anti D (anti Rh0)

monoclonal IgG+IgM
Ensayo en porta & tubo
Ensayo cualitativo para la determinación del antigeno D en
sangre humana. METODO EN TUBO

Conservar a 2...8ºC 1. Preparar una suspensión de hematíes problema lavados

IVD al 3-5% en ClNa 9g/L.
2. Depositar 1 gota del reactivo correspondiente (aprox. 50
PRINCIPIO DEL METODO µL) en un tubo de hemólisis.
La presencia del antígeno D se determina enfrentando los 3. Añadir 1 gota (aprox. 50 µL) de suspensión de hematíes.
hematíes problema al anticuerpo de especificidad D conocida. 4. Mezclar y centrifugar a 3400 r.p.m. o 1000 g, 30
La presencia o no de aglutinación de los hematíes ensayados es segundos.
indicativa de la presencia o ausencia del correspondiente
antígeno en los mismos. Lectura e interpretación
Lectura: Golpear suavemente el tubo para desprender el
REACTIVOS sedimento y examinar macroscópicamente la presencia o
Hibridoma humano IgM (clon RS-1126) ausencia de aglutinación.
Hibridoma humano IgG (clon ESD-1)
Anti D IgG + IgM
Tampón estabilizante Reacción negativa: La resuspensión de los hematíes es
Ázida sódica 0,95 g/L homogénea.
Reacción positiva: los hematíes positivos permanecen
PRECAUCIONES aglutinados una vez resuspendidos.
Aunque los reactivos no son de origen humano y, por lo tanto,
u
exentos de virus HIV y Hepatitis B, se aconseja manipular los En caso de resultado negativo efectuar la prueba D .
reactivos y las muestras con las precauciones debidas.
Prueba Du
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Proceder como en los pasos 1, 2 y 3 Metodo en tubo.
1. Todo estos reactivos son estables hasta la fecha de 1. Mezclar e incubar 15 minutos a 37ºC.
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se 2. Lavar los hematíes con abundante ClNa 9g/L.
mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC y se evita la 3. Añadir 1 gota de Suero Antiglobulina Humana,
contaminación durante su uso. resuspender los hematíes por completo.
4. Mezclar y centrifugar a 3400 r.p.m. o 1000 g, 30
2. Estos reactivos son claros y transparentes, la presencia de segundos.
turbidez puede indicar contaminación microbiana.
No usar si aparece turbio. Lectura e interpretación
Reacción negativa: La resuspensión de los hematíes es
MATERIAL ADICIONAL homogénea.
Prueba en porta: Portas, pipeta automática y palillos. Reacción positiva: los hematíes positivos permanecen
Prueba en tubo: Tubos hemólisis, pipeta automática y centrifuga aglutinados una vez resuspendidos.
Sero-fuge o similar. Para confirmar la negatividad, añadir 1 gota de hematíes
sensibilizados con IgG, si el resultado es negativo la prueba
MUESTRAS no será válida.
Si la prueba se efectúa de inmediato, puede utilizarse sangre
total anticoagulada o sangre coagulada en su propio suero. CONTROL DE CALIDAD
Muestras recogidas en EDTA o Heparina deberán ensayarse Se recomienda comprobar la operatividad de los reactivos
antes de 48 horas. incluyendo, cada vez que se utilicen, controles positivos
Muestras recogidas en ACD, CPD, CPDA-1 mantienen su (hematíes R1r) y negativos (hematíes rr) en paralelo con las
reactividad durante 35 días. diversas técnicas.
Guardar las muestras a 2-8ºC.
VALORES DE REFERENCIA
PROCEDIMIENTO El antigeno Rho (D) esta presente en aproximadamente el
85% de la población Caucasiana
METODO EN PLACA
BIBLIOGRAFIA
1. Mediante una pipeta depositar 1 gota (aprox. 50 µL) de Widmann FK. Technical Manual, 9th edition. Washington D.C.
American Assoc. of Blood Banks. 1985
hematíes problema, con un hematocrito aprox. 35-40%,
Garraty G, Postoway N. et al. Spotaneous agglutination of red cells
sobre una placa. with a positive direct antiglobulin test in various media. Transfusion.
2. Añadir 1 gota (aprox. 50 µL) del reactivo. 24:214-217. 1984.
3. Mezclar bien la sangre con el reactivo formando un circulo
de unos 2 cm de diámetro. PRESENTACION
4. Mover la placa lentamente con movimientos basculantes
durante 2 minutos.

Lectura e interpretación Ref: 1700021 Anti-D 10 mL

Lectura: Observar la presencia o ausencia de aglutinación.
Reacción negativa: No se observa aglutinación a los 2 min.
Reacción positiva: Los hematíes aglutinan en segundos.
En casos dudosos se recomienda esperar 2 minutos.

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