INHIBICIÓN ENZIMÁTICA.

 
 
Toda substancia que tiene la capacidad de unirse a una enzima y, al hacerlo, reducir su actividad es 
un inhibidor de ésta enzima. Los inhibidores existen en la naturaleza como parte de mecanismos de 
control de actividad o interacción entre especies (venenos, sistema de protección). Para nosotros 
los inhibidores son importantes tanto en el área de investigación (estudios de cinética, estructura 
del  sitio  activo,  estudios  de  afinidad  y  rutas  metabólicas)  como  en  aplicaciones  industriales 
(fármacos, antibióticos, conservadores, herbicidas, insecticidas, armas químicas, etc.).  
Los inhibidores pueden clasificarse bajo dos criterios diferentes: 
 
1) Por su sitio de unión a la enzima. 
A) Isostéricos. Se unen en el sitio activo. 
B) Alostéricos. Se unen fuera del sitio activo. 
 
2) Por su efecto sobre los parámetros cinéticos de la enzima. 
A) Reversibles.  Enzima  e  inhibidor  interactúan  mediante  interacciones  débiles,  una  vez 
unidos,  se  pueden  liberar  uno  de  otro,  por  lo  que  la  interacción  y  formación  del 
complejo  EI  es  un  proceso  regido  por  el  equilibrio.  Dependiendo  su  afectación  a  las 
constantes cinéticas se conocen al menos 4 clases. 
B) Irreversibles. Al interaccionar con la enzima, se unen de manera covalente a ésta, siendo 
el  proceso  de  formación  del  complejo  EI  un  proceso  regido  por  la  velocidad  de 
inhibición. 
 
 
A) INHIBIDORES IRREVERSIBLES. 
 
1) INHIBIDORES COMPETITIVOS. 
 
Son inhibidores que compiten con el sustrato para unirse con la enzima, es decir, al estar unido uno 
no puede unirse el otro, y viceversa. Esto puede deberse a que el inhibidor es similar al sustrato y 
puede unirse al sitio activo, pero no ser catalizado, que la unión de S o I bloquee el sitio de unión 
del otro a la enzima, que la unión de S o I altere la estructura de la enzima, deformando el sitio de 
unión de la otra molécula o alguna otra situación. Para éste inhibidor, el equilibrio se representa de 
la siguiente manera: 
 

 
Dónde    
 
Y replanteamos la concentración de enzima como    
 
Esto transforma la ecuación de Michaelis Menten en: 
  
1
 
Si definimos km aparente:   1  
 
Podemos reescribir el modelo: 
 
 
La necesidad de definir una km aparente es el resultado de la competencia de S e I por unirse a E, lo 
que “desplaza” el equilibrio de unión entre E y S, ya que se requerirá mayor concentración de S para 
lograr desplazar por completo a I y lograr saturar a E. Esto se puede observar en la representación 
gráfica del modelo Michaelis Menten: 
 
 

 
 
 
En  ésta  se  observa  que  eventualmente  se  alcanza  la  misma  velocidad  máxima,  pero  se  requiere 
mayor cantidad de sustrato para alcanzar dicha velocidad. Por lo tanto, se observa también en el 
modelo  de  Lineweaver‐Burk  (dobles  inversos)  un  cambio  en  el  comportamiento  gráfico, 
manteniéndose la ordenada al origen (1/vmax), pero cambiando la ordenada a las abscisas (‐1/km) y 
pendiente (km/vmax) debido a la diferencia en Kmap: 
 
  
 
Finalmente,  es  importante  calcular  la  constante  de  inhibición  (kI),  pues  es  el  parámetro  que 
caracteriza la capacidad inhibitoria del inhibidor. Se puede hacer una interpretación similar a la de 
km para kI: un valor bajo implica alta afinidad por la enzima, y por tanto se trata de un inhibidor 
eficiente,  y  viceversa.  El  cálculo  de  kI  es  diferente  para  cada  tipo  de  inhibidor,  en  el  caso  de  un 
inhibidor competitivo, se obtiene de la siguiente regresión y su correspondiente gráfica: 
 

 
De  modo  que  se  puede  obtener  kI  al  despejar  de  la  pendiente  kI,  utilizando  km  de  la  enzima  sin 
inhibidor. 
 
2) INHIBIDORES NO COMPETITIVOS. 
 
