TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

1.1-LAS CÉLULAS PROCARIOTA Y EUCARIOTA

Todos los organismos están formados por una o más células (unicelulares o pluricelulares), estas son la unidad básica de
organización de la vida. La información para formar las células está codificada en sus genes. Todas proceden de otras células
previas y se reproducen por división célular.
Las células procariotas se encuentran en Eubacterias y arqueobacterias. Las eucariotas en el resto de los organismos.
Las células procariotas son más simples, carecen de organulos de almacenamiento, y no poseen un núcleo diferenciado.
Tambien difieren en los mecanismos de división celular y en la estructura de sus cromosomas.
Las células procariotas presentan un solo cromosoma circular de ADN, aunque en ocasiones puede ser de ARN, mientras en
Eucariotas presentan dos o más cromosomas lineales.

1.2.-LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Los ácidos nucleicos son biomoleculas muy grandes, formadas por C, H, O, N, P. Estan formados por la uniíon de muchas
unidades repetidas unidas entre si llamadas NUCLEOTIDOS.
Hay dos tipos: ADN y ARN. Sus funciones principales son transmitir las caracteristicas hereditarias de una generación a la
siguiente y dirigir la síntesis de PROTEINAS.
a) COMPOSICIÓN DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
Los ácidos nucleicos son biopolimeros de peso molecular muy elevado. Estan formados por la unión de muchas unidades
repetidas unidas entre sí llamadas NUCLEOTIDOS.
Cada Nucleotido esta formado por: PENTOSA, GRUPO FOSFATO, y BASES NITROGENADAS.
Los azucares de los ácidos nucleicos son las pentosas, formadas por cinco átomos de carbono numerados del 1´al 5´. El azucar
del ARN es la Ribosa y del ADN la Desoxirribosa.Se diferencian porque la Ribosa tiene un hidroxilo(-OH), en el carbono 2´.
Las bases nitrogenadas, pueden ser de dos tipos: PURINAS O PIRIMIDINAS. Las bases PURICAS, estan formadas por dos anillos,
uno de 6 átomos y otro de 5. Pueden ser ADENINA y GUANINA que estan presentes en el ADN y el ARN. Mientras que las
PIRIMIDINAS, estan formadas por un anillo de 6 átomos, pueden ser CITOSINA, TIMINA y URACILO (solo en ARN). 1

Las bases nitrogenadas se unen a la pentosa mediante un enlace covalente al Carbono 1´de la pentosa ENLACE N-GLUCOSÍDICO.
La unión de una base nitrogenada a la pentosa se denomina NUCLEOSIDO.
El GRUPO FOSFATO, se une a la pentosa por el Carbono 5´ mediante un ENLACE ÉSTER, este aporta cargas negaticas a las
moléculas de nucleicos.

La unión de un nucleótido a un solo grupo de fosfato da lugar a nucleótidos monofosfatos. Por ejemplo. La unión de la
adenosina a un fosfato da lugar al nucleótido Adenosin Monofosfato (AMP). Pero también existen nucleotidos con dos o tres
grupos fosfato, ADP o ATP.
Además de almacenar la información genetica, tienen otras funciones biologicas importantes de naturaleza coenzimatica y
energética (ATP)

La unión de muchos nucleótidos se realiza mediante enlaces covalentes -> Fosofodiéster entre el Carbono 5´ y 3´.
El esqueleto de los ácidos nucleicos esta formado por grupos alternos de pentosa y fosfato. Mientras que las bases nitrogenadas
estan unidas lateralmente a las Pentosas. La cadena representa dos extremos, el SUPERIOR -> C5´ y el INFERIOR -> C3´
1.3.-ADN
El ADN esta asociado a proteinas (nucleoproteínas). La mayoria son HISTONAS, pero tambien hay una pequeña proporción NO
HISTONICAS.
EN las células eucariotas el ADN se encentra en el núcleo, pero tambien en las mitocondrias y cloroplastos. El ADN forma genes,
el material hereditario de las células. Almacena la información genética para el crecimiento y desarrollo del organismo, y
contiene instrucciones para la producción de todas las PROTEINAS que el organismo necesita.
ESTRUCTURA PRIMARIA-secuencia de nucleótidos, la secuencia en que estos se unen entre sí y almacena la información
genética.
ESTRUCTURA SECUNDARIA-es la disposición espacial, con aspectos sobre la estructura tridimensional.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

