Article 

Chemical Composition and Determination of the 
Antibacterial Activity of Essential Oils in Liquid and 
Vapor Phases Extracted from Two Different 
Southeast Asian Herbs—Houttuynia cordata 
(Saururaceae) and Persicaria odorata (Polygonaceae) 
Kristýna Řebíčková 1, Tomáš Bajer 1, David Šilha 2, Markéta Houdková 3, Karel Ventura 1   
and Petra Bajerová 1,* 
1  Department of Analytical Chemistry, Faculty of Chemical Technology, University of Pardubice, 
Studentská 573, 532 10 Pardubice, Czech Republic; kristyna.rebickova@student.upce.cz (K.Ř.); 
tomas.bajer@upce.cz (T.B.); karel.ventura@upce.cz (K.V.) 
2  Department of Biological and Biochemical Sciences, Faculty of Chemical Technology,   

University of Pardubice, Studentská 573, 532 10 Pardubice, Czech Republic; david.silha@upce.cz 
3  Department of Crop Sciences and Agroforestry, Faculty of Tropical AgriSciences, Kamýcká 129,   

Czech University of Life Sciences Prague, 165 00 Prague, Czech Republic; houdkovam@ftz.czu.cz 
*  Correspondence: petra.bajerova@upce.cz; Tel.: +420‐466‐037‐078 

Academic Editor: Derek J. McPhee 
Received: 30 April 2020; Accepted: 20 May 2020; Published: 22 May 2020 

Abstract: Essential oils obtained via the hydrodistillation of two Asian herbs (Houttuynia cordata and 
Persicaria odorata) were analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC–MS) 
and  gas  chromatography  with  flame  ionization  detector  (GC–FID).  Additionally,  both  the  liquid 
and vapor phase of essential oil were tested on antimicrobial activity using the broth microdilution 
volatilization  method.  Antimicrobial  activity  was  tested  on  Gram‐negative  and  Gram‐positive 
bacteria—Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeruginosa,  Enterococcus  faecalis, 
Streptococcus  pyogenes,  Klebsiella  pneumoniae,  Seratia  marcescense  and  Bacillus  subtilis. 
Hydrodistillation produced a yield of 0.34% (Houttuynia cordata) and 0.40% (Persicaria odorata). 41 
compounds were identified in both essential oils. Essential oils contained monoterpenes and their 
oxidized  forms,  sesquiterpenes  and  their  oxidized  forms,  oxidized  diterpenes,  derivates  of 
phenylpropene  and  other  groups,  such  as,  for  example,  aldehydes,  alcohols  or  fatty  acids.  Both 
essential  oils  were  antimicrobial  active  in  both  vapor  and  liquid  phases  at  least  in  case  of  one 
bacterium.  They  expressed  various  antimicrobial  activity  in  the  range  of  128–1024  μg∙mL−1,  512–
1024 μg∙mL−1 in broth and 1024 μg∙mL−1, 512–1024 μg∙mL−1 in agar, respectively. Research showed 
new interesting information about P. odorata and H. cordata essential oils and demonstrated that both 
essential oils could be possibly used in the field of natural medicine or natural food preservation. 

Keywords:  Houttuynia  cordata;  Persicaria  odorata;  essential  oil;  distillation;  antimicrobial  activity; 
vapor phase; volatile compounds; gas chromatography. 
 

1. Introduction 
In recent years, many researchers have been focused on finding new antimicrobial agents that 
could  be  applied  to  multi‐resistant  microorganisms.  Medicinal  herbs  and  their  products,  such  as 
essential  oils  (EOs),  are  the  main  source  of  natural  remedies.  They  have  been  used  since  the  time 

Molecules 2020, 25, 2432; doi:10.3390/molecules25102432  www.mdpi.com/journal/molecules 
Molecules 2020, 25, 2432  2  of  11 

immemorial as the most affordable means of treating diseases. As it has been proven several times, 
EOs  have  diverse  biological  properties.  They  are  bactericidal,  viricidal,  fungicidal,  antiparasitic, 
antioxidant and insecticidal [1–3]. EOs and their components have activity against a variety of targets, 
particularly  the  membrane  and  cytoplasm,  and,  in  some  cases,  they  can  completely  change  the 
morphology  of  the  cells  [4].  They  contain  a  wide  range  of  complex  and  structurally  different 
compounds that are biologically, respectively, antimicrobially active. Antimicrobial activity is closely 
related  to  the  chemical  composition  of  EOs,  functional  groups  and  possible  synergic  interactions 
among constituents. In addition, due to the combination of these active compounds, bacteria are more 
difficult to develop a resistance to these compounds in comparison with commercial antimicrobials, 
which  are  usually  based  on  one  chemical  substance  [5].  In  order  to  use  EOs  for  treating  various 
diseases caused by bacteria, it is important to understand to the relationship between their chemical 
composition and the potential antimicrobial activity. 
EOs  are  volatile,  and  their  vapors  influence  their  antimicrobial  properties.  Therefore,  it  is 
necessary  to  sufficiently  investigate  the  composition  and  properties  of  the  vapors  of  essential  oil. 
Currently, several researchers have investigated the vapor phase of the essential oil, but it deserves 
much wider research and consideration when examining the properties of essential oils [6–12]. It is 
assumed that active compounds in both phases are synergic and furthermore it has been shown that 
vapor  phase  is  sometimes  even  more  effective  than  liquid  phase  to  some  microorganisms.  If 
biologically  active  molecules  were  present  in  the  vapor  phase,  there  would  be,  for  example,  the 
possibility of using EOs for the inhalation and treatment of respiratory diseases [8,9]. Furthermore, 
there would be the possibility of using these properties of EOs to produce various food packaging 
materials that protect food against the spread of microorganisms and extend their shelf life [13–15]. 
Traditionally, agar dilution, broth dilution or broth microdilution methods have been used to 
measure  the  minimal  inhibitory  concentrations  of  antimicrobial  agents  against  microorganisms 
[16,17].  Unfortunately,  these  methods  have  been  limited  to  measuring  the  minimal  inhibitory 
concentrations  (MICs)  of  antimicrobials  only  in  the  liquid  phase.  In  the  last  few  years,  several 
methods and  the  modification‐testing MICs  of antimicrobials  in  the  vapor  phase  were  developed. 
Usually, the disc volatilization method with various modifications is used [10–12,17,18]. 
Two  Southeast  Asian  herbs  (Houttuynia  cordata  and  Persicaria  odorata),  used  mainly  in  the 
traditional Chinese medicine and as a spice in Asian cuisine, have been chosen for this study. These 
two  herbs  have  been  chosen  for  their  known  health  benefits  from  Chinese  medicine  and  for  their 
geographical occurrence. Moreover, there is a lack of scientific literature about Houttuynia cordata [19–
24]  and  Persicaria  odorata  [25,26]  EOs.  Therefore,  they  were  examined  in  more  detail.  Houttuynia 
cordata, also known as a fish mint, belongs to a family Saururaceae. It is a flowering perennial herb 
native to Southeast Asia and it grows in moist shady places [27]. EOs from H. cordata have a fishy 
scent and show a variety of biological activities, such as antimicrobial, antiviral, anti‐inflammatory, 
anticancer and insect repellent [28]. According to the previous reports, the liquid phase of EOs from 
H. cordata has inhibitory effects against Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Bacillus cereus, Bacillus 
subtilis,  Vibrio  cholerae  and  Staphylococcus  aureus  [21,29].  The  dominant  volatile  compounds  are 
houttuynin,  myrcene,  decanal,  cis‐ocimene  and  bornyl  acetate  [27,28,30].  Persicaria  odorata,  also 
known as a Vietnamese coriander, belongs to a family Polygonaceae. It is a tender perennial herb native 
to Southeast Asia and it grows in wet environments with a rich, moist soil shady places [25]. EOs 
isolated  from  P.  odorata  have  a  very  strong  coriander  odor  and  show  antimicrobial,  anti‐
inflammatory, antitumor and antioxidant activity. According to the previous reports, the liquid phase 
of essential oil from P. odorata inhibits Salmonella choleraesuis [31], Enterococcus faecalis, Enterococcus 
faecium,  Staphylococcus  epidermidis  and  Staphylococcus  aureus  [32].  The  most  abundant  volatile 
compounds  are  dodecanal,  decanal,  3‐hexanal,  2‐hexanal,  β‐caryophyllene  and  α‐humulene 
[25,26,33,34]. 
Due  to  the  growing  demand  for  natural  products  and  in  light  of  the  prevalence  of 
pharmaceuticals, antioxidants or food additives in the food preservation process, it is necessary to 
find  new  sources  for  developing  these  products  and  to  specify  their  properties.  Plant‐derived 
essential oils have received significant attention in this field. The aim of this study was to find herbs 
 Molecules 2020, 25, 2432  3  of  11 

