Respuestas diferenciales de azúcar, ácidos orgánicos y antocianinas a la

modulación fuente-sumidero en las uvas Cabernet Sauvignon y Sangiovese

La composición de bayas de uva se compone principalmente de metabolitos primarios y secundarios. Ambos son
sensibles al medio ambiente y a la gestión vitícola. Como consecuencia, el cambio climático puede afectar la
composición de las bayas y modificar la calidad y la tipicidad del vino. Las técnicas de eliminación de hojas pueden
afectar la composición de las bayas al modular el equilibrio de la fuente al sumidero y, a su vez, pueden mitigar
algunos efectos no deseados debido al cambio climático. El presente estudio investigó el equilibrio entre los
parámetros tecnológicos de madurez, como los azúcares y los ácidos orgánicos, y los parámetros de madurez
fenólica, como las antocianinas, en respuesta a la modulación fuente-sumidero. Los perfiles de azúcar, ácido
orgánico y antocianinas se compararon bajo dos niveles de suministro de carbono contrastantes en bayas de cv.
Cabernet Sauvignon y Sangiovese se recolectaron en 9 y 14 etapas de desarrollo respectivamente.
Adicionalmente, Se monitoreó la tasa de intercambio de carbono neto de la cubierta completa para las vides
Sangiovese y se usó un modelo matemático para calcular el equilibrio entre la fijación de carbono y la acumulación
de azúcar en las bayas. La limitación de carbono no afectó ni el tamaño de la baya ni la concentración de ácidos
orgánicos en la cosecha. Sin embargo, redujo significativamente la acumulación de azúcares y antocianinas totales
en ambos cultivares. Lo más interesante es que la limitación de carbono disminuyó la concentración total de
antocianinas en un 84,3% en comparación con el control sin limitación de fuente, mientras que disminuyó la
concentración de azúcar solo en un 27,1%. Esto sugiere que la limitación de carbono condujo a un fuerte
desequilibrio entre azúcares y antocianinas. Además, la limitación de carbono afectó los perfiles de antocianinas
de una manera dependiente de cultivar. El análisis matemático del balance de carbono indicó que las bayas usaron
una mayor proporción de carbono fijo para la acumulación de azúcar bajo limitación de carbono (76.9%) que bajo
suficiencia de carbono (48%). Por lo tanto, bajo limitación de carbono, la baya de uva puede manejar el destino
metabólico del carbono de tal manera que la acumulación de azúcar se mantenga a expensas de los metabolitos
secundarios.

Introducción

La vid es un cultivo perenne importante que se
cultiva en muchos países (7519 mha en 2013; OIV,
2014 ). Sus frutos se utilizan principalmente para la
elaboración del vino, pero también para jugos, pasas
y consumo fresco. La composición de las bayas de
uva, que es importante para los viticultores y la
industria del vino, está determinada principalmente
por azúcares, ácidos orgánicos y diversos
metabolitos secundarios (por ejemplo, taninos,
flavonoles, antocianinas, precursores de aromas y
compuestos volátiles; Conde et al., 2007 ). La
acumulación de estos componentes a lo largo del
desarrollo y maduración de las bayas depende del
genotipo y del medio ambiente ( Jackson y Lombard,
1993 ).
El cambio climático ya afecta la fisiología de la vid (
Schultz, 2000 ), causando una mayor concentración
de azúcar y, en consecuencia, un mayor contenido de
alcohol en los vinos ( Duchêne y Schneider, 2005 ;
Bock et al., 2013 ), ácidos orgánicos reducidos y
antocianinas ( Barnuud et al., 2013 , 2014 ) y perfiles
de aroma modificados ( Keller, 2010a ). A largo plazo,
la sostenibilidad de la producción de vino en varias
regiones vitivinícolas puede verse amenazada por el
cambio climático ( Schultz y Jones, 2010 ; Hannah et
al., 2013) Para enfrentar tales desafíos, los
mecanismos que controlan la acumulación de
metabolitos relacionados con la calidad en las uvas
deben entenderse mejor. Esto permitirá promover
prácticas vitícolas innovadoras que resulten en una
adaptación más fácil de la producción de vino al ajuste fino de la composición de antocianinas tiene
cambio climático ( van Leeuwen et al., 2013 ). importantes impactos en el tono del color y la
estabilidad del color de los vinos resultantes ( Mazza,
Entre las diferentes prácticas vitícolas que afectan la
1995 ). La modulación fuente-sumidero afecta la
composición de las bayas ( Keller, 2010a ; Dai et al.,
coloración de las bayas (Weaver, 1963 ; Kliewer y
2011 ; Kuhn et al., 2014 ), la modulación fuente-
Weaver, 1971 ; Petrie et al., 2000a ), y recientemente
sumidero por poda de verano (es decir, eliminación
sus efectos sobre el contenido y la composición de
de hojas o brotes y adelgazamiento de racimos) es
antocianinas ( Guidoni et al., 2008 ; Pastore et al.,
una herramienta importante eso puede controlar la
2011 , 2013 ; Filippetti et al., 2015 ) llamaron la
relación entre rendimiento y calidad, y ajustar la
atención de muchos grupos de investigación. Por
composición química compleja de la uva ( Kliewer y
ejemplo, Wu et al. (2013) mostraron que retener dos
Dokoozlian, 2005 ). Por ejemplo, la concentración de
hojas solo en un brote ceñido con un racimo inhibía
azúcar de bayas a menudo se correlaciona
completamente la coloración de las bayas. Además,
positivamente con la relación área / rendimiento de
Guidoni et al. (2008)informaron que las antocianinas
la hoja cuando la relación está por debajo de un valor
totales se redujeron por limitación de fuente, con
umbral de aproximadamente 1 m 2 / Kg de masa de
antocianinas dihidroxiladas más sensibles que las
fruta ( Kliewer y Dokoozlian, 2005 ; Duchêne et al.,
trihidroxiladas en el cv. Bayas Nebbiolo. Sin
2012) Por encima de este valor, la concentración de
embargo, otros autores recientemente demostraron
azúcar generalmente alcanza una meseta y se vuelve
que una limitación de la fuente posterior al envero
menos sensible a la modulación fuente-sumidero (
resultante del recorte de brotes ( Filippetti et al.,
Kliewer y Dokoozlian, 2005 ). Las respuestas de los
2015 ), la eliminación de las hojas por encima de los
ácidos orgánicos a la modulación fuente-sumidero se
racimos ( Palliotti et al., 2013b ; Poni et al., 2013 ) o
han estudiado menos a fondo, y los informes
tarde de temporada de antitranspirantes ( Palliotti et
contradictorios mostraron que una proporción
al., 2013a) redujo significativamente la velocidad de
menor de área foliar / rendimiento causó un
acumulación de azúcar, pero no afectó la
aumento ( Wolpert et al., 1983 ; Ollat y Gaudillere,
concentración de antocianinas de bayas en la
1998 ; Wu et al. al., 2013 ), disminución ( Bravdo et
cosecha. Como las técnicas de modulación fuente-
al., 1985 ) o falta de respuesta ( Reynolds et al., 1994
sumidero también producen modificaciones
; Parker et al., 2015 ) de ácidos orgánicos en
concomitantes en el microclima de la zona de fruta
comparación con una alta relación hoja /
(es decir, los regímenes de luz y temperatura), los
rendimiento.
resultados deben interpretarse con precaución. Está
Además de los metabolitos primarios, los bien establecido que la temperatura afecta
metabolitos secundarios (p. Ej., Taninos, flavonoles, significativamente la acumulación de antocianinas (
antocianinas, precursores de aroma y compuestos Spayd et al., 2002 ; Pereira et al., 2006 ; Mori et al.,
volátiles) también juegan un papel esencial en la 2007 ). Por lo tanto, los experimentos que se
configuración de la calidad y tipicidad del vino. En controlan con mayor precisión y evitan la confusión
particular, las antocianinas son responsables del entre los efectos de la modulación fuente-sumidero
color de la uva, que es un determinante importante y el microclima son necesarios para cuantificar la
del color del vino. Las antocianinas de uva derivan de respuesta real de las antocianinas a la disponibilidad
cinco antocianidinas: cianidina (Cy), delfinidina (Dp), de carbono.
peonidina (Pn), petunidina (Pt) y malvidina (Mv).