La Ley de CHARGAFF establece que la cantidad de adenina(A) es igual a la cantidad de timina(T) y la cantidad de guanina (G) es
igual a la cantidad de citosina(C); es decir, el número total de bases purinas es igual al número total de bases pirimidinas (A+G =
C+T) en el ADN.
Según el modelo de WATSON y CRICK, la estructura tridimensional es una doble cadena de polinucleótidos, en las que las bases
nitrogenadas A=T y G≡C Puentes de hidrógeno. Estos apareamientos explican la proporcion de bases de Chargaff.

La secuencia de bases de nucleótidos en una hebra de ADN en la dirección 5´y 3´es complementaria a la otra en dirección 3´ a
5´; Ambas cadenas son ANTIPARALELAS. por convenio, la pauta de lectura de la secuencia SIEMPRE sera 5´a 3´

ESTRUCTURA TERCIARIA
En algunos tipos de ARN la estructura secundaria puede plegarse sobre si misma.
1.4.1.-TIPOS DE ARN
­ ARN MENSAJERO
Su función es transmitir la inflormación genética desde el nucleo al citoplasma. Se forma en un proceso denominado
TRANSCRIPCIÓN. Cada ARNm codifica una secuencia de nucleotidos que va a traducirse en proteinas. Cada grupo de tres
bases del ARNm especifica un determinado aminoacido y se denomina CODON o TRIPLETE.
Los ARNm de las células eucariotas proceso de maduración en qCARAue se eliminan (SPILCING) los INTRONES de los genes.
–
­ ARN TRANSFERENCIA
Es el tipo mas pequeño de ARN, realiza su función en el citoplasma. Existe un ARNt especifico para cada Aminoácido. EN el
extremo C3´existe una secuencia –C-C-A donde se une un aminoácido especifico. Durante la TRADUCCiÓN cada ARNt porta
su aminoácido especificio hasta los Ribosomas. Alli reconoce su Codón correspondiente y se une a él a través de su
ANTICODÓN.
­ ARN RIBOSOMICO
2
Este tipo de ARN es caracteristico por su estructura bicatenaria. Al asociarse a proteinas forma los Ribosomas. El ARNr se
encientra también en Mitocondrias y Cloroplastos. En eucariotas se sintetiza en la región del Nucleolo.
1.5.-PROPIEDADES FÍSICAS DEL ADN
 Tamaño y peso molecular, 103 pares de bases (bp) o 106 megabases. Longuitud 0.34µm y 660.000 Dalton
 Propiedades Acido base: Son ácidas por los grupos fosfato.
 Ph: entre 4,0 y 11,0
 Viscosidad, debido a la rigidez, la longuitud y el escaso diametro. Por ello es muy viscoso. Mas viscoso en bicatenarios.
 Solubilidad, Son solubles en agua por su carácter polar, y poco solubles en disolventes orgánicos.
 Densidad, es mayor en el ARN y en los monocatenarios > que en los bicatenarios
 Absorbancia, máximo de luz ultravioleta de 260nm debido a las bases nitrogenadas. > en monocatenarios. Permite
medir la concentración de ADN y por tanto la calcular la pureza de la solución con la proporción 260/280
 Desnaturalización del ADN
 Renaturalización del AND
 Hibridación
1.6.-CARACTERISTICAS FUNCIONALES DEL ADN

 Ilustra la transmisión y expresión de la herencia genética tras el descubrimiento de la codificación esta en la doble
hélice del ADN.
 Propone que existe una unidireccionalidad: ADN es trascrito a ARN y este traducido a proteína.
 Propuesto por Francis Crick, que resumio como “un Gen, una proteina”
 Actualmente, la aparicion de los virus de ARN que son capaces de hacer copias de si mismos, asi como la de los priones,
y su capacidad de alterar proteinas (duplicandose) con secuencias similares a las suyas han añadido nuevos apartados a
este dogma; que vemos en la ilustración:
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

1.6.1.-REPLICACIÓN DEL ADN

En la replicación semiconservativa, se originan dos moléculas de ADN, cada una de ellas compuesta de una hebra del ADN
original y de una hebra complementaria nueva. En otras palabras el ADN se forma de una hebra vieja y otra nueva. Es decir, las
hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas.

