TRANSCRIPCIÓN

BIOLOGÍA CELULAR

Transducción señales

Remigio

(trans: mate).

En este desglose de los niveles de organización íbamos en aquel nivel en que se organiza la materia
llamado nivel supramolecular. Un ejemplo es la membrana, que limita y comunica compartimentos.
También vimos el ejemplo del citoesqueleto en que las proteínas generan, mueven estructuras, etc.
Todo esto ocurre en respuesta a señales ambientales. Una molécula libre no hace nada si no está en
comunicación con otra molécula. Ya se ha observado en la membrana y los aspectos del citoesqueleto,
uno de los temas a entender en la biología es cómo los seres vivos responden a señales del ambiente y a
eso se le llama transducción de señales. El punto es saber cómo algo del ambiente hace que el sistema
biológico tenga procesos, cambios, que permitan la vida.

He invitado al Dr. Julio Tapia que es profesor en el ICBM y trabaja en aspectos de transducción de
señales que producen respuestas particulares como por ejemplo las (…)… la transducción de esa señal
ambiental propia de la respuesta celular, nos hablará el doctor ahora.

Gracias por la introducción del profesor López. Hoy veremos cómo responde a una señal una célula.
Primero, hay que decir que a la célula le llegan distintos tipos de señales: para que crezcan, para que
detengan el crecimiento, para que sobrevivan, para dañarla, para morir, muy utilizado por sistemas
como el sistema inmune. La integración de las señales es a lo que la célula finalmente responde
(cambiando la expresión de los genes, generando factores intracelulares, moviéndose).

Primero, se verá un poco algunos puntos. Dependiendo de la distancia dependerá en

algo la intensidad de la señal. Las señales pueden actuar a corta o larga distancia.

Cuando es a corta distancia, o cuando la misma célula produce una señal que ella
misma usa (que es típico de células cancerosas) se llama señalización autocrina.

También existe el contacto entre dos células, algo que se da mucho en etapa
embrionaria durante el desarrollo, también por el sistema inmune que
implica señales que son interacciones de membrana como las presentadoras
de antígenos y los linfocitos T.
También las señales paracrinas, que son de distancias cortas.
Cuando la señal viaja una distancia corta se le llama
paracrina, que puede ser a pocas células de distancia.

Están las endocrinas que recorren grandes distancias puesto que las señales viajan por la sangre, las
cuales se conocen como hormonal y tienen como blanco a células que tienen en su superficie moléculas
blanco de la señal.

También están las células sinápticas que tienen corta distancia dado el axón, pero la distancia que viaja
la señal desde que se emite hasta que se secreta la señal, es ínfima, pues la sinapsis es de una célula a
otra, sin embargo, se produce a gran distancia puesto que el axón es largo, y también la especificidad
depende de la naturaleza de la señal. Si es que la superficie ve o no una molécula capaz de recepcionar
el neurotransmisor también hace variar la conexión. Todo esto es respecto a señales hidrofílicas, o sea,
en medio acuoso.

Señales hidrofóbicas, como el cortisol u otras, que son hormonas esteroidales, tienen como fuente de
origen el colesterol. Estas tienen una particularidad dadas sus características, principalmente que
atraviesan la membrana plasmática y esto porque van acompañadas de proteínas transportadoras o
carrier.
Estas tienen en su superficie algunos determinantes que pueden ser reconocidos por proteínas en la
membrana plasmática de las células blanco. La proteína llega a la membrana plasmática y ahí recién
libera a la hormona que es luego, dentro del citoplasma, unida a otra proteína que la llevará al núcleo.

Estas proteínas son receptores intracelulares que tienen una estructura común, que tienen 3 regiones
importantes: una donde une la hormona, una de unión al DNA y una de activación de la transcripción.
A través de estos dominios unen y activan la transcripción. Esto suena a una proteína de transcripción
muy importante que se llaman “factores de transcripción”. Estos receptores se comportan como
factores de transcripción. Esto porque tienen una parte, un dominio, que es capaz de contactar al DNA
en los surcos mayores y menores, y un dominio que activará la transcripción. Cuando estos receptores
unen a la hormona (ligando) cambian sus conformaciones transformándose en un factor de
transcripción yendo al núcleo para unirse a una región del DNA que es la que está normalmente antes
de todos los genes llamada región promotora, y esto es fundamental para gatillar la transcripción de
ciertos genes.

