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Práctica No.4 Control del crecimiento microbiológico: Esterilización por calor húmedo,
efecto de agentes químicos sobre el crecimiento bacteriano y preparación de medios de
cultivo.
Objetivos:
Introducción
En el proceso de esterilización se matan las bacterias, incluso aquellas que tienen esporas. En
cambio en la desinfección no mata las bacterias con esporas, esta consiste en eliminar
tópicamente los microorganismos por ejemplo: en la piel, en heridas, fómites e incluso un
quirófano o área de preparación de medios de cultivo de un laboratorio de microbiología.
La esterilización con autoclave (calor húmedo), se lleva a cabo con humedad y calor eliminando
todo ser vegetativo. Se usa en todos los hospitales y laboratorios de microbiología. El aparato es
parecido a una olla de presión. Las condiciones para la esterilización deben ser a 15 libras (6.80kg)
de presión a 121°C por un periodo de 15 a 20 minutos, para procesos de inactivación el tiempo se
prolonga de 30 a 40 minutos, y con esas condiciones de temperatura y presión se elimina todo
microbio existente. La autoclave tiene una válvula de seguridad para que la presión no se exceda y
llegue a explotar, ese dispositivo nunca debe abrirse antes de que el manómetro se encuentre en
ceros, podría causar una explosión.
Fig.1.Esterilización y desinfección
en microbiología.
Laboratorio de Microbiología I
Docente: B.C. Pablo Argelio Sánchez González
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Fig.2.Partes de un autoclave
Fig.3.Funcionamiento interno de
un autoclave.
Fig.4.Tipos de autoclave.
Laboratorio de Microbiología I
Docente: B.C. Pablo Argelio Sánchez González
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La preparación de los medios de cultivo se hace de acuerdo a las condiciones de cada laboratorio
de microbiología. Los medios de cultivo para preparar y envasar en el laboratorio pueden venir
deshidratados en polvo, en gránulos o en pastillas para disolverlos en agua destilada. Para la
preparación se necesita un autoclave, balanza, agua destilada, espátula, calculadora, probeta,
cajas Petri, tubos de vidrio y un área sin corrientes de aire para poder envasarlos.
Para pesar los medios se deben seguir las indicaciones del fabricante, y se utiliza una regla de 3 de
acuerdo al volumen y la cantidad de cajas Petri que se van a utilizar.
Una vez pesado la cantidad de medio se agrega primero el agar pesado y después el agua, esto con
la finalidad de crear grumos y hacer más lento el proceso de disolución.
Posteriormente se deben llevar al autoclave, una vez finalizada la esterilización, se deben enfriar a
45°C para el vaciado (plaqueado) de los medios en las cajas Petri.
Se realiza un control de calidad dejándolos incubar de 18 horas, por cada caja que se contamine de
cada lote, se debe preparar nuevamente.
Fig.5.Diagrama
de flujo para la preparación de medios en tubo y en caja petri.
Laboratorio de Microbiología I
Docente: B.C. Pablo Argelio Sánchez González
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Material y reactivos:
Agar mac conkey, Agar Mueller-Hinton, Biggy.
Matraces erlenmeyer 500 ml, probetas gradudadas de 100ml, espátulas de metal, vasos de
precipitado de 600ml, cajas petri de vidrio.
Paquetes de cajas petri desechables.
Papel aluminio, pipetas pasteur desechables.
Vasos de precipitado de 100ml.
Circulos de papel filtro, hisopos estériles.
Material por equipo: el indicado desde la sesión de encuadre.
Por grupo: Llevar un frasco pequeño de alcohol al 70°, agua oxigenada, merthiolate con tintura
(rojo), 1 frasco pequeño de solución microdyn (desinfectante).
Reactivos: cloro, violeta de genciana, fenol al 5%, benzal, microdacyn solución en spray (yo les
daré estos reactivos).
Pinzas de metal de su estuche de disección sin dientes
Autoclave
Procedimiento:
Explicación teorica por parte del docente acerca del uso y descripción del autoclave.
Preparación de los medios de cultivo: pesado, hidratación, esterilización y envasado de los medios.
Fig.
6.Diagrama para la preparación de los medios de cultivo en polvo.
Laboratorio de Microbiología I
Docente: B.C. Pablo Argelio Sánchez González
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Fig.8.Proc
edimiento del sembrado masivo y colocación de discos de papel filtro.
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Cuestionario:
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