used both in the cuisine and natural medicine and determine their EOs composition and especially 
their antimicrobial efficiency in both vapor and liquid phase. In this study were two EOs obtained by 
hydrodistillation  and  thereafter  analyzed  by  standard  techniques  GC–MS  and  GC–FID. 
Antimicrobial activity was determined by the modern, recently developed method of Houdkova et 
al. [35] called the broth microdilution volatilization method. It is a simple and rapid simultaneous 
determination of the antibacterial potential of plant volatile compounds in the liquid and the vapor 
phase at different concentrations [35]. 

2. Results and Discussion 

2.1. Extraction Yield and Chemical Composition 
Hydrodistillation in the Clevenger‐type apparatus of Houttuynia cordata produced a pale‐yellow 
liquid with a fishy scent. The essential oil content of distilled aerial parts of dried plant was 0.34%. 
The extraction yield is higher in comparison with those previously published by R. S. Verma et al. 
[24] who only achieved a yield of 0.06–0.14%. A total of 41 compounds were identified that made up 
90.6%  of  the  essential  oil  composition  (Table  1).  The  essential  oil  contained  a  higher  amount  of 
terpenoid compounds (75.5%), followed by non‐terpenoid compounds (15.1%), such as derivates of 
phenylpropene,  aldehydes,  ketones,  esters  and  fatty  acids.  The  major  group  of  substances  was 
monoterpenes with a content of 59.4%, followed by the group of other compounds with a content of 
14.8%,  oxidized  monoterpenes  with  a  content  of  7.2%  and  sesquiterpenes  with  a  content  of  6.6%. 
Other groups were oxidized sesquiterpenes and derivates of phenylpropene. Major compounds of 
the  essential  oil  were  myrcene  (51.6%),  2‐undecanone  (6.7%),  tridecan‐2‐one  (6.1%),  cis‐β‐ocimene 
(5.7%),  geranyl  acetate  (3.1%),  bornyl  acetate  (2.9%)  and  cis‐caryophyllene  (2.6%).  The  other 
compounds were present at less than 2%. These results are similar with the results of previous reports 
[19,22,24]. Only a few fluctuations from other reports were found and are probably attributed to the 
origin  of  the  plant  samples  or  different  extraction  method.  For  the  characteristic  fishy  scent  and 
flavoring of H. cordata essential oils is responsible compound houttuynin (decanoyl acetaldehyde). 
This compound was not identified in our essential oil due to its instability. It is usual that decanoyl 
acetaldehyde  is  during  the  process  of  distillation  easily  oxidized  into  2‐undecanone  [24].  This 
compound  had  the  second  highest  concentration  in  our  essential  oil.  Therefore,  the  amount  of  2‐
undecanone is the primary indicator for the quality of Houttuynia cordata essential oil [23,24]. 

Table 1. Chemical composition of essential oils from Houttuynia cordata and Persicaria odorata. 

Compound  CAS Number  Identification 1  Retention Index  Peak Area [%] 

      Observed  Published 2  H. cordata  P. odorata 
Monoterpenes             
α‐pinene  80‐56‐8  MS, RI  930  933  0.53  ‐ 
camphene  79‐92‐5  MS, RI  946  953  0.36  ‐ 
β‐pinene  127‐91‐3  MS, RI  974  978  0.45  ‐ 
myrcene  123‐35‐3  MS, RI, Std  993  991  51.64  ‐ 
limonene  138‐86‐3  MS, RI, Std  1027  1030  0.49  ‐ 
cis‐β‐ocimene  3338‐55‐4  MS, RI  1036  1040  5.72  ‐ 
trans‐β‐ocimene  3779‐61‐1  MS, RI  1046  1046  0.18  ‐ 
7‐epi‐sesquithujene  159407‐35‐9  MS, RI  1387  1387  ‐  0.02 
Sum [%]          59.37  0.02 
Oxidized monoterpenes             
perillene  539‐52‐6  MS, RI  1097  1098  0.51  ‐ 
linalool  78‐70‐6  MS, RI, Std  1100  1101  0.28  ‐ 
myroxide  33281‐83‐3  MS, RI  1131  1129  0.01  ‐ 
isoborneol  10385‐78‐1  MS, RI  1169  1165  0.08  ‐ 
α‐terpineol  98‐55‐5  MS, RI, Std  1193  1195  0.06  ‐ 
β‐cyclocitral  432‐25‐7  MS, RI  1218  1219  ‐  0.04 
trans‐geraniol  102‐24‐1  MS, RI  1251  1255  0.2  ‐ 
bornyl acetate  92618‐89‐8  MS, RI  1283  1285  2.85  ‐ 
 Molecules 2020, 25, 2432  4  of  11 