La célula no sólo está en influencia de señales hidrofóbicas, la gran mayoría de las influencias son
hidrofílicas. Por esto, la membrana plasmática es fundamental. La MP no es simplemente una cosa
hidrofóbica que separa ambientes, sino que permite intercambios y responder a elementos externos.
Entonces la evolución tomó muchos años para generar estos sistemas “respondedores” en las células y
esto por una señal hidrofílica no es capaz de entrar a la célula. Esto debido a que hay una generación de
proteínas y elementos que dan cuenta de la respuesta de la célula frente a la señal del medio ambiente.
Esta cadena de eventos que ocurren dentro de la célula desde que se contacta la señal hidrofílica se
llama “vía de señalización”.

Hay vías que impactan distintos tipos y modos de activación.

Elementos comunes en las rutas de señalización.

Existen distintos tipos de receptores, hay acoplados a proteína G, el que capta

la luz en la retina.

Otros de tirosina quinasa asociado a la insulina.

Esto no se verá hoy, a menos que haya clase de apoptosis, el receptor con dominio de muerte.
Receptores de pares, hétero-dímero que requiere dos receptores distintos que se unen al ligando y
señalizan, importantes en cáncer y desarrollo. Y no sólo están presentes en la superficie; por ejemplo el
receptor que está en la membrana del RE, cuya señal es una proteína mal plegada dentro del retículo y
luego de detectarlo genera una señal hacia el citosol para que las proteínas sean corregidas.

Las proteínas señalizadoras relevan la señal dentro de la célula entregando información a otra, en
cascada. Hay quienes integran las señales que llegan para luego señalizan río abajo. Hay segundos
mensajeros que permiten amplificar la señal. El AMPc o del GMPc , que son segundos mensajeros, son
moléculas pequeñas que se producen en gran cantidad que difunden en el citosol. También el ión calcio
se considera como esto junto al IP3 y el diacilglicerol que difunde harto.

Otro elemento importante son los dominios funcionales. Probablemente se les mencionó que el
concepto de un gen una proteína queda corto, pero el hecho de que las proteínas tengan una función, ya
no funciona puesto que las proteínas tienen distintos dominios y cada uno tiene una función específica.
Las proteínas son tridimensionales y un dominio es una parte tridimensional con una función
específica. Por ejemplo, una proteína kinasa que fosforilan o lípidos. Las proteínas tienen loop de
activación que son como compuertas que cuando se abren generan el cambio en el sustrato. Otras
tienen el dominio tirosina-kinasa, y las células pueden tener el dominio para la kinasa pero pegados a
una parte de la membrana y no a la otra, estas diferencias son importantes en las funciones celulares.
Las proteínas también pueden chocar, por ejemplo en el citosol, pero no habrá mayor interacción si no
hay un dominio para esta. Lo importante de los dominios es que tienen surcos, espacios, donde
intereactúan. Hay dominios de interacción de proteínas denominados dominios pH. Si los tienen
pueden unir lípidos fosforilados en la memebrana plasmática: fosfoenositol bifosfato ??? Cuando se
produce un fosfoenositol bifosfato en la MP puede reconocerse y recular en la membrana plasmática.
Las proteínas no tienen un solo dominio funcional, se muestra un ejemplo de una que tiene 5 dominios.

Dado que las proteínas que se van activando y apagando tiene que haber una alternancia entre estos
estados on/off, y esto depende de otra proteína. ¿Cómo se producen? Una de las más conocidas es por
fosforilación y desfosforilación. Por ejemplo, una proteína apagada es fosforilada por una kinasa y se
enciende pues cambia su conformación. ¿Cómo se apaga? Hay proteínas que pueden remover el
fosfato, o sea desfosforilar, y esas son fosfatasas.