La replicación del ADN es diferente en eucariotas que en procariotas . Sin embargo hay características igualmente válidas para
ambos que conviene tener claro.

 La replicación no comienza al azar sino en puntos concretos (en procariotas en un sólo punto). A cada una de estas
unidades de replicación se les denomina replicones . En eucariotas cada uno de ellos comienza la replicación de manera
simultánea. Como consecuencia las dos nuevas hebras se van alargando progresivamente por adición secuencial de
desoxirribonucleótidos.
 En cada punto de inicio de la replicación se rompren los puentes de hidrógeno de la doble hélice y se genera una
burbuja (bubble) de replicación con dos horquillas (fork).
 Las ADN polimerasas que intervienen en la replicación tienen dos “limitaciones”:

­ No pueden unir dos nucléotidos entre libres entre sí, sólo añadirlos a una cadena (por eso necesitan una cadena
previa llamada cebadaor que es un ARN)
­ La dirección en la que pueden unir desoxirribonucleótidos es 5’--> 3’
3
La maquinaria enzimática, procesos de iniciación y estabilización del ADN que se duplica aparte, requiere:

 Un CEBADOR al que las ADN polimerasas puedan añadir los nucleótidos. Este cebador es un ARN fabricado por la
primasa
 Molde o plantilla . El orden correcto de incorporación de los nucleótidos viene determinado por su complementariedad
de bases con la secuencia de cada hebra de DNA, que actúa como molde o plantilla.
 DNA polimerasas . Son la familia de enzimas que van a unir nucleótidos en dirección 5’-->3’. En procariotas hay tres la
ADNpol I, II y III, siendo las III la que realiza la principal tarea de replicación. En eucariotas hay cinco ADN Polimerasas
principales.

FASES DE LA REPLICACIÓN DEL ADN

INICIACIÓN

En esta etapa ocurre el ensamblaje del sistema sintetizador. Un complejo de seis proteínas denominado: COMPLEJO DE
RECONOCIMIENTO DE ORIGEN (CRO)
En procariotas, como ya se ha dicho, la replicación comienza en un sólo lugar que están constituido en una región. En eucariotas,
dada la gran longitud de sus cromosomas, la duplicación comienza en varios puntos y habrá, por lo tanto, varios replicones.
La iniciación comienza con el reconocimiento del (los) punto(s) de origen.
 HELICASAS: son proteínas generalmente hexaméricas que se unen al ADN en el origen de la replicación y su función es
romper los puentes de hidrógeno de la molécula de ADN que se va a replicar. Consume ATP en el proceso
 PROTEÍNAS DE UNIÓN SSB . Impiden que los puentes de hidrógeno se vuelvan a formar, y se forman estructuras
denominadas BURBUJAS DE REPLICACIIÓN, cuyos extremos reciben el nombre de HORQUILLAS DE REPLICACIÓN
 TOPOISOMERASAS: al separarse las hebras del ADN se genera tensión en los extremos de la burbuja que aún no se han
abierto debido al súperenrrollamiento que se produce. Las toposiomerasas alivian esta tensión.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

Ya está formado el complejo de inicio y la burbuja con sus dos horquillas abierta. Ahora entrarán en acción las ADNpolimerasas
encargadas de copiar de manera complementaria cada una de las hebras parentales.

