas.
- Análisis de las características y parámetros morfológicos
Inicialmente, se partió de simples cuerdas de esparto y poliéster ubicadas en la superficie de un

tanque lleno agua marina en renovación continua. Una vez se visualizaba la presencia de alga
anclada en las cuerdas de cultivo, se esperó un periodo de 21 días para iniciar un muestreo
continuo.
Cada tres semanas se realizaba un muestro, extrayendo las cuerdas de cultivo del tanque, la
posible alga flotante que pudiera estar contenida en el tanque y el alga anclada a las paredes.

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30
A partir de estas muestras se realizaron un seguido de fotografías para posteriormente, ser

analizadas macroscópicamente y se obtuvo el peso mojado con una balanza industrial Serie PB6
y grosor de cada tipo de alga.
Una vez finalizado el muestreo, se volvían a introducir las cuerdas de cultivo dentro del tanque
con la mínima cantidad posible de alga adherida.
4. Resultados y discusión
4.1. FOTOBIORREACTORES
4.1.1. Análisis macroscópico

Como se ilustra en la figura 4-1, se observa la evolución del crecimiento y morfología de las
muestras de Ulva ohnoi seleccionadas aleatoriamente en cada muestreo realizado cada 2-3 días
a lo largo de la fase experimental fragmentos circulares.
1 4 7 10
2 5 8 11
3 6 9 12
fragmentos circulares para cada fotobiorreactor: 1) 1er muestreo B1, 2) 1er muestreo B2, 3) 1er
muestreo B3, 4) 2o muestreo B1, 5) 2o muestreo B2, 6) 2o muestreo B3, 7) 3er muestreo B1, 8) 3er
muestreo B2, 9) 3er muestreo B3, 10) 4o muestreo B1, 11) 4o muestreo B2, 12) 4o muestreo B3.

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32
Se pueden observar las imágenes de los 4 muestreos realizados cada 2 y 3 días para cada
fotobiorreactor durante la fase experimental fragmentos circulares. Se pudo ver como las
muestras presentaron un diámetro aproximado de 0.5cm. Los fragmentos circulares del
fotobiorreactor 1, presentaron en el primer muestreo (día 0) una mayor morfología circular con
respecto a las muestras de los fotobiorreactores 2 y 3. Las muestras contenidas en estos,
presentaron alguna perturbación en su margen, a partir del cual se pudo ver como este
modificaba su diámetro mayor y disminuía su porcentaje de circularidad.
A lo largo del experimento se observó como las muestras iban perdiendo su margen entero y
obtenían un margen sinuado, evolucionando desde una forma orbicular a una morfología oval y
oblonga. Estas deformaciones provocaron la aparición de un margen sinuado, producido por la
estrategia adoptada por el alga frente la hidrodinámica del tanque, el contacto con las burbujas
de aire y también, debido a ciertas obstrucciones de fragmentos en la parte inferior del
fotobiorreactor, observadas durante el experimento tal y como se ilustra en la figura 4-2. Estas
obstrucciones provocaron una recepción limitada de luz y de nutrientes.
Figura 4-2. Observación de pequeñas obstrucciones en

la zona basal del fotobiorreactor.
En la figura 4-3 se muestran las imágenes sobre los 4 muestreos realizados durante la fase
experimental fragmentos irregulares. A diferencia de la anterior fase, como ya se ha mencionado
en el apartado 3.2.1., la morfología de estos fragmentos se elaboró manualmente, intentado
obtener muestras de algas muy pequeñas (inferiores a un diámetro de 0.5cm) y desiguales. Este
hecho proporcionó un mínimo de heterogeneidad en la medida de las muestras. Se observó,

como en la figura 4-3, todas las muestras tenían un diámetro mayor D.M. < 0.5cm, por lo que
las muestras de la fase experimental fragmentos irregulares, iniciaron el experimento con un
tamaño inferior a las muestras de la fase experimental fragmentos circulares. Así pues, se pudo
visualizar como las muestras no tenían una forma y margen definido, sino todo lo contrario,
tenían una morfología completamente irregular.
1 4 7 10
2 5 8 11
3 6 9 10
fragmentos irregulares para cada biorreactor: 1) 1er muestreo B1, 2) 1er muestreo B2, 3) 1er
muestreo B3, 4) 2o muestreo B1, 5) 2o muestreo B2, 6) 2o muestreo B3, 7) 3er muestreo B1, 8) 3er
muestreo B2, 9) 3er muestreo B3, 10) 4o muestreo B1, 11) 4o muestreo B2, 12) 4o muestreo B3.

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Se pudo contemplar como entre 2o y 3er muestreo, existía una gran diferencia entre el tamaño y
la morfología de las muestras. Hiraoka y Enomoto (1998) realizaron un estudio sobre la
inducción de células reproductivas y observaron que, entre el 2o y 3er día, es cuando se obtiene
una mayor cantidad de zooides, provocando posteriormente un crecimiento exponencial de las
células. Por lo que posiblemente los resultados que se han obtenido pueden estar explicados
por este estudio.
Finalmente, el 4 o y último muestreo de la fase experimental, las muestras presentaron el doble

de tamaño con respecto a los fragmentos circulares. Se pudo ver como la morfología es muy
dispersa entre muestras, sin tener ningún patrón a seguir. Cabe destacar que las muestras de
alga empezaban a presentar ondulaciones en su margen.
A partir de los resultados obtenidos con el software para los parámetros superficie y perímetro,
se realizaron los gráficos contenidos en las figuras 4-4, 4-5 y la tabla 4-1 para poder valorar la
evolución de las muestras de manera conjunta en ambas fases experimentales.
Influencia del sistema de cultivo en la morfología y productividad de Ulva ohnoi: fotobiorreactores, cultivo de fragmentos de talo en tanques y cuerdas de cultivo.
35
Tabla 4-1. Análisis de la superficie y perímetro de los resultados obtenidos en ImageJ de las muestras analizadas en el cultivo en fotobiorreactores.
Biorreactor Morfología Superficie Perímetro

En el 1er muestreo (día 0), las muestras presentaban una superficie inferior Las muestras presentan inicialmente un perímetro constante.
Fragmentos a 0.5 cm2 y homogéneas entre ellas.
Circulares Las muestras evolucionaban homogéneamente a lo largo del experimento.
Las muestras evolucionan homogéneamente a lo largo del experimento.
B1 En el 1er muestreo (día 0), las muestras presentaban una superficie inferior
Fragmentos a 0.5cm2 y homogéneas entre ellas. Las muestras evolucionan de manera homogénea, obteniendo una
Irregulares Las muestras evolucionaban homogéneamente a lo largo del experimento.
desviación estándar del 3.014.
Las muestras presentaban inicialmente, un perímetro variable con un

En el 1er muestreo (día 0), las muestras presentaban una superficie inferior
rango de (2-3cm)
Fragmentos a 0.5cm2 y homogéneas entre ellas.
Circulares Las muestras presentaron la mayor dispersión, obteniendo una superficie

Las muestras evolucionaban de manera homogénea, presentando una
elevada dispersión en el último muestreo.
máxima de 3.998cm2.
B2 a 0.5cm2 y homogéneas entre ellas.
Fragmentos Las muestras evolucionaban de manera homogénea hasta el 3er muestreo Las muestras evolucionaban de manera homogénea, obteniendo una
Irregulares obteniendo superficies inferiores a I.B1. desviación estándar del 7.699.
Las muestras presentaron una desviación estándar del 3.021 en el último

muestreo, obteniendo valores de 12.097cm2.
Las muestras presentaban inicialmente, un perímetro variable con un
a 0.5cm2 y homogéneas entre ellas.
rango de (2-3cm).
Fragmentos Las muestras evolucionaban heterogéneamente a lo largo del
Circulares experimento, pudiendo alcanzar un máximo de superficie talofita de 3.015
Las muestras evolucionaban de manera heterogénea a lo largo del
experimento.
cm2.
B3 En el 1er muestreo (día 0), las muestras presentaban una superficie inferior
a 0.5cm2 y homogéneas entre ellas.
Fragmentos Las muestras evolucionaron de manera homogénea hasta el 3er muestreo Las muestras evolucionaban de manera homogénea, obteniendo una
Irregulares obteniendo superficies inferiores a I.B1. desviación estándar del 3.877.
Las muestras presentaban una desviación estándar del 1.418 en el último

muestreo, obteniendo valores de 6.776cm2.

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Figura 4-4. Composición de gráficos sobre la evolución de la superficie en Figura 4-5. Composición de gráficos sobre la evolución del perímetro en
el tiempo de 20 muestras para ambas fases experimentales en el cultivo en el tiempo de 20 muestras para ambas fases experimentales en el
fotobiorreactores: C.B1 y I.B1 p , C.B2 y I.B2 <, C.B3 y I.B3 ¿ y promedio cultivo en fotobiorreactores: C.B1 y I.B1 p , C.B2 y I.B2 <, C.B3 y I.B3
de los resultados X. ¿ y promedio de los resultados X.
Tal y como se ha visto anteriormente, en las figuras de los parámetros superficie y perímetro,
estos no fueron suficientes para poder entender el comportamiento y la evolución morfológica
de las diferentes muestras de alga en los fotobiorreactores. Por eso, fue necesario realizar el
análisis de:
- Circularidad (C):
En el anexo C contiene los resultados de cada fase experimental, para cada fotobiorreactor y
muestreo.
El fotobiorreactor 1 en la fase experimental fragmentos circulares presentó mayor circularidad,

con respecto el fotobiorreactor 2 y 3. Este fenómeno puede ser causado por la realización
manual de las muestras con un taladracorchos. En las muestras contenidas en el fotobiorreactor
1, se observó una mayor morfología circular con respecto al resto de fragmentos. Por otro lado,
solo en los fotobiorreactores 1 y 2 hay dos muestras que presentaron una elevada circularidad.
A lo largo de ambas fases experimentales, se pudo ver como todas las muestras padecen
deformaciones en su morfología. Estas deformaciones fueron mayores en los fragmentos
irregulares respecto a los circulares. Se puede ver el resultado de esta morfología ilustrado en la
figura 4-6.
Figura 4-6. Evolución morfológica de las muestras del fotobiorreactor 2 desde del inicio hasta final
de ambas fases experimentales.

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38
Se contempla como los fragmentos circulares del fotobiorreactor 2, al inicio del experimento,
no presentaron una circularidad perfecta, aunque si muy aproximada. A diferencia de esta fase
experimental, se observó como los fragmentos irregulares eran 1/4 parte de los circulares en
cuanto a tamaño. Solo hubo un fragmento irregular con una ratio de circularidad elevado.
Por otro lado, se pudo notar, en las imágenes extraídas en el último muestreo de ambas fases
experimentales ilustradas en la figura 4-6, como a diferencia del inicio de los experimentos, las
muestras de la fase experimental fragmentos circulares sufrían menos deformaciones en su
margen respecto los irregulares.
Se pudo ver como ambas fases experimentales crecían de manera expansiva, notando un mayor
crecimiento y una circularidad nula en la fase experimental fragmentos irregulares.
De otro modo, se puede percibir este comportamiento, en los gráficos ilustrados en la figura 4-
7. Se denotó como la fase experimental fragmentos circulares, evolucionaba homogéneamente
entre sus muestras e iba disminuyendo su circularidad. A diferencia de los fragmentos
irregulares, estos presentaron diferencias entre sus muestras y un aumento en las
deformaciones del margen de manera acelerada.
Figura 4-7. Composición de gráficos sobre la evolución de la circularidad en el tiempo de 20

muestras para ambas fases experimentales en el cultivo en fotobiorreactores: C.B1 y I.B1 p ,
C.B2 y I.B2 <, C.B3 y I.B3 ¿ y promedio de los resultados X.
- Elongación o relación de aspecto (AR):

Se puede ver de manera ilustrada en los gráficos contenidos en la figura 4-8, la evolución de la
relación de aspecto de cada muestra en los diferentes fotobiorreactores y para cada fase
experimental.
Inicialmente, se pudo observar como las muestras del fotobiorreactor 1 presentaron una
morfología circular y muy homogénea entre los fragmentos circulares, a diferencia del
fotobiorreactor 2 y 3 que, presentaron dispersión de la morfología en las muestras.

