Efectos del sombreado mutuo en la regulación de la fotosíntesis en el sorgo

cultivado en el campo
Tao Li a, b, Li-Na Liu a, Chuang-Dao Jiang a, ⇑, Yu-Jun Liu b, Lei Shi a

Resumen

En el campo, la siembra cercana inevitablemente causa sombreado mutuo y depresión de la fotosíntesis de la hoja. Para
aclarar los mecanismos reguladores de la fotosíntesis en estas condiciones, se estudiaron cuidadosamente los efectos de la
densidad de siembra en la estructura de la hoja, el intercambio de gases y la proteómica en el sorgo cultivado en el campo.
En ausencia de deficiencia mineral, (1) la siembra cercana indujo una disminución significativa en la intensidad de la luz dentro
de las poblaciones, lo que resultó en una densidad estomática mucho más baja y otras características anatómicas asociadas
con las hojas sombreadas; (2) el sorgo cultivado a alta densidad de siembra tuvo una tasa fotosintética neta y una
conductancia estomática más bajas que las cultivadas a baja densidad de siembra; (3) aproximadamente 62 puntos de
proteína cambiaron sus niveles de expresión en condiciones de alta densidad de siembra, y se identificaron 22 proteínas
asociadas con la fotosíntesis por espectrometría de masas. Un análisis posterior reveló que la depresión de la fotosíntesis
causada por el sombreado mutuo implica la regulación de la estructura de la hoja, la absorción y el transporte de CO2, el
transporte de electrones fotosintéticos, la producción de potencia asimilatoria y los niveles de enzimas relacionadas con el
ciclo de Calvin. Además, la proteína de choque térmico y la proteína potenciadora que evoluciona con oxígeno juegan un
papel importante en la fotoprotección en el sorgo cultivado en el campo. Se sugirió un modelo para la regulación de la
fotosíntesis bajo sombreado mutuo basado en nuestros resultados.

1. Introducción fotosintético. Para evitar el fotodaño causado por la luz

La fotosíntesis es la base del crecimiento del cultivo y la
formación del rendimiento. La luz no solo actúa como la
fuerza impulsora de la fotosíntesis, sino que también
afecta la estructura y la función del aparato fotosintético.
Por lo tanto, la luz juega un papel importante en la
fotosíntesis y el rendimiento del cultivo [1,2]. Las hojas
difieren mucho en estructura y fisiología en condiciones
de alta y baja luz [3,4]. En general, las hojas del sol
desarrolladas con mucha luz son más pequeñas y gruesas,
con tejido de empalizada más desarrollado, mayor
densidad estomática y pilas de granal más delgadas en
comparación con las hojas de sombra [4,5]. Además de la
morfología y estructura de la hoja, la serie de reacciones
fisiológicas y bioquímicas también se ajusta
considerablemente [3]. Las hojas solares tienen un
contenido de clorofila más bajo, pero tienen mayores
cantidades de portadores de transferencia de electrones y
ribulosa-1,5-bifosfato carboxilasa / oxigenasa (Rubisco)
que las hojas de sombra en función del área de la hoja
[2,3,5,6]. En consecuencia, las hojas solares tienen una
mayor capacidad fotosintética por área foliar. Por el
contrario, las hojas de sombra exhiben una capacidad
fotosintética más baja.
Aunque la luz es muy importante para la fotosíntesis,
demasiada luz también puede dañar el aparato
intensa, las plantas han desarrollado varios mecanismos
para lidiar con la irradiación excesiva [7–9]. Entre estos
mecanismos fotoprotectores, uno de los más importantes
es la disipación térmica basada en el ciclo de xantofila [10].
