Identificación molecular de Mycobacterium tuberculosis en bovinos

ABSTRACT

La tuberculosis bovina continuó siendo un problema resurgente en algunos países, especialmente

en áreas endémicas debido al hecho de que el sistema de vigilancia de la salud humana y animal
no se adopta para diagnosticar la infección. Esta crisis se puede atribuir al compartir el mismo
hábitat, especialmente en las zonas rurales. En el presente estudio, se recogieron un total de 148
muestras de ganado para aislamiento durante un período de 3 años de ganado con y sin lesiones,
de las cuales 67 aislamientos se obtuvieron por cultivo. El cual 51 aislamientos fueron identificados
como Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) por IS6110 PCR, de los cuales 43 (84.3%)
fueron identificados como M. tuberculosis y 08 (15.6%) fueron identificados como M. bovis
mediante el uso de PCR multiplex de fragmentos de 12.7 kb. Entre estos, 31 aislamientos que
fueron positivos para IS6110 PCR fueron sometidos a spoligotyping y revelaron 28 aislamientos
pertenecientes a la cepa MANU1 de M. tuberculosis. Este estudio indica claramente que la alta
prevalencia de M. tuberculosis que M. bovis en bovinos se identificó mediante cultivo y por
métodos moleculares M. tuberculosis puede afectar la producción de ganado en contradicción con
los pensamientos anteriores. Este estudio especula que la infección por la cepa M. tuberculosis
MANU1 en el ganado podría deberse a la propagación de humanos u otros huéspedes no
específicos en áreas endémicas de tuberculosis. Aunque la tuberculosis bovina debida a M.
tuberculosis en el ganado no se considera una amenaza grave en todo el mundo, en países donde
la TB humana es endémica, se debe considerar la infección por M. tuberculosis en el ganado.

1. Introducción

La tuberculosis bovina (BTB) causada por Mycobacterium tuberculosis (M.

