Tecnológico de Monterrey, campus Puebla

Enzimología - Abril 2020

Emiliano Pineda Pérez A01422146
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Cinética enzimática compleja

Enzimología semestre i
Emiliano Pineda Pérez A01422146
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Índice
1. Reacciones bisustrato
2. Inhibición enzimática
3. Enzimas alostéricas
4. Curvas en forma “S” - Cinética sigmoidal
5. Referencias
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Reacciones bisustrato
Las enzimas funcionan formando un complejo ES (enzima - sustrato) al unirse al
sustrato al que son afines, De ahí que se estipulara el modelo de cinética enzimática
de Michaelis-Menten, derivado para una reacción de un sustrato. Sin embargo, la
mayoría de las reacciones enzimáticas tienen múltiples substratos y productos, de
hecho, aproximadamente el 60% de las reacciones enzimáticas conocidas son
reacciones bisustrato. En lo que reacciones catalizadas por enzimas se refiere, las
únicas que son verdaderamente de un solo sustrato son las enzimas liasas (un

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grupo es eliminado de un sustrato para formar un doble enlace) e isomerasas
(generan isomerización).
Existen 2 mecanismos de reacción en base al orden de la adición de los
sustratos y la liberación del/los producto(s).
1. Reacción secuencial: Todos los sustratos deben enlazarse a la enzima antes
de la reacción y que los productos sean liberados. Existen reacciones
secuenciales ordenadas y aleatorias.
2. Reacción ping-pong: Algunos productos son liberados antes que todos los
sustratos hayan sido adicionados y una forma alterna de la enzima (que en
este documento llamaremos ​E´​) es producida en la mitad de la reacción.

Comenzando por las reacciones secuenciales, están las ordenadas, En ellas la

reacción tiene obligatoriamente un orden de adición de sustrato y liberación de
producto. su mecanismo es el siguiente:

Figura 1. Mecanismo para reacción bisustrato secuencial ordenada.​ Huerta Ochoa, S. (2008)
Algunos ejemplos de enzimas secuenciales ordenadas son las enzimas
deshidrogenasas.
Posteriormente están las reacciones secuenciales aleatorias, y como dice su
nombre, en esta la reacción no muestra preferencia por el orden de adición de
sustrato y liberación de producto.

Figura 2. Mecanismo para reacción bisustrato secuencial aleatoria. ​Castillo, M. (2011)

Un ejemplo de enzimas secuenciales aleatorias son la fosforilación de la glucosa

con ATP, catalizada con hexoquinasa.

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En las reacciones secuenciales, la reacción transcurre con la formación de un
compuesto ternario ​(EAB / ES1S2)
En el caso de las enzimas con reacción tipo ping-pong se liberan uno o más
productos antes de que se hayan adicionado todos los sustratos. para el caso de las
enzimas de reacción ping-pong NO se forma un compuesto ternario.

Figura 3. Mecanismo para reacción ping-pong , siendo E´la forma alterna de la enzima. ​Castillo, M.
(2011)

Algunos ejemplos de enzimas con reacción ping-pong son la tripsina (liberada por el
páncreas para digerir proteínas) y aminotransferasas.
En cuanto a la cinética enzimática de reacciones bisustrato se debe
comprender la cinética del estado estacionario (parámetros como la Km y Kcat)
para saber si se forma o no el compuesto ternario durante la reacción. Para esto se
utilizan los gráficos de ​doble recíprocos ​ o ​1/V0 y 1/S1.
Para el caso de reacciones secuenciales ordenadas o aleatorias la V se obtiene de
la siguiente forma:

Fórmula 1. Obtención de V para reacciones secuenciales ordenadas y aleatorias.​ Castillo, M. (2011)

Para el caso de las reacciones ping-pong la V se obtiene de la siguiente forma:

Fórmula 2. Obtención de V para reacciones ping-pong. ​Castillo, M. (2011)

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Una vez obtenido V, se trazan las curvas para cada caso con sus dobles recíprocos
(1/V) y se obtiene un conjunto de rectas, dependiendo si las rectas cortan o son
paralelas entre sí es como se determina el análisis cinético en las reacciones
bisustrato.

Figura 4. Determinación de cinética enzimática bisustrato.​ Castillo, M. (2011)

Inhibición enzimática
Las enzimas pueden ser reguladas por otras moléculas que aumentan o disminuyen
su actividad. Las moléculas que aumentan la actividad se conocen como
activadores​, mientras que aquellas que la disminuyen se llaman inhibidores​. En
la mayoría de los casos, la unión de un activador o inhibidor es reversible. Mientras
que los inhibidores irreversibles son más que nada factores como la temperatura o
pH, los inhibidores reversibles se dividen en dos grupos de acuerdo con su
comportamiento de unión: Los inhibidores competitivos y no competitivos.
● Cuando el inhibidor se une a la enzima y bloquea la unión del sustrato, se
conoce como inhibición competitiva porque el inhibidor “compite” con el
sustrato por la enzima.
● Cuando el inhibidor no bloquea la unión del sustrato con el sitio activo, sino
que se pega a otro sitio y causa que la enzima haga su función. se dice que
es una inhibición NO competitiva, porque el inhibidor y el sustrato pueden
estar unidos a la enzima al mismo tiempo .
Se puede diferenciar entre un inhibidor competitivo y uno no competitivo por la
forma en cómo afectan la actividad enzimática.

