Atividade Laboratorial Nº 1

Extração de DNA da Banana, Tomate e Ameixa

Questão central
É possível extrair e visualizar o DNA de frutos?

Princípios
A informação genética que o DNA contém permite o controlo das atividades
fundamentais de todas as células. O DNA, que é um polímero cujos os monómeros
são denominado nucleótidos, suporta toda a informação genética. Cada nucleótido
é composto por um grupo fosfato, uma pentose, nomeada desoxirribose, e uma
base azotada. Existem diferentes bases azotadas: Adenina (A), Guanina (G),
Citosina (C) e Timina (T).
A Adenina e a Guanina são bases púricas, isto é, possuem anel duplo. A Citosina e
a Timina são bases pirimídicas, ou seja, têm anel simples.
Devido à complementaridade de bases, a Adenina e a Timina estabelecem ligações
de hidrogénio duplas, enquanto a Guanina se liga através de ligações de
hidrogénio triplas com a Citosina. Assim cada ácido desoxirribonucleico é
constituído por uma dupla hélice formada por duas cadeias antiparalelas.
Para visualizar o DNA é necessário que se realizem processos químicos para a
desestruturação da membrana celular. Esta molécula é longa logo o que se pode
visualizar são milhares de moléculas misturadas. Visualizar uma única molécula só
é possível ao microscópio.

Conceitos Científicos
 DNA;
 Material

 Banana.
 Caixa
de Petri.
 Tomate.

Espátulas.
 Ameixa.
 Vidro de
relógio.
 Sal.
 Vareta
de Vidro.
 Álcool etílico a 96°.

Congelador.
 Sumo de Ananás.
 Bisturi.
 Detergente.
 Tesoura.
 Gobelés de 200 e 250 mL.
 Tubos de ensaio.
 Provetas de 10, 20, 50 e 100 mL.
 Papel de filtro.
 Funil.
 Almofariz.
 Termómetro.

Procedimento

O procedimento é igual quer seja para extrair o DNA da banana, do tomate ou da

ameixa.
 1- Coloque o álcool no frigorífico para que arrefeça bem.

2- Pese 50g de banana, tomate ou ameixa cortada/o numa caixa de Petri.

3- Com uma espátula, macere o respetivo fruto.

4- Pese 3g de sal num vidro de relógio.

5- Num gobçé de 250 mL, coloque 90 mL de água destilada aquecida a 60°C.

6- Dissolva o sal na água e adicione 10 mL de detergente, mexendo

lentamente.

7- Junte o fruto macerado à solução salina com detergente e mexa

lentamente durante alguns segundos.

8- Coloque a gaze num funil e filtre o preparado obtido para um gobelé.

9- Ao filtrado obtido adicione 25 mL de sumo de ananás.

10- Meça 20 mL do preparado anterior para um tubo de ensaio.

11- À solução filtrada adicione, muito lentamente, 20 mL de álcool frio, com o

tubo de ensaio ligeiramente inclinado. Deve distinguir-se uma fase
alcoólica (sobrenadante) e uma fase aquosa (inferior).

12- Deixe repousar cerca de 5 minutos.

13- Começará a ver um novelo branco a formar-se no sobrenadante alcoólico.

(Banana)
Fig. 1 Peso da banana (38,5g).
(Tomate)
Fig. 5 Filtragem do
preparado obtido (Água
destilada + Sal + Detergente
+ Banana macerada).
Fig. 9 O DNA sobre a mistura
efetuada.
Fig. 2 Peso do sal (3g). Fig. 3 Água destilada Fig. 4 Detergente (10mL) e
aquecida (54°C). Fig.almofariz
10 Tubo com banana
de ensaio macerada.
com a
solução final e um corante para
evidenciar o DNA.
Fig. 6 Sumo de Ananás Fig. 7 Álcool etílico frio Fig. 8 Tubo de ensaio
(25mL). que foi adicionado na com a solução final.
mistura (20mL).
Fig. 1 Peso do tomate (48,8g). Fig. 2 Peso do sal (3g). Fig. 3 Almofariz com tomate
macerado. Fig. 4 Preparado obtido (Água
destilada + Sal + Detergente +
Tomate macerado).