¿Qué aminoácidos son fosforilables? ¿Qué condición se tiene para que un ácido sea fosforilable?
Deben tener un OH libre. La tirosina, la serina y la treonina.
En la evolución aparecieron sólo dos tipos de kinasas: las tirosina-kinasas y las serina-treonina-kinasas.
Resulta que el sitio activo de las serina-treonina-kinasas es más chico. La fosforilación de los últimos 3
aminoácidos genera cambios muy grandes, cambios conformacionales, y por tanto los “loop” se abren
y activan, cosa que ocurren en muchos switch.

Otra forma es por un intercambio de un nucleótico de guanina. Estas tienen un sitio activo que unen
una molécula de GTP, cuando llega la señal del exterior hay un intercambio de GDP por GTP. El sistio
activo hidroliza el GTP cambiándolo por GDP, o sea se autoapaga. Cuando ocurre la hidrólisis y se
apaga no hay más señal de on.

Las proteínas RAS también son importantes, una proteína super importante en cáncer, es un oncogén.
Cuando tiene GTP se nota en el cambio conformacional que hace que esta continúe río abajo.

Todo esto no puede estar siempre encendido. ¿Cómo se apagan las señales?
Por ejemplo, un receptor unido a un ligando se internaliza en un endosoma y dentro se separa el
receptor y este se recicla hacia la membrana nuevamente. En algunos casos esta dupla receptor/ligando,
este endosoma se fusiona con un lisosoma y todo se degrada ahí reciclándolo.

Otra forma es que un receptor sea fosforilado por una kinasa apagándolo río abajo.
Hay proteínas que son apagadas más adelante, río abajo.
También, más río abajo todavía hay proteínas inhibitorias de algún evento.

Los receptores acoplados a proteína G, por los años 60 fueron boom de estudios en biología, esto
porque hay muchísimos y, esto último, porque un gran porcentaje de nuestro DNA está asignado a
proteína G, y además los biólogos estaban enfocados en los órganos de los sentidos donde hay muchos
de estos receptores. Es más, hay secuencias de DNA que indican que podrían ser proteínas G, pero no
se conoce su ligando. Todos están hechos de una cadena que atraviesa 7 veces la membrana y, entre los
dominios transmembrana 5 y 6 hay un dominio intracelular muy importante que permite a los
receptores interactuar con la proteína G. Este tipo de receptores está en la mayoría de las recepciones
de señales del mundo exterior. En humanos hay 700 receptores en total, quizás un poco más; en cambio
los ratones tienen 1000 relacionados con “oler” solamente.

La proteína G son tres proteínas, alfa beta y gama. La alfa y la gama tienen pegado un lípido que les
permite estar anclados a la membrana plasmática, la beta no, en una parte interactúa con gama y una
con alfa. Alfa es capaz de intercambiar GTP por GDP. Se tiene un receptor donde la proteína G está
apagada y cuando llega la señal del exterior, el receptor la une, cambia su conformación y este cambio
hace que la proteína G alfa intercambie GDP por GTP y esta activación que también es un cambio
conformacional hace que alfa se separe de beta y gama; beta y gama siempre están juntas.

Una vez activada alfa podría interactuar con una proteína membrana llamada adenilato ciclasa la cual
cambia conformacionalmente lo que hace que esta encima tome ATP y produzca AMPc que es un
segundo mensajero. En un ejemplo de cuán rápido se produce en la célula, en una neurona (que se
muestra en pantalla) el AMPc aumenta desde el soma hacia la dentrita en 20s, por ejemplo. El AMPc y
su efecto inmediato, tiene efectos también a largo plazo; es capaz de unirse a una subunidad de una
proteína kinasa dependiente de AMPc la pKA. La estructura sería 2 subunidades catalíticas y 2
subunidades regulatorias. Estas regulatorias unen AMPc y cuando ocurre se separan (generando un
cambio conformacional) y se activan cambiando su forma. Y así la Proteína Kinasa A es una serina-
teronina-kinasa, tiene sus blancos particulares. ¿Qué hace esta PKA? Una molécula podría entrar al
núcleo, pasar por el poro nuclear y fosforilar factores de transcripción que cuando se unen al DNA,
cuando están activos por fosforilarse, se unen al elemento de respuesta y se gatilla la transcripción de
un gen determinado.
 Aquí se tiene la glándula adrenal
que

