RECUENTO DE

BACTERIAS COLIFORMES
TOTALES

Norma Boliviana NB 32005

Materiales
Tubos de cultivo de 150 mm x 15 mm o 10
mm x 18mm
Tubos Durham o de fermentación
Frasco y tubos de dilución
Gradilla para tubos Aparatos
Pipetas graduadas de 10 ml y 1 ml Autoclave
Asas de inoculación Balanza digital
Marcadores indelebles Baños de agua, regulados a 44.5°C
Propipetas Refrigerador
Homogenizadores stomacher o licuadora
Phmetro
Estufa de incubación reguladas a 35
 MEDIOS DE CULTIVO

Caldo laurilsulfato-triptosa
Composiscion  
Preparación
Triptosa 20 g
Disolver completamente la Lactosa 5g
sustancia, sin hacer hervir
enrasar a volumen con agua, Cloruro de sodi 5g
y distribuir a 10 ml en tubos Hidrogenofosfato de potasio 2.75 g
de cultivo que contengan
tubos durhan invertido Dihidrogeno fosfto ed potasio 2.75 g
esterilizar e autoclave Sulfato de sodio 0.1 g
durante 15 min a 121°C
Agua destilada 10 ml
 MEDIOS DE CULTIVO
Caldo verde brillante- bilis 2%
Preparación
Composición  

Peptona 10 g

Lactosa 10 g

Bilis de buey 20 g

Verde brillante 0.0133g

Agua destilad 100000 ml

 “ TECNICA NUMERO
MAS PROBABLE NMP
”
Basado en la propiedad, que tienen los microorganismos denominados coliformes, de fermentar la
lactosa con producción de acido y gas a una temperatura entre 37° C e incubados durante un periodo
comprendido entre 24 a 48 h

consiste en un ensayo de dos fases :

 Prueba presuntiva
 Prueba confirmativa.
 TECNICA NUMERO MAS PROBABLE NMP
Prueba presuntiva
 TECNICA NUMERO MAS PROBABLE NMP
Prueba confirmativa para
Prueba confirmativa para
Coliformes Totales.
Coliformes fecales

 De cada uno de los tubos con caldo lauril

sulfato que han producido gas se transfiere
un asda en tubos de caldo de E.Coli con
tubos Durham invertidos atemperados
previamente a 44.5 °C por 30min
 Los tubos sembrados se incubaron en baño
maria a 44.5 °C por 24 horas.
 La presencia de gas indica una prueba
positiva para coliformes fecales.
 Los datos obtenidos se expresaron en
número más probable (NMP) para tres
“ TECNICA DE
RECUENTO DE PLACA
”
 Recuento de la bacteria
Escherichia coli en (ufc/
mL)
 MEDIOS DE CULTIVO