Compound  CAS Number  Identification 1  Retention Index  Peak Area [%] 

      Observed  Published 2  H. cordata  P. odorata 
neryl acetate  141‐12‐8  MS, RI  1358  1365  0.12  ‐ 
geranyl acetate  105‐87‐3  MS, RI, Std  1378  1383  3.11  ‐ 
Sum [%]          7.22  0.04 
Sesquiterpenes             
cis‐caryophyllene  13877‐93‐5  MS, RI  1419  1424  2.58  3.88 
trans‐α‐bergamotene  13474‐59‐4  MS, RI  1431  1432  0.1  0.25 
isogermacrene D  317819‐80‐0  MS, RI  1441  1447  ‐  0.08 
trans‐caryophyllene  87‐44‐5  MS, RI  1452  1451  0.99  ‐ 
α‐humulene  6753‐98‐6  MS, RI, Std  1455  1454  ‐  4.50 
γ‐gurjunene  22567‐17‐ 5  MS, RI  1474  1476  ‐  0.30 
selina‐4.11‐diene  17627‐30‐4  MS, RI  1476  1482  1.13  0.23 
α‐curcumene  644‐30‐4  MS, RI  1482  1480  ‐  0.23 
β‐selinene  17066‐67‐0  MS, RI  1487  1491  ‐  0.40 
valencene  4630‐07‐3  MS, RI  1490  1492  0.67  0.04 
β‐bisabolene  4891‐79‐6  MS, RI  1508  1508  ‐  0.07 
β‐curcumene  72345‐84‐7  MS, RI  1510  1511  ‐  0.08 
7‐epi‐α‐selinene  123123‐37‐5  MS, RI  1517  1518  0.54  0.52 
trans‐calamenene  73209‐42‐4  MS, RI  1519  1527  0.24  ‐ 
cis‐sesquisabinene hydrate  58319‐05‐4  MS, RI  1543  1544  ‐  0.96 
Sum [%]          6.25  11.54 
Oxidized sesquiterpenes             
β‐elemene  33880‐83‐0  MS, RI  1387  1390  0.13  ‐ 
ishwarane  26620‐70‐2  MS, RI  1465  1468  0.24  ‐ 
α‐farnesene  502‐61‐4  MS, RI  1503  1504  0.18  ‐ 
β‐nerolidol  40716‐66‐3  MS, RI  1560  1561  0.76  0.53 
spathulenol  72203‐24‐8  MS, RI  1575  1576  0.37  ‐ 
caryophyllene oxide  1139‐30‐6  MS, RI  1580  1587  0.99  1.42 
humulene epoxide II  19888‐34‐7  MS, RI  1608  1613  ‐  1.09 
caryophylla‐4(12).8(13)‐dien‐5‐ol  19431‐80‐2  MS, RI  1632  1636  ‐  0.69 
epi‐β‐bisabolol  235421‐59‐7  MS, RI  1669  1675  ‐  0.34 
α‐bisabolol  515‐69‐5  MS, RI  1686  1688  ‐  0.05 
trans‐α‐bergamotol  88034‐74‐6  MS, RI  1688  1688  ‐  0.05 
drimenol  19078‐37‐6  MS, RI  1768  1769  ‐  1.24 
drimenin  2326‐89‐8  MS, RI  1944  1944  ‐  0.30 
Sum [%]          2.67  5.71 
Oxidized diterpenes             
phytone  502‐69‐2  MS, RI  1840  1841  ‐  0.38 
Sum [%]          0  0.38 
Derivates of phenylpropene             
methyl eugenol  93‐15‐2  MS, RI  1401  1403  0.25  ‐ 
Sum [%]          0.25  0 
Others             
6‐methyl‐hept‐5‐en‐2‐one  110‐93‐0  MS, RI  985  986  0.05  ‐ 
2‐pentyl‐furan  3777‐69‐3  MS, RI  993  991  ‐  0.06 
6‐methyl‐Hept‐5‐en‐2‐ol  1569‐60‐4  MS, RI  998  995  ‐  0.03 
n‐undecane  1120‐21‐4  MS, RI  1101  1100  ‐  2.52 
n‐nonanal  124‐19‐6  MS, RI  1104  1107  0.12  0.26 
1‐nonanol  143‐08‐8  MS, RI  1172  1169  0.33  0.35 
n‐decanal  112‐31‐2  MS, RI, Std  1208  1208  0.15  18.4 
1‐decanol  112‐30‐1  MS, RI  1276  1278  ‐  5.37 
2‐undecanone  112‐12‐9  MS, RI  1293  1294  6.67  ‐ 
n‐undecanal  112‐44‐7  MS, RI  1307  1309  ‐  1.37 
1‐undecanol  112‐42‐5  MS, RI  1377  1379  ‐  1.16 
2‐dodecanone  6175‐49‐1  MS, RI  1393  1393  0.07  ‐ 
n‐dodecanal  112‐54‐9  MS, RI, Std  1411  1410  0.02  37.08 
1‐dodecanol  112‐53‐8  MS, RI, Std  1477  1476  ‐  4.81 
 Molecules 2020, 25, 2432  5  of  11 

Compound  CAS Number  Identification 1  Retention Index  Peak Area [%] 

      Observed  Published 2  H. cordata  P. odorata 
tridecan‐2‐one  593‐08‐8  MS, RI  1496  1495  6.06  ‐ 
n‐dodecanoic acid  143‐07‐7  MS, RI  1569  1570  0.70  ‐ 
n‐tetradecanal  124‐5‐4  MS, RI  1612  1614  ‐  0.26 
intermedeol  6168‐59‐8  MS, RI  1661  1668  ‐  0.13 
2‐pentadecanone  2345‐28‐0  MS, RI  1696  1697  0.21  ‐ 
n‐hexadecanoic acid  57‐10‐3  MS, RI  1963  1968  0.45  0.44 
linoleoyl chloride  7459‐33‐8  MS, RI  2135  2139  ‐  0.16 
n‐dodecenylsuccinic anhydride  1978‐11‐1  MS, RI  2159  2159  ‐  0.29 
Sum [%]          14.83  72.69 
Total peak area [%]          90.59  90.38 
MS—mass  spectra,  RI—retention  index,  Std—analytical  standard;  2  Data  published  in  database 
1 

ofNational Institute of Standards and Technology (NIST) [36] and Adams [37]. 