La acumulación de carbono en los metabolitos
Tienen diferentes patrones de hidroxilación (formas
primarios y secundarios está interconectada y
di o trihidroxiladas), metilación, y pueden
resulta de una red metabólica complicada. Por
modificarse aún más por acilación ( Mazza, 1995 ). El
ejemplo, los niveles de azúcar se correlacionan
positivamente con los niveles de antocianinas totales
( Vitrac et al., 2000 ; Dai et al., 2014 ), pero se
correlacionan negativamente con los ácidos
orgánicos ( Keller, 2010b ). Curiosamente, la
acumulación de azúcares y antocianinas puede ser
desacoplada por condiciones ambientales como la
alta temperatura ( Sadras y Moran, 2012 ). En
contraste, el efecto de la modulación fuente-
sumidero en el desacoplamiento de azúcar-
antocianina parece más complicado ( Sadras y
Moran, 2012 ). Se ha informado que la relación
antocianina: azúcar aumenta ( Guidoni et al., 2002),
disminuido ( Sadras et al., 2007 ), o sin cambios (
Petrie y Clingeleffer, 2006 ) al aumentar la relación
fuente-sumidero. Los mecanismos subyacentes a
esta diversidad de respuestas justifican una mayor
investigación. Se han desarrollado varias teorías en
la literatura para describir la relación entre los
metabolitos primarios y secundarios en las plantas, y
las dos más relevantes son la hipótesis del balance de
carbono-nutrientes (CNB) y la hipótesis del balance
de diferenciación de crecimiento (GDB) (revisado en
Koricheva et al. al., 1998) El CNB predice que las
concentraciones de metabolitos secundarios
basados en carbono disminuirán en los casos en que
la fijación de carbono sea más reducida que el
crecimiento, como resultado de la disminución de la
reserva de carbono disponible para la asignación a la
producción de metabolitos secundarios. GDB
proporciona una predicción similar, y un metanálisis
mostró que ambas hipótesis parecen ser válidas para
describir la dependencia de los metabolitos
secundarios basados en C totales, particularmente
los compuestos derivados de fenilpropanoides
(incluidas las antocianinas) en la disponibilidad de
carbono en las hojas de la planta leñosa ( Koricheva
et al., 1998) Si los azúcares y las antocianinas tienen
sensibilidades diferentes a la modulación fuente-
sumidero, dicha desincronización puede ayudar a
definir una ventana de relaciones fuente-sumidero,
dentro de la cual los azúcares se reducen mientras
las antocianinas no se ven afectadas. Esto
proporcionaría pistas valiosas para mitigar las
influencias negativas del cambio climático ( Keller,
2010a ).
Por lo tanto, el presente estudio tiene como objetivo
cuantificar las sensibilidades relativas de los
diferentes compuestos de bayas (azúcares, ácidos
orgánicos y antocianinas) a los cambios en la
modulación fuente-sumidero bajo condiciones
controladas o semi-controladas. El monitoreo de la
tasa de fijación de carbono de todo el dosel y el perfil
dinámico de los metabolitos nos permitió realizar un
análisis cuantitativo de la demanda y el suministro de
carbono, y obtener información detallada sobre el
equilibrio fuente-sumidero. Además, un análisis
detallado de HPLC nos permitió comparar los efectos
de la modulación fuente-sumidero en los cambios de
desarrollo en los perfiles de antocianinas en dos
cultivares distintos, Cabernet Sauvignon y
Sangiovese.
Materiales y métodos
Se realizaron dos experimentos con cv. Cabernet
Sauvignon en Burdeos (latitud 44 ° 46 ′ 46 ′ ′ N,
longitud 00 ° 34 ′ 01 ′ ′ O), Francia, y cv. Sangiovese
en Piacenza (latitud 45 ° 02 ′ 52 ′ ′ N, longitud 9 ° 42 ′
2 ′ ′ E), Italia.
Material vegetal y muestreo
Exp 1. Cabernet Sauvignon
Esquejes fructíferos hechos de un brote vertical con
un racimo de cv. El Cabernet Sauvignon se preparó
como se describe en Mullins y Rajasekaran (1981) y
se cultivó en un invernadero con luz natural y semi-
controlado con control químico de enfermedades
aplicado cada 2 semanas. Las condiciones
ambientales (temperatura del aire, radiación a nivel
del dosel y humedad relativa) se registraron cada
hora durante todo el experimento (Figura
complementaria S1).
Treinta esquejes de fructificación homogéneos se
sometieron a dos proporciones de fuente a sumidero
1 semana antes del envero; un grupo de 15 plantas
tenía 12 hojas por racimo por vid (12L) mientras que
las vides restantes tenían tres hojas por racimo por
vid (3L). A los 63 días después de la floración (DAF),
las hojas debajo del racimo basal se eliminaron en
ambos tratamientos para estandarizar los efectos del
microclima; por lo tanto, sobre el racimo, se
mantuvieron 3 y 12 hojas, produciendo un total de 7
y 16 nodos por brote para los tratamientos de 3L y
12L, respectivamente. Las hojas restantes y todos los
brotes secundarios se eliminaron durante el período
de medición. Las plantas se asignaron
aleatoriamente a tres bloques y cada bloque estaba
compuesto por cinco plantas de cada tratamiento.
Las bayas se tomaron muestras nueve veces a
intervalos de 1 semana desde 1 semana después del
tratamiento (70 DAF) hasta 126 DAF. Para asegurar
la captura de la madurez en las vides tratadas con 3L,
la última fecha de muestreo correspondió a una
etapa de madurez excesiva. En cada fecha de
muestreo, se tomó una muestra de una baya de la
parte superior y la mitad de un solo grupo, y las 10
bayas resultantes de cinco grupos (vides) de un
tratamiento dado dentro de una parcela se
agruparon para formar una réplica biológica. Se
obtuvieron tres réplicas biológicas para cada
tratamiento en cada fecha de muestreo. En la
cosecha, todas las bayas restantes fueron
muestreadas, contadas y pesadas.
