ACTIVIDAD 4

OXIDACIÓN DEL JUGO DE MANZANA EN PRESENCIA DE CATECOL

Objetivo: Determinar la constante de Michaelis-Menten y la rapidez máxima de la oxidación del
jugo de manzana en presencia de un catalizador.

Introducción.
1. ¿Qué es un catalizador?
Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de una reacción y se
recupera químicamente invariable al final de la reacción. La velocidad de una reacción
depende de las constantes de velocidad en las etapas elementales del mecanismo de
reacción. Un catalizador proporciona un mecanismo alterno más rápido que el
mecanismo en ausencia del catalizador. Además, aunque el catalizador participa en el
mecanismo debe regenerarse.
2. ¿Qué es catalizador enzimático y que características tiene?
La mayoría de las reacciones que ocurren en los organismos vivos se catalizan por
moléculas llamadas enzimas. La mayoría de las enzimas son proteínas. (Ciertas
moléculas de ARN también actúan como enzimas.) Una enzima tiene acción especifica
con un sustrato especifico. Muchas enzimas catalizan solo la conversión de un reactivo
particular en un producto particular (y la reacción inversa); otras enzimas catalizan
solo cierta clase de reacciones (por ejemplo, la hidrólisis de ésteres). Las enzimas
aceleran las velocidades de reacción de una manera muy sustancial, y en su ausencia
la mayor parte de las reacciones bioquímicas ocurre a velocidades insignificantes. La
molécula sobre la cual actúa la enzima se llama sustrato. El sustrato se une a un sitio
activo especifico en la enzima para formar un complejo enzima-sustrato. Mientras se
une a la enzima, el sustrato se convierte en producto, el cual luego se libera desde la
enzima.
3. Mecanismo general de la catálisis enzimática
E+ S k 1 , k 1 ES k 2 , K 2 E + P
↔ ↔
4. ¿Qué es el catecol?
Es un compuesto cristalino con olor a fenólico y un sabor dulce amargo, que se usa
como astringente y como antiséptico, en fotografía y en la galvanización y elaboración
de otros productos químicos.
5. Mecanismo de oxidación del catecol.

6. En que consiste la cinética del estado estable

El estado estable es cuando las características no varían con el tiempo, en este caso en
particular las concentraciones no varían
7. ¿Qué es la constante de Michaelis-Menten (k M) y como se determina?
El valor de km sugiere la afinidad de la enzima con sus sustratos; un valor bajo indica
mayor afinidad y por lo tanto una mayor velocidad a cualquier [S].
Es utilizado para identificar isoenzimas, las cuales presentan diferente afinidad por el
mayor sustrato
Es sensible a condiciones como pH y temperatura, lo cual permite identificar cambios
estructurales de la enzima
KM = (k_1+k2) /k1
8. ¿Qué significa la rapidez máxima (r máx) y como se determina?
Es el punto donde la velocidad ya no depende de [S] 0 debido a que la enzima se
encuentra saturada por el sustrato, eso ocurre a elevadas [S] 0.
Resumen del experimento
En este experimento se ha extraído jugo de diferentes manzanas para analizar la cinética
de oxidación en presencia de un catalizador (catecol) mediante el uso de un
espectrofotómetro el cual registro valores de Absorbancia a lo largo de 18.58 minutos
para 3 alícuotas con diferentes proporciones de agua, jugo de manzana y catecol, estas
proporciones se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1. Concentración de catecol: 0.5 mg/ml

Tubo Agua (ml) Catecol (ml) Jugo de manzana

(ml)
1 8 5 1
2 7 5 2
3 6 5 3

Resultados
Se uso un extractor de jugos para obtener el jugo de manzanas, el cual presenta la
apariencia mostrada en la Figura 1. A continuación, se prepararon los tubos 1, 2 y 3 y se
mide inmediatamente la Absorbancia en un espectrofotómetro marca Shymadzu (ver
Figura 2). Los valores de Absorbancia obtenidos se muestran en la Tabla 2.

