Manejo y Cultivo de Microorganismos

1. INTRODUCCIÓN nucleolo y el ADN está contenido en un solo cromosoma.

Estos organismos están rodeados por una pared celular que
proporciona estructura, protección y está formada por
péptidoglucano que consiste en un biopolímero compuesto
principalmente de N-acetilglucosamina y aminoácidos.
(Brusseau et al, 2019; Zabel y Morrell, 2020)

Las bacterias se reproducen generalmente por fisión binaria,

Manejo y Cultivo de
Microorganismos
Resumen: Las siguientes instrucciones establecen las pautas
para la preparación de artículos para la Revista Politécnica.
Los artículos pueden ser escritos en español o en inglés, pero
tendrán un resumen de máximo 250 palabras en los dos
idiomas. Los autores pueden hacer uso de este documento
como una plantilla para componer su artículo si están
utilizando Microsoft Word 2013 o superior. Caso contrario,
este documento puede ser utilizado como una guía de
instrucciones. El número mínimo de páginas será 6 y el
máximo 15, Para el envío de los artículos, los autores deben
seguir las instrucciones colocadas en el sistema de recepción
de artículos del sitio web de la Revista Politécnica
(revistapolitecnica.epn.edu.ec). En caso de que su artículo sea
en inglés colocar el título y el resumen en los dos idiomas.
Palabras clave: Incluir una lista de 3 a 6 palabras.
Management and Culture of
esto les permite una rápida reproducción y si las condiciones
son adecuadas, también tendrán un rápido crecimiento. Son
capaces de dividirse cada 20 minutos, se acumulan en
cantidades grandes en sustratos adecuados; sus altas tazas
reproductivas les permiten cubrir superficies expuestas en
poco tiempo. (Brusseau, M. L. et al, 2019; Zabel, R. y
Morrell, J., 2020)
Morfología
Presentan formas diversas, las más comunes son redondas,
llamadas cocos, cilíndricas o bacilos y de forma helicoidal o
espirilos. Además, pueden mantenerse unidas luego de la
división celular, de tal manera que forman grupos
característicos: diplo (parejas), estrepto (cadenas).
(Caballero)
Para determinar la morfología macroscópica de las colonias
bacterianas es necesario aislar las bacterias para obtener
cultivos puros; su forma debe caracterizarse según criterios
como tamaño de colonia, pigmentación, elevación, bordes,
aspecto de la superficie, olor; en la Figura 1 se presentan
ejemplos de estas características. (Forbes, et. al, 2009)

Microorganisms
Abstract: These instructions give you guidelines for
preparing papers for EPN Journal. Papers can be written in
Spanish or English; however, an abstract of maximum 250
words and written in both languages is required. Use this
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using Microsoft Word2013 or later. Otherwise, use this
document as an instruction set. The minimum number of
pages will be 6 and the maximum will be 15. For submission
guidelines, follow instructions on paper submission system
from the EPN Journal website(revistapolitecnica.epn.edu.ec).

Keywords:Include a list of 3 to 6 words

A partir del desarrollo del microscopio electrónico en la
década de 1950 se realizaron varios descubrimientos como la
existencia de células más primitivas o procariotas y células
más complejas o eucariotas. Tiempo después, se clasificaron
a los organismos vivos en tres dominios: Archea, Eubacteria
(Procariota) y Eucariota. (Zabel, R. y Morrell, J., 2020)

1.1. BACTERIAS

Las bacterias son los organismos más antiguos y simples, son

microorganismos unicelulares pequeños, sus tamaños oscilan
entre 0,1 y 2 µm. Son células procariotas, poseen citoplasma, Figura 1. Morfología de colonias bacterianas (Forbes, et. al,
pero a diferencia de las células eucariotas, no poseen 2009)
organelos celulares y su material genético no está delimitado
por una membrana, este núcleo primitivo se conoce como