Exp 2. Sangiovese
El experimento se realizó en cv. Podados con caña de
4 años de edad. Vides Sangiovese injertadas en
portainjertos M3 y cultivadas al aire libre en macetas
de 40 L. Las macetas se llenaron con una mezcla de
arena, marga y arcilla (65, 20 y 15% en volumen,
respectivamente) y se mantuvieron bien regadas
durante la temporada de prueba. Cada vid tenía una
caña fructífera de 1 m de largo con 8–9 yemas
latentes. Se aplicó el adelgazamiento de los brotes
para retener un brote principal por nodo y, en cada
brote, solo se mantuvo el grupo basal. Las vides se
organizaron a lo largo de una sola fila, orientada
verticalmente, orientada hacia el NE-SW de 35 ° y
con formación de seto. Se asignaron ocho vides
uniformes en un diseño completamente al azar a los
siguientes dos tratamientos 1 semana antes del
envero: tres hojas por racimo (brote) o 12 hojas por
racimo (brote). Como en el experimento de Cabernet
Sauvignon, a 40 DAF, las hojas debajo del racimo
basal se eliminaron en ambos tratamientos para
estandarizar los efectos del microclima; por lo tanto,
sobre el racimo, se mantuvieron 3 y 12 hojas, para el
tratamiento de 3L y 12L, respectivamente. Los brotes
se recortaron a 8 y 16 nodos por brote, para
tratamiento de 3L y 12L, respectivamente. Las hojas
restantes y todos los brotes secundarios se
eliminaron durante todo el período de medición.
Se tomaron muestras de bayas 14 veces a intervalos
de 1 semana desde 1 semana antes del tratamiento
hasta 8 semanas después del tratamiento, y luego a
intervalos de 4 días para una mejor madurez de
captura. En cada fecha de muestreo, se tomaron
muestras de tres bayas de la parte superior y media
de un solo grupo y se agruparon las 24 o 27 bayas de
8 o 9 grupos (brotes) de una vid determinada bajo un
tratamiento para formar una réplica biológica. Se
obtuvieron cuatro réplicas biológicas para cada
tratamiento en cada fecha de muestreo. En la
cosecha, todas las bayas restantes de una vid fueron
muestreadas, contadas y pesadas.
Pretratamiento de bayas
Las bayas muestreadas de ambos experimentos se
colocaron inmediatamente en un tubo previamente
pesado y se colocaron en nitrógeno líquido. Los
tubos se volvieron a pesar después de una
congelación profunda para calcular el peso fresco de
las bayas y luego se almacenaron a -80 ° C para su
posterior análisis bioquímico. Las bayas almacenadas
en -80 ° C se descongelaron ligeramente y se
separaron rápidamente en la piel, pulpa y semillas en
el laboratorio. La piel y la pulpa se trituraron
inmediatamente en polvo fino en nitrógeno líquido
usando un molino de bolas MM200 (Retsch, Haan,
Alemania).
Azúcares y ácidos orgánicos
Una parte alícuota de 500 mg de polvo fino de pulpa
se extrajo secuencialmente con etanol (80 y 50%), se
secó en Speed-Vac y se redisolvió en 2,5 ml de agua
desionizada. El contenido de glucosa y fructosa se
midió enzimáticamente con un lector automático de
microplacas (Elx800UV, Biotek Instruments Inc.,
Winooski, VT, EE. UU.) De acuerdo con el método de
Gomez et al. (2007) . El contenido de ácido tartárico
se evaluó mediante el método colorimétrico basado
en reacciones de vanadato de amonio ( Pereira et al.,
2006 ). El ácido málico se determinó utilizando un
método espectrofotométrico acoplado a enzimas
que mide el cambio en la absorbancia a 340 nm
desde la reducción de NAD + a NADH ( Pereira et al.,
2006 ).
Análisis de antocianinas
Una parte alícuota de 500 mg de polvo de piel de
bayas se liofilizó durante 72 h y el polvo seco (\ sim
50 mg) se extrajo en 1,0 ml de metanol que contenía
HCL al 0,1% (v / v). Los extractos se filtraron a través
de un filtro de jeringa de polipropileno de 0,45 μm
(Pall Gelman Corp., Ann Harbour, MI, EE. UU.) Para el
análisis por HPLC. Cada antocianina individual se
analizó como se describe en Hilbert et al. (2003) y
Acevedo De la Cruz et al. (2012) con HPLC. La
cuantificación se llevó a cabo mediante la integración
del área de pico a 520 nm, y se usó el estándar
Malvidin-3-glucósido (Extrasynthèse, Lyon, Francia)
para cuantificar la concentración de antocianina.
Medición del área de la hoja
Para el experimento de Cabernet Sauvignon, se
estimó el área foliar (LA) utilizando la relación entre
el LA específico (m 2 área fresca gDW -1 ) y el peso
seco total de la hoja como se describe en Castelan-
Estrada et al. (2002) . Los LA de las hojas eliminadas
para el tratamiento con 3L se determinaron al inicio
del tratamiento y los LA completos de la planta se
determinaron para ambos tratamientos al final del
experimento.
Para el experimento Sangiovese, se midió LA en las
hojas que se retiraron el día del tratamiento y
después de la cosecha de todas las bayas. LA se
determinó midiendo la superficie de cada lámina con
un medidor LA (LI-3000A, LI-COR Biosciences,
Lincoln, NE, EE. UU.).
Concentración de clorofila
Se midieron seis hojas por planta para vides de 12 l y
tres hojas por planta para vides de 3 l utilizando el
medidor portátil de clorofila SPAD 502 (Minolta
Corp., Ramsey, NJ, EE. UU.). En cada hoja, se tomaron
cinco lecturas SPAD en cada lóbulo de la hoja y luego
se promediaron.
Intercambio de gas de una hoja
Las tasas netas de fotosíntesis (P n ),
evapotranspiración (E) y conductancia estomática (g
s ) de seis hojas por planta se midieron solo en el
experimento Sangiovese a 95 DAF usando un sistema
de fotosíntesis portátil CIRAS-2 (PP Systems,
Amesbury, MA, ESTADOS UNIDOS). En cada parra, se
eligieron dos brotes en posiciones basales y apicales
a lo largo de la caña y, en cada brote, se midieron en
secuencia rápida tres hojas maduras ubicadas en las
posiciones basal, mediana y apical del tallo principal.
Las lecturas se realizaron en las horas de la mañana
(10 h 00–12 h 00) bajo luz de saturación constante
(≈1500 μmol m -2 s -1) impuesta con una lámpara
externa adicional montada en la parte superior de la
cámara de la hoja. Las mediciones se tomaron a
humedad relativa ambiental y el flujo alimentado a
la cámara de hoja ancha ( tamaño de ventana de 4,5
cm 2 ) fue de 300 ml min -1 . Para asegurar la
estabilidad de la entrada de referencia CO 2
concentración [CO 2 ], un CO 2 minicartridge se
utilizó para proporcionar control automático de
entrada [CO 2 ] en 380 mmol L -1 .