Figura 1. Extracto de manzanas recién obtenido

Figura 2. Espectrofotómetro Symadzu

Tabla 2. Valores de Absorbancia registrados para las tres muestras

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Tiempo Tiempo Tiempo

Absorbancia Absorbancia Absorbancia
(min) (min) (min)
3.18 0.246 4.21 0.518 5.18 0.739
6.02 0.334 6.51 0.561 7.38 0.78
8.27 0.365 8.58 0.594 9.5 0.818
10.33 0.408 11.2 0.618 12.2 0.848
13.07 0.441 13.44 0.646 14.25 0.861
15 0.471 15.38 0.68 16.25 0.898
17 0.506 17.51 0.706 18.25 0.921
18.58 0.531 19.41 0.722 20.15 0.988
20.51 0.591 21.3 0.755 22.11 0.957
22.5 0.633 23.32 0.777 24.28 1.053
25.03 0.653 25.44 0.808 26.25 1.015
26.56 0.685 27.36 0.837 28.24 1.021
28.56 0.685 29.52 0.865 30.51 1.048
31.36 0.713 32.23 0.89 33.09 1.054
33.46 0.741 34.29 0.918 35.21 1.076
35.57 0.788 36.51 0.948 37.26 1.103
38.17 0.817 39 0.976    

Análisis de resultados
Con los datos anteriores se procede a realizar una grafica donde en el eje x tenemos al
tiempo (min) y en el eje y tenemos la absorbancia (ABS) para los 3 tubos los cuales fueron
analizados y los resultados se presentan en la Grafica 1:

Grafica 1. Comportamiento de la absorbancia respecto al tiempo de cada tubo

Absorbancia vs Tiempo
1.2
f(x) = 0.01 x + 0.72
1 R² = 0.94
f(x) = 0.01 x + 0.47
R² = 1
0.8 f(x) = 0.02 x + 0.24
ABSORBANCIA

Tubo 1
R² = 0.98
Linear (Tubo
0.6 1)
Tubo 2
0.4 Linear (Tubo
2)
0.2 Tubo 3
Linear (Tubo
3)
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
TIEMPO

Con la grafica anterior tenemos el valor de la rapidez de reacción (r) y con la información
de la cantidad de jugo de manzana en cada muestra podemos usar la siguiente ecuación
1 k 1
= M +
r ( S ) r max r max

S: cantidad de jugo de manzana

Con esta ecuación y haciendo el tratamiento de datos adecuados obtenemos la Tabla 3 y
la Grafica 2 donde obtendremos la ecuación de la recta la cual nos proporcionara los datos
incognitos de cada concentración de jugo

Tabla 3. Ajuste de datos para obtención de incógnitas

tubo (S) 1/(S) r 1/r

1 1 1 0.0157 63.694267
5
2 2 0.5 0.013 76.923076
9
3 3 0.3333333 0.011 90.909090
3 9
Grafica 2. Linealización de datos

Obtencion del KM y la vmax

100
90
80 f(x) = − 37.51 x + 100.1
R² = 0.91
70
60
50
40
30
20
10
0
0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1

Finalmente, con los datos de la ecuación de la recta de la Grafica 2 obtenemos los valores
de kM y de vmax mostrados en la Tabla 4 :

1/rmax rmax kM/rmax kM

100.1 0.00999001 -37.507 -0.3746953

Conclusiones
Los valores obtenidos son muy pequeños, esto puede deberse quizá a que en jugo
ocurrieron 2 oxidaciones, tanto la del jugo como la del catecol y con ello resultados debajo
de lo esperado.
La ecuación de Michaelis-Menten es demasiado útil en una reacción con presencia de una
enzima y un sustrato. De tenerse las constantes intermedias para la reacción, la ecuación
habría sido mas sencilla, sin embargo, a causa de la falta de esos datos, se usó una
ecuación la cual nos indica que los datos se tenían que linealizar para obtener el valor de
las incógnitas presentes.
Finalmente, esta practica nos dio como aprendizaje la catálisis enzimática tanto sus usos
como sus ecuaciones primordiales

Referencias
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CineticaEnzimatica-
EnriqueRivera_32548.pdf