A pesar de la existencia de este mecanismo para liberar
energía excitada excesiva, la producción de especies
reactivas de oxígeno es inevitable durante la fotosíntesis,
especialmente bajo una fuerte irradiación. Para
contrarrestar la toxicidad de las especies reactivas de
oxígeno, las plantas han desarrollado un sistema de
defensa enzimático antioxidante altamente eficiente [11],
que comprende principalmente superóxido dismutasa,
ascorbato peroxidasa, catalasa, peroxidasa y glutatión
reductasa. Muchos estudios han demostrado que las hojas
del sol son insensibles a la luz intensa, mientras que las
hojas de sombra que crecen con poca luz tienen una
capacidad de fotoprotección débil y una mayor
sensibilidad a la luz intensa [4,9]. Sin embargo, la mayor
parte de la evidencia se deriva de experimentos de
simulación, en los que hubo diferencias sorprendentes en
las intensidades de luz entre el crecimiento de las plantas
y el tratamiento. Por ejemplo, la intensidad de la luz
durante el crecimiento de la planta fue de 150 lmol m2 s1,
mientras que la utilizada para inducir la fotoinhibición fue
de 1800 lmol m2 s1, y así sucesivamente [9,11]. Dichos
estudios pueden ayudar en gran medida a dilucidar los
mecanismos fotoprotectores en condiciones de luz
extremadamente fuerte, pero podrían no reflejar las
estrategias reales de aclimatación a la luz de los cultivos
en el campo.
En la práctica, la densidad de siembra es muy importante
para la producción de cultivos [12,13]. La siembra cercana
de los cultivos siempre causa sombreado mutuo entre los
individuos e inevitablemente una depresión en la
fotosíntesis de las hojas [6]. En esta situación, no solo se
modifica la intensidad de la luz, sino también el espectro
de la luz como resultado del sombreado mutuo [5,14]. De
hecho, las variaciones tanto en la intensidad de la luz
como en los componentes espectrales tienen una gran
influencia en la fotosíntesis [5,15]. Sin embargo, la
mayoría de los estudios previos sobre la respuesta de los
cultivos al sombreado se han centrado principalmente en
el sombreado artificial en el campo [1,2]. El sombreado
artificial con redes o pantallas de sombra no cambia los
componentes del espectro [14]. Evidentemente, existen
diferencias claras entre el sombreado artificial y el
sombreado mutuo en el campo. Por lo tanto, los
mecanismos de disminución de la fotosíntesis causados
por el sombreado mutuo pueden ser diferentes cuando se
compara con el sombreado artificial en condiciones de
campo.
El sorgo, una planta típica de C4, es uno de los cultivos más
importantes a nivel mundial, con una tasa fotosintética
muy alta y una gran producción de biomasa. Para aclarar
los mecanismos reguladores de la fotosíntesis en el
campo, se investigaron cuidadosamente los efectos del
sombreado mutuo entre los individuos sobre el
intercambio de gases, la fluorescencia de clorofila, la
estructura de la hoja y la proteómica. Este estudio
proporciona una nueva visión de la regulación
fotosintética en el campo.
bajante de columna se selló con un recipiente de nutrición
y se incrustó en el campo bajo una de las dos densidades
de plantación (5 y 36 plantas m2). Hubo una plántula por
bajante, como se muestra en la Fig. 1. La nutrición y el
agua se suministraron en cantidades suficientes por
planta durante todo el experimento; por lo tanto,
evitando posibles nutrientes y estrés por sequía. Durante
los experimentos, las parcelas (2 m 2 m) se seleccionaron
al azar. La quinta hoja (de arriba a abajo) se utilizó para
todas las mediciones en este estudio.
2.2. Medición del crecimiento de la planta
La altura de la planta, el diámetro del tallo, la longitud y el
ancho de cada hoja (diez réplicas para cada densidad de
siembra) se determinaron utilizando una regla de regla y
un calibrador a vernier. El área foliar se midió usando un
medidor de área foliar (AM100; ADC, Reino Unido). El peso
específico de la hoja se calculó en función del área de la
hoja y el peso seco de la hoja. En un día despejado, las
variaciones diurnas en la intensidad de la luz y la
temperatura del aire se obtuvieron utilizando un medidor
cuántico (QMSS; Photosynthetic Photo Flux, EE. UU.) Y un
termómetro, respectivamente.