Caldo
Preparación
E.Coli EC Composición  

Triptona 20 g
Disolver completamente
la sustancia, sin hacer Lactosa 5g
hervir ensarar a
volumen con agua, Mezcla de sales biliares 1.5g
ajustar el pH a 6.9,
distribuir a 10 ml en Hidrogenofofato dipotasico 4g
tubos de cultivo que
Dihidrogenofosfato potásico 1.5 g
contenga tubos Durham
invertidos y esterilizar en Cloruro de sodio 5g
autoclave durante 15
min a 121 °C Agua destilada 100000ml
 MEDIOS DE CULTIVO
Agar Mac Conkey
Composición  
Preparación
Proteosa peptona o polipepton 3g
Suspender los componentes y calentar
con suave agitación hasta disolver, Peptona 17 g
esterilizar en autoclave a 121 °C durante
15 minutos. Enfriar entre 45-50°C y Lactosa 10 g
fraccioner 20 ml en placas prtri estriles
Sales biliares 1.5 g
De cada tubo que contiene Caldo E.Coli
ECcon formación de gas, se transfirió una Cloruro de sodio 5g
porción con el asa de inoculación se
y
sembró sobre la superficie del Agar Mac Rojo neutro 0.03 g
Conkey en cajas petris. Este medio de
cultivo es esencial para el crecimiento de Cristal violeta 0.001 g
Escherichia coli
la bacteria .
Agar 13.5 g
Agua destilada 1000 ml
 Recuento de la bacteria
Escherichia coli
Se incubo las cajas a 37° C por un periodo
de 18 a 24 h.
Posteriormente se realizo el recuento de la
bacteriaEscherichia coli.
Se procedió a identificar mediante Tinción
Gram.
Los datos obtenidos se expresaron con un
solo número entero y un decimal por diez
elevado a la potencia correspondiente.
 Presencia de la bacteria
Estaphylococcus aureus
en ufc/mL
 MEDIOS DE CULTIVO
Agar base sangre
Preparación
Disolver los componnts en agua, calentar agitando suavemnet
hasta llevar a ebullición durante 1 minuto. Llenar 173 de tubos
de ensayo de 16x150 mm, tapar y esterilizar a 121 °C durante Composición  
15 minutos. Entes de solidificar inclinar los tubos para obtener
un pico de flauta de 4-5 cm y n fodo de 2-3 mm Triptosa 10 g
De acuerdo al Norma Boliviana NB 32004, el método consiste
en extender un volumen determinado de las diluciones Extracro de carne 3g
correspondientes de la leche homogeneizado, sobre la
superficie de Agar Base Sangre, en este medio de cultivo se
Cloruro de sodio 5g
forman colonias negras rodeadas de zonas claras
Agar 15 g
características de Staphylococcus aureus este método utiliza
la prueba de coagulasa y catalasa.
Agua destilada 1000
ml
 Recuento en placa
 Colocar en la autoclave todos los materiales de vidrio y medios de cultivo para
esterilizar.
 Se peso el medio de cultivo Agar Base Sangre en una balanza de precisión y luego
se vertió en un vaso Erlenmeyer, luego se añadió agua destilada hasta que se
disuelva.
 Se preparó las diluciones para cada muestra 1 en 10; 1 en 100; 1 en 1000.
 El método de siembra que se utilizo es por estría. El cual consiste en sembrar
sobre el Agar.
 Se incubo a 37 ºC durante 24 h.
 Observar después de 48 h la formación de colonias.
 Posteriormente se realizo el recuento de colonias sospechosas de
Estaphylococcus aureus.
 Se realizo la identificación mediante Tinción Gram donde se observaron al
microscopio cocos Gram positivos y en racimos
 Prueba de Coagulasa y
Catalasa para la bacteria
Estaphylococcus aureus
 Características de la bacteria
Estaphylococcus aureus
Gram positivo en racimo.
Aproximadamente 1um de diámetro.
Inmóviles.
No forman esporas. 40
La mayoría son anaerobios facultativos
Crece bien en Agar Sangre a 37°C.
Presenta un pigmento de color amarillo.
Catalasa positivo.
Coagulasa positivo.
Colonias medianas, cremosas y brillantes
 Prueba de Coagulasa y Catalasa para la
bacteriaEstaphylococcus aureus
Prueba de Catalasa Prueba de Coagulasa
Consiste en realizar una Para la detección deStaphylococcus
catalasa, que dará positivo, aureus se requiere realizar la prueba de
por la presencia de esta la coagulasa que nos permite diferenciar
enzima enStaphylococcus
S.aureus de otras especies del género
al
Staphylococcus. La coagulasa es una
spp , que desdobla el enzima que estimula la conversión del
peróxido de hidrógeno en fibrinógeno en fibrina, por lo que
agua y oxígeno comprueba la facultad de un
(desprendimiento de microorganismo de coagular el plasma
burbujas) y esta prueba nos por acción de esta enzima. Si es
ayuda a diferenciar de los coagulasa positivo, se produce una
reptococcus spp . turbidez alrededor de la colonia, debida a
la coagulación del plasma.