TRABAJO GRUPAL CINÉTICA ENZIMÁTICA

TME 143 2020

1.- La complicación generada en personas con hipertensión causa

anualmente 9,4 millones de muertes en el mundo, por lo que la búsqueda de
compuestos que permitan disminuir la presión arterial de manera eficiente
tiene gran relevancia clínica. Con los años, se ha descrito una importante
proteína encargada de modular este proceso, la enzima convertidora de
angiotensina (ECA), la cual cataliza la transformación de angiotensina I (AI) en
angiotensina II (AII). El aumento en los niveles de AII produce un potente
efecto vasoconstrictor, lo que favorece la hipertensión.

El captopril es el primer fármaco no peptídico usado en el tratamiento de la

hipertensión. Cuando se realizaron ensayos enzimáticos con la ECA en
presencia o ausencia del fármaco, se obtuvieron los siguientes resultados:

[AI] V0 (µmol/seg) V0 (µmol/seg)

(µM) sin captopril con captopril
0,15 2,96 1,20
0,35 6,00 2,50
0,55 9,00 4,20
1,00 13,00 6,70
2,50 19,50 12,70

a) Determine los valores de Km y Vmáx para la ECA en ausencia y presencia

del captopril.

b) Explique, bioquímicamente, como se ve afectada la actividad de la ECA

en presencia del captopril.

c) En base a sus resultados, explique el efecto del captopril sobre la

presión arterial.

d) Determine la velocidad de la reacción en presencia y ausencia de

captopril cuando [AI] = 1,5 µM.
2.- Las intoxicaciones por metanol, aunque no son frecuentes, conllevan una
elevada morbilidad y mortalidad. El metanol es metabolizado en el hígado,
en la mitocondria del hepatocito, por la enzima alcohol deshidrogenasa
(ADH) a formaldehído y subsecuentemente por la aldehído-deshidrogenasa a
ácido fórmico:

Después de 30 horas post-consumo de metanol, se presenta acidosis

metabólica severa, desórdenes visuales, ceguera, convulsiones, coma, y
puede ocurrir la muerte.
En la siguiente tabla se presentan los datos de la cinética de la ADH usando
metanol como sustrato, en ausencia o presencia de etanol.

V0 V0
[metanol]
sin etanol con etanol
(mM)
(mM/min) (mM/min)
0,5 2,5 1,5
1 4,5 2,8
5 10 8
9 12 9,8

a) Determine Km y Vmax de la ADH en presencia y ausencia de etanol.

b) Explique si el etanol está actuando como un inhibidor de la formación
de formaldehído.
c) Cuando la enzima ADH es incubada sólo con etanol, los parámetros
enzimáticos calculados son Km= 0,55 mM y Vmax= 17,5 mM/min. ¿Por
cuál de los dos alcoholes tiene más afinidad la ADH?
d) ¿Por qué a una persona intoxicada por metanol se le da etanol como
tratamiento primario?
3.- La molécula cGMP está íntimamente relacionada con la relajación de
estructuras que están conformadas por musculatura lisa, como la encontrada
en los vasos sanguíneos del pene en el hombre. Altas concentraciones de
cGMP promueven vasoconstricción, y por tanto la erección. Una enzima que
podría estar relacionada con la regulación de este proceso es la
fosfodiesterasa de tipo 5 (PDE5), la cual cataliza la hidrólisis de la molécula de
cGMP. Se ha estudiado el efecto de diferentes moléculas en esta enzima para
determinar su relación con la función erectil, y una de ellas presenta el
siguiente efecto:

V0 (nmol/min) en V0 (nmol/min) en
[S] (M) ausencia de la presencia de la
droga droga
0,5 4,2 2,4
1 6,7 3,6
2 8,6 5
2,5 10 5,9
3,3 12,5 6,7
Al respecto, explique:

a) ¿Cuál es el valor de Km y Vmax de la enzima, en presencia y ausencia de

la droga?

b) ¿La droga disminuye la actividad de la enzima?, si es así, ¿Qué tipo de

inhibición presenta?

c) ¿Qué velocidad se espera cuando [S]=1,25 (M) en ausencia y

presencia de la droga?

d) ¿Se espera que la droga sea beneficiosa para la disfunción eréctil?

4.- La vitamina B9 o ácido fólico es esencial para el metabolismo de síntesis
de nucleótidos, que son las unidades estructurales fundamentales en la
síntesis del ADN y del ARN. Su forma activa, como cofactor enzimático es el
tetrahidrofolato (THF), producido por la enzima dihidrofolato reductasa
(DHFR) a partir del ácido fólico, según la reacción:

Desde la década del 1950 se ha utilizado el Metotrexato (MTX) como

agente anti-cancerígeno, por su actividad antiproliferativa. En la figura se
muestra la estructura del MTX:

Para comprobar la eficacia del tratamiento con MTX, se realizó un ensayo

enzimático con la enzima DHFR, en presencia y ausencia de MTX,
obteniéndose los datos de la siguiente tabla:

[Ácido Fólico] V0 sin MTX V0 con MTX

mM (μmol/min) (μmol/min)
0,5 30,6 21,7
1,0 41,9 32,9
1,5 48,0 39,7
2,5 54,3 48,1
3,5 57,2 50,6
a) Determine Km y Vmax en presencia y ausencia del MTX.
b) Explique cuál es el efecto del MTX sobre la enzima.
c) Determine la concentración necesaria de Ácido Fólico para reducir a un
tercio la actividad máxima de la DHFR, en ausencia de MTX.
d) En base a los resultados, explique por qué se usa MTX para el
tratamiento del cáncer.
e) Dibuje la gráfica de dobles recíprocos para la actividad de la DHFR, en
presencia y ausencia de MTX. Indique claramente el nombre de los
ejes, de las rectas y de los interceptos.
5.- Una enzima importante en la
regulación de la glicólisis es la
Fosfofructokinasa-1 (PFK-1), cuya
actividad está regulada por diversos
metabolitos. Ésta cataliza la tercera
reacción de este proceso catabólico de
la glucosa, cuyo objetivo es la
producción de energía. En el gráfico se
observa la actividad de dicha enzima en
presencia de bajas concentraciones, o
concentraciones fisiológicas de ATP.

a) Explique brevemente cuál es el efecto del ATP sobre la PFK-1.

b) Explique brevemente el efecto de concentraciones altas y bajas de ATP

sobre la glicólisis.

c) Identifique y justifique el tipo de regulación que se observa sobre la

enzima PFK-1.

d) Explique brevemente en qué condiciones fisiológicas se observaría un

aumento significativo en la actividad de la enzima PFK-1.