Hydrodistillation  in  Clevenger‐type  apparatus  of  Persicaria  odorata  produced  a  deep  yellow 
liquid  with  a  strong  spicy  coriander‐like  aroma.  Due  to  its  aroma,  it  is  also  called  Vietnamese 
coriander  [25].  The  essential  oil  content  of  distilled  aerial  parts  of  dried  plant  was  0.41%.  The 
extraction yield is lower in comparison with those previously published by A. A. Almarie et al. [33] 
who achieved a yield of 0.64%. A total of 41 compounds were identified that made up 90.4% of the 
essential oil composition. In comparison with other reports, we identified more compounds [38,39]. 
N. X. Dung et al. [38] used steam distillation for the isolation of essential oils and they identified 28 
compounds and the most abundant were β‐caryophyllene, dodecanal and caryophyllene oxide. M. 
V. Hunter et al. [39] only identified 17 compounds using steam distillation as an extraction technique 
for  the  isolation  of  essential  oil  from  P.  odorata,  where  the  most  abundant  compounds  were  α‐
humulene,  decanal  and  dodecanal.  Our  essential  oil  contained  a  higher  amount  of  non‐terpenoid 
compounds (72.7%) followed by terpenoid compounds (17.7%). Carbonyls and alcohols, especially 
C10 and C12, made up 68.8% of essential oil composition, followed by the group of sesquiterpenes 
with  a  content  of  11.5%  and  oxidized  sesquiterpenes  with  a  content  of  5.7%.  Other  groups 
(monoterpenes, oxidized monoterpenes and oxidized diterpenes) made up less than 1% of essential 
oil  constitution.  The  major  compounds  of  the  essential  oil  were  n‐dodecanal  (37.1%),  n‐decanal 
(18.1%), 1‐decanol  (5.4%), 1‐dodecanol  (4.8%),  α‐humulene (4.5%), cis‐caryophyllene (3.9%) and n‐
undecane (2.5%). The other compounds were present at less than 2%. These results in relative percent 
content are similar with the results of previous reports. It can clearly be seen that the essential oil 
from  Persicaria  odorata  is  rich  in  C10  and  C12  carbonyls.  Dodecanal  and  decanal  are  the  main 
compounds of Persicaria odorata essential oil in all previous published reports and ours [25,33,38,39]. 
When comparing both EOs, it was found that they have only 12 common compounds out of 41 
but they vary in the percent content. The essential oil from Hottuynia cordata contained much more 
monoterpenes and monoterpenoids, where the most abundant compound was myrcene (51%) that 
was  not  found  in  the  essential  oil  from  the  P.  odorata.  On  the  other  hand,  the  essential  oil  from 
Persicaria odorata contained more sesquiterpenes, sesquipterpenoids and especially aldehydes, where 
n‐dodecanal (37.1%) was the dominant compound compared to H. cordata essential oil, where it was 
only 0.02%. In general, the composition of both essential oils is different. The results are adequate 
because both herbs are neither from the same genus nor family, so their similarity in composition 
was  not  expected.  They  were  selected  for  this  study  according  to  their  similar  use  and  same 
geographical occurrence. 

2.2. Antimicrobial Activity 
The antimicrobial activity of H. cordata and P. odorata essential oils is reported in Table 2. Both 
EOs showed antimicrobial efficiency but in different concentrations. H. cordata and P. odorata essential 
oil expressed various antimicrobial activity in the range of 128–1024 μg∙mL−1, 512–1024 μg∙mL−1 in 
broth and 1024 μg∙mL−1, 512–1024 μg∙mL−1 in agar, respectively. In the liquid phase, the lowest MIC 
was showed for H. cordata (128 μg∙mL−1) against E. faecalis and for P. odorata (512 μg∙mL−1) against S. 
Molecules 2020, 25, 2432  6  of  11 

pyogenes, E. faecalis and B. subtilis. In the vapor phase, the lowest MIC was observed for H. cordata 
(1024 μg∙mL−1) against E. faecalis and E. coli and for P. odorata (512 μg∙mL−1) against E. coli. There are 
observable differences between the efficiency of the vapor and liquid phases of observed essential 
oils (EOs). In most cases, the higher MIC reached the liquid phase, except in the case of EOs from P. 
odorata on E. coli, where the vapor phase was twice as effective as the liquid phase. 
In general, Gram‐negative bacteria are more resistant to EOs than Gram‐positive bacteria [40]. 
This is supported by our results because, as it is shown in Table 2, Gram‐positive bacteria were more 
sensitive  to  tested  EOs  in  comparison  with  Gram‐negative  bacteria.  It  is  possible  that  active 
compounds in EOs can more easily break important bonds (peptidoglycan) in the cell wall structure 
of Gram‐positive bacteria. The structure of the Gram‐positive bacteria cell wall allows hydrophobic 
molecules to easily penetrate the cells and act on both the cell wall and within the cytoplasm. After 
the cell wall is broken, the reactive constituents of the essential oil can penetrate the interior of the 
cell and further damage its DNA. The other fact is that phenolic compounds, which are also present 
in the EOs, generally show antimicrobial activity against Gram‐positive bacteria. On the other hand, 
the cell wall of Gram‐negative bacteria is far more complex, and it is, among other reasons, why they 
are more resistant to biologically active compounds (EOs) [4]. 

Table 2. Antimicrobial activity of tested essential oils and antibiotic ampicillin against Gram‐negative 
and Gram‐positive bacteria. 