produce
epinefrina o adrenalina cuando uno se asusta.
Cuando llega la adrenalina a la célula hepática, un
receptor la une y cambia su conformación, lo
activa y esto activa a su vez a una proteína G lo
que cambia la proteína G alfaS (por estimuladora),
GTP por GDP, luego esto activa la adenilato ciclasa y se comienza a generar segundo mensajero,
mucho, algunas de esas moléculas se unen a la PKA, generando cambios conformacionales y
activaciones de las unidades catalíticas, estas entran al núcleo y fosforilan factores de transcripción que
una vez activados generan la transcripción de la ruta gluconeogénica para que en el hígado se libere
glucosa desde el glucógeno. Muchas de las reacciones de alerta ocurren bajo este mecanismo, el ritmo
del corazón, el iris, etc. Por ejemplo en el corazón la adrenalina aumenta la frecuencia cardíaca a través
de la ruptura de triglicéridos, por tanto, esto sive para “apretar cachete”. Es interesante todas las
respuestas mediadas por alfa s. Otras son las G Alfa Q, que activa a la fosfolipasa C beta en la
membrana plasmática, y corta al fosfoinositol di fosfato, un fosfolípido de la cara interna de la
membrana plasmática y queda diacilglicerol e IP3. El IP3 une canales del retículo endoplásmico que
tienen calcio, mucho calcio, y el calcio es un segundo mensaje también. Este calcio se une en dominios
de unión a calcio en una proteína que se llama kinasa C (por el Calcio) y que no se activa
completamente sino hasa cuando une diacilglicerol, generando el cambio que debe.

Otro esquema que muestra la proteína alfa Q que activa la PLC (fosfolipasa C) y produjo diacilglicerol
e IP3, el IP3 abre canales de calcio en el retículo y el calcio además abre canales dependientes de calcio
para que entre más calcio a la célula y este calcio gatilla distintas respuestas celulares. Una de ellas es
unir pKc la que se termina de activar uniendo diacilglicerol y va a fosforilar todos los blancos suyos.
Un esquema de unidades G alfa. Al alfa S, alfa
Q, alfa I, esta última inactiva la adenilato ciclasa
disminuyendo el AMPc. Por ejemplo un fotón de
luz en la retina activa un receptor que se llama
transduccina que activa una fosfodiesterasa que
baja los niveles de GAMPc??, por ejemplo, el
viagra funciona así disminuyendo los niveles de
GMPc???
No sólo la Galfa señalizan, sino que también las
subunidades beta y gama. Por ejemplo la beta
gama activa canales de potasio.

Otra ruta que se describirá es la ruta de señalización vía receptores con actividad tirosina kinasa.

Estos receptores son importantes en procesos de proliferación celular, crecimiento de células. Yo

estudio cáncer y estos están alterados en cáncer. Un receptor muy alterado en distintos tipos de cáncer
es el receptor del factor de crecimiento endotelial, o también el receptor del factor de crecimiento de
endotelio vascular.

Hay que notar que todas las proteínas tienen una función fisiológica normal. Por ejemplo, hay algunas
que una vez al mes tiene una función muy activa, por ejemplo, algunas que se relacionan con
angiogénesis. Por ejemplo, las mujeres menstruan y su endometrio pierde su estructura y debe ser
regenerado, incluyendo vasos sanguíneos. Entonces, se activan entre los receptores la regeneración.
Pero en cáncer los receptores para generar angiogénesis pueden verse alterado y por tanto el cáncer
puede arreglarse para producir metástasis a través de esto. Las células cancerosas producen factores
que producen vascularizaciones y ramificaciones que son mortales.

Otra cosa a ejemplo, la insulina. Los receptores de insulina son distintos, y es un dímero con puentes
sulfuro en sus estructuras.

Algunos otros receptores, el EGF estimula crecimiento celular, diferenciación, señal inductora del
desarrollo. Tiene una multiplicidad de funciones y es una familia de receptores.

¿Cómo funciona todo esto?