Fig. 6 Sumo de Ananás Fig. 7 Álcool etílico frio que Fig. 8 Tubo de ensaio
Fig. 5 Resultado da filtragem (25mL). foi adicionado na mistura com a solução final.
do preparado obtido. (20mL).
 (Ameixa)

Fig. 1 Peso da ameixa (19,2g). Fig. 2 Tubo de ensaio com a Fig. 3 Tubo de ensaio com a solução
solução final final e um corante para evidenciar o
DNA.

Fig. 9 Tubo de ensaio com a Fig. 10 Observação

solução final e um corante microscópica da solução final
para evidenciar o DNA. presente no tubo de ensaio.
Resultados Obtidos

Filamentos de DNA

Fase alcoólica (sobrenadante)

Fase aquosa
 Discussão

1-
Fig. 1 Tubo de ensaio com a Fig. 2 Tubo de ensaio com a Fig. 3 Tubo de ensaio com a
solução final (banana). solução final (tomate). solução final (ameixa).

Que substância foi adicionada, no decurso da experiência, para neutralizar

a carga negativa DNA e facilitar a extração?

A substancia adicionada foi o sal, uma vez que este contribui com iões positivos
que neutralizam a carga negativa do grupo fosfato dos nucleótidos do DNA.

2- O que se fez para ajudar a quebrar mecanicamente as membranas das

células?

O método mecânico que se utilizou foi a trituração.

3- Que substância contendo enzimas, foi adicionada para ajudar à

destruição da bicamada fosfolipídica das membranas celulares?

A substância usada foi o sumo de ananás que contém uma enzima proteolítica.

4- Qua é a substância em que o DNA é insolúvel e que, por isso, provoca a

sua precipitação e visualização?

A substância em que o DNA é insolúvel é o álcool etílico.

5- Que aspeto apresenta o DNA extraído?

Embora observamos um aglomerado de cadeias de DNA, este apresenta um aspeto

filamentoso.

6- Qual é o papel do detergente na extração do DNA?

O detergente atua normalmente nos lípidos. Como a membrana celular e nuclear

(natureza fosfolipídica) têm uma grande quantidade de fosfolípidos, sob a atuação

Fig. 4,5 e 6 Tubos de ensaio com a solução final do respetivo fruto e um corante para
evidenciar o DNA.
de detergente utilizado, as gorduras vão se emulsionar e todas a moléculas das
membranas vão se romper, fazendo com que todo o conteúdo nuclear da solução,
ou seja, o DNA, fique disperso.

7- Para que serve o sumo de Ananás?

O sumo de ananás, pelo facto de apresentar uma enzima proteolítica denominada

bromelaína, contribui para a degradação das proteínas da camada membranar e
da parede celular.

8- Sugere uma explicação para a ascensão do DNA?

A utilização do álcool etílico, que é insolúvel com o DNA, permitiu que estes se
diferenciassem no tubo de ensaio. O DNA ao ser menos denso que a água ascendeu
para a superfície por ação da gravidade, quando adicionado o álcool. (O DNA tem
maior densidade que o álcool, mas tem menor densidade que a água juntamente
com a mistura de células.

Conclusão

O ácido desoxirribonucleico (DNA) é um composto orgânico cujas moléculas

contêm as informações genéticas que coordenam o desenvolvimento e
funcionamento de todos os seres vivos e que transmitem as características
hereditárias de cada ser vivo.
Nesta atividade laboratorial, conseguimos visualizar o DNA das células eucarióticas
(banana, tomate e ameixa) ao utilizarmos o sal, o álcool, o detergente e o sumo
de ananás.
O sal proporcionou ao DNA um ambiente mais propício uma vez que ele contribui
com iões positivos que neutralizaram a carga negativa do DNA, acabando por o
estabilizar.
O detergente possibilitou a lise da membrana plasmática e nuclear das células
permitindo que o seu ADN se soltasse e se dispersasse na solução.
Como o DNA é insolúvel em álcool, este precipitou e separou-se da solução
formando uma massa filamentosa e esbranquiçada, promovendo a sua
visualização. Como o DNA é menos denso, flutua na superfície do álcool.
Provamos assim, através dos resultados obtidos, a existência de DNA.
Emanuel Tavares Santas
Nº 6 11ºB