ELONGACIÓN
 PRIMASA: fabrica el ARN cebador.
 A cada complejo de inicio se le va a unir la ADNpolimerasa IIIencargada de la elongación formándose así el replisoma .
Esta ADNpolimerasa III unirá los desoxirribonucléotidos a los ARNcebadores de manera complementaria a la hebra
parental que sirve de molde.
Sin embargo hay un problema: las cadenas de ADN son antiparalelas y las ADNpolimerasas sólo pueden unir nucleótidos en
sentido 5’-->3’ y ese es sólo el sentido de avance de una de las cadenas de cada horquilla. Esta hebra se puede sintetizar de
manera continua y se denomina hebra conductora , líder o guía.
Sin embargo, la otra hebra parental se encuentra en sentido 5’-->3’ por lo que la síntesis de su complementaria sería en sentido
3’-->5’, capacidad que no tiene la ADNpolimerasa como ya se ha dicho.
La solución al problema de la síntesis de esta cadena se reveló al comprobar que se producía en forma de pequeños fragmentos
llamados fragmentos de OKAZAKI. Se propuso entonces un modelo en el que la síntesis complementaria de la hebra molde que
iba en sentido 5’-->3’ de cada horquilla se produciría en sentido opuesto al de avance de la horquilla y en forma discontinua. A
esta hebra de nueva síntesis que se replica “a trocitos” se le denominó hebra retardada o retrasada 4
Lógicamente, la síntesis de cada fragmento de Okazaki requiere su propio ARN cebador.
Para que esto sea posible es necesario que la hebra molde en sentido 5’-->3’ forme un bucle para disponerse en sentido 3’-->5’
en el sentido de avance de la horquilla ya que es un mismo complejo multienzimático con ADN polimerasas la que forma tanto
la hebra conductora como la retardada . La elongación se producirá por la unión de los Nucleotidos complementarios
correspondientes mediante ENLACE FOSFODIÉSTER.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

TERMINACIÓN
Termina evidentemente cuando la ADNpolimerasa termina la repicación en todas las horquillas (o en todo el ADN circular en el
caso de sea una célula procariota)
En el caso de los eucariotas, se llega al final de la replicación al final de la molécula del ADN lineal de cada cromosoma.Cuando se
elimina el último ARNcebador, la hebra retardada quedará incompleta ya que la ADN polimerasa no podrá rellenar el hueco al
ser incapaz de sintetizar en direción 3’ --> 5’. 5
 La ADN POLIMERASA I elimina nucleótidos mal apareados así cómo los fragmentos de ARNcebador y rellenando los
huecos con ADN.
 Durante el proceso de terminación se produce una actividad de la ADN POLIMERASA III termina de sintetizar los
fragmentos que se han degradado.
 A continuación la ADN LIGASA une todos los fragmentos obtenidos de la hebra discontiuna.

1.6.2.-TRANSCRIPCIÓN
La transcripción es el proceso por el cual se sintetiza un ARN usando como molde al ADN. Muchos tipos de ARN pueden ser
sintetizados asì por la enzima ARN polimerasa, el ARN ribosomal el de transferencia, los pequeños ARN nucleares o
citoplasmáticos y por supuesto los ARN mensajeros, que serán luego traducidos a una cadena polipeptídica. El proceso de la
transcripción de los mensajeros es diferente en procariotas y eucariotas. Esto es debido a las diferencias propias entre los genes
de las bacterias y los de las células de animales superiores.
La transcripción, da lugar a una “copia” deARN (con secuencia no idéntica, sino complementaria y antiparalela) a partir de una
secuencia “molde” en una de las hebras de ADN.
Los genes eucariotas son complejos y discontinuos es decir que poseen regiones codificantes (que formarán parte de la
proteína) y otros que son no codificantes y se remueven rápidamente antes que el ARN salga al citoplasma a ser traducido. Las
regiones codificantes se llaman EXONES y las no codificantes se llaman INTRONES.
Ademas el ARN m sufre modificaciones luego de transcrito como la adición del Cap (caperuza de inicio) y la cola poly A (stop).
El proceso en el cual se eliminan los intrones y empalman los exones se denomina SPLICING o maduración, ya que el ARN que se
produce es un PRE ARNm.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIÓN
1.-INICIACIÓN
Es la etapa más compleja de la transcripción y es en ella en la que se da la mayor parte de la regulación. Requiere la separación
de hebras en un lugar próximo al promotor en donde se encaje la ARN POLIMERASA. En esta región se constituirá la burbuja de
transcripción y en ella también actúan HELICASAS.