Sample/Growth/MIC (μg∙mL−1) 
Bacterium  Houttuynia cordata  Persicaria odorata  Ampicillin 
Agar  Broth  Agar  Broth  Agar  Broth 
Gram negative             
Escherichia coli  1024  512  512  1024  >4  0.50 
Pseudomonas aeruginosa  >1024  >1024  >1024  1024  >4  1.00 
Klebsiella pneumoniae  >1024  1024  >1024  1024  >4  >4.00 
Serratia marcescens  >1024  1024  >1024  >1024  >4  4.00 
Gram positive             
Staphylococcus aureus  >1024  1024  >1024  >1024  >4  0.50 
Enterococcus faecalis  1024  128  >1024  512  >4  0.25 
Streptococcus pyogenes  >1024  512  1024  512  >4  1.00 
Bacillus subtilis  >1024  >1024  >1024  512  >4  2.00 

The  most  abundant  compound  in  H.  cordata  essential  oil  is  myrcene.  Myrcene  has  an 
antimicrobial activity and moreover enhances the activity of antibiotics [41]. EOs with a high content 
of myrcene have a positive effect on urinary and genital infections [42,43]. These infections may be 
caused among others by E. coli and E. faecalis; therefore, we could assume that EOs from H. cordata 
will affect them, which has been confirmed in this study. The most abundant compound in P. odorata 
essential oil was α‐humulene, which is known for its anti‐inflammatory effect. It is well known that 
EOs  with  α‐humulene are natural  antimicrobial agents  [44–46].  Pichette  et  al.  [46]  have  tested  the 
antimicrobial activity of α‐humulene against E. coli and S. aureus using the microdillution method. α‐
humulene exhibited an MIC of 2.6 μg∙mL−1 against S. aureus and an MIC of more than 20 μg∙mL−1 
against E. coli. Jang et al. [45] have tested the antimicrobial activity of α‐humulene against B. fragilis 
and obtained MIC of 0.5 μg∙mL−1. The high content of α‐humulene could be the reason why P. odorata 
EOs inhibited the growth of six from eight tested bacteria. On the other hand, there is one possible 
disadvantage when using these oils orally or internally, which is possible irritation or allergy caused 
by  cis‐caryophyllene,  which  both  EOs  contains  [47].  It  would  be  necessary  to  further  examine  the 
negative effect of each compound in the essential oil on the human body before using it for treating 
illness. 
Molecules 2020, 25, 2432  7  of  11 

As far as authors know, there are no previous reports about Persicaria odorata and Houttuynia 
cordata essential oils and its antimicrobial activity in the vapor phase, so it is not possible to further 
compare  those  results  with  other  publications.  However,  there  are  some  reports about  testing  the 
liquid phase of EOs from Houttuynia cordata. Verma et al. [24] tested the antimicrobial activity of the 
essential oil from Houttuynia cordata against four bacteria (Staphylococcus aures, Streptococcus mutans, 
Mycobacterium smegmatis and Enteroccocus faecalis). Their essential oil exhibited MIC in the range of 
0.52–1.04 μL∙mL−1. Ji et al. [20] performed a disc diffusion test to determine antimicrobial activity of 
H. cordata essential oil against Bacillus subtilis, Escherichia coli and Staphylococcus aureus; unfortunately, 
the disc diffusion test is only a screening method, which is not possible to compare with MIC. Lu et 
al. [22] tested the antimicrobial activity of H. cordata EOs against Staphylococcus aureus and Sarcina 
ureae using the broth and agar dilution method. Their reached minimal inhibitory concentration was 
in the range of 0.5–1.0 μL∙mL−1. 

3. Materials and Methods 

3.1. Plant Material 
Approximately 120 g of fresh Chinese herbs (H. cordata and P. odorata) was purchased in a local 
Vietnamese market (TTTM Sapa, Prague, Czech Republic). Each sample was air dried in a dark room 
at the laboratory’s temperature. Prior to the distillation, both herbs, including leaves and stems, were 
crushed into smaller pieces. 

3.2. Essential Oil Isolation 
Essential oils were obtained by hydrodistillation using Clevenger‐type apparatus. The EOs was 
prepared as follows: 26.7 g (H. cordata) or 18.4 g (P. odorata) of dried herb was weighted into a 2000 
mL distillation flask, 1000 mL of water was added and the EOs was distilled for 4 h. The essential oil 
was then separated from hydrosol and stored in sealed dark‐glass vials at 4 °C until the analysis. 

3.3. Bacterial Strains and Culture Media 
Four  Gram‐negative  and  four  Gram‐positive  bacteria  that  caused  respiratory  infections, 
including  upper  and  lower  airway  diseases,  were  chosen.  Standard  strains  were  used  for  the 
experiment:  Escherichia  coli  CCM  3954,  Pseudomonas  aeruginosa  CCM  3955,  Klebsiella  pneumoniae 
NPK12, Serratia marcescens CCM 303, Staphylococcus aureus CCM 4223, Enterococcus faecalis CCM 4224, 
Streptococcus pyogenes  NPK01  and  Bacillus  subtilis  CCM  2215. All  standard  strains  were  purchased 
from Czech Collection of Microorganisms (CCM), Brno, Czech Republic. Bacteria were incubated at 
37  °C  for  24  h.  Prior  to  the  experiment,  bacterial  suspensions  with  turbidity  according  to  the 
McFarland scale were prepared corresponding to the grade 0.5 (~1.5 × 108 CFU∙mL−1). The cultivation 
and assay media were Mueller‐Hinton (agar and broth; Himedia, India). The pH of the broth was 
adjusted  to  a  final  value  of  7.6  using  Trizma  base  and  hydrochloric  acid  (both  Himedia,  India). 
Ampicilin (St. Louis, MO, USA) was used as a positive antibiotic control. 

3.4. Antimicrobial Activity Assay 
The  antimicrobial activity of the  liquid  and vapor phase of Eos was  determined  by the broth 
microdilution  volatilization  method  [35].  The  experiments  were  carried  out  in  96‐well  microtiter 
plates with one well volume of 400 μL. The test is designed for the testing of 6 essential oils in total. 
For this study, we tested only 2 essential oils, and different samples were in other wells. The plates 
were covered with wooden plates and clamped to prevent vapor phase leakage. The edge wells were 
left blank to avoid the edge effect. First, essential oil samples were prepared as follows: approximately 
2 μL of EOs was added to corresponding amount of dimethyl sulfoxide (DMSO) at a concentration 
of 1%, then further diluted in the corresponding broth to initial concentration. Then, the antibiotic 
was prepared at an initial concentration of 4 μg∙mL−1. In the first part of the experiment, 30 μL of agar 
was  pipetted  onto  the  plate  lid  and  inoculated  with  5  μL  of  bacterial  suspension  for  vapor  phase 
Molecules 2020, 25, 2432  8  of  11 

