Asignatura: Solución Biología

UNIDAD I: Niveles de organización de la materia y componentes

químicos de la célula

Métodos de estudio de la célula

 Índice

• Métodos de estudio de la célula..

- Introducción.
- Microscopia.
- Partes principales del m.o.c.
• Microscopía electrónica.
- Microscopía electrónica.
- Microscopía electrónica de transmisión.
- Microscopía electrónica de barrido.
• Centrifugación.
- Centrifugación.
- Centrifugación diferencial.
- Centrifugación en gradiente.
• Cultivo celular.
- Cultivo celular.
• Electroforesis.
- Electroforesis.
- Electroforesis de proteínas.
- Electroforesis de adn.
• Información complementaria.
- Información complementaria.
• Recuerde
- Recuerde
 Introducción

Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño
tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su
visualización y estudio.
 Microscopía

• El tamaño promedio de las células eucariontes es de 10 um.

• Para poder observar las células se requiere un instrumento de aumento como el

microscopio.

• Existen diferentes tipos de microscopios ópticos. Sin embargo, el más común es el

microscopio óptico compuesto (m.o.c)
 Partes principales del m.o.c

Oculares

Carro
Revolver

Objetivos
Tornillo
Macrométrico
Platina

Condensador

Tornillo
Lámpara Micrométrico
 Microscopía electrónica

Se basa en la capacidad de los electrones para atravesar o reflejarse en una muestra de tejido, en vez de
lentes utiliza imanes para guiar el haz de electrones.

Permiten observar estructuras ultramicroscópicas como organelos que no son visibles al microscópio
óptico.

Existen dos tipos:

• Microscopía:

Electrónica de transmisión.

• Microscopía:

Electrónica de barrido.

Microscopía electrónica de transmisión

Los electrones atraviesan la muestra y generan una imagen en una pantalla.

Cátodo
Lente
condensadora
Ánodo

Preparación

Lente Objetivo

Ventana de
Lente de visión
Proyección

Imagen en la
Pantalla Visual
 Núcleo

Microscopía electrónica de barrido

Los electrones se reflejan en la muestra y generan una imagen tridimensional de esta.

Cátodo Ánodo

Lente
Condensadora

Espiral de Amplificador
Barrido Electrónico

Haz de Barrido

Detector de
Electrones

Imagen en la
Preparación
pantalla
 Macrófago Glóbulos rojos

Centrifugación

La centrifugación es una técnica que permite separar los sólidos (células, organelos, moléculas, etc.) en
base a la velocidad a la que sedimentan en un medio acuoso bajo la acción de un campo centrífugo.

Es necesario que el precipitadp sea más denso que el fluido.

Esta fuerza se aplica en unos aparatos denominados: centrífugas por medio de la rotación de una de las
piezas, llamada rotor, a gran velocidad dentro de una cámara acorazada en la que puede estar:

• La temperatura controlada (para evitar la degradación (para evitar la degradación de muestras

termosensibles) y en ocasiones bajo vacío (para evitar el calentamiento del rotor por el roce con el
aire).

Existen esencialmente dos tipos de centrifugación:

1) Centrifugación diferencial.

2) Centrifugación en gradiente.
 Centrifugación diferencial

Se basa en la diferencia de forma, tamaño y densidad de las partículas.

Separa componentes subcelulares

Sobrenadante:
Ribosomas, Virus,
macromoléculas

Homogenadocelular
Homogenado celular
Precipitado 1 Precipitado 2
Precipitado
células 1
enteras, mitocondrias,
núcleo, lisosomas,
citoesqueleto. peroxisomas
 Centrifugación en gradiente

Los componentes de una muesta se separan en un gradiente de concentración (ej. Sacarosa, Ficoll), de
acuerdo a su velocidad de sedimentación.

Separa poblaciones celulares en una misma muestra.

 Cultivo celular

Los cultivos celulares son un conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células “in vitro”,
manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas.

Las células se mantienen en medios de cultivo que contienen todos los nutrientes que las células
necesitan.

Las células se mantienen en cámaras de cultivo con 5% de CO2 Y 95% de oxígeno a T° y himedad
constante.

Fibroblastos en cultivo Medios de cultivo Frascos de cultivo Cámaras de cultivo

 Electroforesis

La electroforesis una técnica sencilla que se utiliza para separar proteías y ácidos nucleicos en un campo
eléctrico en funcion de su tamaño.

En un campo eléctrico las

moléculas migraran según su
carga.

En una electroforesis todas las

partículas poseen la misma
carga, por lo que se separan
según tamaño en una matriz
de consistencia gel.

Proteínas
Esta técnica se realiza para
separar principalmente dos
tipos de moléculas:
ADN
 Electroforesis de proteínas

Proteínas

Se agrega una mezcla de agentes denaturantes y un detergente

aniónico (ej..SDS) para desnaturalizar la proteína y cargarla
negativamente.

Electrodo Negativo

Electrodo Positivo

La mezcla de proteína más detergente se Se hace pasar una corriente eléctrica por el gel para
carga en un gel poliacrilamida (SDS- PAGE) separar las proteínas.
 Electroforesis de adn

Se carga el ADN completo o digerido con enzimas

de restricción en un gel de agarosa.

Electrodo Negativo

Electrodo Positivo
El ADN se tiñe con un agente que se intercala en su
Se hace pasar una corriente eléctrica por el gel estructura y que fluorece bajo luz UV.
para separar los fragmentos de ADN
 Información complementaria

Tipo Nombre Ubicación

Libro Biología Molecular de la Célula Bilioteca Uiversidad Santo

Tomas
Bruce Alberts, Julian Lewis; Alexander Johnson,
(aut.)

Miquel Llobera I Sande; Marcé Durfort Coll (tr.)

Ediciones Omega, Barcelona

5ta Edición, 2010.

Recuerda

Recuerda revisar las guías y test que aparece en el aula virtual para reforzar los contenidos.