Los promotores son regiones del ADN que regulan el inicio de la transcripción de un gen si a ellos se unen factores de
transcripción (son proteínas o péptidos) de modo que se favorezca la unión de la ARN polimerasa II al punto de inicio.
Así se forman los primeros enlaces fosfodiester y termina la etapa de iniciación. 6

2.-ELONGACIÓN o ALARGAMIENTO DEL ARN

Es la etapa en la que la ARNpolimerasa II continúa añadiendo ribonucleótidos complementarios a la hebra molde de ADN en
dirección 5’-->3’ (para este avance los va añadiendo al extremo 3’ libre de la cadena de ARN que se va sintetizando).
La burbuja de replicación se va ampliando.
Por detrás de la polimerasa, la cadena deARN nuevo se va separando de la hebra molde de DNA, saliendo de la burbuja y
quedando comoARN de hebra sencilla. En el DNA se vuelven a aparear las dos hebras y se regenera el doble helicoide. También
intervienen las topoisomerasas en este proceso

3.-TERMINACIÓN
El complejo de tranacripción responde a señales específicas para finalizar el proceso, separándose elARN formado.
Estas señales en procariotas suelen ser secuencias palindrómicas o bien secuencias ricas en C y pobres en G.
En eucariotas también se produce la terminación de la transcripción al llegar a determiandas secuencias específicas de ADN.

MADURACIÓN DEL ARNm (sólo en eucariotas)

Como se ya se explicó, el ARNm eucariótico recién transcrito posee secuencias de intrones no informativas que deben de ser
eliminadas mediante el proceso de corte y empalme o “splicing”.
Pero además hay otros dos procesos relevantes en la maduración del ARNm en eucariotas.

1. MODIFICACIÓN EN EL EXTREMO 5’: adición de la caperuza durante la transcripción. La caperuza es un nucleótido GTP
que se adiciona en el extremo 5’. Una vez adicionado, se metila. Por lo tanto la caperuza en un nucléotido de guanina
metilado. La función de la caperuza es proteger a las ARNm de las exonucleasas de modo que no sea digerido antes de
ser leído por los ribosomas. También sirve como punto de unión del mRNA a los ribosomas al iniciar la síntesis
proteíca.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

2. MODIFICACIÓN DEL EXTREMO 3’: adición de la cola de poliA. En primer lugar se poduce un corte corriente arriba desde
el extremo 3’, quedando un ARNm más corto que la secuencia de ADN de la hebra molde. A continuación interviene la
poli(A) polimerasa añadiendo entre 40 y 250 nucleótidos de Adenina. Esta secuencia es la cola de poliA. Su función es
intervenir en el transporte correcto del ARNm hasta el citoplasma y también contribuir a su supervivencia.

1.6.3.-TRADUCCION

El ARNm tanto en procariotas como eucariotas lleva información para la síntesis de polipéptidos y esto se hace gracias a que los
ribosomas y los ARNt van leyendo el ARN desde su extremo 5′ al 3′ donde desde el codón de inicio (AUG) hasta el de stop o paro
(UAG, UAA y UGA) de a cada tres nucléotidos o codones, así se van incorporando aminoácidos que le corresponde a cada codón
hasta llegar al stop donde finaliza la síntesis de la proteína.
1.-FASE DE INICIACION
Se une la subunidad menor del ribosoma a un ARNm, a la altura del codón de inicio AUG.
Un ARNt con un anticodon UAC se incorpora mediante la formación de puentes de hidrogeno entre las bases del codon-
anticodon. Este ARNt transporta el aminoacido Metionina; y al conjunto se le denomina complejo de inicacion.
Se incorpora la subunidad grande, el ARNt-Met se situa en el sitio P.
2.-FASE DE ELONGACIÓN
Al sitio A se suma un 2º aminoacil-ARNt con anticodon complementario al 2º codon del ARNm.
La enzima peptidil-transferasa crea enlace peptidico entre la Metionina (sitio P) y aa (Sitio A).
Formado este enlace peptidio, el ribosoma se desplaza a lo largo de la molécula de ARNm en direccion 5´-3´.
EL primer ARNt (sin aa) se va, y van sucediendo la fase de elongación progresivamente.
3.-FASE DE TERMINACIÓN
Se produce cuando el el ribosoma alcanza en el ARNm un codon de terminación (STOP) (UAA, UAG, UGA). Los factores de
liberacion, reconocen estas secuencias, liberandose la cadena polipeptida del complejo. 7
Se disocia todo el complejo, se separan las dos subunidades del ribosoma, los factores de liberación, el ARNm y el ARNt.