2.3. Medición del intercambio de gases
El análisis del intercambio de gases se realizó en una
cámara de hojas con una concentración de CO2 de 380
lmol mol1, 80% de humedad relativa bajo una irradiación
de 600 o 1200 lmol m2 s 1, utilizando un sistema de

2. Materiales y métodos

2.1. Crecimiento de las plantas y diseño del experimento

El experimento se realizó en el Instituto Botánico de la

Academia de Ciencias de China, Beijing (39280 –41250 N y
115250 –117300 E), en 2012–2013, en un clima
semihúmedo, continental y monzónico. Las semillas de
sorgo (Sorghum bicolor L. cv 'Liaoza 12') se embebieron en
papel húmedo durante 1 día y las semillas germinadas se
sembraron en bajantes de columna (0,16 m de diámetro y
0,75 m de altura) llenas de medios de cultivo (turba: loess
= 1: 1; el suelo mixto en cada bajante contenía 360 g de
estiércol orgánico moderado y 1.43 g de N disponible, a
principios de mayo de 2012 y 2013. El fondo de cada
intercambio de gases (CIRAS-2; PP -Sistemas, Reino
Unido). La tasa fotosintética neta (Pn) y la conductancia
estomática (Gs) se determinaron antes de las 11:00 en un
día soleado. El Pn y Gs se registraron cuando la absorción
de CO2 fue constante y se midieron diez hojas para cada
densidad de siembra.
2.4. Medición de clorofila a fluorescencia
La clorofila a fluorescencia se midió usando un fluorímetro
(Handy PEA; Hansatech, Reino Unido). Se usaron hojas
completamente oscuras (10 h) para determinar Fv / Fm
(donde Fv es la variable y Fm es el rendimiento máximo de
fluorescencia de Chl) a las 06:00. Después de medir el
rendimiento inicial de fluorescencia de Chl (Fo), se aplicó
un pulso de 1 s de luz roja saturada (3500 lmol m2 s1) para
obtener Fm. El resultado para Fv / Fm se calculó como (Fm
– Fo) / Fm, en el que Fv se define como Fm – Fo [16]; Fv /
Fm también se determinó a las 14:00 y 18:00 después de
la adaptación oscura durante 20 minutos de 20 hojas
medidas en cada tratamiento.
2.5. Medición del contenido de clorofila
Se cortaron veinte discos de hoja (5.652 cm2) de la parte
media de cada lámina con un punzón (6 mm de diámetro).
Las muestras para el análisis de pigmento de clorofila se
extrajeron con acetona al 80%, y las mediciones de
absorbancia se realizaron con un espectrofotómetro (UV-
8000S; China) a 663 nm y 646 nm. El contenido de clorofila
se calculó de acuerdo con el método de Porra et al. [17];
Se midieron cinco réplicas para cada tratamiento.
2.6. Medición de la densidad estomática y la estructura
anatómica de la hoja.
La densidad estomatal se midió siguiendo el método de
Coupe et al. [18] Se aplicó esmalte de uñas a las huellas
dentales para obtener una réplica de la superficie de la
hoja. La réplica se observó con un microscopio óptico
(Nikon-E800; Japón) y se fotografió con una cámara digital
(BH-2; Olympus, Japón). El número de estomas se contó
en 20 campos de visión utilizando seis hojas marcadas de
cada tratamiento.
Según lo descrito por Jiang et al. [4], un segmento de hoja
(2 mm 2 mm) sin venas principales se fijó a 4 ° C en
glutaraldehído al 3% en tampón de cacodilato 0,1 M (pH
7,2), y luego se trató con tetróxido de osmio al 1% durante
la noche a 4 ° C. El segmento se deshidrató en una serie de
acetona graduada y se embebió en la resina de Spurr
(Ladd). La microscopía óptica (Nikon-E800; Japón) se
realizó con una sección transversal de 1 l de grosor de la
hoja cortada con un cuchillo de vidrio en un
ultramicrotomo (Leica Ultracut R, Alemania) y teñida con
azul de toluidina al 0,5%. Se obtuvieron micrografías de luz
usando una cámara digital (BH-2; Olympus, Japón). Las
mediciones del grosor de la hoja, el área de la sección
transversal del haz vascular y el área de contacto de las
células de la vaina del haz [19] se obtuvieron utilizando el
software Photoshop; Se midieron 20 posiciones diferentes
en cada segmento.