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40
Las muestras con un AR = [1, 1.1] presentaron una morfología circular perfecta. Para valores AR
= (1.1, 2] fue cuando la muestra empezó a presentar pequeñas deformidades en su morfología.
Tanto el fotobiorreactor 2 como el 3 en la fase experimental fragmentos circulares, se pudo ver
como inicialmente había muestras que presentaban pequeñas deformidades, por lo que las
hacía distanciarse del termino circularidad. Esto se debe a que las muestras fueron obtenidas
manualmente, provocando posibles deformidades en el margen.
A medida que avanzó el experimento hubo muestras que siguieron manteniendo su morfología
inicial, pero la mayoría de estas presentaron deformaciones en su margen perdiendo de este
modo la morfología circular. Este hecho viene producido principalmente por la hidrodinámica
que siguen las muestras en el interior del fotobiorreactor durante la fase experimental.
Por otro lado, analizando las muestras de la fase experimental fragmentos irregulares, se vio
como inicialmente para todos los fotobiorreactores, su morfología no era un círculo perfecto,
sino que presentaba una forma no definida, visualizando un margen crenado y ondulado en
ciertas zonas del talo. Por lo que, inicialmente, se observó dispersión entre muestras.
Posteriormente, se observó como las muestras iban aumentando progresivamente su

elongación, por lo que esto es un indicador de presencia de nuevas morfologías. Las muestras
contenidas en el B1, presentaron una evolución morfológica mucho más homogénea con
respecto a los fotobiorreactores 2 y 3. Estos dos últimos, presentaron muestras con
elongaciones superiores a 5 y diferenciadas del conjunto de muestras (1, 2.5) a lo largo de la
fase experimental.
Figura 4-8. Composición de gráficos sobre la evolución de la elongación en el tiempo de 20

muestras para ambas fases experimentales en el cultivo en fotobiorreactores: C.B2 y I.B2 p ,
C.B2 y I.B2 < , C.B3 y I.B3 ¿ y promedio de los resultados X.
- Tasa de crecimiento (µ)

En las figuras 4-9 y 4-10, se observa la evolución de los fragmentos circulares y los irregulares
para cada uno de los fotobiorreactores. En la figura 4-9 se contempla claramente como, cada
uno de los fotobiorreactores a pesar de ser supuestas replicas entre ellos, mostraron un
comportamiento diferente con algunos puntos en común.
En la fase experimental fragmentos circulares, se obtuvo una tasa de crecimiento máxima (0,366
día-1) en el 3er muestro (día 4) del experimento. Posteriormente, sufrió un descenso ralentizado.

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42
El fotobiorreactor 2 presentó una tasa de crecimiento lineal y ascendente a lo largo del

experimento con una tasa del 0,253 día-1 en el cuarto día (3er muestreo) y una tasa máxima del
0,349 día-1 en el último día de muestreo. Por lo contrario, el fotobiorreactor 3 presentó una tasa
de crecimiento de manera exponencial del !"Á$ =0.67d-1 en el cuarto día y un descenso
exponencial en el último día (0,114 dia-1).
! Fragmentos Circulares
1,00
0,80
0,67
0,60
! (d-1)
0,37
0,40
0,35
0,20 0,15 0,25 0,18

0,11 0,11
0,08
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Tiempo (días)

fotobiorreactores durante la fase experimental fragmentos circulares: % B1 p , % B2
¢ y % B3 ¿.
Tal y como se ha mencionado anteriormente y según el artículo de Hiraoka y Enomoto (1998)

entre el 2o y 3er día de asentamiento de las algas en el cultivo, estas sufren una segregación de
zooides, provocando posteriormente, un crecimiento exponencial hasta el 4o día. Es por eso que
se cree, que las muestras de alga en este tipo de cultivo sufren el mismo fenómeno.
En la figura 4-10 está ilustrada una evolución similar a la anterior fase experimental pero mucho
más elevada y homogénea entre fotobiorreactores.
Se observa como inicialmente, los fotobiorreactores evolucionaron de manera exponencial y

entre el 3er y 4o día, es cuando se produjo el fenómeno de expansión superficial de talo en los
tres fotobiorreactores. A partir de este punto, los 3 fotobiorreactores descendieron de manera

ralentizada su tasa de crecimiento.
! Fragmentos Irregulares
1,00
0,93
0,80
0,67
0,60
0,60
0,61
! (d-1)
0,63
0,40 0,50
0,32
0,31
0,20
0,17
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Tiempo (días)

fotobiorreactores durante la fase experimental fragmentos irregulares: % B1 p , % B2
¢ y % B3 ¿.
Los fotobiorreactores 1 y 3 se vieron representados con un crecimiento muy similar a lo largo

del experimento, con una tasa máxima de crecimiento de 0,626d-1 y 0,667d.1 respectivamente
tal y como muestra la tabla 4-2. A diferencia del resto, el fotobiorreactor 2 presentó una tasa de
crecimiento mucho más exponencial de !"Á$ = 0.93d-1 en el 4o día y un descenso ralentizado
hasta el final del experimento.

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44
Tabla 4-2. Resultados de la tasa de crecimiento para ambas fases experimentales de cultivo en
fotobiorreactores.
Parámetro µ (día-1)
nº Muestreo
1er Muestreo 2o Muestreo 3er Muestreo 4o Muestreo
Fotobiorreactores
F. Circulares - 0,082 0,366 0,183
B1
F. Irregulares - 0,318 0,626 0,500
F. Circulares - 0,146 0,252 0,349
B2
F. Irregulares - 0,169 0,931 0,605
F. Circulares - 0,114 0,674 0,114
B3
F. Irregulares - 0,306 0,667 0,606
Comparando ambas fases experimentales, se observó como en el segundo muestreo realizado

para ambas fases, los fragmentos circulares presentaron una tasa de crecimiento inferior a
0,200d-1, mucho más bajo con respecto a los irregulares. Cabe destacar que, para este
experimento se han obtenido tasas de crecimiento muy elevadas, con respecto otros autores
que han obtenido 0.210d-1 (Coutinho et al., 1993) y 0.180d-1 (Neori et al., 1991). Por lo que,
puede ser interesante realizar un cultivo previo de macroalgas en biorreactores.
Se observó como el fotobiorreactor 1 adoptó un comportamiento homogéneo a lo largo de las

fases, observando siempre que la fase experimental fragmentos irregulares tiene un 0,300d-1
más de tasa de crecimiento respecto los circulares.
Inicialmente, el fotobiorreactor 2 se presentó con una tasa de crecimiento más homogénea con
respecto al resto de fotobiorreactores, pero también fue el que presentó una mayor dispersión
en el 4o día, obteniendo la µ(á* = 0.93d-1 de ambas fases experimentales y muestreos en la fase
experimental fragmentos irregulares.
Finalmente, el fotobiorreactor 3 fue el más disperso de todos: presentó una evolución en forma
de campana en la fase experimental redondas y un inicio exponencial en la fase experimental
fragmentos irregulares con un descenso final muy ralentizado.
En definitiva, la tasa de crecimiento a lo largo del cultivo en fotobiorreactores fue mucho más
elevada en la fase experimental fragmentos irregulares que en circulares y los fotobiorreactores
se comportaron de manera más homogénea entre ellos en la fase fragmentos irregulares. Estos
dos fenómenos pueden estar provocados por defectos constructivos y por la morfología inicial
seleccionada. Esto hace pensar que, los fragmentos irregulares son mucho más rentables en
cultivos basados en fotobiorreactores.
Para poder profundizar en el estudio de la tasa de crecimiento, se ha intentado buscar diferentes

tipos de relaciones con otros parámetros ya estudiados, pero los resultados obtenidos no han
sido nada favorables, ya que la principal problemática es la incapacidad de marcaje de muestras.
Por lo tanto, se decidió no exponerlos en este estudio.
- Evolución de la Densidad de cultivo vs Superficie y Grosor

Para poder realizar un análisis de la relación existente entre densidad de cultivo, superficie y
grosor, se han generado la tabla 4-3 que, contiene los resultados de biomasa en peso fresco,
densidad de cultivo y productividad para ambas fases experimentales y la figura 4-11, donde se
encuentran representadas ambas evoluciones.
Inicialmente, para ambas fases experimentales y para todos los fotobiorreactores, la biomasa
introducida fue la de 1 gfw. A diferencia de esta similitud, la fase experimental fragmentos
irregulares obtuvo un valor de biomasa final para todos los fotobiorreactores superior a la fase
experimental fragmentos circulares.

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46
Tabla 4-3. Resultados de biomasa, densidad de cultivo y productividad en el tiempo para ambas fases
experimentales del cultivo en fotobiorreactores de cada muestreo.
Fragmentos Circulares Fragmentos Irregulares
Muestreo
Muestreo
Muestreo
Muestreo
Muestreo
Muestreo
Muestreo
Muestreo
1er
3er
1er
3er
2o
4o
2o
4o
1,000 1,420 2,530 3,130 1,000 1,340 2,480 3,250
BM (gfw)
B1 8,333 11,833 21,083 26,083 8,333 11,167 20,667 27,083

r (gfw m-2)
Pd
- 13,642 36,053 12,992 - 11,043 37,028 16,673
(gfw día m-2)
BM (gfw) 1,000 1,520 2,240 3,080 1,000 1,130 2,970 4,020
r (gfw m-2) 8,333 12,667 20,000 25,667 8,333 9,417 24,750 33,500
B2
Pd
- 16,890 28,583 14,725 - 4,222 59,764 22,736
(gfw día m-2)
BM (gfw) 1,000 1,480 2,760 3,210 1,000 1,370 2,530 3,540
r (gfw m-2) 8,333 12,333 23,000 26,750 8,333 11,417 21,083 29,500
B3
Pd
- 15,591 41,575 9,744 - 12,018 37,677 21,870
(gfw día m-2)
En la tabla 4-3 se observa como durante los dos primeros muestreos, la fase experimental
fragmentos circulares por lo general presentó una densidad de cultivo y productividad superior
a los fragmentos irregulares. Esto puede estar causado por el aumento progresivo de del grosor
tal y como se menciona en el apartado 4.1.2. De todas formas, este hecho está representado en
la figura 4-11. En los dos últimos muestreos de ambas fases experimentales, se obtuvo una
densidad de cultivo y una productividad en general mucho más elevada en la fase experimental
fragmentos irregulares. Este aumento tan diferenciado puede ser causado por el aumento de
grosor de las zonas dañadas en la elaboración de las muestras, durante los tres primeros
muestreos, provocando un aumento de superficie a posteriori.
Tal y como se ha mencionado anteriormente, a diferencia de los fragmentos circulares, el
crecimiento superficial de los fragmentos irregulares tuvo una mayor similitud entre
fotobiorreactores, con una tendencia exponencial del crecimiento en el 4o día.
Inicialmente, se observó como los valores de grosor en la fase experimental fragmentos

circulares, se encontraban en un rango de (0.020 – 0.030mm), a diferencia de la fase
experimental fragmentos irregulares, los valores de grosor se encontraban dentro del rango
(0.020 – 0.0250mm). Esto se debe al origen de la obtención de las muestras de ambas fases
experimentales, podrían provenir de zonas apicales (localizaciones donde el grosor es inferior,
débil y joven) o en zonas basales (se encuentra un tejido mucho más maduro y grueso).
Según este hecho se podría decir que, las muestras de la fase experimental fragmentos
circulares, habrían sido extraídas de zonas basales o intermedias del alga, a diferencia de las
muestras de la fase experimental fragmentos irregulares, donde podrían tener su origen en las
zonas apicales del alga.
Focalizando la atención en la evolución del grosor a lo largo de los experimentos, se pudo ver
como los fragmentos irregulares presentaron una tendencia ascendente pero lineal, pudiendo
tener su máximo en los días posteriores. En cambio, la fase experimental fragmentos circulares,
mostró tendencias diferenciadas entre fotobiorreactores. Por lo tanto, los fragmentos
irregulares guardaban una mayor relación entre densidad de cultivo y grosor.
Se pudo ver como, en el tercer muestreo de fragmentos irregulares (donde la superficie tuvo un
crecimiento muy bajo), el grosor aumentó sustancialmente, por lo que se podría interpretar que
el alga, estaba realizando una reparación del tejido dañado.
En los días posteriores, cuando la densidad de cultivo superó los 25 gfw m-2, se observó un
aumento del grosor con tendencia exponencial y con valores mucho más elevados en la fase
experimental fragmentos circulares, respecto la fase experimental fragmentos irregulares. Esto
podría estar causado por el embarrancamiento en la zona inferior de fotobiorreactor (figura 4-
2). Las algas en esta zona no reciben la misma intensidad lumínica, ya que presentan
aglomeraciones de muestras atrapadas en zonas determinadas, por lo que el alga, no obtiene la
suficiente energía para poder desarrollarse.