1

1.2. HONGOS
Según su forma de crecimiento pueden dividirse en hongos
filamentosos y levaduras. Los hongos filamentosos son
organismos eucariotes multicelulares y heterótrofos aerobios;
se reproducen por medio de esporas, su población es menos
numerosa que la bacteriana, pero representan una mayor
cantidad de la biomasa microbiana total en el suelo, debido a
sus tamaños relativamente grandes. Son más tolerantes que
las bacterias ante cambios ácidos de pH. (Brusseau, M. L. et
al, 2019; Caballero)
Morfología
Consisten en células cilíndricas, alargadas, interconectadas
llamadas hifas, al conjunto de hifas se lo denomina micelio;
esta estructura les permite adaptarse a diferentes medios para
penetrar, absorber y metabolizar diferentes compuestos
orgánicos (Zabel, R. y Morrell, J., 2020)
A nivel macroscópico muchos de los sistemas de hifas se
encuentran dentro del hospedero o sustrato, por lo que no es
fácil distinguirlos a simple vista. (; Zabel, R. y Morrell, J.,
2020)
1.3. LEVADURAS
Son un tipo de hongos eucariotas unicelulares, la formación
del micelio es limitada o ausente, son mayoritariamente
anaerobios y de reproducción asexual, por gemación o
fragmentación del talo. (Caballero)
Morfología
Estos organismos son células unicelulares redondas u
ovaladas; a nivel macroscópico sus colonias presentas formas
diversas, son cremosas y presentan pigmentos distintos de
acuerdo con su género y especie. (Caballero)
1.4. MANEJO Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Según el tipo de metabolismo, su obtención de carbono y
energía, los microorganismos poseen distintos requerimientos
nutricionales para desarrollarse en un medio, el conocimiento
de estos requerimientos es clave para el aislamiento de
microorganismos en cultivos puros. (Prescott)
Inóculo
Es una cantidad de microorganismos que se prepara a partir
de un cultivo puro en medio líquido o de una colonia aislada
en medio sólido, esta cantidad es suficiente para su desarrollo
si éste es transferido a un medio de cultivo por inoculación.
(García, et al.)
Medios de Cultivo
La finalidad de un medio de cultivo está relacionada con la
composición de dicho medio, se puede preparar un medio
Revista Politécnica- XXXX 202X, Vol. XX, No. X
para propiciar el crecimiento de microorganismos específicos
e inhibir otros, para facilitar la identificación de cierta
especie, incluso para satisfacer requerimientos de
microorganismos exigentes. Según su finalidad, los medios
de cultivo pueden ser selectivos, diferenciales, enriquecidos.
(Prescott)
Los medios de cultivo según su composición pueden ser
definidos o complejos.
 Los medios definidos se preparan de tal forma que
se conoce la composición exacta del medio y es un
medio de cultivo utilizado para describir qué
componentes metaboliza un microorganismo.
(Prescott)
 Los medios complejos son de composición
indefinida, pues el objetivo es que el medio pueda
satisfacer nutricionalmente a muchos
microorganismos. Se utilizan ingredientes altamente
nutricionales como peptonas o extracto de carne.
(Prescott)
Técnica Aséptica
Para conseguir aislar con éxitos los microorganismos es
necesario evitar la contaminación y para ello se lleva a cabo
la técnica aséptica. Esta técnica consiste en mantener el lugar
de trabajo limpio y en condiciones estériles, se utilizan
cámaras de seguridad biológica o cámaras de flujo laminar, o
bien se trabaja en las proximidades de la llama de un
mechero, dependiendo del riesgo biológico que presente el
microrganismo. (Gamazo, et. al, 2005)
2. METODOLOGÍA
Inoculación en medio liquido
Materiales
- Un mechero de Bunsen
- Asa de siembre
- Gradilla
- Tubos de ensayos
- Inóculos de la caja de Petri
- Tapones de algodón
Procedimiento
 Se toma el inóculo de la placa de Petri.
 Flamear el asa, dejar enfriar, destapar la placa, tomar
el inóculo y volver a tapar.
 Tomar el tubo a inocular de la gradilla, destapar y