testing. In the second part (liquid phase assay), 100 μL of buffered Mueller‐Hinton broth was pipetted 
into  the  wells.  Each  well  had  a  final  volume  of  100  μL.  Seven  two‐fold  diluted  concentrations  of 
samples starting at a concentration of 1024 μg∙mL−1 were prepared for each essential oil in one row. 
A positive and negative control of bacterial growth was prepared in the first two columns. In the last 
column, 6 two‐fold diluted concentrations of antibiotic starting at 4 μg∙mL−1 were prepared. Finally, 
all wells except the negative control were inoculated with 5 μL of bacterial suspension. Plates were 
closed, fixed and incubated at 37 °C for 24 h. After incubation, minimal inhibitory concentrations of 
EOs were evaluated by the visual assessment of bacterial growth after the coloring of a metabolically 
active bacterial colony with thiazolyl blue tetrazolium bromide dye (MTT; Sigma Aldrich, Prague, 
Czech Republic). A total of 25 μL of 600 μg∙mL−1 dye was applied to the lid and each well of the plate 
and  equilibrated  for  10  min.  The  color  changed  from  yellow  (dead  cells)  to  purple  (live  cells). 
Thereafter,  the  MICs  were  recorded.  All  experiments  were  performed  in  triplicate  in  three 
independent  experiments.  The  results  were  expressed  as  the  median  of  minimal  inhibition 
concentration of the antimicrobial agent values. 

3.5. GC–MS Analysis 
The  GC–MS  analysis  of  samples  was  carried  out  by  using  a  Gas  Chromatograph  GC  2010 
coupled to a Mass Selective Detector GCMS‐QP2010 Plus (both Shimadzu, Kyoto, Japan) and Combi 
Pal Autosampler (CTC Analytics, AG, Zwingen, Swizerland) on a capillary column SLB‐5ms Supelco 
(30 m × 0.25 mm, 2.5 μm film thickness; Bellefonte, PA, USA). The carrier gas was Helium 5.0 (Linde, 
Prague, Czech Republic) with a constant flow of 30 cm∙s−1. The oven temperature program was set at 
an initial temperature of 40 °C for 3 min, then heated up to 250 °C at 2 °C∙min−1 and held at 250 °C for 
10 min. The injector and detector temperatures were set at 200 °C. The mass spectrometry detector 
was operated under electron ionization mode at ionization energy of 70 eV when ions with m/z 33–
500 were scanned. A total of 1 μL of diluted essential oil (200 times, n‐hexane) was injected with a 
split ratio 1:50. The experimental results of retention indices were calculated relative to C8–C33 n‐
alkanes in concentrations of 100–200 μg∙mL−1, dissolved in n‐hexane (Restek, Bellefonte, PA, USA). 
The  calculation  was  performed  according  to  the  van  den  Dool and  Kratz  method,  and  the results 
were further compared to published data [36,37]. Compounds were identified by comparing their 
mass  spectra  with  mass  spectra  of  several  standards  (Table  1)  and  commercial  mass  spectral 
databases  NIST’14  Mass  Spectral  Library  and  FFNSC  2  GC/MS  Library  Release  2.0  (Flavor  and 
Fragrance  Natural  and  Synthetic  Compounds  Library)  and  further  checked  out  by  manual  mass 
spectra evaluation. 

3.6. GC–FID Analysis 
The GC–FID analysis of samples was carried out by using a Gas Chromatograph GC 2010 with 
a flame ionization detector (Shimadzu, Kyoto, Japan) and Autosampler Combi Pal (CTC Analytics, 
AG, Zwingen, Swizerland)  on  a capillary  column SLB‐5ms Supelco  (30  m  × 0.25  mm, 2.5 μm film 
thickness; Bellefonte, PA, USA). The GC–FID conditions were the same as in case of GC–MS analysis. 
The injector temperature was set at 200 °C and the detector temperature was set at 260 °C. A total of 
1 μL of diluted essential oil (200 times, n‐hexane) was injected with a split ratio 1:50. As in the case of 
GC–MS, experimental retention indices were calculated and compared to published data. 

4. Conclusions 
This  study  shows  new  interesting  knowledge  about  EOs  distilled  from  two  Asian  herbs—
Persicaria odorata and Houttuynia cordata. The chemical composition of EOs corresponds to previous 
studies with a minor deviation that may be caused by agronomic factors, sample storage or sample 
preparation and other factors. Both EOs showed antimicrobial activity in different concentrations to 
different  bacteria.  Due  to  great  antibacterial  activity,  along  with  the  composition  of  Eos,  we  see  a 
great potential for future usages of these oils, such as natural antimicrobials or food preservatives. 
As far as we know, we were the first to describe the antimicrobial properties of those EOs in both 
Molecules 2020, 25, 2432  9  of  11 

vapor and liquid phases on eight selected bacteria. Furthermore, it is necessary to study the possible 
cytotoxicity  of  these  oils.  The  disadvantage  is  that  both  oils  contain  cis‐caryophyllene  that  causes 
allergic reactions and skin irritation. It would be necessary to find the balance in concentrations of 
beneficial antimicrobial active compounds and potentially toxic compounds. 

Author Contributions: Conceptualization, K.Ř. and T.B.; methodology, T.B. and M.H.; formal analysis, K.Ř..; 
investigation, K.Ř.; resources, K.Ř.; writing—original draft preparation, K.Ř.; writing—review and editing, P.B.; 
T.B. and D.Š.; supervision, K.V.; project administration, P.B. All authors have read and agreed to the published 
version of the manuscript. 

Funding: This research received no external funding. 

Conflicts of Interest: The authors declare no conflict of interest. 