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48
Figura 4-11. Composición de gráficos sobre la evolución de la densidad de cultivo, superficie y

grosor de ambas fases experimentales en el cultivo en fotobiorreactores: superficie C.B1 y I.B1 p ,
superficie C.B2 y I.B2 ¢, superficie C.B3 y I.B3 ¿ y grosor .
4.2. FRAGMENTOS DE TALO EN TANQUE

En la figura 4-12 se muestran algunas de las recopilaciones fotográficas de las muestras
analizadas para este cultivo.
1 2 3
4 5 6 7
Figura 4-12. Evolución morfológica en el tiempo de las muestras en el cultivo de

fragmentos de talo en tanques: 1) 1er muestreo, 2) 2o muestreo, 3) 3er muestreo, 4)
3er muestreo, 5) 4o muestreo. 6) 5o muestreo y 7) 6o muestreo.
Se observa como a lo largo del cultivo las muestras de alga fueron modificando su morfología,
presentando ondulaciones en los centímetros más próximos al margen de la muestra y
transformando su forma circular en una elipse. Se pudo presenciar también, debilitaciones en la
superficie intermedia de la muestra del alga y sobretodo se observaron fragmentaciones en los
talos de este cultivo.
Estas características son producidas por la hidrodinámica del tanque. Muchas de las algas
seguían la trayectoria especificada en la figura 3-2, producida por la corriente de aire. Esta
corriente debilita la superficie del alga, provocando posteriormente la perforación de la lámina.
También existe otra problemática de otras muchas algas, las cuales fueron retenidas en la
superficie, debido a la acumulación de burbujas de aire en la cara inferior de estas y la elevada
salinidad del agua. Este fenómeno las hizo permanecer en la superficie, acumulándose en las
zonas donde existe menos recambio de agua, por lo que el alga tenía un mayor contacto con el
medio gaseoso, un elevado contacto con la iluminación del tanque y menos accesibilidad a
nutrientes. Por lo tanto, esta biomasa acumulada padeció una debilitación de su tejido,
provocando a posteriori su propia muerte.

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50
Finalmente, aquellas muestras de algas que tenían una mayor capacidad de supervivencia,
fueron aquellas que experimentaron una mayor expansión de su superficie y modificaron su
morfología.
Por otro lado, en el anexo B, se contemplan los resultados generados a través del software, de
los cuales se analizaron los parámetros superficie y perímetro para generar diferentes gráficos
ilustrados en las figuras 4-13 y 4-14 y la tabla 4-4.
51
Tabla 4-4. Análisis de la superficie y perímetro de los resultados obtenidos en ImageJ de las muestras analizadas en el cultivo en tanque.
Superficie Perímetro
Inicialmente (día 0), las muestras contenían una superficie talofita de entre 4 y 6cm2.
En el 2o muestreo (1 semana de cultivo), las muestran doblaban e incluso cuadriplicaban
su superficie laminar obteniendo un rango de (9-20cm2).
En dos primeros muestreos, el perímetro presentó un comportamiento
A partir del tercer muestreo, se denotó enlentecimiento del crecimiento superficial y homogéneo y ascendente.
una presencia de comportamiento heterogéneo entre muestras en cuanto a valores
superficiales. También se observaron fracturas y debilitación en los tejidos. Tanto en el 3er como en el 4o muestreo, se observó un crecimiento
NA1 superior al esperado debido a la fragmentación del talo. A más
En los dos últimos muestreos, solo fueron analizas dos fotografías, debido a la elevada fragmentación y debilidad de los tejidos, mayor era el perímetro.
fragmentación de las muestras. Se obtuvieron valores de 175.409 cm2 y 678 cm2.
Por lo general, las muestras siguieron una evolución constante y
Por lo general, las muestras siguieron una evolución constante y ascendente a lo largo ascendente a lo largo del experimento.
del experimento.

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Evolución Superficie NA1 Evolución Perímetro NA1

70,0 45,0
60,0 40,0
35,0
Superficie (cm2)
Perímetro (cm)
50,0
30,0
40,0 25,0
30,0 20,0
15,0
20,0
10,0
10,0 5,0
0,0 0,0
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25
Tiempo (días) Tiempo (días)
Figura 4-13. Evolución de la superficie en el tiempo de las 20 muestras Figura 4-14. Evolución del perímetro en el tiempo de las 20 muestras
seleccionadas en el cultivo de fragmentos de talo en tanque: NA1 y seleccionadas en el cultivo de fragmentos de talo en tanque: NA1 y
promedios de NA1 X. promedios de NA1 X.
Como se ha podido ver anteriormente, en las figuras de los parámetros superficie y perímetro,
no fueron suficientes para poder entender el comportamiento y la evolución morfológica de las
diferentes muestras de alga en cultivo en tanques. Por eso, ha sido necesario realizar el análisis
de:
- Circularidad (C):
Tal y como se observa en el último muestreo de la fase experimental fragmentos circulares del
cultivo en fotobiorreactores (apartado 4.1.1.), las muestras iban perdiendo su morfología
circular y adoptándola a una elipse. Se inició pues este experimento con una morfología elíptica.
En la figura 4-15, se puede contemplar la evolución en el tiempo de la morfología inicial de
círculo hasta la obtención de formas ovales y/o oblongas.
Generalmente, se observaba como no existía ninguna muestra que presentara una circularidad
perfecta. Se observó tanto en el primer muestreo como en el segundo, un comportamiento
homogéneo entre ellas y la disminución de su circularidad.
En el tercer muestreo, se produjo un aumento superior de la superficie con respecto al

perímetro, siendo la superficie más grande que este. Este hecho provocó poca diferenciación
entre el conjunto de muestras del segundo muestreo y del tercero. Por lo contrario, en el 4o
muestreo realizado se observó como la circularidad siguió disminuyendo. Esta evolución es
indicadora de la modificación que estaban adoptando las muestras en su morfología, en este
tipo de cultivo.

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Evolución Circularidad NA1

0,080
0,070
0,060
Circularidad
0,050
0,040
0,030
0,020
0,010
0,000
0 5 10 15 20 25
Tiempo (días)
Figura 4-15. Evolución de la circularidad en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas

en el cultivo de fragmentos de talo en tanque: NA1 y promedios de NA1 X.
- Elongación o relación de aspecto (AR):

Inicialmente, tal y como se ha vio en el parámetro circularidad, en la figura 4-16 se observa como
las muestras del primer muestreo presentaban pequeñas deformaciones en su margen, por lo
que ya no podían ser consideras círculos perfectos.
Una vez pasada la semana de reinoculación, se pudo ver una gran dispersión entre las muestras.
Por lo que todas experimentaron un cambio en su morfología, adaptándola a las necesidades de
cada una para las condiciones en las que se encuentran.
Por otro lado, se pudo contemplar como entre el 2o y 3er muestreo, apenas hubo diferencias
observables entre muestras, pero si una elevada dispersión en el 4o muestreo. Cabe destacar
que las muestras no eran comparables unas con otras, ya que fueron elegidas de manera
aleatoria.
Evolución Elongación NA1

25
20
Tiempo (días)
15
10
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0
Elongación
Figura 4-16. Evolución de la elongación en el tiempo de las 20 muestras seleccionadas

en el cultivo de fragmentos de talo en tanque: NA1 y promedios de NA1 X.
- Tasa de crecimiento (µ)

En la figura 4-17, se observa la tasa de crecimiento que experimentaron las muestras
reinoculadas en un tanque con sistema de recirculación integrado. Inicialmente en la primera
semana de reinoculación, el alga potenció su tasa de crecimiento hasta un 0.31d-1 un valor
superior al obtenido por otros autores de 0.21d-1 (Coutinho & Zingmark, 1993) y 0.18d-1 (Neori
et al. 1991).
Seguidamente, las algas mostraron un descenso exponencial hasta una tasa de crecimiento del
0,100 día-1. Este hecho puede explicarse debido a la fragmentación de las algas. Las muestras
siguieron aumentando su superficie talofita durante el resto del experimento, aunque estas
sufrieron una debilitación en sus tejidos y por consecuente su fracturación. Por lo tanto, existió
una pérdida de superficie laminar y una disminución de la tasa de crecimiento.

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µ NA1
0,35
0,31
0,30
0,25
0,20
µ (d-1)
0,15
0,10 0,10
0,05 0,06
0,00
0 5 10 15 20 25
Tiempo (días)
Figura 4-17. Evolución de la tasa de crecimiento de las muestras empleadas en el

cultivo de fragmentos de talo en tanque.
De la misma manera que para el cultivo de Ulva ohnoi se quiso profundizar en el estudio de la
tasa de crecimiento intentando buscar diferentes tipos de relaciones con otros parámetros ya
estudiados, pero los resultados obtenidos no fueron nada favorables. Por lo tanto, se decidió no
exponerlos en este estudio.
- Evolución de la Densidad de cultivo vs Superficie y Grosor

Se quiso estudiar, si existió alguna relación entre la densidad de cultivo, el grosor obtenido en
las muestras y la superficie de estas. En la tabla 4-5, se encuentran los resultados de biomasa en
peso fresco, densidad de cultivo y de productividad. A partir de los valores, se pudo observar
que, a pesar de producirse múltiples fracturaciones en la superficie talofita de las muestras de
alga, esta no dejó de aumentar su peso a lo largo del experimento (100g aproximadamente de
su biomasa total en cada muestreo). Bibliográficamente, se han obtenido valores de
productividad para Ulva ohnoi de 46.3 gdw m-2 día-1 (Mata et al., 2016), 46.5 y 55 gdw m-2 día-1
para U. lactuca (Figueroa et al., 2009; Neori et al., 1991) y 40 gdw m-2 día-1 para U. rigida (Jiménez
del Río et al., 1996). A diferencia de estos, en este cultivo se ha obtenido un valor máximo en
peso seco de 3,3 gdw m-2 día-1, donde el porcentaje de materia seca es alrededor de un 11%, por
lo que sería interesante valorar que parámetros se deberían modificar para aumentar la
productividad de este tipo de cultivo.
Tabla 4-5. Resultados de biomasa, densidad de cultivo y productividad en el tiempo del cultivo en
tanque para cada muestreo.
1er 2o 3er 4o 5o 6o
nº Muestreo
Muestreo Muestreo Muestreo Muestreo Muestreo Muestreo
BM (gfw) 9,42 125 257 363 439 572

r (gfw m-2) 14,719 195,312 401,563 567,188 685,938 893,750
Pd
- 25,799 29,464 23,661 16,964 29,688
(gfw día m-2)
A partir de los resultados de la tabla 4-5 y los valores obtenidos para el grosor y superficie
anteriormente citados, se generó la figura 4-18, donde se pueden ver representada la evolución
entre los parámetros.
Se pudo contemplar como para ambas comparaciones, existía una buena evolución. Por lo que,
esto indica una muy buena relación entre los parámetros. Se observó como la densidad de
cultivo y la superficie aumentaban sus valores a la par durante todo el experimento, teniendo
un pequeño punto de inflexión en el tercer muestreo. Por otro lado, el grosor siguió el mismo
comportamiento que la evolución anteriormente mencionada, pero se denotó más el punto de
inflexión en el tercer muestreo. En este punto, se ha visto anteriormente como a penas existían
diferencias de relación de aspecto y/o circularidad causadas por la elevada fragmentación del
alga, la observación de alga flotante en la superficie, etc. Por lo que se puede ver representando
que, a pesar del incremento de densidad de cultivo, este no perteneció al aumento de grosor,
sino al de superficie.

