UNIVERSIDAD DE SANTANDER – UDES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FÍSICAS Y

NATURALES

PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

33426-A1-FISIOLOGÍA MICROBIANA – 2020A

Formato Presentación de Informes de

Laboratorio

Método de Bradford

Tibaduiza Vergara Diego Alexander

Microbiología industrial, grupo 4
Fecha de la práctica: 27/02/2020
Fecha de presentación de informe: 12/03/2020
Universidad de Santander, Bucaramanga, Colombia, 680003

RESUMEN
En el experimento se realizó una
cuantificación de proteína por el método de
Bradford con la ayuda de una muestra de
leche y otras pruebas que estaban a ciertas
concentraciones para poder hacer un análisis
de como se puede observar el
comportamiento del método según la
concentración de proteína en el medio, para
esto se utilizo un instrumento para poder
hacer las lecturas como lo es un
espectrofotómetro que puede detectar por
medios de transmitancia y absorbancia.
PALABRAS CLAVE
Proteína, absorbancia,
concentración, Bradford.
INTRODUCCIÓN
La determinación de proteínas por el método de
Bradford es ampliamente usada ya que
es simple, rápida, barata y sensible. Es
necesario construir una curva de calibración
para
determinar la concentración de las muestras. El
método se basa en la unión específica del
colorante azul de Coomassie brillante G250
(CBBG) a los residuos de Arg, Trp, Tyr, His y
Phe de las proteínas. El CBBG se une a los
residuos de las proteínas produciendo una
absorbancia máxima a 595 nm, mientras que el
colorante libre tiene una absorbancia máxima
a 470 nm.
MÉTODOS
Versión actualizada por la Dra. L. Nelly Díaz Puentes, el 5 de febrero 2020.
Se utilizaron el reactivo de Bradford 1x y un
buffer salino a la misma concentración, en
donde se utilizaron 98µL de Buffer salino con
una micropipeta y es añadido a una bala
eppendorf seguidamente se le adiciono 20
microlitros de la muestra de leche a la cual se
le realizara la cuantificación.
Se realizan las muestras control y otra con
muestra que contenía 20µL de la muestra de
leche, luego se hicieron muestras con distintas
concentraciones de proteína (0.125mg/mL,
0.25mg/mL, 0.5mg/mL, 0.75mg/mL, 1mg/mL,
1.5mg/mL y 2mg/mL los cuales se prepararon
en celdas previamente rotuladas con las
concentraciones dadas anteriormente para ser
medidas en el espectrofotómetro, después de
transmitancia, cada muestra de proteína se utilizaron 20µL
añadiéndolas a las celdas, para finamente
adicionar 1mL del reactivo de Bradford a cada
una, se dejaron reposando por 5 minutos en un
lugar oscuro, pasado el tiempo indicado las
celdas revelan una gama de colores con cada
muestra realizada usando con la celda que
está libre de proteína (control) y la otra con
muestra (leche) para realizar un contraste de
cómo se debería observar el comportamiento
de las celdas con las concentraciones de
proteínas finalmente se realiza la cuantificación
por medio de un espectrofotómetro en el cual
se debió calibrar usando el blanco como fuente
inicial y mirar la transmitancia de las demás
celdas para determinar cuanta luz hay
transferida y saber que celda contiene una
mayor cantidad de proteína
RESULTADOS
La transmitancia y absorbancia revelan la
cantidad de proteína de cada muestra ya que el
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método de Bradford cumple con resaltar
algunos componentes de la proteína de la leche
que el instrumento espectrofotómetro puede
medir y poder hacer una aproximación de
cuanta proteína contiene la muestra de leche y
El método de Bradford es un ensayo colorimétrico
para la medición de proteínas totales en una
solución, que involucra la unión de un colorante (el
azul de coomassie a las proteínas en un medio
acido y su cambio de absorbancia de 465 a 595
nm, ya que el reactivo hace que las proteínas se
precipiten en el tiempo, la lectura de la absorbancia
se debe hacer al poco tiempo de la realización o
montaje de las muestras. Como lo indica.
En la cuantificación de proteínas totales en
extractos crudos de cepas nativas de Bt se empleó
la técnica de Bradford, que es sensible e involucra
la unión del Coomassie Brilliant Blue G-250
a una proteína absorbiendo a 595 nm de λ
(Bradford, 1976). La unión del colorante a la
proteína
provoca un cambio en el máximo de absorción del
colorante de 365 a 595 nm, por lo cual el cambio
en la absorbancia a 595 nm es proporcional a la
concentración de proteína en la muestra
(Fernández & Galván, 2010).
La unión del colorante a la proteína es un proceso
muy rápido aproximadamente 2 minutos, y el
complejo proteína-colorante permanecen dispersos
en solución por un tiempo relativamente largo,
aproximadamente 1 hora, con lo que se puede
decir que el procedimiento es muy reproducible y
rápido, y no requiere de mucho tiempo (Bradford,
1976).
CONCLUSIONES
 Algunas técnicas no indican buen desarrollo
del método ya que el no limpiar la punta por
la zona periférica puede ocasionar una
Versión actualizada por la Dra. L. Nelly Díaz Puentes, el 5 de febrero 2020.
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Laboratorio
cuanto puede contener a diferentes
concentraciones.
DISCUSIÓN
alteración en los resultados en la
concentración que realmente se planteo
analizar.
 El no uso del tapaboca puede ser un factor
de riesgo a la hora de realizar la muestra ya
que la saliva contiene enzimas que pueden
degradar la muestra y ocasionar también
falsos resultados cuando se realice la
lectura.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 Bio-Rad Laboratories(2012) YouTube:
Bradford Assay. Extraído de:
https://www.youtube.com/watch?
v=vfY3mVOlGBU
 Sánchez. S. Greaves. N. (2013) Facultad
de Química, Departamento de Bioquímica,
Material de apoyo para los estudiantes del
curso Bioquímica experimental. Extraído de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/
MATERIALAPOYOANTECEDENTES_2242
7.pdf
 Torres, E. Hernández, J. Peréz, C(2013)
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
TOTALES EN EXTRACTOS CRUDOS DE
CEPAS NATIVAS DE Bacillus thuringiensis
AISLADAS DE BOYACÁ Y
CUNDINAMARCA. . Conexión
Agropecuaria JDC, 3(2), 37-43. Recuperado
a partir de:
https://www.jdc.edu.co/revistas/index.ph
p/conexagro/article/view/312
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