Universidad Autónoma del Estado de Morelos

Facultad de Ciencias Biológicas

Taller básico de principios y manejo de instrumentos de laboratorio
Proyecto 9 y 10 “Microscópico”
Montañez Gonzalez Dalia

1. Explica los términos refracción y difracción de la luz.

Refracción

La refracción de la luz es el cambio de dirección de los rayos de luz que

ocurre tras pasar estos de un medio a otro en el que la luz se propaga con
distinta velocidad.

Se rige por dos principios o leyes de la refracción:

 El rayo incidente, el refractado y la normal a la superficie en el punto

de incidencia están en el mismo plano

 La ley de Snell de la refracción, que marca la relación entre el

ángulo de incidencia iˆ, el de refracción rˆ, y los índices de refracción
absolutos de la luz en los medios 1 y 2, n1 y n2, según:

sin(iˆ) / sin(rˆ) = n2n1

Difracción

Difracción de Fraunhofer

En general la difracción ocurre cuando las ondas pasan a través de

pequeñas aberturas, alrededor de obstáculos o por bordes afilados.

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Cuando un objeto opaco se encuentra entre la fuente puntual de luz y una
pantalla como se muestra en la imagen superior, la frontera entre las
regiones sombreadas e iluminada sobre la pantalla no está definida.

Una inspección cuidadosa de la frontera muestra que una pequeña cantidad

de luz se desvía hacia la región sombreada.

La región fuera de la sombra contiene bandas alteradas brillantes y oscuras,

donde la intensidad de la primera banda es más brillante que la región de
iluminación uniforme.

Difracción de Fresnel

La Difracción de Fresnel o también difracción del campo cercano es un

patrón de difracción de una onda electromagnética obtenida muy cerca del
objeto causante de la difracción (a menudo una fuente o apertura).

Más precisamente, se puede definir como el fenómeno de difracción

causado cuando el número de Fresnel es grande y por lo tanto no puede ser
usada la aproximación Fraunhofer (difracción de rayos paralelos).

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2. Explica cómo se forma la imagen a través de la lente.

Una lente es un objeto transparente, principalmente hechos de vidrio, que tiene la

capacidad de refractar la luz. Cuando hablamos de refractar la luz, estamos diciendo
que la lente tiene la capacidad de desviar los rayos luminosos que llegan a él.
Estas lentes son las usadas por ejemplo en lentes para mejorar la visión, o un
microscopio, entre otras cosas.

Clases de lentes

Existen dos tipos de lentes que se diferencian por su forma y por como reflejan la
luz.
 Lentes convergentes (f´>0): este tipo de lentes se caracteriza porque la
parte central tiene mayor espesor que los bordes.

La imagen de las lentes convexas se encuentra del otro lado del objeto.
Además sus rayos convergen en un punto.

 Lentes divergentes (f´<0): se caracterizan porque la parte central es más

angosta que la parte de los bordes. Es decir, aumenta su espesor cuando
nos acercamos a los extremos.

En este tipo de lentes la luz se desvía de forma tal que la imagen se

produce del mismo lado que el objeto al que se lo está viendo, pero en un
tamaño mucho menor. Los rayos cuando se refractan en estas lentes
divergen.

Elementos de una lente

 Centros de curvatura C, C'.- Son los centros geométricos de las superficies

curvas que limitan el medio transparente.

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 Eje principal.- Es la línea imaginaria que une los centros de curvatura.
 Centro óptico O.- Es el punto de intersección de la lente con el eje principal.
 Foco F y F'.- Es el punto del eje principal por dónde pasan los rayos
refractados en la lente, que provienen de rayos paralelos al eje principal.
 Distancia focal f y f'.- Es la distancia entre el foco y el centro óptico.

Imágenes producidas por las lentes.

La construcción de imágenes en las lentes, se realizan aplicando las tres

propiedades siguientes:
 Todo rayo paralelo al eje principal, se refracta pasando por el foco
imagen.
 Todo rayo que pasa por el centro óptico, no se desvía.
 Todo rayo que pasa por el foco objeto, se refracta paralelo al eje
principal.

Siendo:
s = Distancia del objeto a la lente. Por convenio le tomamos siempre
<0
s' = Distancia de la imagen a la lente
f' = Distancia focal imagen

 Si la lente es convergente, F’ es un foco real y f’ > 0

 Si la lente es divergente, F’ es virtual y f’ < 0

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3. Explica qué es un microscopio óptico o compuesto.

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a al ojo

humano. Esto se logra mediante un sistema óptico compuesto por lentes, que forman y
amplifican la imagen del objeto que se está observando. Dicho término surge en el siglo XVII
y deriva de las palabras griegas “mikrós” (pequeño) y “skopéoo” (observar).

El microscopio compuesto consta de dos partes, una parte mecánica que tiene la finalidad
de sostener la preparación a examinar y soportar todo el sistema óptico del microscopio. Y
una parte óptica que considera los dos sistemas de lentes convergentes centrados sobre un
eje óptico común, denominado ocular y objetivo. También esta parte integra un sistema de
iluminación que facilita la observación microscópica.