2.7. Determinación proteómica
2.7.1. Preparación, extracción y cuantificación de
proteínas totales.
Las muestras de hojas se pesaron inmediatamente y se
sumergieron en nitrógeno líquido, y se almacenaron a 80
° C para análisis proteómico en Beijing Protein Innovation
Co., Ltd. (Beijing Genomics Inst.; BGI). Una muestra de
hoja (1 g) de cada réplica se molió en un polvo fino con
10% (p / v) de polivinilpolirrolidona (PVPP) y nitrógeno
líquido en un mortero preenfriado. El polvo se incubó
luego en un tubo de centrífuga preenfriado para extraer
proteínas utilizando el método TCA / acetona [20].
Después del secado al vacío, las proteínas resultantes se
disolvieron en un tampón de lisis (urea 7 M, tiourea 2 M,
CHAPS al 2% (p / v), Tris-HCl 20 mM, pH 8,8), y luego se
sometieron a ultrasonido durante 5 min. en un baño de
hielo (pulso durante 2 s, pulso apagado 3 s, potencia 180
W). El sobrenadante se recogió por centrifugación a
20,000 g durante 30 minutos a 15 ° C. La curva estándar
de proteína se obtuvo usando el método del kit Quant-2D
para cuantificar la proteína; Se determinó la
concentración de proteínas [21].
2.7.2. Electroforesis en gel de poliacrilamida bidimensional
y escaneo en gel
Las proteínas extraídas de las hojas de sorgo se diluyeron
con un tampón de rehidratación de 450 ll que contenía
DTT 50 mM y tampón de gradiente de pH inmovilizado
(IPG) al 0,8% (v / v) [22], y luego se mezcló completamente
y se centrifugó a 20,000 g durante 10 min a 10 C. Las
muestras se prepararon tres veces usando electroforesis
bidimensional; El enfoque isoeléctrico se realizó con un
soporte para tiras IEF de 24 cm de longitud, pH 4-7.
Después del electroenfoque, cada muestra se equilibró en
tampones de equilibrio de yodoacetamida al 1% y 2,5% de
yodoacetamida durante 15 minutos durante 15 minutos,
respectivamente. Las tiras se usaron inmediatamente
para realizar una separación de segunda dimensión en gel
de 12,5% y procedimiento SDS-PAGE a 20 ° C, hasta que el
bromofenol se volvió azul, como un indicador de que el gel
se había agotado por completo. Los geles se tiñeron con
azul brillante Coomassie G-250. Posteriormente, se
obtuvieron imágenes escaneando los geles teñidos y se
guardaron como una imagen TIF para su posterior análisis
(Image Máster 2D platinum 5.0).
2.7.3. Análisis de imágenes, identificación de proteínas y
búsqueda en bases de datos.
Las proteínas se analizaron de acuerdo con los métodos
de Fan et al. [23]; solo aquellos puntos que cambiaron en
abundancia de manera reproducible en más de dos veces
y pasaron la prueba de significación (p 6 0.05) se
denominaron proteínas expresadas diferencialmente y se
seleccionaron para la identificación de proteínas. Cada
punto a analizar se escindió de un gel, se colocó en un tubo
de centrífuga de 1,5 ml y se numeró. Después de la
proteólisis, las manchas se probaron usando MALDI TOF /
TOF. Después de la primera espectrometría de masas, se
seleccionaron tres iones precursores para una segunda
cesación. Se observaron algunos fragmentos rotos en la
parte superior del espectro de masas marcado, y su
relación masa-carga se mostró en la segunda
espectrometría de masas; esto podría enviarse al servidor
MASCOT (Matrix-Science, Londres, Reino Unido) para la
búsqueda. De acuerdo con el puntaje, se recuperaron y
analizaron los resultados para el valor E, la cobertura de la
secuencia de proteínas, la intensidad máxima de los
péptidos coincidentes, el IP calculado experimentalmente,
el peso molecular relativo y otros factores.