References 
1.  Caputo, L.; Nazzaro, F.; Souza, L.F.; Aliberti, L.; De Martino, L.; Fratianni, F.; Coppola, R.; De Feo, V. Laurus 
nobilis: Composition of Essential Oil and Its Biological Activities. Molecules 2017, 22, 930. 
2.  Merghni, A.; Marzouki, H.; Hentati, H.; Aouni, M.; Mastouri, M. Antibacterial and antibiofilm activities of 
Laurus nobilis L. essential oil against Staphylococcus aureus strains associated with oral infections. Curr. 
Res. Transl. Med. 2016, 64, 29–34. 
3.  Rafiq, R.; Hayek, S.A.; Anyanwu, U.; Hardy, B.I.; Giddings, V.L.; Ibrahim, S.A.; Tahergorabi, R.; Kang, H.W. 
Antibacterial and Antioxidant Activities of Essential Oils from Artemisia herba‐alba Asso., Pelargonium 
capitatum x radens and Laurus nobilis L. Foods 2016, 5, 28. 
4.  Nazzaro,  F.;  Fratianni,  F.;  De  Martino,  L.;  Coppola,  R.;  De  Feo,  V.  Effect  of  essential  oils  on  pathogenic 
bacteria. Pharmaceuticals 2013, 6, 1451–1474. 
5.  Kon, K.V.; Rai, M.K. Plant essential oils and their constituents in coping with multidrug‐resistant bacteria. 
Expert Rev. Anti‐Infect. Ther. 2012, 10, 775–790. 
6.  Feyaerts,  A.F.;  Mathe,  L.;  Luyten,  W.;  Tournu,  H.;  Van  Dyck,  K.;  Broekx,  L.;  Van  Dijck,  P.  Assay  and 
recommendations for the detection of vapour‐phase‐mediated antimicrobial activities. Flavour Frag. J. 2017, 
32, 347–353. 
7.  Houdkova, M.; Doskocil, I.; Urbanova, K.; Tulin, E.; Rondevaldova, J.; Tulin, A.B.; Kudera, T.; Tulin, E.E.; 
Zeleny,  V.;  Kokoska,  L.  Evaluation  of  antipneumonic  effect  of  Philippine  essential  oils  using  broth 
microdilution volatilization method and their lung fibroblasts toxicity. Nat. Prod. Commun. 2018, 13, 1059–
1066. 
8.  Acs, K.; Bencsik, T.; Boszormenyi, A.; Kocsis, B.; Horvath, G. Essential oils and their vapors as potential 
antibacterial agents against respiratory tract pathogens. Nat. Prod. Commun. 2016, 11, 1709–1712. 
9.  Amat, S.; Baines, D.; Alexander, T.W. A vapour phase assay for evaluating the antimicrobial activities of 
essential oils against bovine respiratory bacterial pathogens. Lett. Appl. Microbiol. 2017, 65, 489–495. 
10.  Reyes‐Jurado,  F.;  Cervantes‐Rincon,  T.;  Bach,  H.;  Lopez‐Malo,  A.;  Palou,  E.  Antimicrobial  activity  of 
Mexican oregano (Lippia berlandieri), thyme (Thymus vulgaris), and mustard (Brassica nigra) essential oils in 
gaseous phase. Ind. Crops Prod. 2019, 131, 90–95. 
11.  Santomauro, F.; Donato, R.; Pini, G.; Sacco, C.; Ascrizzi, R.; Bilia, A.R. Liquid and vapor‐phase activity of 
Artemisia annua essential oil against pathogenic Malassezia spp. Planta Med. 2018, 84, 160–167. 
12.  Torpol, K.; Wiriyacharee, P.; Sriwattana, S.; Sangsuwan, J.; Prinyawiwatkul, W. Antimicrobia activity of 
garlic (Allium sativum L.) and holy basil (Ocimum sanctum L.) essential oils applied by liquid vs. vapour 
phases. Int. J. Food Sci. Technol. 2018, 53, 2119–2128. 
13.  Azadbakht, E.; Maghsoudlou, Y.; Khomiri, M.; Kashiri, M. Development and structural characterization of 
chitosan  films  containing  Eucalyptus  globulus  essential  oil:  Potential  as  an  antimicrobial  carrier  for 
packaging of sliced sausage. Food Packag. Shelf Life 2018, 17, 65–72. 
14.  Chen, C.W.; Xu, Z.W.; Ma, Y.R.; Liu, J.L.; Zhang, Q.J.; Tang, Z.P.; Fu, K.J.; Yang, F.X.; Xie, J. Properties, 
vapour‐phase  antimicrobial  and  antioxidant  activities  of  active  poly(vinyl  alcohol)  packaging  films 
incorporated with clove oil. Food Control 2018, 88, 105–112. 
15.  Silva, F.; Domingues, F.C. Antimicrobial activity of coriander oil and its effectiveness as food preservative. 
Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2017, 57, 35–47. 
Molecules 2020, 25, 2432  10  of  11 