tuberculosis) y Mycobacterium bovis (M. bovis) es una enfermedad infecciosa altamente
prevalente que afecta al ganado y a los humanos en todo el mundo y la India es uno de los
22 países de alta carga (Mukhopadhyay y Ganguly, 2013 ) Se estima que más de 50
millones de bovinos están infectados con M. bovis en todo el mundo, lo que resulta en
una pérdida económica de aproximadamente $ 3 mil millones (Grange y Yates, 1994).
Informes recientes indican un aumento en la prevalencia de tuberculosis entre el ganado.
Varios trabajos de investigación realizados en Tamil Nadu (India) indican una prevalencia
tan alta como 13.4% de BTB entre el ganado (Yesuf, 2012). Aunque M. tuberculosis y M.
bovis se consideran principalmente como patógenos específicos del huésped, la capacidad
de las bacterias para infectar una amplia gama de huéspedes y su capacidad para cruzar
las barreras de las especies ha llevado a la transmisión de la enfermedad entre humanos y
animales. En la India, los tabúes culturales y religiosos prevalecientes han dado como
resultado la naturaleza endémica de la enfermedad, que es de importancia para la salud
pública. Por lo tanto, vale la pena considerar la seguridad del alimento animal de origen,
especialmente la tuberculosis, teniendo en cuenta no solo la endemicidad de la
tuberculosis y su asociación con enfermedades inmunosupresoras, sino también la
aparición de resistencia a los medicamentos entre M. tuberculosis. La estrecha asociación
de humanos y animales ha resultado no solo en zoonosis sino también en sospecha de
posible zoonosis inversa.
La tuberculosis bovina continuó siendo un problema importante en países donde
los principios de prueba y sacrificio no son asequibles y estos programas son parcialmente
efectivos debido al hecho de que la vida silvestre actúa como reservorio y mantiene la
infección (Sechi et al., 2001). Debido a la participación de humanos, animales
domesticados y animales salvajes, solo un estudio bien realizado que involucre a todos
estos proporcionará la magnitud exacta del problema (Srivastava et al., 2008). Esto
plantea un desafío formidable para controlar y erradicar las enfermedades
micobacterianas. Varios estudios (Prasad et al., 2005; Mishra et al., 2005; Ocepek et al.,
2005; Chen et al., 2009; Du et al., 2011; Romero et al., 2011; Spicic et al., 2012; Thakur et
al., 2012) informaron el aislamiento y la caracterización de M. tuberculosis y M. bovis
entre el ganado vacuno, mientras que la transmisión de enfermedades entre las especies
sigue siendo una hipótesis. Por lo tanto, el presente estudio se intentó aislar y caracterizar
molecularmente los aislados bovinos y compararlos con los aislados humanos.
2. Materiales y Métodos
2.1. Colección de muestra
Se recogieron un total de 148 muestras de ganado demacrado sospechoso de
tuberculosis y también de las lesiones nodulares caeseous de matadero y muestras post
mortem. Las muestras incluyen nódulo caeseous en pulmones (78), ganglios linfáticos
(29), bazo (20) y muestras de leche (21). Todas las muestras se recogieron asépticamente
en recipientes estériles con tapa de rosca para evitar la contaminación externa y se
enviaron al laboratorio en hielo para su posterior procesamiento.
2.2. Aislamiento
Las muestras se procesaron para aislar las micobacterias siguiendo un método
modificado (Whitlock et al., 1991) usando cloruro de hexa decil piridio (HPC) como
descontaminante. Aproximadamente 5 g de muestras de tejido (pulmón caseoso, ganglio
linfático y bazo) se homogeneizaron en un homogeneizador de tejidos en condiciones
estrictamente estériles después de la adición de 10 ml de solución salina estéril. Esto se
centrifugó y el líquido de la parte superior se procesó para descontaminación con 10 ml de
HPC al 0,9% para descontaminación y se incubó a 37 ° C durante 18 h. De manera similar,
se centrifugaron 10 ml de muestra de leche a 3000 rpm durante 10 minutos. El sedimento
se resuspendió en 10 ml de HPC al 0,9% para descontaminación y se incubó a 37 ° C
durante 4 h. Después de la descontaminación, las muestras se centrifugaron a 5000 rpm
durante 5 minutos y se lavaron con PBS estéril dos veces. Se preparó un frotis a partir de
este sedimento para su examen microscópico mediante tinción rápida con ácido para la
detección inicial. La muestra descontaminada (100 ml) se inoculó tanto en medio sólido
Lowenstein-Jensen (LJ) como en caldo Middlebrook 7H9 con y sin glicerol (piruvato de
sodio) por duplicado. Todos los cultivos se incubaron a 37 ° C durante 10-16 semanas para
la aparición de crecimiento visible en medio LJ. En el caldo 7H9 del arroyo Medio, el
crecimiento del organismo se confirma mediante tinción rápida con ácido.
2.3. Identificación bioquímica
Todos los aislamientos se sometieron a pruebas bioquímicas, a saber: morfología
de la colonia, producción de pigmento, temperatura, patrón de crecimiento, producción
de niacina, prueba de catalasa termoestable, reducción de nitrato y resistencia a la
hidrazida de ácido carboxílico (TCH) de tiofeno 2, prueba de pirazinamidasa según
Palomino et Alabama. (2007) Todo el procedimiento de prueba bioquímica y la
interpretación de los resultados se realizaron utilizando los kits de prueba bioquímica para
micobacterias (Himedia Laboratories Pvt. Ltd, India).
2.4. Caracterización molecular
2.4.1. IS6110 PCR
El ADN genómico se extrajo del cultivo positivo usando el kit de sangre y tejido
DNeasy (Qiagen, Alemania) y se verificó la pureza y se cuantificó. Los cebadores de
amplificación para PCR de un solo tubo se basaron en la secuencia descrita anteriormente
(Collins et al., 1993). El ADN objetivo utilizado para la amplificación fue un fragmento de
445 pb de IS6110 utilizado para identificar el complejo Mycobacterium tuberculosis. La
reacción se sometió a desnaturalización inicial a 94 ° C durante 10 minutos seguido de 30
ciclos de amplificación que consisten en desnaturalización a 94 ° C durante 1 minuto,
recocido a 54 ° C durante 1 minuto y extensión a 72 ° C durante 1 minuto con un final
extensión a 72 C por 5 min. Los cebadores utilizados fueron:
IS6110F (5´-GACCACGACCGAAGAATCCGCTG)
IS6110 R (5´- CGGACAGGCCGAGTTTGGTCATC)
La amplificación por PCR se llevó a cabo en mezclas de reacción de 25 ml que
contenían 1 ml de molde de ADN, 20 pM de 1 ml de cebador directo e inverso, 12.5 ml de
mezcla maestra de PCR de colorante rojo 2X (Amplicon) y 9.5 ml de agua libre de
nucleasas. El producto final amplificado por PCR se separó por electroforesis en gel de
agarosa al 1,5% y se documentó en gel.
2.4.2. PCR multiplex basada en un fragmento de 12.7 kb
Se realizó un ensayo de tubo múltiple multiplex-PCR basado en un fragmento de 12,7 kb
para la identificación diferencial de M. tuberculosis y M. bovis. Las secuencias de
cebadores y el rendimiento de la PCR fueron informados previamente por Thangaselvam
et al. (2009) Tres cebadores oligonucleotídicos que comprenden un cebador directo
común de 12.7 kb F y dos cebadores inversos, que incluyen R1 de 12.7 kb específico de M.
bovis amplificado una secuencia de 823 pb y R2 de 12.7 kb específico de M. tuberculosis
amplificado una secuencia de 389 pb. Los cebadores utilizados fueron
12.7 kb F (5´-CACCCCGATGATCTTCTGTT)
12.7 kb R1 (5´- GCCAGTTTGCATTGCTATT)
12.7 kb R2 (5´- GACCCGCTGATCAAAGGTAT)
La reacción se sometió a una desnaturalización inicial de 94 ° C durante 10 minutos
seguido de 30 ciclos de desnaturalización a 94 ° C durante 1 minuto, recocido a 54 ° C
durante 1 minuto y extensión a 72 ° C durante 1 minuto con una extensión final a 72 ° C C
por 5 min. La amplificación por PCR se realizó en mezclas de reacción de 25 ml que
contenían 1 ml de plantilla de ADN, 20 pM de 1 ml de cebadores directos e inversos, 12,5
ml de mezcla maestra de PCR de colorante rojo 2X y 8,5 ml de agua libre de nucleasas. Los
amplicones se analizaron por electroforesis en gel de agarosa en un gel de agarosa al
1,5%. Los geles fueron visualizados y documentados utilizando un sistema de
documentación automático.