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● Si es inhibidor competitivo, disminuirá la velocidad de reacción cuando no hay
mucho sustrato, pero si hay mucho sustrato este “ganará”; La enzima de
cualquier forma puede alcanzar la velocidad máxima de reacción siempre y
cuando haya sustrato necesario.
● Si el inhibidor es no competitivo, la reacción jamás llegará a si velocidad de
reacción máxima, incluso en presencia de mucho sustrato.

Figura 5. Tipos de inhibidores y cómo afectan la actividad enzimática.​ Khan academy. (2020)

Enzimas alostéricas
Si bien las enzimas por si solas son complejas, hay una rama de enzimas con
múltiples subunidades de estructura cuaternaria. Una consecuencia de estas
subunidades es que cada una de ellas tiene su propio centro activo . Esto significa
que la enzima de estructura cuaternaria puede unir más de una molécula de
sustrato. Alostérica se define como “forma diferente”. las enzimas alostéricas
pueden cambiar de conformación. Las enzimas alostéricas pueden presentar
conformaciones activa e inactiva como resultado de la unión del sustrato en el
centro activo o centros alostéricos.
Las enzimas alostéricas pueden tener también subunidades reguladoras que
unen moléculas reguladoras (activadores o inhibidores). En general a los inhibidores
y activadores se les conoce como “efectores”. La regulación alostérica es solo
cualquier forma de regulación donde la molécula reguladora (sea activador o
inhibidor) se une a la enzima en un lugar distinto al sitio activo.
En las enzimas alostéricas, la unión de un sustrato se une a un centro activo
de la misma molécula de la enzima. Una posible causa de esta interacción entre
subunidades es que la unión del sustrato se transforme en ​cooperativa​; es decir, la

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unión del sustrato a un centro activo de la enzima mejora o facilita la unión del
mismo sustrato a otros centros activos. Las enzimas cooperativas son más
sensibles en su respuesta a los cambios en las concentraciones de sustrato que
otras enzimas y exhiben una transición de tipo “interruptor”. Esto corresponde a una
curva de velocidad en forma “S”.

Figura 6. Transición tipo interruptor de cinética compleja. ​Khan academy. (2020)

Curvas en forma “S” - Cinética sigmoidal

El modelo de Michaelis-Menten ha servido de mucha ayuda sobre el desarrollo de la
enzimología. Sin embargo, no todas las enzimas se explican por el modelo antes
mencionado. Las enzimas alostéricas son un ejemplo, estas a menudo muestran
curvas sigmoideas de la velocidad de reacción. En la cinética sigmoidea se
observan pequeñas fluctuaciones de la concentración de sustrato como sinónimo de
grandes variaciones en la velocidad de reacción. Como tal, el factor que limita la
velocidad de reacción es la llegada del sustrato al centro activo de la enzima.

Figura 7. Curva de enzima alostérica sin y con inhibidor.​ Biología Arizona. (2004)
Como se puede observar en la figura 7, en presencia de un inhibidor se requiere de
mayor concentración de sustrato para que la enzima cambie a su conformación
activa, sin embargo, cuando se alcanza la concentración suficiente de sustrato para

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activar el interruptor a conformación activa, el sustrato se une cooperativamente y la
misma velocidad se alcanza, en presencia o ausencia de inhibidor.
Para concluir y generalizando, cabe reiterar que las enzimas pueden ser
moléculas bastante complejas que fungen un papel importante no solo en
reacciones de tipo industrial o en laboratorio sino en nuestros propios organismos.
El comprender que no todas las enzimas se rigen por una curva michaeliana es vital
a la hora de estudiar nuevas enzimas y el cómo poder modificarlas para el beneficio
humano.

Referencias
Aranda, J. S., & Salgado, E. (2008). Modelación de catálisis enzimática con enzimas alostéricas.
Revista mexicana de ingeniería química​, ​7​(1), 21-27.
Berg, J. M., Tymoczko, J. L. y Stryer, L. (2007). Enzymes can be inhibited by specific molecules (Las
enzimas pueden inhibirse con moléculas específicas). En ​Biochemistry (6° ed., sección
225-234). Nueva York, NY: W. H. Freeman.
Biologia.Arizona.edu. (2004). Problemas De Energía, Enzimas Y Catálisis. (​Institución​) Available at:
http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/energy_enzymes_catalysis/03t.ht
ml
Castillo Castillo, M., (2011). Reacciones Bisustrato Available at:
https://es.slideshare.net/peibizita/reacciones-bisustrato
Christensen, H. N., & Palmer, G. A. (1980). Cinética enzimática: curso programado para estudiantes
de medicina y ciencias biológicas. Reverté.
Huerta Ochoa, S., (2020). Sistemas multiespecie Reacciones Bisustrato (​de UAM​) Available at:
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/sho/Tema_4-a_mod-Sist-MultieEsp.pdf
Khan Academy. (2020). Fundamentos De Las Gráficas De Cinética Enzimática (​Artículo​) | Khan
Academy. Available at:
https://es.khanacademy.org/science/biology/energy-and-enzymes/enzyme-regulation/a/basics
-of-enzyme-kinetics-graphs