2.8. Estadísticas
Los datos se compararon con la prueba T de muestras
independientes usando SPSS (versión 11.5), en los niveles
de significancia de 0.05 y 0.01. El programa de gráficos
SigmaPlot (versión 10.0) se utilizó para crear ilustraciones.
3. Resultados
3.1. Efectos del sombreado mutuo sobre la intensidad de
la luz y la temperatura del aire.
En días soleados, el valor máximo de intensidad de luz era
de aproximadamente 1343 lmol m2 s 1 a baja densidad de
plantación, mientras que a alta densidad de plantación
solo alcanzaba 390 lmol m2 s1 al mediodía (Fig. 2A). Los
cambios diarios de temperatura dentro de la población
fueron consistentes con la intensidad de la luz (Fig. 2B). La
temperatura máxima bajo las densidades de siembra baja
y alta ocurrió a las 14:00, y fue de 36.3 C y 32.8 C,
respectivamente. La intensidad de la luz y la temperatura
dentro de la población de sorgo se redujeron claramente
significativamente mediante el sombreado mutuo bajo la
siembra cercana.
3.2. Efectos del sombreado mutuo sobre el crecimiento de
las plantas y la estructura de las hojas.
En comparación con el sorgo crecido a una baja densidad
de siembra, el sorgo a una alta densidad de siembra tuvo
una altura de planta más alta, mientras que el diámetro
del tallo, el área de la hoja de la planta, el área de una sola
hoja y el peso específico de la hoja fueron menores (Tabla
1). Además, la densidad estomática de las hojas cultivadas
en la alta densidad de siembra disminuyó
significativamente en comparación con las hojas de baja
densidad de siembra.
Para analizar más a fondo los efectos del sombreado
mutuo en los órganos fotosintéticos, también se estudió
la estructura de la hoja (Fig. 3, Tabla 1). Bajo una alta
densidad de siembra, el sombreado mutuo causó una
marcada reducción en el grosor de la hoja, el área de la
sección transversal del haz vascular y el área de contacto
de las células de la vaina del haz, en comparación con la
baja densidad de siembra. Por lo tanto, estos cambios en
la estructura morfológica y anatómica indicaron que el
sorgo crecido a una alta densidad de siembra desarrolló
características típicas de las plantas de sombra.
3.3. Efectos del sombreado mutuo en la función
fotosintética

Para explicar mejor las respuestas de las hojas al
sombreado mutuo, medimos el contenido de clorofila, el
intercambio de gases y la fluorescencia de clorofila. A alta
densidad de siembra, el contenido de clorofila aumentó
claramente debido al severo sombreado mutuo (Tabla 1).
Los valores para Pn y Gs en irradiaciones de 600 y 1200
lmol m2 s1 se muestran en la Fig. 4. Tanto Pn como Gs
disminuyeron significativamente a alta densidad en
comparación con baja densidad de siembra. Al mismo
tiempo, el sorgo que crece a alta densidad de siembra
exhibió una ligera fotoinhibición al mediodía (Fig. 5). Se
observo la seria disminución de Fv / Fm en sorgo a baja
densidad de siembra, que se debió principalmente a la
depresión de Fm y al aumento de Fo.
3.4. Efectos del sombreado mutuo en el proteoma foliar
Para examinar los cambios en el perfil de proteoma de las
hojas de sorgo sometidas a sombreado mutuo, realizamos
un análisis de gel en 2-D. La figura 6 muestra los perfiles 2-
DE de las proteínas, de los cuales 62 puntos proteicos
mostraron una diferencia significativa en el nivel de
expresión (p <0,05). MALDI TOF / TOF identificó con éxito
un total de 52 proteínas de todas las proteínas expresadas
diferencialmente (DEP), y 22 proteínas asociadas con la
aclimatación a la luz fotosintética se enumeran en la Tabla
2. Estas proteínas identificadas podrían clasificarse en
cuatro categorías según la clasificación de Fan et al. [23] y
Li et al. [22]: reacción a la luz, metabolismo del carbono,
proteínas fotorreceptoras y fotoprotección.