Todos estos receptores están separados salvo la insulina. Cuando llega la señal, que se une en las partes,
induce la dimerización, o sea que las dos proteínas se “funden” se unen. Revisar que hacia extracelular
son todos distintos, pero hacia intracelular todos tienen un dominio tirosina kinasa. Entonces, cuando se
dimerizan estos dos receptores, el dominio tirosina-kinasa fosforila aminoácido de tirosina de manera
cruzada, (en la imagen se distingue) y además se autofosforilan, es decir, ocurre una polifosforilación
de tirosina. Todo esto produce la llegada de distintas proteínas que necesariamente deben tener un
dominio que reconozcan el dominio (tirosina fosforilada) SH2. Y de ahí hacia abajo se activan las
cascadas.

Un ejemplo, un receptor dimerisado y fosforilado (en una imagen) llega una proteína que se llama
ERB2A, un factor de crecimiento epidermal (EGF, importante en cáncer). La generación de proteínas
fosforiladas hace que llegue una proteína adaptadora que tiene un dominio de adaptación con
fosfotirosina y además es reconocida con otra proteína que, cuando se unen, hacen que la proteína RAS
intercambie GDP por GTP y se activa señalizando río abajo a distintas cascadas de señalización. Una
de esas es la formada por las las MAP kinasas. MAP es proteínas activadas por mitosis y es muy
importante. ¿Cómo se activan específicamente? Las RAS se asocia a las RAF y se activan, y fosforilan
las MET ??? y activan a las siguientes serina-treonina-kinasa que se llama ERN??? Esta cascada es la
famosa cascada de las MAP kinasa. RAF Y RAS y los receptores están mutados en algunos cánceres, lo
cual es importante saber.
¿Qué mutación podría afectar al receptor?

Una mutación (ojo) es un cambio en el DNA que hace que el aminoácido (uno o más) cambie y por
tanto puede cambiar la función al receptor, por ejemplo que se vuelva oncogénico.
(Se habla de las mutaciones que podría haber para cáncer referido a una imagen).

Hay mutaciones que pueden ocurrir en RAS, en la tirosina-kinasa, en los receptores, en el dominio
tirosina-kinasa haciéndolo siempre activo, etc.

Volviendo a RAS, ¿qué podría estar pasando en RAS que produzca que se transforma en cáncer? Que
siempre esté unido a GTP y por tanto, tendría que pasar algo en el sitio activo de RAS. Recordar que el
sitio activo de RAS hidrolizaba GTP y también se autoapagaba ella misma. Entonces, una de las
mutaciones más frecuentes de RAS es que no funcione esa actividad enzimática. En efecto, hay
mutaciones que hacen que no se autoapague.
¿Qué mutación podría aparecerle a ERN para que esté siempre activa (está en una imagen, verificar
nombre).? Lo que aparece mutado en un cáncer son los aminoácidos que son ácidos (que tienen un
grupo carboxilo, ácido aspártico, glutámico, etc). Entonces, este simple cambio de una base en un
codón puede hacer que esta proteína ya no pueda ser desfosforilada.

Se observa (en la imagen) membrana plasmática, receptores de factor de crecimiento epidermal. Se

muestra un dímero de dos colores, pero son dos moléculas iguales (se habla del receptor de insulina).
Cuando llega el ligando, se dimeriza, luego un cambio conformacional, activación del dominio
tirosinakinasa, fosforilación, viene una proteína adaptadora, luego llega RAS, luego las proteínas
efectoras y las kinasas, luego el núcleo más complejos de poros, entra al núcleo la proteína y hay
algunas responsables de la duplicación del DNA, aparecen las ERN y activan a las ciclinas (encargadas
del control de DNA) y por tanto la célula se divide.

(ver animación de la presentación).

Es necesario recalcar que las rutas de señalización celular conversan cruzadamente entre ellas, y
algunos tipos de receptores distintos pueden gatillar distintos caminos de cascadas, a través de las
kinasas, los efectores, etc. Por tanto, todo está cruzado. Hay un esquema de muchas rutas. Algunos
bioinformáticos han tomado las rutas y han llegado a emulaciones de rutas en células (muestra un video
de un circuíto electrónico celular). Por eso las respuestas nunca son únicas en una célula, porque está
todo integrado. 4922