1.7.-LA INFORMACIÓN GENÉTICA. LA ESTRUCTURA DE LOS GENES

Un gen es la unidad básica de la herencia en un organismo vivo, y se compone de ADN. La herencia es la transferencia de
características de padres a hijos a través de sus genes.
Los genes están compuestos de segmentos de ADN. Un gen es una secuencia de ADN codificados con instrucciones para una
proteína en particular. A través del ADN, los genes codifican instrucciones para crear muchos tipos de diferentes de proteínas
dentro de nuestras células vivas.
Los genes se encuentran en los cromosomas. Cada célula humana tiene 46 cromosomas. Cada cromosoma contiene hasta 3,000
genes. Pero no todos los genes en el cromosoma trabajan activamente, algunos están “activados” y otros “apagados”. En el ser
humano, sólo el 2% de todos los genes están “activados”. Teniendo en cuenta la función se pueden diferenciar las dos regiones
siguientes:
 Región reguladora, region que controla cuando y en que tejido se expresa un gen.
 Region estructural, que comprende la secuencia del gen que se va a trascribir. La región codificante del gen se llama
EXÓN. Pero el ADN tambien contiene regiones interpuestas a los exones que no seran codificantes y por ello seran
eliminadas denominadas INTRONES. Este proceso, se denomina SPLICING y ocurre antes de que el PRE ARNm
abandone el núcleo.
El número de exones que forman un gen es muy variable, el valor promedio es de 7-8. Aunque hay genes con un solo exon y
otros con mas de 100. Mientras que el tamaño medio de un exon es de 150 nucleotidos. El tamaño medio de un gen humano es
de 20-30kb.

1.8.-ORGANIZACIÓN DEL GENOMA HUMANO

Es la suma de genoma mitocondrial y nuclear. El genoma humano es toda la información genética presente en un solo grupo
(haploide) de los cromosomas humanos, que incluye 22 cromosomas, más los cromosomas sexuales X e Y. Dependiendo de su
ubicación, se pueden clasificar.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

 GENOMA NÚCLEAR
Proporciona la mayor parte de la información genética esencial para el individuo, ya que contiene el 99% del ADN
 GENOMA MITOCONDRIAL
Se compone de 47 genes, que solo contienen información de una porcion pequeña de las funciones específicas
mitocondriales.
Dependiendo si el ADN codifica proteinas o no, se pueden clasificar en codificante o no codificante:
 ADN CODIFICANTE
El 30% del genoma es codificante -> De ese porcentaje. El 5% corresponde a EXONES.
Con lo cual, solo el 1`5-2% del total del genoma se traduce a proteinas.
 ADN NO CODIFICANTE
No codifica ni contiene ningun elemento funcional. La mayor parte esta formado por componentes repetitvos.
Tambien se puede clasificar en función del número de copias de sus secuencias.
 ADN DE COPIA ÚNICA
Es la clase mas importante de ADN. Se repiten una sola vez en el genoma. Representa el 45% del genoma. Se trata de
genes funcionales .
 ADN REPETITIVO
Conforma el 55% restante del genoma. Son secuencias que se repiten una y otra vez.
o MODERADAMENTE REPETITIVO
o ALTAMENTE REPETITIVO
 ADN SATELITE -> tándem: se repite cientos de veces unas pegadas a otras, adyacentes
 ADN REPETITIVO DISPERSO -> las secuencias repetitivas se dispersan por el genoma 8