2.4.3. Spoligotyping
Se utilizaron cebadores de locus-DRa directo (0.2 mmol / ml) y DRb (0.2 mmol / ml)
para la spoligotipación (Kamerbeek et al., 1997). Los espaciadores entre las repeticiones
directas en la región objetivo se amplificaron usando dos cebadores de 18 nucleótidos
(cebador 50-CCAAGA GGGGACG-GAAAC-3´ y cebador biotinilado 5´-
GGTTTTGGGTCTGACGAC-3´). Los productos de PCR se hibridaron luego con una
membrana Biodyne C (Isogen Bioscience, Maarsen, Países Bajos). Esta membrana contiene
secuencias espaciadoras oligoméricas sintéticas inmovilizadas derivadas de la región de
repetición directa de M. tuberculosis H37Rv y M. bovis BCG. El ADN hibridado se detectó
mediante el uso de un kit de quimioluminiscencia mejorado (kit de detección de ECL
Amersham, Little Chalfont, Reino Unido), con exposición a la película de rayos X que
produce un patrón o perfil que recuerda un código de barras. Los perfiles se compararon
con el perfil de spoligotype aislado de M. tuberculosis disponible con la base de datos
internacional de spoligotype SpoldB4 y "Spotclust" para asignar familias de cepas según la
definición / convención estándar. Los aislamientos con patrones de spoligotype presentes
en (SpolDB4 se etiquetaron automáticamente con un número de "tipo compartido" y los
perfiles únicos se mencionaron como "nuevos".
3. Resultados
3.1. Aislamiento