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Superficie y Grosor vs Densidad de cultivo

NA1
50,000 0,140
Superficie (cm2) 40,000

0,110
Grosor (mm)
30,000
0,080
20,000
0,050
10,000
0,000 0,020
0 100 200 300 400 500 600
r (g/m2)
Figura 4-18. Gráfico sobre la evolución de la densidad de cultivo, superficie

y grosor del cultivo de fragmentos de talo en tanque: superficie y grosor
.
4.3. CUERDAS DE CULTIVO

La aparición de pequeñas algas, fueron visibles pasados los 46 días de la implantación de las
cuerdas. En la figura 4-19 es posible observarlas y su evolución tras 3 semanas.
1 2
Figura 4-19. Composición de imágenes sobre: 1) inicio del experimento y 2) momento de

extracción de las cuerdas de cultivo en el primer muestreo.
Las cuerdas de esparto estaban formadas por un conjunto de fibras de gramíneas silvestres,
por lo que su origen es 100% vegetal terrestre y los cordones de zapatillas son 100% de
poliéster. Estas cuerdas tienen inicialmente un punto a favor con respecto el esparto, ya que
es un material muy resistente a la humedad.
En la figura 4-20 se presenta la cosecha de las cuerdas de cultivo en los tres muestreos
realizados. Se pudo observar como a medida que transcurre el experimento, la biomasa de alga
total disminuía en las cuerdas de cultivo comparadas con el primer muestreo.
Se pudo ver como la cantidad de alga era superior en las zonas de las cuerdas que se encuentran
más cercanamente de la superficie. Este fenómeno se explica gracias al contacto directo y
constante, con la iluminación del tanque, con la renovación de agua y su aireación. Los extremos
de las cuerdas se podrían encontrar en las zonas profundas del tanque, por lo que no existía un
contacto directo con la luz, ya que había predispuestos otros estratos de alga por encima de esta
zona, los cuales retenían parte de la iluminación.
1 2 3
Figura 4-20. Composición de imágenes de las cuerdas de cultivo en cada muestreo realizado en el
experimento cuerdas de cultivo: 1) 1.er muestreo, 2) 2.o muestreo y 3) 3.er muestreo.
- 1er muestreo
El primer muestreo se realizó al cabo de 3 semanas después de la primera aparición de algas en
las cuerdas de cultivo. El resultado obtenido se muestra en la figura 4-21.
Se pudo contemplar como la morfología variaba según donde iba creciendo el alga: las muestras
de alga tanto cultivadas en las cuerdas de esparto como en los cordones de poliéster,
presentaron mayores deformidades en su margen respecto el alga que se encontraba flotando.

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60
Las muestras de alga obtenidas de las cuerdas de poliéster presentaron una morfología rizada,
encrespada completamente y longitudinal. Su morfología era similar a una escarola. Por lo
contrario, las algas que se desprendieron de las cuerdas de cultivo y evolucionaron libremente
por todo el tanque, presentaban una mayor superficie y un margen más liso.
1 2 3
4 5 6
7 8 9
Figura 4-21. Composición de imágenes sobre las diferentes muestras de alga de las
diferentes cuerdas de cultivo y flotante en el 1er muestreo: 1) muestra cultivada en esparto,
2) muestra flotante, 3) muestra cultiva en poliéster, 4) muestra cultivada en esparto, 5)
cuerdas de cultivo, 6) muestra cultivada en poliéster, 7) muestra cultivada en esparto, 8)
muestra flotante y 9) muestra cultivada en de poliéster.
Por otro lado, se tomaron 7 muestras del alga contenidas en el tanque: el alga flotante, la
biomasa de alga de cada cordón de poliéster, la biomasa de alga de cada cordón de esparto y
las algas adheridas a la pared y se obtuvo su peso fresco. Los resultados se pueden contemplar
en la tabla 4-6.
Tabla 4-6. Resultados de biomasa del 1er muestreo en cuerdas de cultivo.
Cordón Poliéster Cordón esparto

Pared Flotante
1 2 1 2 3
BM (gfw) 265 359 39 47 73 64 75
Los dos grupos con mayor cantidad de biomasa fueron: alga adherida a la pared y el alga
flotante. El crecimiento del alga en la pared estaba producido por la falta de limpieza del tanque
desde el inicio del experimento hasta realizar el primer muestreo.
Toda el alga flotante recolectada, provino inicialmente de su aparición en las cuerdas de cultivo.
Por debilitación, estas sufrieron una fracturación de talo y siguieron su desarrollo de manera
libre por todo el volumen del tanque. Es por eso que se pudo notar como morfológicamente era
muy diferentes en comparación con el alga que se desarrolló en las cuerdas de cultivo. Esta alga
en concreto, inicialmente se observó como presentaba una menor cantidad de biomasa en
ambos tipos de cuerda y un grosor similar entre ellas (tabla 4-9) y como en el tiempo este grosor
fue aumentando. Este aumento es debido a dos motivos principalmente:
- El alga extraída en cada muestreo provenía de un alga adulta.

- Debían aumentar su grosor para poder producir una fijación superior en las cuerdas y no
desprenderse, debido a la corriente de aire generada en el interior del tanque.
En la tabla 4-6 también se puede observar un dato curioso y es que, tanto en la cuerda de
poliéster como en la cuerda de esparto situadas en las zonas más lejanas de la entrada de aire,
presentaban una mayor cantidad de biomasa. Este fenómeno puede estar causado por la
distribución de perdida de carga a lo largo de aireador. Las cuerdas situadas sobre los puntos
donde existía menor perdida de carga, recibían una mayor cantidad de aire, provocando una
mayor flotabilidad de los talos en la superficie del tanque, donde la radiación PAR recibida podría
estar saturada. Es por eso que, a mayor intensidad lumínica, menos clorofila y por tanto menos
densidad de biomasa.

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- 2o muestreo
El siguiente muestreo se realizó pasadas tres semanas desde el primero. Las muestras se pueden
observar en la figura 4-22, donde las algas desarrolladas en las cuerdas de cultivo, presentaban
una morfología mucho más rizada y en forma de espiral, comparada con el anterior muestreo.
Por otro lado, también se observó como este grupo de biomasa evolucionaba de manera mucho
más longitudinal con respecto al conjunto de biomasa flotante, la cual crecía de manera
expansiva pero mucho más reducida a la del muestreo anterior.
9
6
3
2 5 7
4 8
1
10 11 12
cuerdas de cultivo y flotante en el 2. o muestreo: : 1) cuerdas de cultivo, 2) muestra flotante, 3)
muestra flotante, 4) muestra flotante, 5) muestra flotante, 6) muestra cultivada en poliéster, 7)
muestra cultivada en esparto, 8) muestra cultivada en esparto, 9) muestra cultivada en esparto,
10) muestra cultivada en poliéster, 11) muestra cultivada en poliéster y 12) muestra cultivada en
esparto.
Con respecto a los resultados del peso fresco, se encuentran en la tabla 4-7. Se puede ver como
el tiempo entre los dos muestreos no fue suficiente como para observar la aparición de nuevos
individuos adheridos a las paredes del tanque, por lo que se obtuvo un peso fresco de 0 g para
este grupo.
A diferencia del primer muestreo, se observó como el conjunto de biomasa flotante disminuyó
y también, como los grupos de biomasa de los dos tipos de cuerdas de cultivo aumentaron
progresivamente. Este fenómeno esta causado por el aumento de grosor de las algas en la parte
inferior, para poder fortalecer su adherencia a las cuerdas de cultivo.
En comparación entre las cuerdas de cultivo, se pudo ver como inicialmente la mayor cantidad
de alga se concentraba en las cuerdas de cultivo de esparto, ya que unitariamente se obtenía
una mayor cantidad, pero se observó como a medida que pasa el tiempo esta cantidad iba
disminuyendo en las cuerdas hechas de esparto y aumentando en las cuerdas hechas de
poliéster. Esto es debido a dos motivos:
- La facilidad de fijación inicial en las cuerdas de cultivo era superior en las fibras vegetales
de esparto.
- La baja resistencia del esparto a la humedad hizo que, con el paso del tiempo, las fibras se
deshicieran y por tanto, tuviesen merma de material de cuerda de cultivo.
Tabla 4-7. Resultados de biomasa del 2o muestreo en cuerdas de cultivo.

Pared Flotante
1 2 1 2 3
BM (gfw) 0 281 54 70 59 37 64
- 3er muestreo
En la figura 4-23, se han representado los diferentes grupos de biomasa que contenía este
experimento. Se observó como las muestras de algas desarrolladas en las cuerdas de cultivo,
presentaban una morfología muchas más rizada, longitudinal y estrecha, comparadas con el
muestreo anterior. Se pudo ver también la morfología que presentó el alga flotante: contenían
una superficie expansiva, presentando un aspecto deteriorado con respecto a los anteriores
muestreos. Este hecho puede estar causado, como ya se ha mencionado anteriormente, por la
aparición de nuevas algas a partir de individuos adultos.

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64
1 2 3
4 6
7 5 8
cuerdas de cultivo y flotante en el 3.er muestreo: 1) cuerdas de cultivo, 2) muestra cultivada en
esparto, 3) muestra cultiva en esparto, 4) muestra cultivada en poliéster, 5) muestra cultivada en
poliéster, 6) muestra cultivada en poliéster, 7) muestra flotante y 8) muestra flotante.
Los resultados del peso fresco se encuentran representados en la tabla 4-8, observando como
de la misma manera, no transcurrió un periodo suficiente como para poder obtener biomasa de
alga anclada en las paredes del tanque. Por otro lado, se pudo ver como el resto de los tres
grupos siguieron la misma evolución: el alga flotante disminuyó, aumentó la biomasa en las
cuerdas de cultivo hechas de poliéster y disminuyó de manera ralentizada la biomasa adherida
a las cuerdas de cultivo hechas de esparto.
Tabla 4-8. Resultados de biomasa del 3er muestreo en cuerdas de cultivo.

Pared Flotante
1 2 1 2 3
BM (gfw) 0 156 66 83 57 40 69
Por otro lado, se analizaron los valores obtenidos para el peso mojado y el grosor de 20 muestras
para cada tipo de alga en cada muestreo. Cabe recordar que los valores obtenidos son respecto
una biomasa inicial aproximadamente nula para cada muestreo.
- Grosor
En la tabla 4-9 se visualiza los promedios obtenidos a través de los resultados generados por el
micrómetro.
Tabla 4-9. Resultados promedios del grosor de las muestras en cuerdas de cultivo.
Grosor (mm)
Tipo de alga
Flotante Poliéster Esparto Pared
nº Muestro
1er 0,093 0,068 0,068 0,031
2o 0,160 0,0,85 0,104 0
3er 0,224 0,240 0,277 0
Primeramente, tal y como se ha mencionado anteriormente, existió la presencia de alga

adheridas a la pared. Si se comparan con el resto de grosores del primer muestreo, se pudo ver
como estas presentan un 1/3 o 1/2 del grosor de los otros tipos de alga analizadas. Este mínimo
grosor pudo estar provocado por la falta de contacto entre alga y corriente de aire, ya que estas
se encontraban en las zonas más lejanas. Este fenómeno provocó la ausencia de aumento de
grosor, ya que la fuerza hidrodinámica recaída sobre ella era mínima y por tanto no había
desprendimiento.
Con respecto al resto de grosores, se pudo ver como a medida que se realizaba un muestreo y
se extraía la máxima cantidad de alga, esta cada vez iba aumentando su grosor. Este fenómeno
puede ser explicado de la siguiente manera: las algas cuando se encuentran adheridas a un
sustrato, estas aumentan el grosor de su pie de anclaje para no desprenderse de este y
desarrollarse correctamente frente la hidrodinámica del medio donde se encuentra. En este
caso, se provocó la fractura laminar del alga adherida en cada muestreo, provocando un
estímulo en esta. Este se basó en un aumento del grosor de los nuevos individuos y una

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disminución de su tamaño en la misma fracción de tiempo, ya que el alga invirtió la energía en

aumentar el grosor y no la superficie. Este fenómeno se puede ver representado en la figura 4-
24.
Evolución Grosor NA2

0,30
0,25
0,20
Grosor (mm)
0,15
0,10
0,05
0,00
1 2 3
Muestreo
Figura 4-24. Evolución del grosor de las diferentes muestras en los diferentes
tipos de cuerdas de cultivo y flotante: alga flotante ,alga en cuerdas de
esparto y alga en cuerdas de poliéster .
Como se observa en la figura 4-24, los grosores pertenecientes a los tipos de cuerda empleados
para este experimento, mostraron un aumento progresivo en el tiempo, presentando ambos
materiales un grosor superior/similar al tipo de alga flotante.
- Evolución de la Biomasa y Grosor