Nuclear 99%
Localización
Mitocondrial 1%

Codifica o Codificante 30%

no
proteinas No Codificante 70%

Secuencia única 45%

Moderadamente
Número de repetitivo
copias
Repetitivo  Satelite (en
Altamente Tandem) 10%
repetitivo  Disperso 45%

1.10.-ENZIMAS ASOCIADAS A LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Las técnicas de biologia molecular implican manipulaciones de los ácidos nucleicos, tales como amplificación, degradación,
corte, unión, marcaje, secuenciación, etc.
Todas estas acciones son posibles gracias a la actividad catalizadora de enzimas especificas que son aisladas de todo tipo de
organismos (virus, bacterias, y celulas eucariotas).
Realizan in vitro, la misma actividad que llevarian a cabo in vivo en condiciones biologicas.
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

A) CLASIFICACION NUCLEASAS
Son enzimas que cortan y degradan los ácidos nucleicos mediante hidrolisis del enlace fosfodiester entre dos nucleotidos.

SEGÚN TIPO DE A.NUCLEICO SEGÚN EL TIPO DE CADENA SEGÚN PUNTO DE CORTE ESPECIALIDAD DEL CORTE

 Nucleasas ARN ->  -> Moleculas  Exonucleasas ->  Cortan aleatoriamente

Ribonucleicos Bicatenarias Eliminan nucleotidos
uno a uno desde un
extremo

 Nucleasas ADN ->  -> Moleculas  Endonucleasas ->  Cortan en sitios

Monocatenarias Cortan puntos concretos
 Desoxirribonucleicos
intermedios molecula

1.-ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN
Son endonucleasas bacterianas que reconocen secuencias cortas de ADN bicatenario (4-8 pares de bases) y producen un corte
en la doble cadena en una secuencia o cerca de ella, fragmentando la molecula.
Las secuencias de ADN especificas que reconocen se denominan DIANAS DE RESTRICCIÓN. En las bacterias constituye una
defensa inmune, puesto que degrada el ADN exogeno y evitar asi que se destruya el ADN propio.
TIPOS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
 TIPO I y TIPO III, reconoce su diana y efectua el corte en una región anterior o posterior de la diana a una distancia
aleatoria. Cortan y modifican (metilan).
 TIPO II, reconoce la diana de restricción y cortan en puntos especificos, generalmente dentro de la misma diana.
Generan patrones especificos y reproducibles de fragmentos. Se les llama tijeras moleculares.
9
TIPOS DE CORTE DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
 EXTREMO ROMO, se da generalmente en el centro de la diana, los enlaces coinciden.
 COHESIVOS, normalmente se da en los extremos de la diana. Genera en cada extremo regiones monocatenarias y
complementarias que se pueden adherir a fragmentos de ADN recombinante, con secuencias de bases
complementarias. Los enlaces son escalonados. Y esta forma de unión es mas fuerte.
2.-ADN POLIMERASAS
Permiten realizar copias de moleculas de ADN mediante replicación. Las mas usasdas son las TIPO I y II. Para actuar necesitan:
 Los cuatro desoxinucleotidos trifosfato  Cebadores
 ADN molde  Mg+2 como cofactor
TIPOS:
 La ADN PRIMASA se une a la helicasa formando el primosoma (la primasa es necesaria para la síntesis)
 La Primasa sintetiza un corto primer de ARN de 10-12 nucleótidos, al cual la ADN polimerasa III incorpora nucleótidos.
 La ADN Polimerasa III incorpora nucleótidos 5’ - 3’ en ambas cadenas comenzando en el cebador o primer de ARN.
 El cebador o primer de ARN es removido y reemplazado con ADN por la polimerasa I, y el espacio es sellado por la ADN
ligasa.
 La ADN LIGASA sella los espacios entre los fragmentos deOkazaki con un enlace fosfodiéster

3.-TRANSCRIPTASAS INVERSAS
Se trata de enzimas capaces de sintetizar una cadena de ADN a partir de un molde de ARN
 TEMA 1 –FUNDAMENTOS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

1.11.-MUTUACIONES Y POLIMORFISMOS

Ambos son variaciaciones en el ADN pero un POLIMORFISMO, es una variación que esta presente en una gran variedad de la
población. En cambio MUTUACIÓN. es una variación presente en pocas personas. Además los polimorfismos, se reservan para
hablar de variaciones de la normalidad (personas sanas). En cambio una mutuación puede tener repercusiones negativas,
positivas o ninguna.