Intercambio de gas de toldo entero
Las mediciones de la tasa de cambio de CO 2 neta del
dosel completo (NCER) se realizaron solo en el
experimento Sangiovese utilizando el sistema
multicámara reportado en Poni et al. (2014) con
soplantes centrífugos de corriente alterna (Vorticent
C25 / 2M Vortice, Milán, Italia) que suministran un
flujo de aire máximo de 950 m 3 h -1 ; Cámaras de
polietileno de plástico flexible que permiten 88% de
transmisión de luz, 6% de enriquecimiento de luz
difusa y sin alteración del espectro de luz. El sistema
también presenta un CO 2 absoluto de canal único
CIRAS-EGM4analizador de gas infrarrojo (PP
Systems, Amesbury, MA, EE. UU.) con un rango de
medición de 0–1000 partes por millón y un
registrador de datos CR1000 conectado a un
multiplexor AM16 / 32B (Campbell Scientific,
Shepshed, Reino Unido). Para facilitar la mezcla de
aire y asegurar una mayor estabilidad en la
concentración de entrada de CO 2 , el aire fue
forzado a través de un tanque de almacenamiento
(500 L) antes de ser dirigido a las cámaras. El cambio
del muestreo de aire de una cámara a otra se logró a
intervalos de tiempo programados (90 s) utilizando
un conjunto de válvulas solenoides (SIRAI, Padova,
Italia); El caudal de aire a cada cámara se controló
mediante una válvula de mariposa (Ghibson,
Monteveglio, Italia) y se midió con un manómetro
digital Testo 510 (Farnell, Lainate, Italia) utilizando el
método de restricción de flujo ( Osborne, 1977) El
caudal alimentado a las cámaras se ajustó a 7,1 l / sy
se mantuvo hasta el tratamiento de eliminación de la
hoja, cuando el caudal se cambió a 5 l / s. El NCER de
dosel completo por vid (μmol de CO 2 / s) y por
unidad LA (μmol de CO 2 / m 2 s) se calculó a partir
de los caudales y los diferenciales de CO 2
posteriores.
Las cámaras se instalaron en cada parra y se
operaron continuamente las 24 horas del día desde
una semana antes del tratamiento (2 de julio) hasta
95 días después de la floración (1 de septiembre). La
temperatura del aire ambiente (entrada) y la
temperatura del aire en la salida de cada cámara se
midieron mediante termopares blindados tipo PFA-T
de 1,2 mm de diámetro con aislamiento de teflón
(Omega Engineering, Stamford, CT, EE. UU.), Y se
midió la radiación directa y difusa con un sensor de
luz solar BF2 (Delta-T Devices, Ltd, Cambridge,
Inglaterra) colocado horizontalmente en la parte
superior de una estaca de soporte al lado de las
cámaras que encierran los toldos. La humedad
relativa ambiental (entrada) y la humedad relativa en
la salida de cada cámara se midieron mediante un
sensor de humedad HIH-4000 (Honeywell, Freeport,
IL, EE. UU.) Montado aguas arriba del EGM4.
Análisis de los datos
Todos los análisis de datos se realizaron con el
software R ( R Development Core Team, 2010 ).
Student t -test fue usado para verificar las diferencias
entre las dos relaciones fuente-sumidero en cada
etapa de desarrollo.
El análisis de asignación de carbono se realizó como
sigue. Primero, el carbono acumulado en las bayas
durante el desarrollo se calculó en función de la
concentración de hexosa y el peso fresco de la baya
con un coeficiente de transformación de carbono de
0.4 g de carbono g -1 de hexosa. En segundo lugar, el
carbono total acumulado (C) en las bayas por vid se
ajustó a la siguiente curva sigmoidea ( Sadras et al.,
2008 ):
C = Cm a x1 + mi[t0 0- tsi]
donde t es el número de días después de la floración,
C max es la cantidad máxima de carbono (g), t 0 es el
número de días después de la floración cuando la
cantidad de carbono es la mitad del máximo, y b
representa la duración de la acumulación de carbono
de 0.25 C max a 0,75 C máx . Tercero, la tasa de
acumulación de carbono (g de carbono / día) se
calculó utilizando la derivación de primer orden de la
curva sigmoidea. Finalmente, la relación entre el
carbono acumulado de las bayas y el carbono
fotosintetizado (obtenido de la medición del
intercambio de gases del dosel completo) se
cuantificó por su relación para estimar el equilibrio
de carbono de la oferta frente a la demanda.
Resultados
Relación de hoja a fruta
Como se esperaba, la remoción de hojas redujo
efectivamente el LA total por vid en el tratamiento
de 3L en Cabernet Sauvignon y Sangiovese (Tablas 1
y 2 ). También resultó en una relación hoja-fruta (LA
/ F) significativamente menor en tratamientos de 3L
que en 12L en ambos cultivares. Todas las vides de
TABLA 1. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre el área
de la hoja (LA), la relación área-rendimiento de la hoja y el
contenido de clorofila de la hoja (SPAD) de las vides Cabernet
Sauvignon.
3L tenían una relación LA a rendimiento inferior a 1,0
m 2 / Kg. Por otro lado, tanto las lianas Cabernet
Sauvignon de 12 l como las vides Sangiovese tuvieron
un LA / F de 3.98 m 2 / Kg y 1.15 m 2 / kg,
respectivamente (Tablas 1 y 2 ).
Peso de la baya
En Cabernet Sauvignon, el tratamiento de 3L limitó
el aumento en el tamaño de la baya que
normalmente ocurre entre 80 y 90 días después de
la floración (DAF), pero extendió la duración del
crecimiento a 110 DAF, cuando las bayas en
condiciones de 12L ya alcanzaron su máximo peso
fresco (Figura 1A ) La mayor duración del
crecimiento compensó la disminución de la tasa de
crecimiento y dio como resultado un peso de bayas
muy similar en ambas condiciones de crecimiento en
la cosecha. Por el contrario, el tratamiento con 3L no
afectó el perfil de desarrollo del tamaño de la baya
TABLA 2. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre el área de la hoja (LA), la tasa de intercambio de carbono neto total (NCER) por vid y por
unidad de área de la hoja, la fijación neta de carbono acumulada (gCO 2 / vid) durante el período de prueba, y la hoja -rendimiento de la vid
Sangiovese.
en las bayas Sangiovese (Figura 1B) En la cosecha, las
bayas Sangiovese eran más grandes que las de
FIGURA 1. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre el peso de la baya
estacional de las vides Cabernet Sauvignon (A) y Sangiovese (B) que tienen tres
hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L) . La flecha sólida indica la fecha de la
modulación fuente-sumidero. Las barras verticales indican SE ( n = 3 para
Cabernet Sauvignon y n = 4 para Sangiovese).
Cabernet Sauvignon. Las bayas de ambos cultivares
duplicaron su tamaño desde el envero hasta la
madurez. Además, se produjo la deshidratación de
las bayas en las bayas de Cabernet Sauvignon, como
lo indica la disminución en el peso fresco de las bayas
de 112 DAF a 126 DAF (Figura 1A ).
Concentración de azúcar
Las concentraciones de hexosa (glucosa + fructosa)
de las bayas Cabernet Sauvignon y Sangiovese se
redujeron significativamente por la limitación de la
fuente (Figura 2 ). Los efectos negativos de la
limitación de la fuente se observaron 1 semana
después del tratamiento con Cabernet Sauvignon y 2
semanas después del tratamiento con
Sangiovese. En la cosecha, el tratamiento de 3L
causó una reducción del 17.5% de la concentración
de hexosa en Cabernet Sauvignon y una reducción
del 36.7% en Sangiovese en comparación con las
bayas tratadas con 12L.
FIGURA 2. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre las
concentraciones estacionales de hexosa de bayas Cabernet
Sauvignon (A) y Sangiovese (B) muestreadas de vides que tienen tres
hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L) . La flecha sólida indica la fecha
de la modulación fuente-sumidero. Las barras verticales indican SE
( n = 3 para Cabernet Sauvignon y n = 4 para Sangiovese).
un suministro de fuente adecuado (Figura 4 ), con
derivados de malvidina dominantes en el primero y
cianidina-3-glucósido dominante en el
segundo. Además, todas las formas aciladas de
antocianinas estaban ausentes en Sangiovese
(Figura 4A ). Estas diferencias en la composición se
vieron aún más afectadas por la limitación de la
FIGURA 3. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
concentración de ácido málico estacional (A, B) y ácido tartárico (C,
D) de bayas Cabernet Sauvignon (A) y Sangiovese (B) de vides que
tienen tres hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L) . Las flechas
continuas indican la fecha de la modulación fuente-sumidero. Las
barras verticales indican SE ( n = 3 para Cabernet Sauvignon y n = 4
para Sangiovese).