Cabe destacar que, aunque este fenómeno este justificado por el hecho de la supervivencia y la
presencia de una corriente hidrodinámica, se quiso estudiar la existencia o no de la relación
entre la biomasa de alga para cada tipo y el grosor.
A partir de los resultados que se encuentran en las tablas 4-6, 4-7, 4-8 y 4-9, se generó la figura
4-25, donde se contempla la evolución de ambos parámetros.
El alga flotante provenía de la fractura talofita de las muestras de algas desarrolladas en las
cuerdas de cultivo, es por eso que se observó como su grosor en cada muestreo iba aumentando
progresivamente y de manera conjunta con el grosor de las algas desarrolladas en cuerdas de

cultivo. Analizando la figura 4-25, se observó como las algas de tipo flotante a en cada muestreo,
a medida que su grosor era mayor, presentaba menor biomasa. En el último muestreo realizado
para este experimento, este tipo presentó un grosor inferior a los otros dos grupos de alga, esto
fue debido a que estos también aumentaban su grosor para proporcionar una mayor sujeción
en las cuerdas de cultivo, por lo que la fracturación del alga iba disminuyendo y solo se
presentaban fracturas en aquellas zonas donde el grosor era inferior y las probabilidades de
fracturación eran mayores (zonas apicales)
Biomasa vs Grosor
0,300
0,250
0,200
Grosor (mm)
0,150
0,100
0,050
0,000
0 50 100 150 200 250 300 350 400
BM (gfw)
Figura 4-25. Evolución del grosor y la densidad de cultivo de las diferentes muestras en
los diferentes tipos de cuerdas de cultivo y flotante: algas flotantes , algas en
cuerdas de esparto y algas en cuerdas de poliéster .
Con respecto al tipo de alga desarrollada en cuerdas de poliéster, se pudo ver como existían una
evolución ascendente del grosor, pero ralentizada en cuanto a biomasa. Cabe destacar que,
aunque la biomasa y el grosor aumentasen progresivamente, se pudo ver como este fenómeno
afectaba a la morfología tal y como se ha comentado anteriormente, presentaban morfologías
mucho más longitudinales y márgenes rizados.

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68
Por otro lado, respecto el tipo de alga que se desarrollaba en las cuerdas de cultivo de esparto,
estas presentaron una disminución de biomasa y un aumento de grosor, este hecho es posible
que esté descrito por la siguiente hipótesis: debido a que la resistencia a la humedad de este
material era muy baja, a medida que fue transcurriendo el experimento, la superficie de material
fue disminuyendo por la fracturación o descomposición del mismo. Por lo que las algas tuvieron
una superficie de cultivo inferior para desarrollarse.
Conclusiones
De acuerdo con los resultados obtenidos a partir de la búsqueda bibliográfica, así como del
trabajo de campo realizado, durante el desarrollo de este trabajo, se extraen las siguientes
conclusiones:
CULTIVO EN BIORREACTORES
- En el cultivo de Ulva ohnoi en fotobiorreactores es posible adquirir tasas de crecimiento de

!"Á$ = 0.67 d-1 en fragmentos circulares y !"Á$ = 0.93 d-1 en fragmentos irregulares. Estos
valores son aproximadamente 4 veces mayores que los valores obtenidos
bibliográficamente para tasas de cultivo en tanques.
- Indistintamente de las morfologías seleccionadas inicialmente para llevar a cabo el cultivo

en fotobiorreactores, las muestras tienden a aumentar su elongación, disminuyendo la
circularidad, adoptando morfologías oblongas, ovales y no definidas, con márgenes
sinuados y ondulados. Además, cuanto mayor ha sido la manipulación inicial de las
muestras, mayores serán los valores de grosor.
CULTIVO EN TANQUES:
- En los cultivos en tanques semicirculares, se pueden llegar a obtener tasas de crecimiento

iniciales de !"Á$ = 0.31 d-1, con tendencia a disminuir en el tiempo y presencia de elevadas
fragmentaciones de talo a partir de la 3a semana de cultivo.
- Aunque las muestras seleccionadas para este tipo de cultivo hayan sido utilizadas para
realizar un cultivo en fotobiorreactores, morfológicamente siguen la misma tendencia
anterior: morfologías oblongas y ovales, con márgenes sinuados y ondulados.

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70
Una buena estrategia de cultivo, enfocada a la obtención de tasas de crecimiento elevadas, sería
un cultivo previo de muestras de alga con morfologías irregulares en fotobiorreactores y
posteriormente traspasar las muestras a un cultivo en tanques.
CUERDAS DE CULTIVO
- Es posible obtener biomasa de Ulva ohnoi a partir de cuerdas de cultivo integradas en un

sistema IMTA, sin haber realizado un sembrado.
- Es importante tener en cuenta el tiempo previo necesario para la obtención de pequeños

talos y realizar una buena selección del material de elaboración de las cuerdas de cultivo
para macroalgas, ya que este influirá en la producción de biomasa.
- Cuanto mayor es la manipulación de las muestras de alga ancladas en los cabos, mayor es
el aumento del grosor y mayores son las posibilidades de que el alga transforme
morfologías de talos oblanceolados esparcidos, con márgenes ondulados a talos
ramificados, oblanceolados longitudinalmente y altamente festoneados.
Bibliografía
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https://doi.org/10.1016/J.ALGAL.2017.12.008
Anexos
Anexo A. ImageJ
Anexo B. Tablas de resultados ImageJ
Anexo C. Análisis de parámetros geométricos
Anexo D. Esquema instalación IMTA
Anexo E. Diagramas experimentales

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ANEXO A
ImageJ
Anexo A. ImageJ
ImageJ es un paquete de software desarrollado por el Instituto Nacional de la Salud (NIH).

Actualmente es un programa público, libre de restricciones de derechos de autor, pensado para
procesar y analizar imágenes, basándose en: mostrar, editar, analizar, procesar y guardar
imágenes desde 8 a 32 bits.
Para realizar este TFG, ha sido indispensable el uso de este programa en el análisis de las
imágenes obtenidas a lo largo de los experimentos.
Destacar, que es no es el único protocolo que se debe seguir para analizar imágenes, este
protocolo está basado en pruebas y pruebas con el programa, con tal de poder conseguir el
análisis óptimo de las imágenes.
- PROTOCOLO ImageJ
Inicialmente es necesario tener el software instalado en el ordenador (versiones disponibles
tanto para Mac iOS X, Windows como Linux).
Por otro lado, se deben tener almacenadas en una carpeta del ordenador todas aquellas
imágenes que se quieran analizar.
Una vez realizado los dos pasos anteriores, se analizan las imágenes de la siguiente manera:
1. Cargar la imagen a analizar en cuestión:

File > Open > Select Image > Open
2. Escalar la imagen:
2.1. Se debe contener una distancia conocida en la imagen. En este caso se tiene dos
distancias conocidas: la monda de 5 cent y la hoja milimetrada.
2.2. Se debe informar al software donde se encuentra esa distancia conocida.
*Straight* > Select distance

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2
2.3. Se debe informar al programa de la medida de esa distancia.

Analyze > Set Scale > Distance in pixels (número obtenido de la distancia seleccionada
anteriormente) > Know distance (distancia conocida) > Unit of length (unidades de la
distancia conocida) > OK
De esta manera se obtendría una imagen escalada a la distancia conocida y sus respectivas
unidades. Este proceso facilitará futuramente la obtención de resultados.
3. Seleccionar las superficies de la imagen que se quiere analizar.

Image > Adjust > Color Threshold > Hue (31, 226) > Select
En este caso se obtiene una nueva pestaña que permitirá seleccionar del color más conveniente,
las superficies a analizar. Se debe jugar con el panel de edición hasta encontrar el punto
perfecto, donde solo se obtienen las superficies que interesadas.
4. Seleccionar los parámetros que interesan para que el programa pueda analizar y generar
resultados.
Analyze > Set Measurements > Select measures (Area, Perimeter, Fit ellipse) > Decimal
places (3) > OK

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4
5. Obtención de los resultados.

Analyze > Analyze Particles > OK > Results Table
Finalmente, se obtiene una tabla de resultados donde se encuentran todas aquellas medidas
que se han seleccionado con anterioridad relacionadas a las superficies seleccionadas. Se puede
observar que el resultado no es preciso del todo debido al tipo de imagen, el tipo de muestra,
pero si se trata de un valor muy aproximado al real.
Estos resultados se exportan a un fichero de Excel para posteriormente analizarlos.

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ANEXO B
Tablas de resultados ImageJ
1
Anexo B. Tablas de resultados ImageJ

Tabla 1. Resultados ImageJ de fotobiorreactor 1, fase experimental fragmentos circulares, 1.er muestreo.
FOTOBIORREACTOR C.B1
SUPERFICIE
PARÁMETROS PERÍMETRO (cm) GROSOR (mm) D. MAYOR (cm) D. MENOR (cm)
(cm2)
0,308 2,290 0,024 0,633 0,619
0,287 2,261 0,023 0,614 0,596
0,367 2,505 0,022 0,759 0,615
0,291 2,217 0,019 0,664 0,558
0,275 2,183 0,023 0,637 0,550
0,310 2,213 0,021 0,649 0,609
1.er 0,386 2,480 0,020 0,762 0,646
M 0,338 2,449 0,025 0,679 0,634
U 0,338 2,335 0,018 0,670 0,642
E 0,343 2,369 0,024 0,671 0,651
S
0,365 2,340 0,024 0,703 0,662
T
0,333 2,450 0,022 0,665 0,638
R
0,323 2,264 0,020 0,682 0,602
E
0,319 2,253 0,025 0,688 0,590
O
0,375 2,468 0,021 0,700 0,681
0,325 2,272 0,024 0,684 0,605
0,315 2,320 0,017 0,647 0,619
0,291 2,217 0,022 0,633 0,585
0,370 2,556 0,021 0,750 0,628
0,333 2,372 0,023 0,707 0,600

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2
SUPERFICIE
(cm2)
0,384 3,056 0,023 0,759 0,644
0,269 2,815 0,019 0,612 0,560
0,352 2,743 0,021 0,724 0,619
0,328 3,022 0,024 0,668 0,625
0,332 2,959 0,017 0,679 0,623
0,335 2,751 0,018 0,697 0,611
1.er 0,386 2,889 0,020 0,722 0,680
M 0,323 2,777 0,021 0,658 0,624
U 0,364 2,896 0,023 0,716 0,647
E 0,330 2,741 0,025 0,679 0,620
S
0,396 2,898 0,022 0,717 0,703
T
0,381 2,884 0,019 0,766 0,633
R
E 0,367 2,469 0,020 0,741 0,631
O 0,313 2,457 0,022 0,737 0,541
0,423 2,537 0,018 0,789 0,682
0,371 2,458 0,025 0,708 0,668
0,349 2,522 0,021 0,701 0,633
0,371 2,474 0,017 0,694 0,680
0,351 2,309 0,018 0,685 0,651
0,367 2,390 0,024 0,693 0,675
3
SUPERFICIE
(cm2)
0,321 2,757 0,019 0,673 0,608
0,322 3,109 0,017 0,660 0,622
0,334 2,789 0,020 0,668 0,636
0,405 3,338 0,018 0,859 0,600
0,289 2,553 0,022 0,639 0,577
0,341 2,979 0,019 0,664 0,654
1.er 0,299 2,871 0,021 0,629 0,606
M 0,341 2,669 0,024 0,685 0,634
U 0,344 2,914 0,023 0,675 0,649
E 0,323 2,792 0,019 0,660 0,623
S
0,361 2,911 0,022 0,698 0,658
T
0,334 2,395 0,021 0,684 0,621
R
0,374 2,437 0,024 0,756 0,630
E
0,351 2,490 0,023 0,690 0,648
O
0,310 2,230 0,020 0,663 0,597
0,357 2,369 0,019 0,696 0,653
0,336 2,284 0,021 0,669 0,640
0,277 2,198 0,024 0,677 0,521
0,216 2,121 0,023 0,613 0,449
0,346 2,408 0,021 0,682 0,645