Fig. 1. Aislamiento por medio Loweinstein En el presente estudio, de 148

Jensen. Medio LJ que muestra colonias de color muestras sospechosas de tuberculosis, el
tostado, rugosas y crujientes. cribado inicial por tinción con ácido rápido
reveló que el 52% (77) de las muestras
mostraron positivo para organismos ácidos rápidos. El aislamiento por cultivo reveló
crecimiento en el 45,2% (67) de las muestras. Las muestras de pulmón caseoso, ganglio
linfático preescapular y leche mostraron 60% (47), 58.6% (17) y 14.2% (3) positividad
cultural respectivamente, mientras que el bazo mostró un crecimiento nulo. Los
aislamientos mostraron características culturales variables desde colonias lisas a crujientes
de pan en colonias en medio Lowenstein Jensen después de 10 días a 10 semanas de
incubación a 37 ° C (Fig. 1). Se observó que la descontaminación con HPC era eficiente en
el aislamiento de micobacterias de las muestras. El material pulmonar caseoso y los
ganglios linfáticos preescapulares
proporcionaron un buen crecimiento en
comparación con las muestras de bazo.
Aunque las micobacterias podrían aislarse
de 3 muestras de leche, depende de la
cantidad de organismos excretados y la
etapa de infección.
3.2. IS6110 PCR y PCR multiplex
Las muestras positivas culturales se
sometieron a PCR IS6110 que amplificó el
34,4% (51) de los aislamientos. El tamaño
del amplicón para la PCR IS6110 fue de 445
pb (Fig. 2). Las muestras positivas por
IS6110 PCR se sometieron a PCR multiplex
para la diferenciación de M. bovis y M.
tuberculosis dirigido a un fragmento de 12,7
kb que mostró un 84,3% (43) de
aislamientos producidos con un tamaño de
amplicón de 389 pb que indica M.
tuberculo-sis y un 15,6% (8) los aislamientos produjeron un tamaño de amplicón de 823
pb que indica M. bovis (Fig. 3). La presentación general de los resultados se proporciona
en la Tabla 1.
Todos los aislamientos se sometieron a una prueba de catalasa semicuantitativa,
prueba de catalasa estable al calor, prueba de niacina, prueba de pirazinamidasa y TCH y
se notaron variaciones en los caracteres bioquímicos entre las diferentes pruebas. Ocho
aislados mostraron resultados negativos para la prueba de niacina y susceptibles a TCH.
Entre los aislamientos restantes hubo variación en algunas pruebas bioquímicas, aunque
la mayoría de las pruebas bioquímicas se realizaron de acuerdo con M. tuberculosis. Por lo
tanto, la caracterización precisa de los aislamientos fue difícil con las pruebas bioquímicas
con respecto a las micobacterias.
3.3. Spoligotyping
La región DR que incluye los espaciadores intercalados de las cepas del complejo
M. tuberculosis se amplificó utilizando los cebadores DRa y DRb por PCR. El DRa está
marcado con biotina, el ADN amplificado podría usarse directamente para la hibridación
con los 43 oligonucleótidos espaciadores, que se unieron covalentemente a una
 membrana. La diferencia en la presencia de tales secuencias espaciadoras entre los
aislados clínicos diferenciará varias cepas de micobacterias. El ADN de 31 aislamientos que
fueron positivos para la PCR IS6110 se seleccionó al azar y se envió al Instituto Nacional de
Investigación en Tuberculosis (NIRT), Chennai (Tamil Nadu, India) para spoligotipar para
identificar la cepa más prevalente del organismo MTBC. El patrón de espoligo de 28

aislamientos se agruparon en un grupo, mientras que los 3 aislamientos restantes no se

ajustaban a ninguno de los patrones de la base de datos. El spoligotyping revelado entre
31 aislamientos se encontró que 28 aislamientos eran M. tuberculosis perteneciente a
MANU 1 como se muestra en la Fig. 4.

