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Dra. Rosa Elena Hi Alarcón Ing. Ma. Elena Aguilar John Dra. Irene Borges Carrete
Jefe Técnico de Laboratorio Coordinador de Procesos Director Médico
NUEVO SANATORIO DURANGO S.A. DE C.V.
MANUAL DE POLITICAS Y CLAVE
PRT-NSD-LAB-37
PROCEDIMIENTOS
F. de
PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD MICROBIANA elaboración:
F. de revisión:
No. De revisión:
LABORATORIO 1 de 8 Hoja:
SISTEMA DE GESTIÓN DE CALIDAD ISO-9001-2008/NMX-CC-9001-IMNC-2008
OBJETIVO:
Dar al medico los elementos necesarios para dar tratamiento a infecciones causadas por agentes
microbianos de importancia médica.
ALCANCE:
Estos discos se utilizan para pruebas semicuantitativas de sensibilidad in Vitro de patógenos bacterianos
comunes de crecimiento rápido y de ciertos patógenos bacterianos exigentes, por medio del procedimiento
de prueba de difusión de discos en agar. Entre ellos se incluyen Enterobacteriaceae , Staphylococcus
spp., Acinetobacter spp., Enterococcus spp., Vibrio cholerae y mediante procedimientos modificados,
Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos.
REFERENCIAS:
a) “Microbiología Maédica”, Jawetz E. y col. El manual moderno S.A. DE C.V. México, D.F. 1987.
b) “Diagnostico Microbiologicos” Koneman E.W. Allen S.A. Dowll V.R Jonda W.M. Sommers H.M. Winn
W.C. Editorial Médica Panamericana. 3ª Edición, Buenos Aires 1992.
RESPONSABILIDADES:
• Del Flebotomista
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Transportar las muestras al área de microbiología lo antes posible y entregar la hoja de trabajo;
colocar las muestras en el área respectiva según lo indique el encargado del área.
PROCEDIMIENTO:
INSTRUMENTACION:
Materiales subministrados.
- Discos Sensi-DIsc para el análisis de las sensibilidades indicadas en las etiquetas.
FUNDAMENTO:
En la década de 1940 se desarrollaron métodos de difusión en agar utilizando discos de papel de filtro
seco impregnados de concentraciones específicas de agentes antimicrobianos. Con el fin de eliminar o
minimizar la variabilidad de este análisis, Bauer y cols. Desarrollaron un procedimiento normalizado para
el cual se eligió el agar de Mueller Hinton como medio para el análisis.
Los discos, que contienen una gran variedad de agentes antimicrobianos, se colocan en la superficie de
las placas de agar de Mueller Hinton (o de agar de medio de prueba Haemophilus para H. influenzae,,
agar GC II con enriquecimiento IsoVitalex para N. gonorrhoeae o agar de Muller Hinton con 5% de sangre
dde carnero para S. pneumoniae y para estreptococos β-hemolíticos y del grupo viridans) que han sido
inoculadas con cultivos puros de aislados clínicos. Después de la incubación, se examinan las placas y se
miden y comparan las zonas de inhibición que rodean los discos con los límites de tamaños de zona
establecidos para agentes antimicrobianos individuales a fin de determinar el agente o agentes más
convenientes en la terapia antimicrobiana.
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Es importante instruir al paciente para que se haga un aseo de genitales externos y evitar la
aplicación de algún tipo de tratamiento local o sistémico; asi como lavado vaginal y abstenerse de efectuar
el coito por lo menjos tres días antes de la toma de muestra. No deben utilizarse en los días previos a la
recogida de la muestra, soluciones antisépticas vaginales, óvulos ni pomadas.
TOMA DE MUESTRAS:
a. TÉCNICA.
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borde de la placa de petri y sus centros estén a no menos de 30mm de distancia. Evite colocar
este tipo de discos adyacentes. Para H. influenzae, N. gonorrhoeae y S. pneumoniae no utilice
más de 9 discos por placa de 150mm o 4 discos por placa de 100mm. Si los discos se han
colocado en el agar con dispensadores que no sean de autoapisonamiento, presiónelos contra la
superficie con una aguja o una pinza estériles.
5. A los 15 min., coloque las placas de agar boca arriba en una estufa de incubación a 35 ± 2 ºC
(para Staphylococcus spp., el análisis a temperaturas superiores a 35ºC puede no detectar
estafilococos resistentes a la meticilina (SRM); para N. gonorrhoeae, incube a 36 ± 1ºC [sin
superar los 37ºC]). S e deben incubar las Haemophilus spp., N. gonorrhoeae, S. pneumoniae y
otros estreptococos en una atmósfera enriquecida con CO2 al 5%.
MANEJO DE MUESTRAS:
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Cuadro 2. Aceptabilidad de las muestras clínicas para cultivo por bacterias anaerobias
Muestras aceptables Muestras Inaceptables
Aspirado (por aguja o jeringa) Aspirado de traqueostomía
Aspirados de senos Aspirado endotraqueal
Aspirado endometrial (útero) Esputo expectorado
Aspirado suprapúbico (orina) Esputo inducido
Aspirados transtraquales Fluido seminal o prostático
Bilis Heces o muestras rectales
Cepillado bronquial (broncoscopía) Lavado broncoalveolar
1
DIU para Actinomyces spp. Loquios
Glándula de Bartholin Orina obtenida por cateterización
2
Heces para Clostridium spp. Orina obtenida por micción
Médula ósea Torunda cervical
Ovario Torunda endocervical
Placenta obtenida por cesárea Torunda faríngea
Torundas y tejidos obtenidos por Torunda nasofaríngea
cirugía
Trompas de falopio Torunda perineal
Torunda vulval
• Idealmente, todos los recipientes conteniendo muestras clínicas deben ser transportados en
bolsas plásticas sellables, con dos compartimientos separados, uno para el recipiente y otro para
la documentación.
• La mayoría de las muestras clínicas recolectadas con torundas y que se han secado durante el
NOMBRE / PUESTO / FIRMA
ELABORÓ: REVISÓ: AUTORIZÓ:
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• Si la muestra es recolectada a través de piel intacta (por ejemplo, hemocultivos), se debe lavar la
piel con agua y jabón, luego se debe desinfectar en forma centrífuga con etanol al 70% y
finalmente de la misma manera con una solución yodada (tintura de yodo al 1-2%).
• Cada muestra clínica debe estar rotulada con el nombre del paciente, número de identificación, el
tipo o la descripción de la muestra, el sitio especifico de recolección, la fecha y la hora de la
recolección y las iniciales del recolector.
• La muestra clínica debe estar acompañada de una solicitud de análisis, la cual debe incluir la
siguiente información:
CONTROL DE CALIDAD:
Para realizar un control de calidad para esta tinción es necesario contar con una cepa de Género
Mycobacterium que son (BAAR) Bacilos ácido alcohol resistentes que al microscopio serás observados
como bacilos teñidos de color rojo, pleomórficas (curva y/o rectas). Como control negativo se utilizan
cepas de Staphylococcus aureus.
Los medios más adecuados para obtener el desarrollo y conservación de las micobacterias son:
Lowenstein Jensen (que contiene verde de malaquita), el ATS (American Toraxic Society), el Cohen
Midelebrook 7HIV y HVII. Deberán realizarse resiembras para tener como control BAAR jóvenes.
RESULTADOS:
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. El resultado deberá ser reportado, en caso de contener bacilos ácido alcohol resistente como positivo a
estos en 100 campos observados. En caso contrario; no se observaron bacilos ácido alcohol resistentes
en 100 campos observados.
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