UPC - BarcelonaTech
4
Tabla 4. Resultados ImageJ de fotobiorreactor 1, fase experimental fragmentos circulares, 2.o muestreo.
SUPERFICIE
(cm2)
0,406 2,520 0,027 0,753 0,687
0,440 2,877 0,028 0,826 0,677
0,297 2,240 0,025 0,650 0,583
0,351 2,348 0,027 0,688 0,649
0,377 2,729 0,029 0,713 0,674
0,376 2,714 0,024 0,714 0,670
2.o 0,479 3,301 0,026 0,837 0,728
M 0,429 2,778 0,023 0,759 0,719
U 0,426 2,925 0,030 0,764 0,710
E 0,384 2,624 0,028 0,792 0,617
S
0,339 2,375 0,025 0,738 0,585
T
0,483 2,794 0,029 0,868 0,708
R
0,328 2,228 0,027 0,656 0,636
E
0,497 3,027 0,025 0,861 0,735
O
0,389 2,594 0,028 0,748 0,662
0,309 2,397 0,030 0,656 0,599
0,324 3,049 0,024 0,749 0,552
0,367 2,688 0,023 0,693 0,674
0,353 2,646 0,026 0,760 0,592
0,406 2,868 0,028 0,756 0,684
5
SUPERFICIE
(cm2)
0,585 3,797 0,023 0,979 0,760
0,529 4,094 0,025 0,850 0,793
0,380 3,045 0,022 0,716 0,676
0,630 3,707 0,020 0,948 0,847
0,358 2,979 0,024 0,694 0,656
0,600 3,964 0,022 0,918 0,833
2.o 0,450 3,286 0,025 0,790 0,724
M 0,337 2,597 0,026 0,690 0,623
U 0,388 2,585 0,023 0,738 0,670
E
0,536 3,064 0,022 0,833 0,818
S
0,452 3,351 0,021 0,791 0,728
T
0,351 2,875 0,025 0,698 0,641
R
0,353 2,703 0,023 0,683 0,659
E
O 0,501 4,289 0,024 0,860 0,742
0,654 3,409 0,020 0,927 0,899
0,568 4,041 0,025 0,893 0,809
0,409 2,963 0,023 0,760 0,686
0,461 3,157 0,021 0,804 0,730
0,410 3,317 0,025 0,754 0,692
0,542 2,999 0,020 0,882 0,783

UPC - BarcelonaTech
6
SUPERFICIE
(cm2)
0,367 2,861 0,022 0,690 0,677
0,419 2,905 0,024 0,762 0,701
0,325 2,544 0,025 0,649 0,637
0,486 3,071 0,023 0,794 0,779
0,464 3,065 0,026 0,806 0,733
0,310 2,416 0,024 0,657 0,602
2.o 0,355 2,601 0,025 0,714 0,633
M 0,595 5,692 0,022 1,038 0,730
U 0,388 2,739 0,023 0,720 0,685
E 0,426 3,499 0,020 0,795 0,682
S
0,433 3,161 0,021 0,822 0,671
T
0,410 3,077 0,026 0,766 0,682
R
0,509 3,351 0,024 0,879 0,738
E
0,360 2,650 0,023 0,713 0,643
O
0,462 3,064 0,021 0,842 0,699
0,431 3,234 0,025 0,789 0,695
0,368 2,625 0,025 0,702 0,668
0,414 2,820 0,024 0,767 0,688
0,346 2,614 0,022 0,684 0,644
0,398 3,047 0,021 0,737 0,687
7
SUPERFICIE
(cm2)
0,843 4,287 0,027 1,153 0,931
0,624 3,699 0,029 0,932 0,853
0,888 4,282 0,030 1,172 0,965
0,804 4,119 0,028 1,034 0,989
0,937 4,563 0,032 1,242 0,960
0,656 3,576 0,025 0,995 0,839
3.er 0,758 4,184 0,027 1,057 0,913
M 0,836 4,074 0,031 1,153 0,923
U 0,610 3,862 0,030 0,959 0,810
E
0,767 4,152 0,029 1,080 0,904
S
0,638 3,455 0,028 1,016 0,799
T
0,754 4,102 0,030 1,059 0,907
R
0,988 4,682 0,031 1,234 1,019
E
0,923 4,406 0,027 1,127 1,043
O
1,185 5,091 0,024 1,343 1,123
0,815 3,781 0,027 1,175 0,883
0,910 3,938 0,026 1,164 0,996
0,721 3,540 0,028 1,021 0,899
0,746 3,527 0,029 1,008 0,942
0,745 3,585 0,031 1,016 0,934

UPC - BarcelonaTech
8
SUPERFICIE
(cm2)
0,786 3,416 0,026 1,078 0,928
0,984 3,968 0,023 1,208 1,037
0,952 4,954 0,025 1,171 1,035
0,609 3,234 0,027 0,977 0,794
0,703 3,390 0,024 0,970 0,923
0,609 3,285 0,025 0,884 0,876
3.er 0,741 3,568 0,023 1,074 0,878
M 0,491 2,757 0,022 0,820 0,763
U 0,898 3,759 0,025 1,158 0,987
E
0,890 4,012 0,023 1,084 1,046
S
1,149 6,228 0,026 1,350 1,083
T
0,917 3,936 0,027 1,235 0,945
R
0,478 2,754 0,024 0,868 0,702
E
O 0,789 3,876 0,028 1,181 0,850
1,027 4,884 0,023 1,217 1,074
0,860 3,626 0,025 1,120 0,978
0,641 3,311 0,025 1,035 0,789
0,678 3,263 0,026 0,969 0,891
0,701 3,336 0,025 1,023 0,873
0,823 3,856 0,027 1,198 0,875
9
SUPERFICIE
(cm2)
1,889 5,824 0,025 1,654 1,454
2,204 6,339 0,024 1,821 1,541
1,560 5,370 0,027 1,486 1,337
1,777 5,650 0,023 1,575 1,437
1,799 6,470 0,022 1,616 1,418
1,259 5,842 0,028 1,367 1,173
3.er 2,218 7,260 0,025 1,960 1,441
M 1,165 5,596 0,027 1,305 1,136
U 1,473 5,157 0,023 1,408 1,332
E
1,470 5,151 0,024 1,454 1,288
S
1,383 4,913 0,025 1,533 1,148
T
1,755 6,020 0,020 1,781 1,255
R
1,719 6,093 0,027 1,574 1,390
E
0,960 3,888 0,026 1,236 0,989
O
1,360 4,903 0,024 1,371 1,263
1,177 5,609 0,027 1,332 1,125
1,167 4,387 0,028 1,302 1,141
1,904 6,128 0,022 1,731 1,400
1,782 6,057 0,021 1,598 1,420
1,816 5,995 0,024 1,615 1,431

UPC - BarcelonaTech
10
SUPERFICIE
(cm2)
1,433 5,221 0,035 1,500 1,216
1,016 4,586 0,032 1,181 1,095
1,822 5,862 0,029 1,720 1,349
1,304 5,079 0,036 1,487 1,117
1,205 4,688 0,031 1,302 1,178
1,356 4,921 0,034 1,478 1,168
4.o 1,303 5,003 0,035 1,506 1,101
M 1,169 4,932 0,037 1,550 0,960
U 1,053 4,551 0,036 1,334 1,006
E
0,954 4,068 0,037 1,158 1,048
S
1,464 5,684 0,032 1,536 1,213
T
1,653 5,406 0,035 1,525 1,380
R
1,309 4,782 0,032 1,411 1,181
E
1,590 5,264 0,033 1,474 1,374
O
1,142 4,348 0,035 1,319 1,102
1,299 5,317 0,036 1,358 1,217
1,568 5,216 0,037 1,600 1,248
1,137 4,821 0,035 1,303 1,110
1,884 5,936 0,032 1,791 1,340
2,278 6,459 0,031 1,943 1,492
11
SUPERFICIE
(cm2)
2,916 8,545 0,030 2,073 1,791
3,998 9,211 0,032 2,398 2,122
2,157 6,837 0,034 1,691 1,624
2,469 7,131 0,029 2,076 1,514
2,865 8,180 0,032 2,318 1,573
1,943 6,629 0,028 1,715 1,442
4.o 2,699 7,880 0,034 1,872 1,836
M 1,796 6,019 0,031 1,588 1,440
U 1,522 5,989 0,030 1,575 1,230
E
2,559 7,888 0,028 2,008 1,622
S
2,254 8,105 0,029 1,722 1,666
T
2,203 6,737 0,032 1,924 1,457
R
2,711 8,360 0,034 1,997 1,729
E
2,784 8,499 0,031 2,003 1,770
O
1,520 6,568 0,030 1,524 1,270
2,036 7,251 0,032 1,879 1,380
1,590 6,636 0,029 1,757 1,152
2,190 7,316 0,031 1,976 1,411
1,108 4,819 0,032 1,301 1,085
1,418 5,477 0,035 1,487 1,214

UPC - BarcelonaTech
12
SUPERFICIE
(cm2)
2,661 7,120 0,032 1,963 1,726
3,099 7,727 0,030 2,158 1,829
2,216 6,732 0,031 1,769 1,595
2,497 6,994 0,034 1,869 1,701
2,523 7,852 0,035 1,912 1,680
1,772 6,840 0,031 1,622 1,391
4.o 3,105 8,693 0,029 2,320 1,705
M 2,545 7,443 0,030 1,911 1,695
U
1,643 7,154 0,032 1,545 1,354
E
2,068 6,123 0,035 1,667 1,580
S
2,068 6,405 0,028 1,725 1,527
T
1,953 6,006 0,032 1,820 1,367
R
2,465 7,413 0,031 2,113 1,486
E
O 2,412 7,107 0,028 1,865 1,646
1,346 4,760 0,032 1,463 1,171
1,921 6,053 0,029 1,627 1,503
1,649 6,480 0,034 1,577 1,331
1,641 5,393 0,028 1,544 1,353
2,709 7,317 0,030 2,081 1,657
2,533 6,717 0,035 1,914 1,685
13
Tabla 13. Resultados ImageJ de fotobiorreactor 1, fase experimental fragmentos irregulares, 1.er muestreo.
FOTOBIORREACTOR I.B1
SUPERFICIE
(cm2)
0,122 1,596 0,015 0,457 0,340
0,124 1,650 0,016 0,440 0,359
0,109 1,481 0,019 0,407 0,340
0,059 0,973 0,020 0,320 0,236
0,110 1,567 0,015 0,475 0,295
0,062 1,332 0,017 0,402 0,196
1.er 0,080 1,532 0,016 0,361 0,283
M 0,053 1,216 0,018 0,380 0,176
U
0,154 1,827 0,019 0,512 0,383
E
0,052 1,062 0,015 0,360 0,185
S
0,053 1,046 0,020 0,356 0,189
T
0,051 1,127 0,021 0,374 0,174
R
E 0,048 1,120 0,017 0,287 0,212
O 0,039 0,884 0,018 0,306 0,162
0,030 0,798 0,017 0,234 0,164
0,045 1,252 0,016 0,255 0,224
0,050 1,029 0,019 0,309 0,207
0,028 0,896 0,017 0,227 0,159
0,025 0,768 0,015 0,192 0,166
0,024 0,777 0,019 0,242 0,128