Fig. 2. Amplificación por PCR de la región de 445 pb en IS6110 dirigida al complejo M. tuberculosis.
Marcador de masa molecular de ADN - escalera de 100 pb
Carril (1–10) (13–23) - Aislamientos de ganado
Carril 11 - Control positivo H37RV
Carril 12 y 24 - Control negativo
4. Discusión
La tuberculosis sigue siendo un problema importante de salud animal, así como un
problema de salud pública a nivel mundial. India se ha convertido en un punto de acceso
para la tuberculosis, testigo de una de las tasas de incidencia más altas. Aunque las
estrategias de control se desarrollaron e implementaron en diferentes niveles, la
tuberculosis sigue siendo un desafío científico y se complica con la aparición de formas
resistentes a los medicamentos. Las estrategias desarrolladas hacia el control de la
tuberculosis hasta ahora se han dirigido a seres humanos o animales por separado. La
capacidad de M. tuberculosis y M. bovis y sus spoligotypes para infectar y transmitir
enfermedades a través de varias especies deben ser consideradas seriamente.
El presente estudio mostró que el pulmón caseoso y el ganglio linfático
preescapular pueden ser la muestra ideal para el aislamiento de micobacterias de
animales muertos. El bazo reveló la presencia de organismos ácidos resistentes, pero se
encontró negativo para el cultivo. Aunque M. tuberculosis podría aislarse de las muestras
de leche, la excreción de organismos del complejo M. tuberculosis (MTBC) ocurre solo en
la etapa avanzada de la infección. Esa podría ser la razón de la positividad cultural en
algunos casos. Otros estudios han informado un aislamiento relativamente mayor de M.
bovis de las glándulas linfáticas y el pus en comparación con otras muestras como el
hígado y los pulmones (Leite et al., 2003).
Tabla 1
Resultados de aislamientos por tinción de FA, crecimiento cultural, IS6110PCR y PCR multiplex.

Sl.No. Muestras Positividad Positividad Positividad Multiplex PCR 12.7 kb

1 Caseous lung 65 (51) 60 (47) 41(32) 87.5 (28) 12.5 (4)
(n = 78) ácida rápida % cultural %(n) IS6110 %(n) M.tuberculosis %(n) M.bovis %(n)
(n)
2 Pre scapular 58.6 (17) 58.6 (17) 55.1 (16) 81.3 (13) 18.8 (3)
LN
(n = 29)
3 Spleen 30 (6) – – – –
(n = 20)
4 Milk 14.2 (3) 14.2 (3) 14.2 (3) 66.6 (2) 33.3 (1)
(n = 21)
5 Total 52 (77) 45.2 (67) 34.4 (67) 84.3 (43) 15.6 (8)
(n = 148)
Fig. 4. Spoligotyping de M. tuberculosis aislamientos.
Fila 1–7: aislamientos de M. tuberculosis que muestran linaje Manu 1
Fila 8: H37RV (cepa de referencia)
Fila 9: M. bovis BCG
Fila 10: control negativo
Fila 11–31: aislamientos de M. tuberculosis que muestran linaje Manu 1