La primera categoría es la reacción a la luz de la
fotosíntesis (Tabla 2), que está relacionada con el
transporte de electrones y la formación de potencia
asimilatoria. Las abundancias de la supuesta subunidad K
de la oxidorreductasa NADHplastoquinona K isoforma 1,
ferredoxinaNADP reductasa (FNR), ferredoxina (Fd),
proteína potenciadora de evolución de oxígeno 1 y
subunidad beta ATP sintasa fueron reguladas al alza en
hojas cultivadas con baja densidad de siembra, pero
reguladas a la baja en las hojas en Alta densidad de
siembra.
La segunda categoría está correlacionada con las enzimas
del metabolismo del carbono. La Tabla 2 muestra que la
abundancia de malato deshidrogenasa, subunidad
pequeña ribulosa-1,5-bifosfato carboxilasa / oxigenasa,
triosefosfato isomerasa, fosforibulocinasa, sedoheptulosa
bifosfatasa1 (SBPase), sacarosa sintasa (SS) y almidón
sintasa I (GBSS) unida a gránulos todos se sobre regularon
en hojas cultivadas a baja densidad de siembra, pero la
abundancia de expresión de la subunidad grande ribulosa-
1,5-bisfosfato carboxilasa / oxigenasa se reguló a la baja
(Tabla 2).

La tercera categoría está relacionada con las proteínas
fotorreceptoras. De estos, el criptocromo 2 estaba
regulado al alza en hojas cultivadas a baja densidad de
siembra, mientras que la expresión del fitocromo C estaba
regulada a la baja (Tabla 2).
La cuarta categoría comprende proteínas asociadas con la
fotoprotección. Las abundancias de la proteína 70 de
choque térmico con cloroplastos y la proteína
potenciadora de evolución de oxígeno 1 aumentaron en
las hojas cultivadas a baja densidad de plantación, pero
disminuyeron en las hojas cultivadas a alta densidad de
plantación (Tabla 2). Además, la abundancia de la proteína
potenciadora de evolución de oxígeno 1 a baja densidad
de siembra fue seis veces más alta que a alta densidad de
siembra (Tabla 2).
4. Discusión
4.1. Efectos del sombreado mutuo en la capacidad
fotosintética
En este estudio, la siembra cercana del sorgo causó un
sombreado mutuo severo, como se refleja en la notable
disminución de la irradiancia dentro de las poblaciones
(Fig. 2A). Por lo tanto, el sorgo crecido a una alta densidad
de siembra desarrolló hojas de sombra (Fig. 3 y Tabla 1).
Sabemos que las características morfológicas de las hojas
y la estructura anatómica juegan un papel clave en la
regulación de la capacidad fotosintética, proporcionando
un marco estructural para la difusión de gases y la
optimización de la función fotosintética [4,18,24].
Teóricamente, una mayor densidad estomática y hojas
más gruesas, así como una transferencia de metabolitos
más rápida entre el mesófilo y las células de la envoltura,
tienden a favorecer una tasa fotosintética más alta [25].
En consecuencia, bajo sombreado mutuo, la disminución
de la densidad estomática, el grosor de la hoja, el área de
la sección transversal del haz vascular y el área de
contacto de las células de la vaina del haz, todas las
características de la morfología y la estructura anatómica
de las hojas (Tabla 1), pueden ser parcialmente
responsables de deprimente capacidad fotosintética.
Además, se encontró que la disminución de la fotosíntesis
no solo es el resultado de cambios significativos en las
características morfológicas y la estructura anatómica,
sino también en las proteínas funcionales (Tabla 2). En
general, el CO2 ingresa al mesófilo a través de los estomas
en las superficies de las hojas, que es altamente sensible
al ambiente de luz. En el presente estudio, el sombreado
mutuo en condiciones de alta densidad de siembra
condujo a una disminución significativa en la densidad
estomática y Gs (Fig. 4 y Tabla 1). Por lo tanto, el
intercambio de CO2 a través de los estomas puede estar
restringido. Para una planta C4 típica, como el sorgo, el
CO2 ambiental se fija inicialmente como un ácido de
cuatro carbonos (malato, Mal) en las células mesofílicas a
través de PEPCase. El malato se transfiere a las células de
la envoltura del haz. Posteriormente, la descarboxilación
del malato a través de una enzima descarboxilante
produce una alta concentración de CO2 alrededor de
Rubisco que facilita su asimilación a través del ciclo de
Calvin. La disminución en la abundancia de malato
deshidrogenasa en plantas cultivadas a alta densidad de
siembra indicó que la tasa de CO2 liberado en las células
de la envoltura del haz a través de la descarboxilación de
malato podría haberse ralentizado. El sombreado mutuo
por lo tanto resultó en una disminución en la absorción y
transporte de CO2 en la fotosíntesis.