Componentes de un microscopio compuesto

Ocular:

Permite observar la imagen del objeto formada por el objetivo, actuando como una
lupa. Está compuesta por dos lentes: la inferior o colectora, y la superior, o lente
ocular.

Objetivo

Se insertan en el revólver del microscopio y se distinguen dos tipos:

Objetivos en seco.- En éstos, el aire se interpone entre la lente y el
preparado. Los objetivos más comúnmente utilizados son de 4, 10, y 40 x.

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 Objetivos de inmersión.- Se distinguen de los anteriores porque entre la
lente y el preparado se debe interponer un medio transparente con un índice
de refracción (n) superior al del aire (n = 1), y semejante al del vidrio (n =
1,5).

El medio utilizado es un aceite de inmersión, como por ejemplo el aceite de

cedro. Son aptos para la observación de bacterias, finas estructuras, etc.

Platina

Es la estructura que sostiene el preparado que se desea observar.

Tubo

En él está instalado el sistema óptico. Actualmente son corrientes los aparatos

binoculares (dos oculares) que facilitan la visión con los dos ojos y los revólveres
portaobjetivos, con los cuales se pueden cambiar los objetivos instantáneamente,
sin desenfocar la preparación.

El enfoque se hace mediante unos tornillos llamados macrométricos y

micrométricos, que permiten desplazamientos verticales groseros y finos,
respectivamente.

Sistema de iluminación

Situado debajo de la platina, está formado por:

Lámpara ó espejo de iluminación.

Condensador.- Posee la función de concentrar sobre el preparado los rayos

luminosos procedentes de la fuente de luz.

Diafragma.- Situado debajo del condensador, sirve para graduar la cantidad

de luz que llega al objeto.

Filtros de luz.- Son placas de vidrios, coloreadas, que dejan pasar las
radiaciones de longitud de onda deseadas, absorbiendo las restantes.

Pie

Soporta el resto del microscopio, está constituido por una estructura metálica
pesada.

4. Explica qué es el poder de resolución de un microscopio.

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 El poder de resolución es la distancia mínima a la que se pueden discriminar dos puntos.
Este límite viene determinado por la longitud de onda de la fuente de iluminación, en este
caso la luz visible.

5. Escribe los tres sistemas que conforman el microscopio.

El microscopio compuesto u óptico está integrado por tres sistemas, los cuales son:

a) Sistema Mecánico
b) Sistema Óptico
c) Sistema de Iluminación

a) Sistema Mecánico
El sistema mecánico es el esqueleto o armazón del microscopio, el cual proporciona
soporte y estabilidad al equipo.

Está integrado por:

 El tubo de microscopio.- El cual es de forma cilíndrica, en su parte superior
sostiene a la lente o lentes oculares y en la parte inferior se encuentra el
sistema de lentes objetivos.

 Revólver.- Es la parte circular en la que se encuentran atornilladas las

diferentes lentes objetivos, al girar el revolver cambian las lentes objetivos
sin que se desenfoque la preparación.

 Platina.- Pieza metálica cuadrada o circular, con un orificio central sobre el

que se colocan las preparaciones a observar y por el que atraviesa el rayo
luminoso. Puede ser fija o estar provista de tornillos de desplazamiento que
nos permiten centrar la preparación o buscar diferentes campos de
observación.

 Base o Pie.- Es la base sobre la que descansa el aparato y le da

estabilidad.

 Brazo o columna: Esla parte que sostiene el tubo y su mecanismo de

desplazamiento vertical formado por los tornillos macrométrico y
micrométrico.

b) Sistema Óptico

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 Formado por dos sistemas de lentes: Oculares y Objetivos.

Los lentes oculares van montados en la parte superior del tubo del microscopio. Su
nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador y sus poderes de
aumento van desde 4x hasta 20x.

Los lentes objetivos se encuentran en el revólver y quedan cerca del objeto a

observar. Existen dos tipos de objetivos: Objetivos secos y de Inmersión

Los objetivos secos se utilizan sin colocar alguna sustancia entre ellos y la
preparación, únicamente el aire. Proporcionan poco aumento que va desde
10x , 20x,40x hasta incluso 60x; dicho aumento se encuentra grabado en el
exterior de cada objetivo, en este caso encontramos 10x o también llamado
seco débil y 40x o seco fuerte.

Los objetivos de inmersión se utilizan colocando una sustancia entre ellos y

la preparación, por lo general, se emplea el aceite de cedro. Proporcionan
un mayor aumento y definición, de 100x; los podemos identificar ya que son
los más largos y traen grabada en el exterior la palabra oil (aceite).

c) Sistema de Iluminación

El sistema de Iluminación está formado por la fuente de iluminación, Espejo,

Condensador, y Diafragma.

La fuente de iluminación consta generalmente de una lámpara

incandescente de tungsteno.

El espejo es necesario si la fuente de iluminación no está dentro del

microscopio tiene una cara plana y una es cóncava.