Entre 148 muestras recolectadas, 67 muestras mostraron positividad por cultivo,

que es muy alta. Esto podría deberse al hecho de que las muestras fueron recolectadas
específicamente de animales que estaban muy demacrados y con sospecha de
tuberculosis. Cassidy (2006) informó que la inspección post mortem reveló que la mayoría
de las lesiones de tuberculosis bovina estaban localizadas en el tracto respiratorio, lo que
sugiere que la transmisión de aerosoles es la principal vía de transmisión. Whipple y col.
(1996) observaron que M. bovis se aisló principalmente de los ganglios linfáticos
traqueobronquiales y mediastínicos y también mostró que no todo el ganado desarrolla
lesiones visibles. Por lo tanto, las muestras deben recolectarse no solo de material
pulmonar caeseous sino también de ganglios linfáticos. Los resultados obtenidos fueron
contrarios a los resultados obtenidos por Ameni et al. (2013) y Waters et al. (2010)
quienes opinaron que M. tuberculosis es avirulento y la colonización ocurre sin patología.
Mientras que en este estudio, todas las muestras se aislaron de lesiones caseosas, que en
etapas avanzadas pueden eliminar las bacterias en el medio ambiente, lo que lleva a una
mayor diseminación. Prasad y col. (2005) informaron que entre el 15 y el 28% de los
animales en la India estaban infectados con M. tuberculosis según lo evaluado por PCR
anidada y cultivo como resultado de la transmisión de humano a ganado, lo que podría
constituir un grave peligro para la salud pública. Además, también observó la presencia de
M. tuberculosis y M. bovis en la misma muestra que la infección mixta. Thakur y col.
(2012) detectaron M. bovis y M. tuberculosis en un rebaño organizado y en el norte de
India y declararon que M. tuberculosis en el ganado con mayor frecuencia produce una
infección aguda con sensibilización a corto plazo a la tuberculina. Al contrario de esto,
Ameni et al. (2013) estudio en Etiopía no pudo demostrar la transmisión de humanos a
bovinos y M. tuberculosis es menos virulento en bovinos. Spicic y col. (2012) describieron
un caso de transmisión de M. tuberculosis de humanos a bovinos con perfiles MIRU
idénticos para ambos aislamientos. Sjogren y Hillerdal (1978) citaron varios ejemplos de
transmisión de humano a ganado y destacaron el peligro potencial que los pacientes con
tuberculosis pulmonar con baciloscopia positiva representan para los animales. Grange y
Yates (1994) informaron que los trabajadores agrícolas que orinan en establos podrían
representar una fuente de infección para los animales. Romero y col. (2011) informaron
sobre humanos como fuente de infección por M. tuberculosis en bovinos en España con
perfil de spoligotipado de SIT 2537, SIT 1564 y SIT58.
De 148 muestras de tejido analizadas por tinción de FA, el 52% (77) muestras
mostraron presencia de organismos de FA. Tang y col. (2004) mostraron que la
sensibilidad de la tinción de FA será aproximadamente del 60%. La detección microscópica
de especies de micobacterias carece de sensibilidad principalmente debido al
requerimiento de una alta carga bacteriana con un límite de detección de más de 104
micobacterias por ml. Sulieman y Hamid (2002) informaron que el 53,3% de las 120
lesiones caseosas fueron positivas por tinción de FA. Resultados similares también se
observaron en nuestro estudio ya que las muestras son de casos sospechosos de
tuberculosis.
4.1. Aislamiento e identificación
El aislamiento tradicional por cultivo se considera el estándar de oro para el
diagnóstico presuntivo y la confirmación rutinaria de la infección (Mehdikhani y Rokni,
2012). La tasa de aislamiento en este estudio es del 45,2% en comparación con el 52% de
positividad para FA. La reducción en la tasa de aislamiento podría atribuirse a una
concentración reducida de organismos en la muestra o debido al protocolo de
descontaminación seguido. La contaminación fúngica adicional del cultivo también
contribuyó a reducir el aislamiento. El cultivo con medio LJ con y sin glicerol (piruvato de
sodio) se usó para el aislamiento de M. tuberculosis y M. bovis. Se observó que el
crecimiento fue rápido en los medios líquidos en comparación con los medios sólidos. La
presencia adicional de una mayor cantidad de organismos con FA en la muestra dio como
resultado colonias visibles dentro de 2 a 4 semanas. M. bovis mostró colonias suaves y
húmedas típicas según lo declarado por Kubica et al. (2006), mientras que M. tuberculosis
mostró colonias de color beige, rugosas con apariencia de pan rallado. La falta de enzima
piruvato quinasa en M. bovis es la razón del crecimiento disgénico en presencia de
glicerol.
La identificación precisa de los aislados de micobacterias a nivel de especie y
subespecie es crucial para la identificación. La caracterización bioquímica reveló pocas
variaciones entre los aislamientos clínicos que dificultan la identificación. Además, la
principal limitación es el tiempo involucrado para cada prueba. Por lo tanto, se intentaron
pruebas bioquímicas junto con la caracterización molecular en este estudio.
4.2. IS6110 PCR y PCR multiplex
La identificación molecular de MTBC se llevó a cabo dirigiéndose a diversas
