ICB 420 – 1

Biocatálisis y Reactores Enzimáticos

Ayudantía 7: Parámetros de inmovilización

1. Una β-galactosidasa se inmoviliza en un soporte de agarosa heterofuncional. El rendimiento

de inmovilización en términos de proteína (YP) es del 95% y en términos de actividad
expresada (YE) es del 85%. El procedimiento de inmovilización consiste en poner en contacto
10g de soporte (densidad 0,7 g/mL) con 9 mL de preparación de β-galactosidasa soluble y
93 mL de tampón bicarbonato bajo agitación durante 3 horas. Al final del proceso, la
actividad expresada en el catalizador inmovilizado es 286 UI/g, la actividad restante en
solución es 2,6 UI/mL y la proteína restante en solución es 0,18 mg/mL.

Determine la actividad perdida durante la inmovilización, la carga de proteínas en el soporte

(masa de proteína inmovilizada por unidad de masa de soporte) y la actividad especifica de
la preparación de β-galactosidasa soluble en UI/mg.

2. La lipasa pancreática (triacilglicerol acilhidrolasa, EC 3.1.1.3) se inmoviliza en glioxil agarosa

y octadecil Sepabeads al poner en contacto 50 mL de una preparación liquida de lipasa con
20 g/L de proteína y una actividad especifica de 10 UI/mgproteína con 10g de cada soporte.
Después de la inmovilización en glioxil agarosa, se obtiene un catalizador sólido (GAL) con
una actividad específica de 350 UI/gsoporte y un sobrenadante con 2 mgproteína/mL y 30 UI/mL.
Después de la inmovilización en Octadecil Sepabeads, se obtiene un catalizador sólido (SBL)
con una actividad específica de 1200 UI/gsoporte, mientras que no se detecta actividad de
proteína o de enzima en el sobrenadante.

Determine el rendimiento de inmovilización de proteínas (YP) y el rendimiento de la

actividad enzimática (fracción de la actividad contactada expresada en el catalizador
después de la inmovilización) (YE), discutiendo el significado de los resultados obtenidos. Se
asume que el volumen ocupado por los sólidos es despreciable.

3. Penicilina G acilasa (PGA) de E.coli recombinante es inmovilizada en glioxil agarosa 6BCL

contactando 4,9 g del soporte activado (densidad 0,7 g/mL) con 3 mL de un extracto de PGA
diluido previamente con 20 mL de tampón bicarbonato de 100mM y pH 10. La actividad
enzimática y concentración de proteínas obtenidas durante la inmovilización se pueden
observar en la tabla a continuación:

Actividad (UI/mL) Proteínas en el

sobrenadante
Time (h) Control Sobrenadante Suspensión (mg/mL)
0 50 50 50 5
1 50 40 50 3,5
2 32 49 2,5
3 50 25 48 2,1
4 10 47 1,8
5 50 5 46 1,6
6 0 46 1,5
7 50 0 46 1,5

“Control” se refiere a la evolución de la actividad de la enzima libre en solución,

“sobrenadante” se refiere a la actividad en la fase liquida posterior a la remoción del
catalizador y “suspensión” se refiere a la actividad en la fase líquida con el catalizador
presente.

Determine el rendimiento de inmovilización de proteínas (YP), rendimiento de actividad

enzimática (YE), la actividad específica del catalizador (actividad enzimática expresada por
unidad de masa), la capacidad de carga del soporte (proteína inmovilizada por unidad de
masa de soporte), la actividad específica del extracto de PGA y el tiempo de inmovilización.