Ácidos orgánicos
Los perfiles de desarrollo de los ácidos málico y
tartárico se vieron ligeramente afectados por la
modulación fuente-sumidero en las bayas de
Cabernet Sauvignon (Figuras 3A, C ). Desde el envero
hasta la cosecha cercana, las concentraciones de
ácidos málico y tartárico fueron mayores en el
tratamiento de 3L que en el de 12L, mientras que no
se encontraron diferencias significativas en la
cosecha. Por otro lado, los perfiles de desarrollo de fuente (Figuras 4B, C ). En la cosecha, la proporción
los ácidos orgánicos en las bayas Sangiovese no se de derivados de malvidina se incrementó a 93.7% en
vieron significativamente afectados por la bayas tratadas con 3L en comparación con 79.7% en
modulación fuente-sumidero (Figuras 3B, bayas tratadas con 12L de Cabernet Sauvignon
D ). Además, la tendencia plana de los ácidos (Figura 4B ). Sangiovese se vio menos afectado por la
tartáricos en las bayas de Cabernet Sauvignon se limitación de la fuente, con 55.6% de cynidin-3-
debe al hecho de que el muestreo comenzó en una glucoside en bayas tratadas con 3L y 42.4% en bayas
etapa posterior (Figura 3C) En la cosecha, las tratadas con 12L (Figura 4C)
concentraciones de ácido málico fueron 1.78 y 1.5 g
/ L y las de ácidos tartáricos fueron 6.61 y 7.13 g / L
para Cabernet Sauvignon y Sangiovese,
respectivamente.

Composición y concentración de antocianinas

Las bayas Cabernet Sauvignon y Sangiovese
mostraron diferentes perfiles de antocianinas bajo
 FIGURA 4. Cromatogramas de HPLC típicos de antocianinas en pieles FIGURA 5. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
de bayas de uvas Cabernet Sauvignon y Sangiovese cultivadas bajo acumulación de antocianinas totales (A, B) , antocianinas
suministro de carbono no limitado (A) ; y los efectos de la modulación dihidroxiladas (C, D) , antocianinas trihidroxiladas (E, F) y la relación
fuente-sumidero en la composición de antocianinas de las pieles de de dii a tri- antocianinas hidroxiladas (G, H) en la piel de Cabernet
bayas Cabernet Sauvignon (B) y Sangiovese (C) en la cosecha de vides Sauvignon (panel izquierdo) y bayas Sangiovese (panel derecho) . Los
con tres hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L) . Dp, delfinidina; Mv, dos niveles de suministro de carbono se obtuvieron tratando las vides
malvidina; Pt, petunidina; Cy, cianidina; Pn, peonidina; glc, con tres hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L). Las flechas continuas
glucósido; ac, acetato; Cou, Coumarate. indican la fecha de la modulación fuente-sumidero. Las barras
verticales indican SE ( n = 3 para Cabernet Sauvignon y n = 4 para
Sangiovese).

Los perfiles de desarrollo de la composición y

concentración de antocianinas se vieron
significativamente afectados por la limitación de la
fuente en ambos cultivares (Figuras 5 y 6 ). En
Cabernet Sauvignon, la cantidad de antocianinas
totales fue sistemáticamente mayor en las bayas
tratadas con 12L que en las bayas tratadas con 3L
durante el desarrollo de la baya (Figura 5A) Las bayas
tratadas con 12L aumentaron bruscamente sus
antocianinas de 70 a 77 DAF, permanecieron en una
meseta hasta 98 DAF, y posteriormente
disminuyeron progresivamente. Las bayas de 3L
exhibieron un perfil de desarrollo similar pero con
una meseta mucho más baja que las bayas de 12L. En
Sangiovese, las bayas de 12L comenzaron a acumular
antocianinas de 68 DAF y alcanzaron un máximo en
la cosecha. Por el contrario, el tratamiento con 3L
deprimió casi por completo la acumulación de
antocianinas totales, con solo un ligero aumento
entre 95 y 105 DAF (Figura 5B ). En la cosecha, el
tratamiento con 3L causó una reducción del 74.8% 5.27 mg / g FW en 12L) y una reducción del 94.5% en
en la concentración de antocianinas totales en Sangiovese (0.22 mg / gFW en 3L versus 3.32 mg /
Cabernet Sauvignon (1.32 mg / g FW en 3L versus gFW en 12L).
 FIGURA 6. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
cantidad (A, C) y la proporción (B, D) de antocianinas no aciladas (A,
B) y antocianinas aciladas (C, D) en relación con la concentración total
en el piel de bayas de Cabernet Sauvignon de vides con tres hojas (3L)
o 12 hojas por racimo (12L) . Las barras verticales indican SE ( n = 3).
Las antocianinas trihidroxiladas y dihidroxiladas
mostraron diferentes perfiles de desarrollo y
respuestas distintas a la limitación de la fuente
(Figuras 5C-H ). Las bayas de Cabernet Sauvignon
tenían antocianinas trihidroxiladas más altas que las
dihidroxiladas en ambos tratamientos (Figuras 5C, E,
G ), mientras que se observó lo contrario en
Sangiovese (Figuras 5D, F, H ). En Cabernet
Sauvignon, el tratamiento 3L disminuyó más
dihidroxilado (Figura 5C ) que las antocianinas
trihidroxiladas (Figura 5F ), lo que resultó en una
proporción más baja de antocianinas dihidroxiladas
(Figura 5G)) Por el contrario, el tratamiento con 3L
disminuyó igualmente las antocianinas di y
trihidroxiladas en Sangiovese, sin afectar la
proporción de antocianinas di y trihidroxiladas
(Figura 5H ).
El efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
acilación de antocianinas se investigó más a fondo en
las bayas de Cabernet Sauvignon (Figura 6 ). El
tratamiento con 3L disminuyó más fuertemente las
antocianinas no aciladas que las aciladas en
comparación con las bayas tratadas con 12L (Figuras
6A, B ). Esta modificación desequilibrada causó un
aumento significativo en la proporción de
antocianinas aciladas en bayas tratadas con 3L que
con bayas tratadas con 12L (Figura 6D ). La
proporción de antocianinas aciladas alcanzó 58.4%
en 3L y fue 46.1% en 12L en la cosecha (Figura 6D ).
Fijación de hoja de carbono y utilización de carbono
de bayas
Los tipos de cambio netos de CO 2 (NCER) se
midieron en Sangiovese y se muestran en la Figura 7
. El NCER por unidad LA (μmol m -2 s -1 ) fue muy
similar (≅ 4.5 μmol m -2 s -1 ) para los dos grupos de
vides antes del tratamiento (Figura 7A y Tabla 2 ).