16.  Laird, K.; Phillips, C. Vapour phase: A potential future use for essential oils as antimicrobials? Lett. Appl. 
Microbiol. 2012, 54, 169–174. 
17.  Ji, H.; Kim, H.; Beuchat, L.R.; Ryu, J.H. Synergistic antimicrobial activities of essential oil vapours against 
Penicillium corylophilum on a laboratory medium and beef jerky. Int. J. Food Microbiol. 2019, 291, 104–110. 
18.  Doran, A.L.; Morden, W.E.; Dunn, K.; Edwards‐Jones, V. Vapour‐phase activities of essential oils against 
antibiotic sensitive and resistant bacteria including MRSA. Lett. Appl. Microbiol. 2009, 48, 387–392. 
19.  Asakawa, Y.; Tomiyama, K.; Sakurai, K.; Kawakami, Y.; Yaguchi, Y. Volatile compounds from the different 
organs of Houttuynia cordata and Litsea cubeba (L. citriodora). J. Oleo Sci. 2017, 66, 889–895. 
20.  Ji,  Y.B.;  Yang,  J.J.;  Yu,  M.;  Cao,  Y.;  Guo,  S.Z.;  Qiao,  A.N.  Study  on  medicinal  plant  active  substances 
extraction and antibacterial activity of Houttuynia cordata. In Proceedings of the 1st International Global on 
Renewable Energy and Development, Singapore, 22–25 December 2017; IOP Publishing Ltd: Bristol, UK, 
2017; Volume 100. 
21.  Kwon,  H.‐D.;  Cha,  I.‐H.;  Lee,  W.‐K.;  Song,  J.‐H.;  Park,  I.‐H.  Antibacterial  activity  of  volatile  flavor 
components from Houttuynia cordata Thunb. Prev. Nutr. Food Sci. 1996, 1, 208–213. 
22.  Lu, H.; Wu, X.; Liang, Y.; Zhang, J. Variation in chemical composition and antibacterial activities of essential 
oils from two species of Houttuynia THUNB. Chem. Pharm. Bull. 2006, 54, 936–940. 
23.  Pang, J.; Dong, W.; Li, Y.; Xia, X.; Liu, Z.; Hao, H.; Jiang, L.; Liu, Y. Purification of Houttuynia cordata Thunb. 
essential oil using macroporous resin followed by microemulsion encapsulation to improve its safety and 
antiviral activity. Molecules 2017, 22, 293. 
24.  Verma, R.S.; Joshi, N.; Padalia, R.C.; Singh, V.R.; Goswami, P.; Kumar, A.; Iqbal, H.; Verma, R.K.; Chanda, 
D.;  Chauhan,  A.  Chemical  composition  and  allelopathic,  antibacterial,  antifungal,  and 
antiacetylcholinesterase activity of fish‐mint (Houttuynia cordataThunb.) from India. Chem. Biodivers. 2017, 
14, e1700189. 
25.  Shavandi,  M.A.;  Haddadian,  Z.;  Ismail,  M.H.S.  Eryngium  foetidum  L.  Coriandrum  sativum  and  Persicaria 
odorata L.: A review. J. Asian Sci. Res. 2012, 2, 410. 
26.  Starkenmann, C.; Luca, L.; Niclass, Y.; Praz, E.; Roguet, D. Comparison of volatile constituents of Persicaria 
odorata (Lour.) Sojak (Polygonum odoratum Lour.) and Persicaria hydropiper L. Spach (Polygonum hydropiper 
L.). J. Agric. Food Chem. 2006, 54, 3067–3071. 
27.  Dai, D.N.; Thang, T.D.; Ogunmoye, A.; Eresanya, O.I.; Ogunwande, I.A. Chemical constituents of essential 
oils from the leaves of Tithonia diversifolia, Houttuynia cordata and Asarum glabrum grown in Vietnam. Am. 
J. Essent. Oil. 2015, 2, 17–21. 
28.  Oh, S. An effective quality control of pharmacologically active volatiles of Houttuynia cordata Thunb by fast 
gas chromatography‐surface acoustic wave sensor. Molecules 2015, 20, 10298–10312. 
29.  Zhang, W.; Lu, F.; Pan, S.; Li, S. Extraction of volatile oil from Houttuynia cordata and its anti‐biotic and anti‐
virus activities. Pract. Prev. Med. 2008, 15, 312–316. 
30.  Jiangang, F.; Ling, D.; Zhang, L.; Hongmei, L. Houttuynia cordata Thunb: A review of phytochemistry and 
pharmacology and quality control. Chin. Med. 2013,4, 101–123. 
31.  Fujita,  K.;  Chavasiri,  W.; Kubo, I. Anti‐salmonella  activity of  volatile compounds  of  Vietnam  coriander. 
Phytother. Res. 2015, 29, 1081–1087. 
32.  Chansiw, N.; Paradee, N.; Chotinantakul, K.; Srichairattanakool, S. Anti‐hemolytic, antibacterial and anti‐
cancer activities of methanolic extracts from leaves and stems of Polyg. odoratum. Asian Pac. J. Trop. Biomed. 
2018, 8, 580–585. 
33.  Almarie, A.; Mamat, A.; Wahab, Z.; Rukunudin, I. Chemical composition and phytotoxicity of essential oils 
isolated from Malaysian plants. Allelopath. J. 2016, 37, 55–69. 
34.  Murray, A.F.; Satooka, H.; Shimizu, K.; Chavasiri, W.; Kubo, I. Polygonum odoratum essential oil inhibits the 
activity of mushroom derived tyrosinase. Heliyon 2019, 5, e02817. 
35.  Houdkova, M.; Rondevaldova, J.; Doskocil, I.; Kokoska, L. Evaluation of antibacterial potential and toxicity 
of  plant  volatile  compounds  using  new  broth  microdilution  volatilization  method  and  modified  MTT 
assay. Fitoterapia 2017, 118, 56–62. 
36.  Linstrom,  P.J.;  Mallard,  W.  NIST  Chemistry  WebBook,  NIST  Standard  Reference  Database  Number  69. 
Availabe online: https://webbook.nist.gov/chemistry/ (accessed on 30 April 2020). 
37.  Adams, R.P. Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography/Mass Spectrometry, 4th ed. ed.; 
Allured Publishing Corporation: Carol Stream, IL, USA, 2007. 
Molecules 2020, 25, 2432  11  of  11 

38.  Dũng, N.X.; Van Hac, L.; Leclercq, P.A. Volatile constituents of the aerial parts of Vietnamese Polygonum 
odoratum L. J. Essent. Oil Res. 1995, 7, 339–340. 
39.  Hunter,  M.V.;  Brophy,  J.J.;  Ralph,  B.J.;  Bienvenu,  F.E.  Composition  of  Polygonum  odoratum  Lour.  from 
Southern Australia. J. Essent. Oil Res. 1997, 9, 603–604. 
40.  Trombetta,  D.;  Castelli,  F.;  Sarpietro,  M.G.;  Venuti,  V.;  Cristani,  M.;  Daniele,  C.;  Saija,  A.;  Mazzanti,  G.; 
Bisignano,  G.  Mechanisms  of  antibacterial  action  of  three  monoterpenes.  Antimicrob.  Agents  Chemother. 
2005, 49, 2474–2478. 
41.  Sieniawska,  E.;  Swatko‐Ossor,  M.;  Sawicki,  R.;  Skalicka‐Woźniak,  K.;  Ginalska,  G.  Natural  terpenes 
influence the activity of antibiotics against isolated Mycobacterium tuberculosis. Med. Princ. Pract. 2017, 26, 
108–112. 
42.  Lis, A.; Banaszczak, P. Chemical composition of the essential oils from flowers and leaves of Phellodendron 
chinense CK Schneid. J. Essent. Oil‐Bear. Plants 2010, 13, 52–58. 
43.  Arnal‐Schnebelen,  B.;  Hadji‐Minaglou,  F.;  Peroteau,  J.;  Ribeyre,  F.;  De  Billerbeck,  V.  Essential  oils  in 
infectious gynaecological disease: A statistical study of 658 cases. Int. J. Aromather. 2004, 14, 192–197. 
44.  Fernandes, E.S.; Passos, G.F.; Medeiros, R.; da Cunha, F.M.; Ferreira, J.; Campos, M.M.; Pianowski, L.F.; 
Calixto, J.B. Anti‐inflammatory effects of compounds alpha‐humulene and (−)‐trans‐caryophyllene isolated 
from the essential oil of Cordia verbenacea. Eur. J. Pharmacol. 2007, 569, 228–236. 
45.  Jang, H.‐I.; Rhee, K.‐J.; Eom, Y.‐B. Antibacterial and antibiofilm effects of α‐humulene against Bacteroides 
fragilis. Can. J. Microbiol. 2020, 66, 1–11. 
46.  Pichette, A.; Larouche, P.L.; Lebrun, M.; Legault, J. Composition and antibacterial activity of Abies balsamea 
essential oil. Phytother. Res. 2006, 20, 371–373. 
47.  National  Center  for  Biotechnology  Information.  PubChem  Database.  Available  online: 
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/Caryophyllene (accessed on 28 April 2020). 

Sample Availability: Samples of the compounds are not available from the authors. 

© 2020 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland. This article is an open access 
article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution 
  (CC BY) license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).