Los inhibidores competitivos son aquellos en los que la unión del sustrato a la enzima no inhibe la 
unión del inhibidor a ésta, ni la unión del inhibidor inhibe la del sustrato. Ambas moléculas pueden 
estar unidas a la enzima a la vez, sin embargo, cuando el inhibidor se encuentra unido, la enzima es 
catalíticamente inactiva. El equilibrio de éste sistema queda representado de la siguiente manera: 

 
Ahora:    
Esto reduce de manera efectiva la cantidad de enzima total activa en el sistema, y recordando que 
vmax es una función de [E]T, ésta es la constante que  se verá afectada: 

1
 
 
Dónde: 

 
1
 
En éste caso, el modelo de Michaelis Menten muestra que se ve reducida la velocidad máxima al 
verse reducida la cantidad de enzima catalíticamente disponible, pero no hay variación en km: 

 
Igualmente, se observará un cambio en la gráfica de Lineweaver‐Burk: 

 
 
Ahora, se observa que no hay cambio en km (ni la ordenada a las abscisas), pero la vmax, (y por tanto 
la ordenada al origen) presentan variación. Para el cálculo de una kI no competitiva, se emplean la 
siguiente regresión y gráfica: 

 
Siguiendo para el cálculo de kI el mismo procedimiento que en la inhibición competitiva. 
3) INHIBIDORES ACOMPETITIVOS. 
Los inhibidores acompetitivos son aquellos que son incapaces de unirse a la enzima, únicamente se 
unen al complejo enzima sustrato, haciendo a éste más estable.  

 
Ahora:    
Esto  conlleva  a  una  alteración  del  modelo  de  Michaelis  Menten,  el  cuál  presenta  variación 
significativa respecto a su forma tradicional: 

1
1
A causa de la estabilización del complejo ES, aparentemente la enzima incrementa su afinidad por 
el sustrato, lo que se ve reflejado en una disminución de km, pero al ser catalíticamente inactivo el 
complejo ESI, se reduce su velocidad. El modelo de Michaelis Menten se ve alterado de la siguiente 
manera: 

 
El modelo de Lineweaber‐Burk genera, para éste tipo de inhibición, líneas paralelas:  

 
Y el cálculo de la constante de inhibición se hace mediante la extrapolación hasta la ordenada a las 
abscisas, correspondiendo éste punto con –kI: 

 
4) INHIBIDORES MIXTOS. 
Éste  tipo  de  inhibidor  presenta  un  modelo  de  equilibrio  similar  al  del  inhibidor  no  competitivo, 
siendo posible que inhibidor y sustrato se unan a la enzima independientemente de la presencia del 
otro. Sin embargo, en éste caso la unión de una u otra molécula si afecta la afinidad de la molécula 
aún no unida por la enzima: 

 
Ahora:    
Pero :    ´ ´ 

Nuevamente, hay una alteración significativa al modelo de Michaels Menten: 

1
´
 
1
1
1
´
 

Pese a que éste modelo, así como el da la inhibición acompetitiva no se ajustan del todo a la forma 
tradicional del modelo de Michaelis Menten, el cálculo de las constantes cinéticas puede hacerse a 
partir de la forma tradicional de éste. Sin embargo, para estimar el comportamiento de la velocidad, 
es necesario emplear los modelos aquí presentados. En el caso del modelo de Michaelis Menten 
para un inhibidor mixto, se observan características de la inhibición competitiva y no competitiva 
(de ahí su nombre), es decir, una diminución en la velocidad máxima y un aumento en km (pérdida 
de afinidad ES). 

 
  
Se observa también la alteración del modelo de dobles inversos: 

 
En éste caso, son necesarios tanto el cálculo de kI como el de kI´: 
 

 
 
 
 

 
 
 B) INHIBIDORES IRREVERSIBLES. 
 
La mayoría de los inhibidores con mayor toxicidad (biocidas) son los irreversibles, ya que al unirse 
de manera covalente a la enzima, la inutiliza de manera permanente, impidiendo por completo su 
actividad en lugar de sólo reducirla, como los reversibles. En muchas ocasiones, estas interacciones 
son con aminoácidos en el sitio activo (particularmente el sitio catalítico), aunque no excluyen otro 
tipo  de  interacciones.  Mientras  que  en  el  caso  de  un  inhibidor  reversible  es  posible  restaurar  la 
actividad de la enzima al retirar el inhibidor (purificar la enzima) en un proceso relativamente fácil, 
los inhibidores irreversibles son imposibles de separar de la enzima y conservar la actividad de ésta. 
Su  comportamiento  cinético  es  aparentemente  similar  al  del  inhibidor  no  competitivo,  pero 
recordando que éste proceso está regido por un tiempo y no por un equilibrio de inhibición. Por lo 
tanto, en lugar de alteración de constantes cinéticas, se observa una velocidad de formación del 
complejo EI, inactivo. 
 

 
 
Si consideramos: [E]=e, [I]=i y [EI]=z, tenemos: 
 
 
Integrando ésta ecuación, tenemos: 
 
1
 
 
Cuando i>>>e, la solución anterior puede reducirse a un modelo de pseudo primer orden: 
 
´  
 
Dónde k´ es la constante de pseudo primer orden. El término i desaparece pues al ser mucho mayor 
que  e,  su  variación  se  vuelve  muy  poco  significativa,  por  lo  que  i  permanece  prácticamente 
constante. k´ es la pendiente obtenida al graficar ln(e‐z) contra el tiempo.