1.11.1.-MUTUACIONES

En la replicación se han de incorporar 1010 nucleotidos. Con lo cual hay mucha probabilidad de error. Aunque la maquinaria de
reparación es muy exacta, pues existen mas de 50 enzimas reparadoras del ADN, en ocasiones se produce un error que no es
reparado.

Si el error ocurre en una celula somática, todas las células formadas a partir de ella, tendran la misma mutuación. Y si fuese en u
gameto, seria hereditaria.

Los agentes mutágenos que pueden producir errores y por consiguiente mutuaciones, son: Físicos (Radiaciones), Biologicos
(Virus), Químicos (Ac. Nitroso).

EFECTO SOBRE EL ADN TAMAÑO DEL ERROR ESTABILIDAD DE LA MUTUACIÓ

 Mutuaciones Sinonimas, el
producto formado no cambia
 No sinonimas, originan secuencia
polipeptida alterada
 Mutuaciones Absurdas,
interrupcion precoz, por 1 STOP
anticipado
 Mutuaciones extensas, Alteracion
extensa de grandes regiones del
genoma
 Mutuaciones puntuales, afecta a
pequeño fragmento del gen
 Dinámicas, sus sintomas se van
agravando y antipando en las
siguientes generaciones
 Estáticas, no se anticipan

1.11.2.-POLIMORFISMOS

Es una variación en la secuendia de un lugar determinado del ADN, entre los individuos de la población. Para que esa variacion 10
pueda considerarse polimorfismo, debe estar presente al menos en el 1%. Algunos polimorfismos pueden traducirse en
diferentes fenotipos, por ejemplo el color de los ojos.

1. Polimorfismo de único nucleótido, el más numeroso. Se cambia un nucleótido por otro, dando lugar a una secuencia
genomica distinta, con distintos alelos en un cromosoma.
2. Polimorfismo de longuitud de fragmentos de restricción (RFLP), cambio de un nucleótido por otro en una región diana
de restricción, de manera que se destruye la diana de restricción. La presencia o ausencia de esa diana marcan el
polimorfismo.
3. Polimorfismo VNTR (número variable de repetiones en tándem), se originan por la presencia de pequeñas secuencias
repetidas en tándem.
a. Microsatélites, la secuencia repetida es corta (de 2 a 4 nucleótidos)
b. Minisatélites, la secuencia repetida es larga Determina la huella genética.
4. Duplicaciones segmentarias, regiones del genoma duplicadas
5. Variantes del número de copias, se multiplican las copias
6. Pseudogenes, son versiones incorrectas de genes que no se expresan
7. MicroARN o MiARN, regulan la expresion genes diana mediante la degradación de sus mensajeros o por la traducción
8. Polimorfismos de inserción/deleción del ADN, afectan a los exones ya que faltan o sobran bases

1.12.-ADN PLASMÍDICO

Son moléculas de ADN circulares extracromosomicas, que no estan en el núcleo, sino que estan dispersas. Tienen de 30 a 10kb.
Sucede en bacterias, y en células eucariotas, por ejemplo en la levadura.

Los plasmidos contienen un origen de replicación autónomo, genes no esenciales para el funcionamiento de la célula y codifican
una gran variedad de enzimas. Lo cual confiere a las bacterias gran resistencia ante antibioticos y otros compuestos o virus.

La obtención de plasmidos es sencilla debido a su pequeño tamaño y por su naturaleza circular.

Los plasmidos son útiles en ingeneria genética, ya que son facilmente manipulables y se les puede insertar secuencias
genéticas. Se utilizan como vectores de clonación de fragmentos de ADN genómico.