flamear la boca de este.
 Re suspender el inóculo con el aza descargando el
aza contra la pared del tubo inclinando ligeramente.
 Flamear la boca del tubo, colocar el tapón y
depositar en la gradilla.
 Flamear el aza y esperar a que se enfrié, dejar sobre
la base del mechero (Savunisevilla, 2012).
 Manejo y Cultivo de Microorganismos
Condiciones de asepsia
 Flamear el asa o el hilo.
Para flamear el asa hay que colocar en posición
perpendicular a la mesa de trabajo en la parte alta de la
llamada del mechero hasta que se pongan incandescente,
pasar varias veces por la llama la parte metaliza que
sujeta el asa, después se retira de la llama y esperar que
se enfríe manteniéndolo sin soltarlo cerca del mechero.
 Flamear la boca del tubo, matraz o frasco.
Quitar el tapón y pasar las bocas de los tubos, matraces o
frascos por la llama del mechero brevemente y con el
recipiente inclinado, no dejar los tapones de algodón,
sostener con el dedo meñique de la mano que sostiene el
asa o el hilo, trabajar en las proximidades de la llama del
mechero.
 Manipulación de las placas de Petri.
Las placas deben estar siempre en posición invertida
antes de tomar el inoculo, tomar la base de la placa con
la mano contraria a la que sostiene el asa dejando la tapa
a un lado del mechero.
 Rotulado del material
Rotular siempre todo el material para poder identificarlo,
rotular los tubos en la parte alta y las placas de Petri en la
base (Savunisevilla, 2012).
Metodología para la visualización de microorganismos  Cerevisiae se dio a las dos temperaturas de trabajo en el
 Enchufar el microscopio a una fuente de energía.
 Girar el revolver hasta enfocar el objetivo menor
debido a que se facilita la visualización de las
estructuras, al escuchar un clic, la posición del
objetivo será la correcta para su uso.
 Encender la luz para iluminar la imagen observada
por el ocular
 Asegurar el portaobjetos con la muestra tratada con
coloración de Gram con los clips de la platina.
 Ajustar la entrada de la luz con el diafragma.
 Mover primero el tornillo macrométrico para bajar o
subir la platina hasta enfocar la imagen lo más cerca
posible al objetivo.
 Ajustar el tornillo micrométrico para que la imagen
sea lo más nítida posible.
 Mover la imagen hasta que el área resaltada se
encuentre centrada para su visualización.
Los objetivos que tienen la palabra aceite en un costado son
lentes de inmersión por los que se debe emplear una pequeña
cantidad de aceite de inmersión en el portaobjetos para evitar
la distorsión de luz y lograr una imagen más clara. Usar
únicamente el tornillo micrométrico para enfocar el lente de
inmersión, debido a que el tornillo macrométrico puede dañar
la lente.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la tabla 1 se muestra el crecimiento de los
microorganismos Aspergillus Niger, Saccharomyces
Cerevisiae, Staphylococcus en diferentes medios de cultivos
y diferentes temperaturas.
Tabla 1. Crecimiento de microorganismos en diferentes medios de
cultivo y temperaturas. Calificando: 3= muy abundante, 2=
abundante, 1= poco abundante, 0= nulo.
Hongo Levadura Bacteria
TAmb 30 °C TAmb 30 °C TAmb 30 °C
PCA 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
Malta 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Agar
Czape 1 1 3 3 1 1 1 1 1 1 2 2
k
El mejor crecimiento de los hongos Aspergillus Niger se
observó en el cultivo de Malta-Agar a ambas temperaturas de
trabajo y en el Czapek a 30°C. Esto se debe a que el cultivo
Malta-Agar es el mejor cultivo para el crecimiento de hongos
y levaduras por su alto contenido de polisacáridos que sirven
como fuente de energía como la maltosa (Merck, 2014). El
menor crecimiento de hongos se dio a la temperatura
ambiente de los cultivos PCA y Czapek, esto se debe a que el
intervalo de temperaturas óptimas para el crecimiento de
hongos se da entre los 25 a 30°C (Cañedo, 2008), sin