Después del tratamiento, se volvió ligeramente más
alto en 3L (en promedio 6.30 μmol m -2 -1 ) que en
el tratamiento de 12L (en promedio 5.56 μmol m -2
s -1 ), sin alcanzar una diferencia significativa (Tabla
2) Sin embargo, cuando se acumularon esas
diferencias marginales en cada día, el carbono fijado
por una unidad de AL durante el período
experimental fue claramente mayor en el
tratamiento de 3L que en el de 12L (Figura 7C ). La
tasa de fotosíntesis de una sola hoja en la cosecha,
medida en condiciones óptimas con luz saturada, fue
significativamente mayor en las hojas tratadas con 3L
(15.1 μmol m -2 s -1 ) que en el tratamiento con 12L
(13.8 μmol m -2 s -1 ). Además, tanto para Cabernet
Sauvignon (Tabla 1 ) como para Sangiovese (Tabla 3
), las hojas de las plantas de 3L tenían un mayor
contenido de clorofila que el de las plantas de 12L
(Tabla 3 ).
TABLA 3. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
transpiración (E), la conductancia estomática (g s ), la fotosíntesis
neta (Pn) y el contenido de clorofila (SPAD) medido en seis hojas
por vid en Sangiovese.
El NCER por vid se calculó como el producto de NCER
por LA y LA total por vid (Figura 7B ). Antes del
 FIGURA 7. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la tasa neta de intercambio de carbono (NCER) por unidad de área foliar (A) y por vid (B) , así
como la fijación de carbono acumulada por unidad de área foliar (C) y por vid ( D) , registrado diariamente con un sistema de intercambio de gases de dosel
completo durante todo el período experimental en vides Sangiovese, ya sea con tres hojas (3L) o 12 hojas por racimo (12L) . Los valores de las cámaras
vacías también se indicaron (A, B) como referencia. Las flechas continuas indican la fecha de la modulación fuente-sumidero. Las barras verticales indica
SE ( n = 4).

tratamiento, las hojas de ambos grupos tenían NCER
/ vid muy similar (promedio de 3L y 12L a 8.12 μmol
s -1 ). Durante el tratamiento, se eliminaron 40 y
83.3% de LA en comparación con el pretratamiento
para las vides 12L y 3L, respectivamente (Tabla 2 ).
Estas reducciones en el LA total por vid dieron como
resultado una disminución proporcional abrupta de
NCER / vid del 38.8% para las vides de 12L y del 82.4%
para las vides de 3L, promediada durante los
acumulado por vid en la cosecha en el tratamiento
de 3L solo se redujo en un 55,8% en comparación con
12L (Figura 7D ).
Para investigar el equilibrio de la oferta y la demanda
de carbono, también se calculó la tasa de
acumulación de carbono en todas las bayas de una
vid y se comparó con el carbono fijado por la
fotosíntesis (Figura 8 ). Como se esperaba, las bayas
de 3L acumularon mucho menos carbono (43.4 g)
que las del tratamiento de 12L (81.9 g) en la cosecha
(Figura 8A ). Paralelamente, la tasa de acumulación
de carbono en las bayas (g de carbono por día)
también disminuyó en las bayas de 3L en
comparación con las bayas de 12L (Figura 8B ).
primeros 3 días después del tratamiento (Figura 7B ).
Posteriormente, las vides reaccionaron a sus
tratamientos, y las plantas de 3L mostraron una
reducción del 66.1% en NCER / vid en paralelo con
una reducción del 69.6% en LA por vid, en
comparación con las plantas de 12L (Figura7B y Tabla
2 ). Cuando el NCER por vid se acumuló durante el
período posterior al tratamiento, el carbono
Considerando la tasa de acumulación de carbono
como la utilización de carbono y el NCER por vid
como suministro de carbono, se calculó la
proporción de la primera a la última (Figura 8C) El
carbono total acumulado por día en bayas de 3L
representó ∼76.9% del fijado por la fotosíntesis
durante el período de acumulación rápida de azúcar
(es decir, de 54 a 81 DAF), mientras que solo
representó ∼48% en bayas de 12L durante el mismo
período. Curiosamente, esta proporción saltó a
niveles muy altos, incluso más del 100%, en varios
días específicos en ambos tratamientos. Un análisis
posterior reveló que esos días correspondían a días
nublados (Figura complementaria S1) cuando los
NCER por vid eran muy bajos (Figura 7B ).

FIGURA 8. Efecto de la modulación fuente-sumidero sobre la
asignación de carbono en Sangiovese cultivado con tres hojas (3L)
o 12 hojas (12L) por racimo . Carbono acumulado en todas las
bayas por vid (A) , tasa de acumulación de carbono en todas las
bayas por vid por día (B) , y la proporción de carbono
fotosintetizado utilizado para la acumulación de azúcar de bayas
durante el período de desarrollo (C) . Las flechas continuas
indican la fecha de la modulación fuente-sumidero.
Discusión
La limitación de la fuente inducida por la eliminación
severa de las hojas en Cabernet Sauvignon y
Sangiovese causó una reducción significativa en la
acumulación de azúcares en las bayas. Este resultado
confirma muchos estudios previos con diferentes
otros cultivares de Vitis vinifera L., que informaron
una disminución en la acumulación de azúcar
después de la limitación de carbono inducida por la
eliminación tardía de la hoja (manual o mecánica),
recorte de brotes en el cuajado y envero ( Poni y
Giachino, 2000 ; Heuvel et al., 2005 ; Stoll et al., 2010
; Palliotti et al., 2013b ; Poni et al., 2013 ; Filippetti et
al., 2015 ; Parker et al., 2015) Sin embargo, también
hay estudios que muestran que la acumulación de
azúcar no se ve afectada ( Percival et al., 1994 ; Chorti
et al., 2010 ; Sabbatini y Stanley Howell, 2010 ;
Pastore et al., 2013 ) o incluso aumentaron
ligeramente ( Bledsoe et al. ., 1988 ; Percival et al.,
1994 ; Guidoni et al., 2002 ; Poni et al., 2006a , 2008
; Palliotti et al., 2011 , 2012 ; Pastore et al., 2011 ,
2013 ; Bubola y Persuric, 2012 ; Gatti et al., 2012)
después de una relación LA / Fruta decreciente. Estas
observaciones contradictorias son muy
probablemente el resultado de las diferencias en el
tiempo y la gravedad de la fuente para hundir las
modulaciones. De hecho, Kliewer y Dokoozlian
(2005) han demostrado que un LA / Fruit por encima
de 0.8 m 2 / Kg es crítico para la maduración
completa de las uvas. Los estudios que no
informaron ningún efecto de las modulaciones
fuente-sumidero sobre la acumulación de azúcar a
menudo no fueron inferiores a este valor umbral. En
el presente estudio, LA / Fruit fue inferior a 0,8 m 2 /
Kg en vides de origen limitado para ambos cultivares.
Por lo tanto, es de suma importancia considerar la
magnitud de LA / Fruit cuando se comparan los
ensayos sobre el efecto de las modulaciones fuente-
sumidero en los azúcares de bayas.
En contraste con la disminución en la concentración
de azúcar bajo limitación de fuente, no se
encontraron diferencias significativas en el
contenido de ácidos orgánicos en la cosecha en los
dos cultivares estudiados en este trabajo. En un
reciente análisis detallado del desarrollo, Parker et
al. (2015) también observaron una pérdida de
sincronización entre el azúcar y el ácido orgánico en
respuesta a la reducción de las relaciones LA / Fruta,
con una reducción de la acumulación de azúcar, pero
los ácidos orgánicos en gran medida no se vieron
afectados. Algunos otros estudios ( Bledsoe et al.,
1988 ; Poni et al., 2006a , 2009 ; Tardaguila et al.,
2010 ; Pastore et al., 2013) informaron que una
disminución en la relación fuente-sumidero por la
eliminación de la hoja conduce a una disminución de
la acidez total y el ácido málico, mientras que los
ácidos tartáricos no se vieron afectados o incluso
aumentaron en comparación con las vides sin
eliminación de la hoja. Los autores de estos estudios
con frecuencia señalaron un probable efecto de
confusión de la eliminación de la hoja y el microclima
modificado, lo que hace que su resultado no sea
realmente comparable con los encontrados en el
presente estudio. Nuestros resultados y los de Parker
et al. (2015) ambos confirman que los ácidos
orgánicos son menos sensibles a la limitación de
carbono que los azúcares.
