PROBLEMAS DE RECOMBINACION GENETICA

GENETICA MODERNA Francisco Ayala

CAPITULO 7

1. En E. coli las mutaciones thr y leu son mutaciones auxótrofas que requieren
treonina y leucina para su crecimiento. La mutación ara 3 hace a la célula incapaz
de crecer con arabinosa como única fuente de carbono. La siguiente tabla da la
frecuencia de co-trasnsducción de estos genes por el fago P1. Qué medio selectivo
se utiliza en cada caso y cuál es el orden de los genes?

% de colonias seleccionadas que

contienen el marcador no seleccionado

Genotipo marcador leu+ thr+ ara+

Receptor seleccionado

thr+ 4,1 - 6,7

leu+ - 1,9 55,4

Ara3 leu thr

thr+leu+ - - 80,0

ara+ 72,6 4,3 -

2. Las mutaciones ara1 y ara2 están muy estrechamente ligadas a ara3 y también
incapacitan a las células de E. coli para usar la arabinosa como única fuente de
carbono. Los cruzamientos de transducción recíproca realizados para ordenar estas
mutaciones dan los resultados de la siguiente tabla. En todos los casos, los
recombinantes ara+ son seleccionados, y la fracción de estos que lleva los
marcadores no seleccionados leu+ o thr+ se cuenta. Cuál es el orden de estos
marcadores?

% de colonias seleccionadas que

contienen el marcador no seleccionado

Receptor Dador leu+ thr+

thr ara1 leu ara2 64,4 1,2

thr ara2 leu ara1 17,4 7,4

thr ara1 leu ara3 26,1 6,4

thr ara3 leu ara1 52,4 2,4

thr ara2 leu ara3 14,3 9,5

thr ara3 leu ara2 65,8 2,8

3. Cuando se utilizan células ara3 como receptoras y P1 se cultiva sobre el tipo

salvaje, ara1 y ara2 como dadores, y la selección se realiza para los transductores
Ara+, numerosas colonias diminutas, invisibles a simple vista aparecen en las placas
de selecciñon ademas de las colonias de tamaño normal Ara+. Elabore la hipótesis
para explicar la presencia de estas colonias diminutas.

4. Algunas cepas de Salmonella paratyphi son móviles porque poseen flagelos; otras
carecen de flagelo y no son móviles. El fago P22 de transducción generalizada de
Salmonella se cultiva en una cepa móvil y se emplea para infectar una cepa no
móvil. Cuando las células no móviles se depositan en la superficie de una columna
de agar nutritivo blando en un tubo y se incuban, se encuentran trayectorias o líneas
de pequeñas colonias de bacterias que pasan a través del agar blando. Cultivos
posteriores de estas colonias revelan que todas las células de las colonias no son
móviles. Explicar.
5. Diferentes cepas Hfr muestran orígenes y direcciones de transferencia del
cromosoma bacteriano diferentes en el apareamiento con las cepas F-. El orden de
transferencia de los genes cercanos al origen (O) de varias cepas diferentes Hfr se
da a continuación. Utilice los datos para construir un mapa físico del cromosoma
bacteriano.

Cepa Hfr Orden de transferencia de los genes

H O – thr – leu – azi – ton – pro – lac - ade

4 O – thi – met – ile – mtl - xyl – mal – str

6 O – ile – met – thi – thr – leu – azi – ton

AB311 O – his – trp – gal – ade – lac – pro – ton

AB313 O – mtl – xyl – mal – str – his

6. Se realiza un experimento de apareamiento interrumpido para localizar al gen arg7

en el mapa de E. coli empleando una cepa protótrofa StrS Hfr 4 (véase el problema
- - - -
5) apareada con F , Met , Mtl StrR que es arg7 . Tras la interrupción de
apareamiento, porciones del cultivo se dispersan sobre placas que contienen glucosa
como fuente de carbono, estreptomicina y arginina o metionina. A partir de la
siguiente tabla determine la localización del gen arg7+.

Número de recombinantes
Tiempo de interrupción
del apareamiento (min) Arg+ StrR Met+ StrR

0 0 0

6 0 0

8 3 0

10 19 4

11,5 56 28

13 126 62

14,5 217 183

7. En algunos cruzamientos en los que intervienen cepas lisogénicas, fagos como  se
pueden tratar como si fueran marcadores genéticos de bacterias.
La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos cuando una cepa Hfr H, Str S, no
lisogénica [(ly)-] se cruza con una cepa F-, Thr- Leu- Gal- StrR lisogénica para uno
de una serie de profagos diferentes, p.ej., F- Thr- Leu- StrR (). Se seleccionan los
recombinantes Thr+ Leu+ StrR o los recombinantes Gal+ StrR, y la frecuencia de los
marcadores [(ly)-] Hfr se determina por la sensibilidad a la infección por el fago en
cuestión, por ej., la pérdida del profago del recombinante es tratada como un
marcador no seleccionado. A partir de los datos ordene los profagos en el mapa
físico de E. coli uno con respecto al otro y a Thr+ Leu+ y Gal+.

Fracción de recombinantes que no son

lisogénicos

Profago Thr+ Leu+ StrR Gal+ StrR

 0.16 0.82
21 0.01 0.10
82 0.21 0.89
434 0.11 0.68
424 < 0.01 0.03
381 0.025 0.15

8.- En un cruzamiento Hfr x F- , leu+ entra como primer marcador, pero el orden de los
otros marcadores es desconocido. Si la cepa Hfr es silvestre y la F- auxotrófica para
cada marcador, cuál es el orden de los marcadores cuando los recombinantes leu+
son :

27% ile+
13% mal+
82% treo+
1% trp+

Señale el medio selectivo para cada recombinante.

 9. La bacteria E.coli está infectada con una mezcla de fagos T4 y sus genes tienen
que ser mapeados. Los fagos parentales tienen el genotipo r+ m+ tu+ y r m tu.
Muestras cultivadas de la progenie de los fagos, dan los siguientes resultados.

+++ 1243
+ + tu 322
rm+ 284
r m tu 1158
+m+ 175
+ m tu 54
r+ + 58
r + tu 160

TOTAL 3454

Determine la secuencia de estos tres genes y la distancia entre ellos.

1. En un experimento de transformación, x+y+z+ es usado como donador y

x-y-z- como receptora. 250 transformantes x+ son seleccionados, y luego
plaqueados para determinar si x+ y/o z+ están presentes. Los genotipos
de los transformantes obtenidos se observan mas abajo. Qué puede
concluir acerca la posición de los genes??

Genotipo Número de colonias

x+y-z- 53
x+y-z+ 173
x+y+z- 7
x+y+z+ 17
250

Frecuencia de recombinación entre x+ y z+

2. En una experimento de transformación, el donante es ara +, nic+ gal+ y
la receptora es ara- nic- gal-. Los transformantes ara so seleccionados y
analizados. 40% fueron ara+ gal+ y 5% fueron ara+ nic+. En que orden
se encuentran los genes dispuestos.

Dadora Ara+nic+gal+
Receptora Ara- nic- gal-