regiones como las regiones codificadoras de antígeno IS6110, 65 kDa y 35 kDa. La mayoría
de los estudios se han dirigido al elemento multicopia IS6110 que se distribuye por todo el
genoma. M. tuberculosis lleva múltiples copias de IS6110 y M. bovis lleva una o dos copias
(Fomukong et al., 1994). En este estudio, 51 aislamientos mostraron amplificación
específica para la PCR IS6110. La reducción de la positividad que el cultivo podría deberse
a la presencia de micobacterias no tuberculosas que carecen de la secuencia de inserción.
Esto podría confirmarse aún más mediante pruebas bioquímicas. Además, también se
informó que los aislados clínicos carecerán de esta región en áreas endémicas,
especialmente en el sur de la India (Das et al., 1995).
La PCR multiplex dirigida a un fragmento de 12,7 kb se empleó en este estudio
para diferenciar M. tuberculosis y M. bovis. Se encontró que el 84.3% (43) aislamientos
pertenecen a M. tuberculosis y el 15.6% (8) aislamientos pertenecen a M. bovis. Hallazgos
similares también fueron reportados por Rekha et al. (2015) quienes opinaron que esto
podría deberse a la posibilidad de transmisión de humano a ganado. Estudios anteriores
han informado que M. bovis es el único agente etiológico para la tuberculosis bovina,
mientras que el escenario actual muestra especies completamente diferentes. El
aislamiento de altas tasas de M. tuberculosis podría deberse a la estrecha interacción del
ganado humano. El historial detallado de las muestras recolectadas revela que la mayoría
del ganado comparte un contacto cercano con los seres humanos.
4.3. Spoligotyping
Spoligotyping puede usarse como herramientas potencialmente poderosas para la
detección y diferenciación simultánea de M. tuberculosis. Los estudios de spoligotyping de
la India muestran un predominio diferencial de cepas entre las regiones del sur (TbD1 +
cepas y variantes) y norte (TbD12 CAS y variantes) del país. Se encontró que la cepa de
Asia central (CAS) era dominante en las cepas indias del norte y este de África (EAI) que se
observan con mayor frecuencia en las regiones del sur. Las eliminaciones de firmas RD239
y RD 750 definen aislamientos pertenecientes a los linajes "Indo-Oceanic", "East African /
Indian" - EAI y CAS. Recientemente se identificó "MANU" en India, que se encontró en
Mumbai (Chatterjee et al., 2010). Basado en la pérdida sucesiva de secuencias de ADN
espaciadoras, MANU se subdividió tentativamente en MANU 1, MANU2 y MANU3.
Mumbai (Almeida et al., 2005) han informado sobre cepas adicionales de Beijing asociadas
con altas proporciones de resistencia a múltiples fármacos. Los informes sobre
spoligotyping de aislamientos de ganado son raros y en el presente estudio spoligotyping
de los aislamientos mostraron que veintiocho aislamientos agrupados a la cepa MANU 1.
La cepa MANU1, aparte de su alta presencia en Mumbai, se encuentra concentrada en el
sur de Andhra Pradesh (Distrito de Chitoor) (Thomas et al., 2011). Dado que la mayoría de
los animales para el sacrificio fueron transportados desde Andhra Pradesh, existe la
posibilidad de que se produzca la cepa MANU 1 entre el ganado. Según lo informado por
Ocepek et al. (2005) la transmisión de humano a ganado ha sido probada por IS6110 RFLP.
De manera similar, en este estudio, la cepa MANU 1 identificada por spoligotyping sugiere
que se ha producido un posible derrame, ya sea de humanos o de otros huéspedes, lo que
requiere confirmación adicional. Además, la prevalencia predominante del aislamiento de
la cepa MANU1 debe evaluarse por su capacidad para infectar y propagarse entre el
ganado. El alto nivel de M. tuberculosis en el ganado encontrado en este estudio, en
contraste con otras partes del mundo, probablemente sea el resultado de altos niveles de
tuberculosis no tratada en la población humana, junto con la migración humana no
organizada, compulsiones económicas y normas religiosas en algunos países en desarrollo.
donde la vaca se considera un animal sagrado. Similar a los aislamientos humanos, se
debe establecer una base de datos para aislamientos de animales para comparación y
análisis. Dado que la resistencia a los medicamentos entre los aislados humanos se está
convirtiendo en un grave problema de salud pública, la transmisión de M. tuberculosis
entre el ganado conducirá a una mayor diseminación de la infección.
5. Conclusión
En conclusión, pudimos aislar un alto porcentaje de M. tuberculosis que M. bovis
del ganado. Los resultados de spoligotyping revelaron la prevalencia predominante de la
cepa MANU1 entre los aislados de ganado, lo que indica una posible transmisión de
humano a ganado. Por lo tanto, se deben realizar más estudios para tener una base de
datos de spoligotyping para aislamientos de animales y se debe identificar la razón de la
prevalencia de MANU1 entre el ganado. Las estrategias de control para la tuberculosis
deben incluir áreas donde la TB humana y bovina coexista. Si se produce una zoonosis
inversa, esto puede conducir a un aumento de la carga de micobacterias en la región
debido a una mayor excreción basada en la masa corporal del ganado, que podría ser una
amenaza grave, especialmente si se trata de micobacterias resistentes a los
medicamentos.