Además, aunque se observó un claro aumento en el
contenido de clorofila debido al sombreado mutuo (Tabla
1), las proteínas asociadas con los pigmentos
fotosintéticos claramente no estaban reguladas por varios
pliegues en abundancia (Tabla 2). Por lo tanto, llegamos a
la conclusión de que el complejo de recolección de luz
podría no ser el principal sitio regulador para la
fotosíntesis de las hojas bajo sombra mutua en el campo.
Sabemos que la proteína potenciadora de evolución de
oxígeno 1 es un componente importante del complejo de
evolución de oxígeno en PSII [26,27]. En este estudio,
observamos que la abundancia de proteína potenciadora
que evoluciona con oxígeno se redujo significativamente
debido al sombreado mutuo en el campo (Tabla 2).
Probablemente sea desventajoso para la estabilidad de la
PSII y la actividad del complejo de evolución de oxígeno.
Al mismo tiempo, la abundancia de Fd, FNR y la supuesta
subunidad K de NADH-plastoquinona oxidorreductasa K
isoforma 1 se reguló a la baja en plantas cultivadas en
condiciones de siembra cercanas (Tabla 2), lo que puede
provocar una disminución en la velocidad de transporte de
electrones. Además, el sombreado mutuo también causó
la baja regulación en las expresiones de ATP sintasa y FNR
(Tabla 2), lo que puede limitar la producción de NADPH y
ATP en cierta medida. Por lo tanto, el ambiente de poca
luz causado por el sombreado mutuo a alta densidad de
siembra causó una disminución en la velocidad de
transporte de electrones y la formación de potencia
asimilatoria, lo que indica que estos dos factores pueden
ser sitios reguladores importantes para la fotosíntesis en
condiciones de sombreado mutuo en el campo.
El ciclo de Calvin es una reacción en cadena, constituida
por numerosas enzimas. En este estudio, muchas enzimas
asociadas con el ciclo de Calvin, como la triosa fosfato
isomerasa, SBPasa y fosforibulocinasa, se regularon
negativamente en plantas cultivadas en condiciones de
siembra cercanas (Tabla 2). Es bien sabido que RuBP
reacciona con CO2 para producir PGA catalizada por
Rubisco. Más tarde, PGAld se forma en presencia de ATP y
NADPH, y luego se transforma en RuBP en el ciclo de
Calvin. Nuestros datos indican que las fases reproductivas
de RuBP pueden ralentizarse en las hojas cultivadas en
condiciones de siembra cercanas. Por lo tanto, la
disminución en la tasa fotosintética podría atribuirse
parcialmente a la depresión de la regeneración de RuBP
en condiciones de sombreado mutuo. Además, SS y GBSS
también pueden ser sitios reguladores importantes para
la fotosíntesis, lo que se refleja en la clara regulación a la
baja de su abundancia en condiciones de siembra
cercanas (Tabla 2). En contraste, Rubisco es comúnmente
considerado como una enzima clave en la fotosíntesis
[28,29]. Sin embargo, los cambios en el contenido de
Rubisco han sido controvertidos en estudios anteriores.
Por un lado, existe una correlación positiva entre el
contenido de Rubisco y la tasa fotosintética [29,30]. Por
otro lado, Ray et al. descubrió que el arroz tenía un alto Pn
con un bajo contenido de Rubisco [31]. Recientemente, Li
et al. informan que las plántulas de salsa Suaeda
mantuvieron una alta tasa fotosintética bajo estrés salino,
mientras que la abundancia de Rubisco se redujo
significativamente [22]. Rubisco, de hecho, también sirve
como una importante proteína de almacenamiento [32].