UPC - BarcelonaTech
14
SUPERFICIE
(cm2)
0,137 1,806 0,016 0,431 0,405
0,085 1,553 0,013 0,473 0,229
0,163 1,878 0,017 0,488 0,424
0,121 1,861 0,013 0,543 0,284
0,063 1,139 0,019 0,356 0,224
0,040 0,890 0,015 0,295 0,173
1.er 0,068 1,520 0,014 0,477 0,181
M 0,063 1,254 0,017 0,397 0,203
U
0,050 0,899 0,013 0,265 0,238
E
0,047 0,923 0,018 0,258 0,230
S
0,054 1,178 0,016 0,401 0,171
T
0,052 1,093 0,017 0,348 0,192
R
E 0,075 1,644 0,015 0,456 0,209
O 0,106 1,703 0,018 0,427 0,317
0,080 1,525 0,015 0,471 0,217
0,041 0,994 0,018 0,311 0,169
0,035 0,819 0,019 0,257 0,172
0,014 0,549 0,014 0,159 0,113
0,042 1,116 0,015 0,352 0,153
0,057 1,241 0,016 0,323 0,226
15
SUPERFICIE
(cm2)
0,097 1,372 0,017 0,451 0,274
0,138 1,596 0,015 0,475 0,370
0,106 1,470 0,018 0,515 0,262
0,100 1,651 0,018 0,436 0,293
0,093 1,501 0,019 0,505 0,234
0,084 1,482 0,017 0,377 0,282
1.er 0,073 1,181 0,016 0,363 0,255
M 0,055 1,129 0,018 0,318 0,220
U
0,046 1,033 0,015 0,306 0,189
E
0,036 0,874 0,019 0,311 0,148
S
0,053 1,047 0,017 0,324 0,209
T
0,049 1,137 0,018 0,352 0,176
R
0,040 0,822 0,016 0,257 0,201
E
O 0,040 0,952 0,018 0,301 0,169
0,072 1,369 0,015 0,395 0,234
0,049 1,019 0,019 0,333 0,188
0,032 0,916 0,017 0,315 0,131
0,078 1,332 0,016 0,375 0,264
0,017 0,549 0,018 0,164 0,132
0,031 0,855 0,017 0,232 0,168

UPC - BarcelonaTech
16
Tabla 16. Resultados ImageJ de fotobiorreactor 1, fase experimental fragmentos irregulares, 2.o muestreo.
SUPERFICIE
(cm2)
0,274 2,358 0,023 0,639 0,546
0,296 2,687 0,020 0,665 0,568
0,132 1,678 0,022 0,447 0,375
0,121 1,654 0,021 0,542 0,284
0,061 1,170 0,025 0,373 0,206
0,049 0,964 0,020 0,319 0,195
2.o 0,086 1,463 0,022 0,506 0,216
M 0,092 1,435 0,019 0,379 0,310
U 0,058 1,054 0,020 0,323 0,228
E
0,072 1,141 0,023 0,355 0,257
S
0,091 1,345 0,024 0,431 0,268
T
0,094 1,436 0,021 0,399 0,299
R
0,139 1,639 0,020 0,456 0,389
E
O 0,157 2,058 0,025 0,637 0,314
0,215 3,101 0,024 0,595 0,459
0,102 1,665 0,020 0,532 0,244
0,071 1,525 0,021 0,538 0,169
0,105 1,541 0,022 0,519 0,259
0,087 1,681 0,023 0,404 0,275
0,186 2,306 0,024 0,616 0,383
17
SUPERFICIE
(cm2)
0,194 2,000 0,020 0,612 0,403
0,190 1,779 0,019 0,588 0,412
0,095 1,446 0,018 0,439 0,276
0,163 1,943 0,021 0,720 0,288
0,077 1,279 0,017 0,432 0,227
0,153 1,615 0,022 0,492 0,396
2.o 0,090 1,214 0,023 0,349 0,328
M 0,108 1,572 0,019 0,496 0,278
U
0,183 1,763 0,020 0,526 0,444
E
0,072 1,181 0,021 0,386 0,236
S
0,052 0,915 0,022 0,292 0,225
T
0,106 1,602 0,018 0,503 0,267
R
0,107 1,505 0,023 0,418 0,326
E
O 0,076 1,214 0,021 0,386 0,252
0,058 1,240 0,023 0,471 0,156
0,050 0,957 0,020 0,301 0,211
0,065 1,216 0,019 0,371 0,222
0,043 0,881 0,021 0,244 0,223
0,026 0,814 0,022 0,241 0,137
0,045 0,903 0,017 0,322 0,178

UPC - BarcelonaTech
18
SUPERFICIE
(cm2)
0,149 2,146 0,022 0,571 0,332
0,186 2,555 0,024 0,757 0,313
0,118 2,539 0,023 0,851 0,176
0,158 2,057 0,021 0,586 0,343
0,345 3,036 0,023 0,747 0,588
0,086 1,525 0,020 0,397 0,275
2.o 0,054 1,175 0,019 0,275 0,251
M 0,197 2,453 0,020 0,580 0,433
U 0,159 1,885 0,017 0,519 0,390
E 0,112 2,074 0,022 0,512 0,279
S
0,096 1,965 0,024 0,423 0,290
T
0,067 1,171 0,021 0,377 0,227
R
0,092 1,337 0,025 0,393 0,296
E
0,085 1,663 0,023 0,378 0,286
O
0,083 1,503 0,022 0,389 0,270
0,060 1,252 0,023 0,352 0,217
0,060 1,147 0,024 0,330 0,230
0,056 1,028 0,021 0,321 0,221
0,066 1,270 0,022 0,316 0,265
0,146 2,385 0,020 0,523 0,355
19
SUPERFICIE
(cm2)
0,580 3,782 0,025 1,123 0,657
0,918 5,047 0,020 1,318 0,887
0,302 2,709 0,026 0,804 0,479
0,285 3,417 0,024 1,181 0,308
0,500 3,557 0,025 1,142 0,557
0,803 5,010 0,027 1,408 0,727
3.er 0,488 3,650 0,025 0,916 0,679
M 0,152 2,063 0,026 0,673 0,288
U 0,572 3,914 0,021 1,022 0,713
E
0,187 1,977 0,027 0,545 0,438
S
0,408 3,301 0,024 1,119 0,464
T
0,760 4,467 0,025 1,025 0,945
R
0,367 3,432 0,023 0,746 0,626
E
0,571 4,749 0,027 1,420 0,511
O
0,704 5,196 0,025 1,172 0,765
0,238 3,904 0,024 0,722 0,419
0,308 3,723 0,023 0,680 0,577
0,138 1,819 0,026 0,473 0,371
0,256 3,160 0,024 0,800 0,407
0,160 2,599 0,025 0,722 0,282

UPC - BarcelonaTech
20
SUPERFICIE
(cm2)
0,934 6,434 0,020 1,954 0,609
1,293 6,591 0,021 1,919 0,858
0,823 4,354 0,022 1,153 0,909
0,431 3,504 0,023 0,918 0,598
0,619 4,908 0,024 1,472 0,535
0,350 3,020 0,020 1,092 0,408
3.er 0,200 2,092 0,022 0,620 0,410
M 0,324 2,977 0,024 0,785 0,525
U
0,880 4,408 0,023 1,336 0,838
E
0,891 4,996 0,021 1,482 0,765
S
0,901 5,169 0,020 1,632 0,703
T
0,572 3,781 0,023 1,394 0,522
R
E 0,352 3,408 0,024 1,082 0,414
O 0,352 3,408 0,022 1,082 0,414
1,643 5,931 0,022 1,723 1,215
1,144 4,818 0,021 1,578 0,923
0,407 2,706 0,020 0,769 0,673
0,177 1,831 0,021 0,581 0,387
0,147 1,810 0,024 0,483 0,387
0,138 1,584 0,023 0,469 0,374
21
SUPERFICIE
(cm2)
1,400 7,414 0,025 1,599 1,115
0,315 3,588 0,024 1,094 0,367
0,216 2,572 0,027 0,630 0,436
0,438 4,063 0,026 1,225 0,455
0,807 5,953 0,028 1,201 0,855
0,170 2,114 0,023 0,568 0,382
3.er 0,605 4,433 0,022 0,908 0,848
M 0,510 4,399 0,024 0,909 0,715
U 0,547 4,978 0,026 1,133 0,614
E
0,873 5,433 0,025 1,213 0,917
S
0,403 3,893 0,027 0,766 0,670
T
0,500 3,437 0,024 0,873 0,729
R
0,298 3,340 0,026 0,747 0,508
E
0,296 2,819 0,023 0,750 0,503
O
0,428 3,209 0,025 1,142 0,477
0,251 2,446 0,021 0,835 0,382
0,415 3,967 0,022 1,310 0,403
0,134 1,719 0,027 0,543 0,314
0,220 2,082 0,025 0,600 0,467
0,188 2,570 0,022 0,648 0,369

UPC - BarcelonaTech
22
SUPERFICIE
(cm2)
3,958 14,441 0,026 3,485 1,446
1,516 8,254 0,027 2,111 0,914
1,171 7,828 0,028 1,983 0,751
2,763 9,000 0,029 2,273 1,548
5,986 13,922 0,026 3,327 2,291
1,425 7,684 0,028 1,732 1,047
4.o 1,623 11,689 0,027 2,389 0,865
M 3,013 11,700 0,024 2,176 1,763
U
0,588 4,079 0,026 1,060 0,707
E
0,901 6,093 0,025 1,239 0,926
S
1,998 8,887 0,027 1,975 1,288
T
1,999 8,787 0,025 2,418 1,053
R
1,875 7,517 0,026 1,721 1,387
E
O 1,046 6,024 0,028 1,339 0,994
1,882 7,988 0,025 2,598 0,922
3,012 9,165 0,026 2,651 1,446
1,240 5,460 0,028 1,746 0,904
1,062 4,744 0,027 1,341 1,008
1,454 5,766 0,025 1,654 1,119
0,500 3,533 0,027 1,061 0,600
23
SUPERFICIE
(cm2)
5,498 20,842 0,023 3,117 2,246
5,940 17,667 0,024 3,451 2,191
1,539 8,464 0,023 1,675 1,171
1,198 10,748 0,025 2,203 0,692
0,605 4,399 0,022 1,006 0,766
9,559 28,482 0,023 3,979 3,059
4.o 4,075 12,305 0,024 3,102 1,672
M 2,766 13,660 0,026 2,285 1,541
U
1,805 7,453 0,025 1,862 1,234
E
5,070 18,861 0,024 5,842 1,105
S
12,097 32,599 0,027 8,363 1,842
T
3,631 12,889 0,022 3,085 1,498
R
E 3,550 11,538 0,020 2,320 1,948
O 0,969 5,154 0,025 1,271 0,971
1,828 10,173 0,023 1,766 1,318
3,487 12,471 0,021 2,845 1,560
3,515 20,082 0,024 2,528 1,770
1,198 10,748 0,026 2,203 0,692
7,197 27,341 0,022 5,390 1,700
1,627 14,542 0,024 1,946 1,065

UPC - BarcelonaTech
24
SUPERFICIE
(cm2)
2,981 8,730 0,032 2,109 1,799
6,776 20,168 0,027 3,780 2,283
2,918 12,382 0,028 2,940 1,264
2,316 9,286 0,025 2,125 1,388
4,847 14,961 0,027 3,151 1,959
3,390 8,466 0,023 2,294 1,881
4.o 1,515 7,878 0,029 2,471 0,781
M 4,011 11,721 0,025 2,976 1,716
U
2,689 8,412 0,026 2,727 1,256
E
1,291 4,972 0,024 1,719 0,957
S
1,739 7,826 0,028 1,938 1,143
T
1,207 6,985 0,030 1,509 1,018
R
E 1,146 4,969 0,029 1,325 1,101
O 2,030 12,664 0,024 3,642 0,710
3,609 14,073 0,025 2,887 1,592
2,820 10,023 0,022 2,451 1,465
1,365 6,831 0,026 1,655 1,050
2,458 14,591 0,027 2,444 1,280
2,220 8,360 0,024 2,208 1,280
4,228 14,297 0,028 3,217 1,673
25
Tabla 25. Resultados ImageJ de fragmentos de talo en tanque (NA1), 1.er muestreo.
TANQUE NA1
SUPERFICIE
(cm2)
1,433 5,221 0,035 1,500 1,216
1,016 4,586 0,032 1,181 1,095
1,822 5,862 0,029 1,720 1,349
1,304 5,079 0,036 1,487 1,117
1,205 4,688 0,031 1,302 1,178
1,356 4,921 0,034 1,478 1,168
1.er 1,303 5,003 0,035 1,506 1,101
M 1,169 4,932 0,037 1,550 0,960
U
1,053 4,551 0,036 1,334 1,006
E
0,954 4,068 0,037 1,158 1,048
S
1,464 5,684 0,032 1,536 1,213
T
1,653 5,406 0,035 1,525 1,380
R
1,309 4,782 0,032 1,411 1,181
E
O 1,590 5,264 0,033 1,474 1,374
1,142 4,348 0,035 1,319 1,102
1,299 5,317 0,036 1,358 1,217
1,568 5,216 0,037 1,600 1,248
1,137 4,821 0,035 1,303 1,110
1,884 5,936 0,032 1,791 1,340
2,278 6,459 0,031 1,943 1,492