embargo, algunos hongos pueden desarrollarse a
temperaturas entre los 0 a 55 °C, pero en menor cantidad
como se observa en la Tabla 1.
El mejor crecimiento de la levadura Saccharomyces
cultivo Malta-Agar al igual que los hongos Aspergillus
Niger. Mientras que el menor crecimiento se dio en el cultivo
Czapek, esto se debe a que el rango de temperaturas óptimas
para el crecimiento de levaduras se encuentra en los 25 a 30
°C (Cañedo, 2008), sin embargo, estos se pueden elevar hasta
los 35 °C por lo que la presencia de la bacteria a 30 °C en el
cultivo Czapek fue poco abundante.
El mejor crecimiento de la bacteria Staphyloccus se dio en el
cultivo de Malta-Agar, mientras que en segundo lugar se
encuentra el cultivo PCA, sin embargo, este último debía ser
más adecuado para el crecimiento de la bacteria (Loke,
2015). Esto se debe a que la Staphyloccus se encuentra dentro
de un rango de temperatura óptima entre los 30 a 40 °C por lo
que la presencia de la bacteria en los otros cultivos fue en
menor cantidad. A temperaturas bajas como la ambiente el
desarrollo es menor para el cultivo Czapek. Otra posibilidad
de error se atribuye a una contaminación al momento de
realizar la inoculación.
Características microscópicas de los microorganismos:
Las propiedades microscópicas de los microorganismos
fueron determinadas con la ayuda de un microscopio y son
observadas en la Tabla 2.
3
 Figura 6. Vista
Tabla 2. Diferencias microscópicas de los 3 microorganismos macroscópica del
Microorganism Saccharomyces
Imagen Características Cerevisiae
o
Son células
cilíndricas, Se observan
alargadas, colonias blancas
interconectadas en forma de
Aspergillus Staphylococcus espiral en un
llamadas hifas.
Niger medio de color
El conjunto de
Figura 2. Vista en amarillento.
hifas se lo Figura 7. Vista
el microscopio del
denomina micelio. macroscópica del
Aspergillus Niger
Staphylococcus
(Cañedo, 2008)
Son células
unicelulares CONCLUSIONES
redondas u
ovaladas. La Malta-Agar es el mejor medio de cultivo para los
Saccharomyces Presentan microorganismos el hongo Aspergillus Niger, la levadura
Cerevisiae distintos Saccharomyces Cerevisiae y la bacteria Staphylococcus a
Figura 3. Vista en pigmentos de
el microscopio del temperatura ambiente y a 30 °C.
acuerdo con su
Saccharomyces
Cerevisiae
género y especie. Los microorganismos se desarrollan mejor a una temperatura
(Cañedo, 2008) de 30 °C que a temperatura ambiente.
Son redondas,
cilíndricas de El cultivo Czapek es el de menor crecimiento poblacional de
forma helicoidal o los 3 medios de cultivos utilizados.
espirilos.
Se mantienen
Staphylococcus
unidas luego de la
Figura 4. Vista en división celular, REFERENCIAS
el microscopio del formando grupos
Staphylococcus característicos.
(Loke, 2015) Cañedo, V. (2008). Manual De Laboratorio Para El Manejo
De Hongos Entomopatógenos. Lima, Perú: Centro
Características macroscópicas de los microorganismos: Internacional de la Papa.

Las características macroscópicas fueron observadas con la Loke, P. "Overview of citric acid production from
ayuda de los ojos y se detallan en la Tabla 3. Aspergillus niger." Frontiers in Life Science. 2015.
https://bit.ly/2GNG6nj. (junio, 2020)
Tabla 3. Diferencias macroscópicas de los 3 microorganismos
Microorganism Merck, M. (2014). Agar extracto de malte. 105398 | Agar
Imagen Características
o Extracto de Malte, 01(129).

Savunisevilla. (2012). Técnicas Básicas de Microbiología.

El hongo es de Siembra y Aislamiento de Bacterias. Recuperado de:
color negro https://www.youtube.com/watch?
Aspergillus escarchado, v=TnHCd4sY24&feature=youtu.be. (junio, 2020).
Niger cubierto por un
micelio de color
amarillento.
Figura 5. Vista
macroscópica del
Aspergillus Niger

Se observan
colonias blancas
Saccharomyces
en forma de
Cerevisiae
espiral en un
medio de color
amarillento.

Revista Politécnica- XXXX 202X, Vol. XX, No. X