Además de la sensibilidad relativa de azúcares y
ácidos orgánicos, también estudiamos la respuesta
de metabolitos secundarios importantes como las
antocianinas. La limitación de la fuente causó
reducciones de 75 y 93.5% en las concentraciones de
antocianinas en las bayas Cabernet Sauvignon y
Sangiovese en la cosecha, en paralelo con solo
reducciones de 17.5 y 36.7% en azúcares, en
comparación con las bayas sin fuente limitada.
Después del recálculo del conjunto de datos de
informes recientes, encontramos que la limitación de
la fuente causó una reducción del 99.2% en las
antocianinas con una reducción del 38.5% en los
azúcares en el cv. Jingyan ( Vitis vinifera ; Wu et al.,
2013 ), y una reducción de 17.5 o 19.1% en
antocianinas con una reducción de 8.4 o 6.8% en
azúcares en el cv. Sangiovese ( Pastore et al., 2011 ,
2013) Estos resultados indican claramente que la
acumulación de azúcares y antocianinas se
desacopla bajo la limitación de la fuente, y que el
carbono se asigna preferentemente para la
acumulación de azúcar en lugar de las antocianinas.
Como se mencionó en la introducción, se han
desarrollado varias teorías (CNB y GDB) en la
literatura para describir la relación de competencia
entre los metabolitos primarios y secundarios en las
plantas (revisado en Koricheva et al., 1998 ). Arnold
y col. (2004) confirmaron, con una serie de elegantes
experimentos, que el contenido fenólico y la
coloración del álamo ( Populus nigra x P. deltoides)
las hojas del sumidero se reducen por el flujo de
carbono interrumpido desde la fuente al sumidero,
es decir, la disponibilidad reducida de carbono. En
suspensiones celulares de cv. Gamay Freaux que
produce antocianinas de forma constructiva,
Guardiola et al. (1995) demostraron con un enfoque
de modelado matemático que los metabolismos
primarios (azúcares) y secundarios (antocianinas)
compiten por el sustrato de carbono cuando el
sustrato es escaso. Nuestros resultados
proporcionan una evidencia de la validez de las
hipótesis de CNB y GDB en un sumidero productivo
(bayas) y allanan el camino para modelar las
acumulaciones de azúcares y antocianinas en la baya
de uva bajo varias proporciones fuente-sumidero.
Curiosamente, ( Sadras y Moran, 2012) también
informaron el desacoplamiento entre la acumulación
de azúcares y antocianinas en condiciones de altas
temperaturas. Sin embargo, los mecanismos
biológicos subyacentes a este efecto de
desacoplamiento deberían ser diferentes de los que
se encuentran bajo limitación de carbono, porque la
temperatura tiene un efecto directo sobre la
biosíntesis y degradación de antocianinas al modular
la expresión génica y las actividades enzimáticas de
las enzimas relacionadas ( Mori et al., 2007 ). Se han
realizado pocos estudios para comprender el efecto
inhibitorio de la limitación de la fuente sobre la
acumulación de antocianinas a niveles de proteína y
/ o transcripción. Dos análisis recientes de
transcriptomas de todo el genoma mostraron que la
limitación de carbono redujo la abundancia de
transcripción de glucosa UDP: flavonoide-3- O-
glucosiltransferasa (UFGT) y GST4, que se conocen
como reguladores importantes de la acumulación y
el transporte de antocianinas ( Pastore et al., 2011 ,
2013 ). Un análisis proteómico mostró que las
abundancias de chalcona sintasa y dihidroflavonol
reductasa, ambas involucradas en la vía de
antocianinas, se redujeron fuertemente por la
limitación de la fuente ( Wu et al., 2013 ). Nuestra
reducción observada en la antocianina total en
ambos cultivares bajo limitación de fuente también
debería ser el resultado de modificaciones en los
reguladores clave de las vías de antocianina, aunque
se necesitan más experimentos transcriptómicos y
proteómicos para confirmar estas especulaciones.
Como se sabe que diferentes moléculas de
antocianinas tienen diferentes tonalidades y
estabilidades de color ( He et al., 2010 ), también
estudiamos la alteración de la composición de
antocianinas en respuesta a la limitación de carbono.
La concentración y composición de las antocianinas
son diferentes entre las bayas Cabernet Sauvignon y
Sangiovese en condiciones normales (con suficiente
carbono); Las bayas de Cabernet Sauvignon tenían
una mayor concentración de derivados de malvidina
(trihidroxilados) y antocianinas aciladas, mientras
que las bayas de Sangiovese eran más ricas en
cianidin-3-glucósido (dihidroxilado) y no se
encontraron antocianinas aciladas. Estos resultados
están de acuerdo con un informe anterior ( Mattivi
et al., 2006) La limitación de carbono aumentó la
proporción de cianidina-3-glucósido en Sangiovese.
En el mismo cultivar, otros autores ( Filippetti et al.,
2007 ; Pastore et al., 2011 , 2013 ) también
encontraron que una disminución en la relación
fuente-sumidero aumentó la proporción de
cianidina-3-glucósido. Por el contrario, la proporción
de antocianina predominantemente peonidina-3-
glucósido (dihidroxilada) en el cv. Nebbiolo se redujo
por la baja relación fuente-sumidero ( Guidoni et al.,
2002) En Cabernet Sauvignon, encontramos que la
proporción de antocianinas dihidroxiladas
(derivados de cianidina y peonidina) se redujo por la
limitación de carbono. Estos resultados indican que
la modificación en la composición de antocianinas en
respuesta a la limitación de la fuente depende del
cultivar. Se sabe que la relación entre las
antocianinas di y trihidroxiladas está bajo el control
de la actividad relativa de la flavonoide 3 ′ -
hidroxilasa (F3 ′ H) y la flavonoide 3 ′ , 5 ′ -hidroxilasa
(F3 ′ 5 ′ H) ( Castellarin et al., 2006 ). El análisis de
transcriptoma mostró que la limitación de carbono
aumentó la abundancia de transcripción de F3 'Hb,
que es responsable de la biosíntesis de dihidroxilado,
y explicó la modificación observada en la
composición de antocianinas ( Pastore et al., 2013 ).
Además de la limitación de la fuente de carbono, la
exclusión de la luz puede aumentar la proporción de
antocianinas di- / trihidroxiladas ( Guan et al., 2014 );
tanto el estrés hídrico ( Castellarin et al., 2007a , b )
como la alta temperatura disminuyen esta relación (
Mori et al., 2007 ). También se sabe que la acilación
de antocianinas se ve afectada por la exposición a la
luz y la temperatura ( Tarara et al., 2008) En Cabernet
Sauvignon, también observamos que la limitación de
la fuente aumentó significativamente la proporción
de antocianinas aciladas en comparación con la
condición de limitación sin fuente. La regulación
molecular de la acilación de antocianinas es en gran
medida desconocida, aunque la acilación puede
mejorar la estabilidad de las antocianinas ( Sarni et
al., 1995 ; He et al., 2010 ). Estas respuestas
diferenciales entre antocianinas di y trihidroxiladas y
entre antocianinas aciladas y no aciladas pueden
proporcionar implicaciones potenciales valiosas en la
modulación de la calidad del vino. Se requieren
esfuerzos adicionales para investigar por qué las
actividades o la expresión de F3 ′ H y F3 ′ 5 ′H
responde a la limitación de la fuente de manera
diferente entre los cultivares y por qué las
antocianinas aciladas se acumulan preferiblemente
bajo la limitación de la fuente.