UPC - BarcelonaTech
26
Tabla 26. Resultados ImageJ de fragmentos de talo en tanque (NA1), 2.o muestreo.
TANQUE NA1
SUPERFICIE
(cm2)
10,345 14,546 0,052 3,784 1,965
11,021 15,246 0,055 4,654 2,833
10,895 14,352 0,057 3,574 1,986
12,327 16,342 0,062 4,675 2,584
11,573 16,523 0,055 3,967 2,012
15,436 19,749 0,042 5,869 3,909
2.o 10,406 15,224 0,046 3,911 2,015
M 9,067 13,464 0,053 2,575 1,212
U
11,490 14,439 0,045 4,014 1,938
E
13,782 17,432 0,056 5,978 2,584
S
10,347 15,568 0,062 3,972 2,562
T
12,360 17,056 0,060 4,632 1,984
R
15,436 19,432 0,053 5,012 2,014
E
O 19,657 19,078 0,048 7,256 2,879
11,526 14,567 0,057 4,611 2,973
10,785 14,359 0,062 4,784 2,005
14,674 16,403 0,061 4,989 2,232
13,757 16,875 0,056 4,532 1,985
16,556 17,463 0,053 5,125 2,053
10,574 15,253 0,058 3,925 1,974
27
Tabla 27. Resultados ImageJ de fragmentos de talo en tanque (NA1), 3.er muestreo.
TANQUE NA1
SUPERFICIE
(cm2)
27,731 25,450 0,077 6,104 4,784
18,936 20,563 0,062 6,020 3,005
25,354 23,071 0,084 6,625 3,873
20,904 20,362 0,077 6,078 3,379
33,026 27,394 0,069 7,782 4,403
32,807 27,382 0,068 7,590 3,503
3.er 25,285 22,956 0,082 6,568 3,901
M 21,117 22,360 0,068 5,462 3,923
U 32,672 27,347 0,068 7,232 4,235
E 23,456 21,672 0,057 6,564 3,023
S
25,345 21,974 0,078 6,783 3,975
T
19,327 21,081 0,062 6,042 3,810
R
24,895 22,485 0,056 6,358 3,346
E
31,563 28,378 0,067 7,021 4,564
O
35,021 29,625 0,070 7,802 3,389
21,472 19,345 0,072 6,521 4,231
18,894 20,049 0,056 6,045 2,755
23,671 21,231 0,068 6,565 2,798
32,001 27,678 0,079 7,057 4,320
25,879 22,873 0,085 6,781 3,239

UPC - BarcelonaTech
28
Tabla 28. Resultados ImageJ de fragmentos de talo en tanque (NA1), 4.o muestreo.
TANQUE NA1
SUPERFICIE
(cm2)
29,352 25,256 0,062 10,451 6,252
60,684 40,787 0,090 16,777 5,882
40,436 36,326 0,087 14,365 8,752
37,344 30,463 0,058 13,656 9,520
57,463 39,323 0,690 14,461 4,456
43,747 37,355 0,072 15,785 9,433
4.o 29,363 28,734 0,079 12,567 7,354
M 39,456 32,373 0,083 13,674 8,823
U
30,247 29,679 0,104 11,563 6,432
E
41,467 35,574 0,094 15,547 5,352
S
50,854 37,436 0,093 15,462 5,823
T
45,645 37,011 0,034 14,967 6,836
R
23,575 24,346 0,086 12,657 5,243
E
38,543 30,614 0,059 12,987 4,982
O
45,779 37,328 0,068 14,654 6,452
42,567 36,679 0,094 15,852 8,452
33,575 29,562 0,082 13,972 7,567
52,843 35,732 0,075 16,241 4,336
32,674 28,497 0,079 14,512 8,442
36,367 28,952 0,064 13,456 7,534
ANEXO C
Análisis de parámetros
geométricos
1
Anexo C. Análisis de parámetros geométricos

Tabla 1. Resultados analíticos de fotobiorreactores, fase experimental fragmentos circulares.
Superficie Superficie Grosor

Nº Tiempo Superficie Superficie µ
FOTOBIORREACTOR MAX MIN /X/ Circularidad Elongación
muestras (días) /X/ (cm2) 2 SD (% d’1)
(cm ) (cm2) (cm)
20 0 0,330 0,386 0,275 0,032 0,022 - 0,050 1,104
20 2 0,388 0,497 0,297 0,058 0,027 8,156 0,044 1,143

C.B1
20 4 0,807 1,185 0,610 0,058 0,028 36,641 0,057 1,179
20 7 1,397 2,278 0,954 0,328 0,034 18,274 0,043 1,237
20 0 0,355 0,423 0,269 0,034 0,021 - 0,049 1,118
20 2 0,475 0,654 0,337 0,101 0,023 14,585 0,046 1,120

C.B2
20 4 0,786 1,149 0,478 0,177 0,025 25,233 0,051 1,178
20 7 2,237 3,998 1,108 0,672 0,031 34,850 0,048 1,179
20 0 0,329 0,405 0,216 0,039 0,021 - 0,049 1,118
20 2 0,413 0,595 0,310 0,068 0,023 11,398 0,046 1,120

C.B3
20 4 1,592 2,218 0,960 0,350 0,025 67,424 0,051 1,178
20 7 2,241 3,105 1,346 0,493 0,031 11,405 0,048 1,179

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2
Tabla 2. Resultados analíticos de fotobiorreactores, fase experimental fragmentos irregulares.
Superficie Grosor
Nº Tiempo Superficie Superficie Superficie µ
FOTOBIORREACTOR MAX /X/ Circularidad Elongación
muestras (días) /X/ (cm2) MIN (cm2) SD (% d’1)
(cm2) (cm)
20 0 0,066 0,154 0,024 0,038 0,017 .- 0,042 1,732
20 2 0,124 0,296 0,049 0,069 0,022 31,768 0,050 1,631

I.B1
20 4 0,435 0,918 0,138 0,069 0,025 62,575 0,040 1,935
20 7 1,951 5,986 0,500 1,295 0,027 50,030 0,018 2,110
20 0 0,070 0,163 0,014 0,037 0,016 - 0,042 1,649
20 2 0,098 0,194 0,026 0,052 0,020 16,895 0,050 1,669

I.B2
20 4 0,629 1,643 0,138 0,420 0,022 93,129 0,040 1,743
20 7 3,858 12,097 0,605 3,021 0,024 60,462 0,018 1,925
20 0 0,064 0,138 0,017 0,031 0,017 - 0,046 1,649
20 2 0,119 0,345 0,054 0,070 0,022 30,557 0,036 1,669

I.B3
20 4 0,451 1,400 0,134 0,300 0,025 66,689 0,032 1,743
20 7 2,778 6,776 1,146 1,418 0,026 60,620 0,028 1,925

3
Tabla 3. Resultados analíticos de fragmentos de talo en tanques.
Superficie Superficie Grosor

Nº Tiempo Superficie Superficie µ
TANQUE MAX MIN /X/ Circularidad Elongación
muestras (días) /X/ (cm2) SD (% d’1)
(cm2) (cm2) (cm)
20 0 1,397 2,278 1,433 0,328 0,034 - 0,053 1,237
20 7 12,601 19,657 9,067 2,640 0,055 31,42 0,048 2,047

NA1
20 14 25,968 35,021 18,894 5,238 0,070 10,33 0,046 1,826
20 21 40,599 60,684 23,575 9,749 0,108 6,38 0,037 2,179

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ANEXO D
Esquema instalación IMTA
1
Anexo D. Esquema instalación IMTA

R1, R2 y R3 Tanque de cultivo de algas
NA1 Tanque experimento fragmentos de talo
NA2 Tanque experimento cuerdas de cultivo
T1 y T2 Tanque lenguados
BF Biofiltro
B Bomba
FM Filtro de malla
Entrada de agua
Salida de agua

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ANEXO E
Diagramas experimentales
1
Anexo E. Diagramas experimentales

Fotobiorreactores: fase experimental fragmentos circulares*
*Se realizó el mismo proceso para los 3 fotobiorreactores durante 7 días.

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2
Fotobiorreactores: fase experimental fragmentos irregulares*
*Se realizó el mismo proceso para los 3 fotobiorreactores durante 7 días.

3
Talo en tanque*
Cada 7 días
*Se realizó el mismo proceso para los talos en tanque durante 28 días.

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4
Cuerdas de cultivo
*Se realizó el mismo proceso para las cuerdas de cultivo durante 63 días.

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INFLUENCIA DEL SISTEMA DE CULTIVO EN LA

MORFOLOGIA Y PRODUCTIVIDAD DE ULVA

Autor: Andrea Escribano Prófumo

Castelledefels, 10 de enero de 2019

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN __________________________________________________ 31

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

Figura 4-12. Evolución morfológica en el tiempo de las muestras en el cultivo de fragmentos de

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

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Grizel, Montes, & Polanco, 2000).

Figura 1-1. Ejemplos de macroalgas

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1.1.2. MACROALGAS EN LA INDUSTRIA

Finalmente, a nivel industrial se practica la extracción de agar, carragenina y alginatos, con el

1.2. Ulva ohnoi

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

en superficie), pudiendo alcanzar entre 80 – 90µm en la zona basal y 30 – 55µm en la zona

(A. Escribano 2018). (A. Escribano 2018).

Figura 1-4. Composición celular de Ulva ohnoi (A. Escribano 2018).

1.3. CULTIVO DE MACROALGAS

La técnica de cultivo se debe adecuar a la biología y características de la especie. Por lo tanto,

El desarrollo de las técnicas de cultivo de macroalgas, en el último siglo, se ha diversificado

Actualmente existen dos grandes grupos de cultivo de macroalgas:

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instalaciones internas, complementadas con fases en instalaciones externas en el mar) y

o Cultivo intensivo mixto planta-mar (“indoor-outdoor”): la obtención de la semilla y el

biofiltración, en los efluentes de sistemas integrados multitróficos y en la producción de

1.4. CULTIVO DE MICROALGAS

- Cultivos en sistemas abiertos

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

agitación que provoca la circulación del cultivo favoreciendo el crecimiento y la

- Cultivos en sistemas cerrados

1. Evaluación de la viabilidad de cultivo de Ulva ohnoi según su morfología inicial.

Escuela Superior de Agricultura de Barcelona

3.1. Procedencia y recolección de Ulva ohnoi

Posteriormente, el Dr. Javier Cremades (Universidad de A Coruña) realizó una secuenciación

Finalmente, los ejemplares fueron trasladados a las instalaciones de la Escuela Superior de

- Construcción y características de los fotobiorreactores

Inicialmente, no se disponía de ningún tipo de fotobiorreactor para poder realizar este

La pieza interna del fotobiorreactor se construyó a partir de un cilindro de metacrilato, de 8 cm

Figura 3-1. Estructura del fotobiorreactor (A. Escribano 2018).

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- Obtención de los fragmentos circulares y fragmentos irregulares

La biomasa de alga fue extraída de un tanque implantado en la instalación acuícola multitrófica

o Fase experimental fragmentos circulares

o Fase experimental fragmentos irregulares

- Análisis de las característica y parámetros morfológicos

Para ambas fases experimentales, se llevó a cabo el mismo procedimiento de análisis

- El día de inicio de ambos experimentos, se seleccionaron aleatoriamente 20 muestras de

Durante el análisis de las imágenes se observaron diferentes dificultades:

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- Debido a la iluminación de las fotografías, el programa no detectaba las zonas más

o Elongación o Relación de aspecto (AR) es la relación de las longitudes de los ejes de la

Esta fue calculada a partir de la siguiente fórmula:

Donde D.M. es el diámetro mayor y D.m. es el diámetro menor. Es un parámetro adimensional.

o Circularidad (C) es la medida de cuanto se acerca la superficie seleccionada a un círculo.

Esta fue calculada a partir de la siguiente fórmula:

Donde S es la superficie y P es el perímetro. Es un parámetro adimensional.

- Determinación de la tasa de crecimiento, densidad de cultivo y productividad

Para ambas fases experimentales, se llevó a cabo el mismo procedimiento de determinación.

o La Tasa de Crecimiento (µ) indica el crecimiento o decrecimiento durante un periodo de