En el presente estudio, se observó una disminución en la
tasa fotosintética con la regulación positiva de Rubisco en
condiciones de siembra cercanas (Tabla 2). En
consecuencia, concluimos que Rubisco, que sirve como
una proteína funcional y de almacenamiento importante,
puede no ser el paso fotosintético limitante de la
velocidad en condiciones de sombreado mutuo.
Aunque el proceso de fotosíntesis se ha estudiado
ampliamente, la mayoría de los estudios anteriores se han
centrado principalmente en unos pocos pasos reguladores
de aclimatación a la luz y no revelaron la red reguladora
potencial. En este estudio, en condiciones de sombreado
mutuo, se encontró que la reducción de la fotosíntesis en
el sorgo involucra la regulación de la estructura de la hoja,
la absorción y el transporte de CO2, el transporte de
electrones, la formación de energía asimilatoria y las
enzimas asociadas con el ciclo de Calvin. Sobre la base de
nuestros resultados, en la Fig. 7 se propone una posible
red reguladora para la fotosíntesis en condiciones de
sombreado mutuo.
4.2. Efectos del sombreado mutuo en los mecanismos
fotoprotectores.
la proteína potenciadora que evoluciona con oxígeno
(Tabla 2), aliviando así la fotoinhibición y el fotodaño. En
general, con el fin de mejorar la aclimatación de los
cultivos a la luz fuerte y la temperatura alta en el campo,
se ha prestado mayor atención que antes al
fortalecimiento del ciclo de xantofila y el sistema de
defensa enzimática antioxidante. Sin embargo, nuestros
resultados indican que Hsp y la proteína potenciadora que
evoluciona con oxígeno pueden desempeñar papeles muy
importantes en la mejora de la tolerancia a la luz y a la
temperatura en el campo.
5. Conclusiones
En conjunto, la depresión de la fotosíntesis en el sorgo
bajo sombreado mutuo implica la regulación de la
estructura de la hoja, la absorción y el transporte de CO2,
el transporte de electrones fotosintéticos, la producción
de potencia asimilatoria y los niveles de enzimas
relacionadas con la asimilación de carbono. Además, la
proteína de choque térmico y la proteína potenciadora
que evoluciona con oxígeno pueden desempeñar un papel
importante en la fotoprotección en el sorgo cultivado en
el campo.

Aunque la intensidad de luz máxima fue de

aproximadamente 1343 lmol m2 s1 a baja densidad de
siembra (Fig. 2A), la expresión de proteínas asociadas con
el ciclo de xantofila y el sistema de defensa de la enzima
antioxidante no estaba regulada por incremento. Por lo
tanto, la regulación de la abundancia de proteínas puede
no ser los principales mecanismos de aclimatación a la luz
en el campo para el ciclo de xantofila y el sistema de
defensa de enzimas antioxidantes. Probablemente, la
regulación de las actividades enzimáticas podría ser más
importante. Además, nuestros datos demostraron que la
abundancia de la proteína de choque térmico (Hsp) y la
proteína potenciadora que evoluciona con oxígeno
estaban reguladas negativamente a una alta densidad de
siembra (Tabla 2). Además, la evidencia acumulada indica
que el cloroplasto Hsp es importante en la
termotolerancia del PSII, que podría proteger el PSII y las
proteínas complejas que evolucionan con oxígeno de ser
dañadas por el estrés por calor [7]. Al mismo tiempo, las
proteínas potenciadoras que evolucionan con oxígeno son
favorables para mantener la estabilidad del complejo que
evoluciona con oxígeno [26], y su estabilidad también
juega un papel crucial en la protección de PSII contra la
alta temperatura [27]. En nuestro estudio, no solo la
intensidad de la luz, sino también la temperatura del aire,
mejoraron notablemente a baja densidad de siembra (Fig.
2). Se observó claramente la regulación positiva de Hsp y