El condensador de luz está formado por un sistema de lentes cuya función

es captar los rayos luminosos y dirigirlos hacia la preparación que se va a
enfocar.

El Diafragma es una abertura que controla la cantidad de luz que debe

pasar por el condensador, que se regula por una palanca lateral.

6. Explica cuál es la función del aceite para inmersión.

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 El aceite de inmersión es un líquido viscoso y transparente que tiene un alto índice
refractivo. Por este motivo es muy utilizado en las observaciones microscópicas, ya
que brinda la propiedad de concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo
de 100X del microscopio, aumentando su poder de resolución.
Esto ocurre debido a que se forma una película viscosa entre el objetivo y el frotis,
impidiendo que los rayos de luz se dispersen al llegar al aire, logrando concentrar
los haces de luz hacia la muestra.

La función principal del aceite de inmersión es brindar imágenes más claras, nítidas
y definidas, permitiendo la observación de detalles que con otros objetivos no sería
posible.

7. Escribe el procedimiento para enfocar una muestra en el microscopio compuesto u óptico y

menciona las partes que hace uso.

a) Quitar la funda protectora del microscopio.

b) Enchufar/encender el microscopio.
c) Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoque
correcto. Este paso en muy importante y se debe realizar siempre, ya que permitirá
la observación de una panorámica del preparado y la ubicación de áreas de interés
para su análisis posterior.
d) Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente.
e) Colocar el preparado sobre la platina, con el cubre-objetos hacia arriba y
sujetándola con las pinzas/guías.
f) Enfoque el preparado mirando a través del ocular y lentamente mueva el tornillo
macrométrico.
g) Recorra todo el preparado y haga sus observaciones. Elija el sitio donde debe
seguir observando a mayor aumento.
h) Cambie al objetivo de mediano aumento (20 X) y para lograr el enfoque siga
moviendo lentamente el tornillo macrométrico. Al cambiar de objetivo, la imagen
debe estar ligeramente enfocada gracias a que la mayoría de microscopios son
para-focales, es decir, una vez logrado el primer enfoque, al pasar al objetivo de
aumento inmediato superior la imagen queda en un foco aproximado y solo se debe
realizar un ajuste.
i) Realice la observación y haga sus anotaciones. Determine cuál es la estructura que
va a observar a mayor aumento y colóquela en el centro del campo.
j) Cambie al objetivo de mayor aumento. Si realizó el enfoque de manera correcta con
el objetivo anterior, al colocar el objetivo de mayor aumento la imagen solo se debe
enfocar girando única y lentamente el tornillo micrométrico. Nunca se debe utilizar el
tornillo macrométrico con los objetivos de mayor aumento, pues al estar éste muy
cerca del preparado, se corre el riesgo de partirlo.

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 k) Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observación
moviendo constantemente el tornillo micrométrico para variar los planos de enfoque.
De igual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y
mejorar el contraste. Haga sus observaciones.
l) Una vez finalizada la observación, aleje la platina y coloque nuevamente el objetivo
de menor aumento.
m) Retire la muestra.
n) Limpie la lente objetivo si usó medio de inmersión, apague la/s lámpara/s.
o) Cubra el microscopio con la funda protectora.

8. Si conocemos el aumento del ocular y el aumento del objetivo, ¿cómo se calcula el aumento
total del microscopio?

El aumento total de un microscopio se calcula multiplicando el aumento del objetivo

por el aumento del ocular.

Debido a la naturaleza de la luz y de las lentes, el máximo aumento útil que se

puede conseguir con un microscopio óptico está alrededor de 1500x.

Las combinaciones de objetivo y ocular que generen en aumento superior a 1500x

resultarán en un aumento vacío, es decir, sin ganancia de resolución y, por lo tanto,
sin añadir detalles a la imagen.

Para un uso óptimo, el aumento total (objetivo + ocular) debería estar comprendido
entre 500 y 1000 veces el valor de la apertura numérica del objetivo.

La apertura numérica de un objetivo tiene una relación proporcional con su aumento.

Los microscopios electrónicos iluminan las muestras con un haz de electrones en

lugar de con luz. De este modo, se pueden conseguir aumentos de hasta
10000000x.

9. ¿Qué es el ajuste de dioptrías y cómo se realiza?

La precisión del ajuste dióptrico se puede mejorar utilizando el objetivo más potente
posible.

Mientras mira por el ocular derecho, gire el anillo de ajuste dióptrico de la

funda del ocular derecho hasta que la zona periférica del campo de visión
resulte claramente visible.

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Las dioptrías también se pueden ajustar utilizando los discos micrométricos
del ocular.

Mientras mira por el ocular derecho, gire el mando de enfoque para enfocar
la muestra.

Mire por el ocular izquierdo y gire solamente el anillo de ajuste dióptrico del
ocular izquierdo para enfocar la muestra.

Cuando gire el anillo de ajuste dióptrico de un ocular, sujete la parte inferior

del ocular con la otra mano.

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