Fuente y sumidero pueden comunicarse de forma
interactiva y ejercer influencias mutuas entre sí.
Cuando se reduce la relación fuente-sumidero, las
hojas (fuente) en la vid pueden aumentar la
eficiencia de la hoja hacia una compensación de su
tasa fotosintética para satisfacer la demanda de
bayas (sumidero; Candolfi-Vasconcelos y Koblet,
1990 ; Petrie et al. ., 2003 ; Kliewer y Dokoozlian,
2005) Observamos que las vides de origen limitado
aumentaron su NCER por unidad de LA en
comparación con las vides de origen suficiente. Esto
se confirmó aún más por un mayor contenido de
clorofila (7% más en las vides Sangiovese y 13.5%
más en las vides Cabernet Sauvignon), y una mayor
capacidad de fotosíntesis medida en una sola hoja en
condiciones óptimas. Otros autores han observado
efectos similares de la limitación de la fuente sobre
el contenido de clorofila en las hojas ( Candolfi-
Vasconcelos y Koblet, 1990 ; Petrie et al., 2000b)
Dicha compensación fotosintética puede explicar por
qué las vides de origen limitado perdieron el 69,6%
de su LA aunque la fijación de carbono se redujo solo
el 55,8% durante la maduración de las bayas. Sin
embargo, está claro que la compensación es parcial,
y esto puede deberse al hecho de que solo se
retuvieron las hojas principales del brote primario y
se eliminó todo el nuevo crecimiento durante
nuestro experimento. Las hojas maduras responden
menos a la modulación fuente-sumidero ( Candolfi-
Vasconcelos et al., 1994b ).
La comparación de la fijación de carbono por las
hojas y la utilización de carbono por las bayas puede
proporcionar una estimación valiosa del equilibrio de
carbono entre la demanda y la oferta. Esta
información es esencial para comprender la fisiología
de las vides y puede ayudar a desarrollar modelos
mecanicistas ( Poni et al., 2006b ; Cola et al., 2014 ).
Sin embargo, esta comparación a menudo falta en
los experimentos de modulación fuente-sumidero
debido a la falta de instalaciones adecuadas para
medirla. El enfoque de intercambio de gases en todo
el dosel ( Poni et al., 2014) permite controlar el NCER
estacional y cuantificar el carbono fijado después de
la modulación fuente-sumidero. Además, seguimos
la dinámica de la acumulación de azúcar de las bayas
y calculamos la cantidad de carbono utilizada en las
bayas a través de una función matemática de
acumulación de azúcar ( Sadras et al., 2008 ). Esto
proporcionó una buena estimación de la utilización
de carbono en el sumidero más importante (bayas;
Gutiérrez et al., 1985 ; Coombe, 1989) El análisis
matemático del balance de carbono indicó que la
utilización de carbono de las bayas representaba una
mayor proporción de carbono fijo para la
acumulación de azúcar bajo limitación de carbono
(73.4%) que bajo suficiencia de carbono (40.7%)
durante las etapas de acumulación de azúcar (54 a
81 DAF). Esto indica que la asignación de carbono no
es proporcional a la oferta de carbono, pero con
prioridades para las bayas bajo limitación de fuente,
lo que proporciona evidencia directa para respaldar
la suposición más aplicada en los modelos de
asignación de carbono de la vid ( Gutiérrez et al.,
1985 ; Bindi et al., 1996 ; Poni et al., 2006a ; Pallas et
al., 2008 ). Los mecanismos biológicos detrás de este
fenómeno han sido poco investigados. Pastore y col.
(2011)mostró que la abundancia de transcripción de
la isoenzima 2 de piruvato descarboxilasa implicada
en la glucólisis se redujo por una baja relación
fuente-sumidero. Sin embargo, encontramos que la
limitación de carbono aumentó las actividades
enzimáticas involucradas en el metabolismo
primario de carbohidratos (datos no publicados de
Dai et al.). Estos aumentos en las enzimas
metabólicas pueden conferir una mayor fuerza de
hundimiento y, por lo tanto, permitir que las bayas
atraigan una mayor proporción de carbono bajo
limitación de fuente. Vale la pena señalar que
nuestro cálculo no considera la utilización de
carbono para el mantenimiento y las reservas, ni la
contribución potencial de la movilización de carbono
de reserva ( Gutiérrez et al., 1985), sino que
proporciona un indicador cuantitativo de la
asignación de carbono. Por lo tanto, las proporciones
cercanas al 100% observadas entre 64 y 67 DAF en
vides de 3L son apenas realistas en vides reales; en
su lugar, indican fuertemente que las reservas de
carbono se removilizan para la acumulación de
azúcar en las bayas y / o el mantenimiento de la vid.
Una remobilización de reserva similar podría explicar
la alta proporción de carbono que se observó cuando
estaba nublado y la tasa de fotosíntesis de la vid fue
extremadamente baja. Aunque no cuantificamos la
remobilización de la reserva, Weaver (1963) informó
que las reservas (tanto de azúcares solubles como de
almidón) en los brotes se redujeron
significativamente por la limitación de la fuente en el
cv. Vides Carignane y Zinfandel. Kliewer y Antcliff
(1970)estimó que hasta el 40% del total de azúcares
en las bayas puede provenir de los tejidos de
almacenamiento de la vid. Usando el etiquetado de
14 C, ( Candolfi-Vasconcelos et al., 1994a ) mostró
que las reservas de carbono de los tejidos de
almacenamiento leñosos pueden reasignarse
activamente en bayas bajo las limitaciones de la
fuente. El uso futuro del etiquetado de 14 C, la
medición del índice de intercambio neto de carbono
(NCER) de la cubierta completa y la evaluación del
contenido de carbono en varios tejidos (hojas,
brotes, madera, frutos y raíces) proporcionarían un
valioso conjunto de datos para la cuantificación del
carbono. Análisis de saldo y asignación.
Conclusión
La limitación de la fuente inducida por la eliminación
de la hoja 1 semana antes del envero redujo
significativamente la concentración de azúcares y
antocianinas, pero no alteró la concentración de
ácidos orgánicos en Cabernet Sauvignon y
Sangiovese. Además, la magnitud de la reducción fue
mucho mayor en las antocianinas que en los azúcares
en respuesta a la limitación de la fuente, lo que
demuestra un desacoplamiento entre azúcares y
antocianinas en ambos cultivares. Aunque los
patrones de respuestas para azúcares, ácidos
orgánicos y antocianinas totales a la limitación de la
fuente son bastante consistentes entre los cultivares,
la modificación de las composiciones de antocianinas
depende del cultivo. Por lo tanto, la baya de uva
maneja el destino metabólico del carbono de tal
manera que la acumulación de azúcar se mantiene al
máximo a expensas de los metabolitos secundarios
(por ejemplo, antocianinas) bajo limitación de
fuente.