RESUMEN

El análisis de la presencia de microorganismos relacionados a pseudomona fluorescens es

indicativo de las propiedades del suelo. Para esto es necesario la comparación de distintas
áreas con el objeto de evaluar su comportamiento. El presente estudio toma como zonas
influencia los terrenos cultivados y en estado de descanso; partiendo de la aplicación de
muestreo compuesto para posterior análisis de laboratorio, donde se estimaran a partir de
procesos de incubación y titulación propiedades benéficas o afectantes.

Palabras clave: pseudomonas, pseudomona fluorescens, calidad biológica, Agricultura,

tinción de Gram, conteo en placa y microbiota

ABSTRACT
The analysis of the presence of microorganisms related to pseudomone fluorescens is
indicative of soil properties. For this it is necessary to compare different areas in order to
evaluate their behavior. The present study takes as influence the cultivated land and in rest
state; starting from the application of composite sampling for subsequent laboratory
analysis, where beneficial or affecting properties will be estimated from incubation
processes and titration.
Keywords: pseudomonas, pseudomona fluorescens, biological quality, Agriculture, Gram
staining, plate count and microbiota

OBJETIVO PRINCIPAL
Describir características y comportamientos relacionados a la presencia de pseudomonas
fluorescens en la calidad de suelos. Respecto al uso de terrenos en estado de siembra y
descanso, a partir de la zona de estudio ubicada en zona agropecuaria UPTC sección Tunja.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Realizar muestras de terreno representativas de la calidad microbiológica del suelo.
 Analizar propiedades microbiológicas de pseudomonas fluorescens en el
laboratorio.
 Aplicar métodos estadísticos aplicados a la caracterización de poblaciones del
microrganismo de interés.
 INTRODUCCIÓN
Con el actual crecimiento poblacional se ve la necesidad de disponer de alimentos a las
personas, por tal razón se han implementado programas como la revolución verde que son
enfocados a producción de alimentos sin importar las practicas llevadas a cabo, lo que
implica que los suelos pierdan su capacidad de resiliencia dado a perdida de su biota, esto
se da debido a que estos microorganismos son exterminados ya sea por las adecuaciones
por métodos de tractorado o otros a menor escala que hacen el suelo más susceptible a
pérdidas de humedad y por tanto generación de un hábitat no óptimo para el desarrollo y
crecimiento de estos microorganismo, estas prácticas agrícolas también hacen uso de
químicos como herbicidas, plaguicidas etc., que afectan de manera directa la biota del suelo
ya que al matar las plagas que afectan los cultivos, también exterminan microorganismos
benéficos que son indicadores de un suelo sano.
El uso intensivo de agroquímicos ha despertado recientemente el interés de los
consumidores, esto a causa del creciente índice de informes que apuntan graves
consecuencias sobre la salud humana por altas concentraciones de químicos en alimentos;
esté fenómeno obedece a la necesidad de aumentar la concentración en los insumos usados
para el control de organismos patógenos. El crecimiento de los últimos es consecuencia del
primero, es así que la composición de los microorganismos del suelo se ve afectada y en
consecuencia se rompe el equilibrio de organismos de control biológico, dando como
resultado el alza de vulnerabilidad del suelo ante un ataque de patógenos.Las pseudomona
fluorescens son de gran importancia en el control de patógenos del suelo, pero al igual que
otras formas de vida se ven afectadas por las técnicas de agricultura intensiva haciendo
imposible el desarrollo de simbiosis, por ende para este estudio se hace importante ver en
qué medida un suelo de cultivo tiene presencia de estos organismos con relación a uno en
descanso.
Desde la antigüedad, hombres y mujeres han venido modificando su alrededor, utilizando
diferentes herramientas que con el transcurrir del tiempo aumentan su capacidad de
impacto. En los últimos dos siglos su acción se ha multiplicado, debido al aumento de la
población y del potencial técnico y científico. (FAO, 2019). Por medio de este trabajo se
busca realizar el conteo de los microorganismos indicadores de un suelo sano, teniendo en
cuenta como indicadores las colonias presentes en cada uno de estos principalmente la
presencia de pseudomonas flourescens encontrados en diferentes muestras de suelo
tomadas en dos ambientes diferentes (suelo de jardinería y suelo de bosque).

MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales:
o Barreno o pala
o Balde o lona limpios.
 o Tamiz
o Bandeja de plástico
o Incubadora.
o Caja Petri
o Agar plate count
o Agra King A
o Reactivos Gram
o Aza
o Luz UV
o Gradilla
o Tubos de ensayo

Método:

Para Identificar la presencia de Pseudomonas fluorescens como indicador de calidad del

suelo, se planteó muestreo en zonas con actividad agrícola y áreas de descanso,
considerando la variabilidad del terreno donde se tienen distintos usos índices de calidad
del aire.

Se realiza muestras de suelo con posterior análisis de laboratorio por medio de la siembra
en agar base King A, donde se identifica la aparición del genero bacteriano Pseudomonas
fluorescens estimado por medio de caracterización microscópica y macroscópica dando
uso a metodología como tinción de Gram con observación en microscopio.

El muestreo se obtuvo a partir de mezclar las muestras tomadas en un área determinada

para obtener una sola que presumiblemente representa al total. Tiene la ventaja de que
permite un muestreo mayor sin aumentar el número de análisis. Este tipo de muestreo es
válido si:

1) El volumen de la muestra representa a una población homogénea

2) En la muestra compuesta contribuyen por igual cada una de las muestras
individuales
3) No se han efectuado cambios durante la manipulación para obtener la muestra
compuesta, que pudieran afectar a los resultados analíticos
4) .
Este tipo de muestreo se realiza cuando la medida es más importante que la variabilidad.
El número de muestras para mezclar oscila entre 4 y 16 (máximo 25), y como regla
general, el área representada por una muestra compuesta no debería ser superior a 1 Ha
(100 x 100 m). Este límite puede ser mayor (hasta 5 Ha) si la zona a investigar es
razonablemente homogénea, o sea si la zona puede considerarse como un todo.

PROCEDIMIENTO

1. MUESTREO

Se seleccionaron las zonas de muestreo por su uso

Suelo sometidos a procesos de jardineria y suelo de bosque

secundario.

Se realizó un muestreo compuesto, se realizaron aforos a 60 cm

en diferentes puntos del terreno estudiado

Se llevó al laboratorio en las proximas 8 horas para su

respectivo estudio.

2. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

Se homogenizó y tamizó 3 kg de la muestra de suelo

Se realizó el pre-enriquecimiento no selectivo, pesando 700g

Se colocó en una bandeja de plástico de primer uso

Se aplicó una solución de herbicida a 360 ppm con ayuda de un

atomizador.

Se incubó a temperatura ambiente 25ºC por 7 días.

 Aislamiento selectivo

Se prepararon 4 diluciones sucesivas des 10-1 hasta 10-4

Se partió del uso de 10g de la muestra pre enriquecida y 90ml de

agua destilada.

El aislamiento selectivo se realiza sembrando por duplicado 4

diluciones mediante la técnica de estría (0,1 ml)

Se realizó la siembra en un agar mínimo de sales suplementado con

el herbicida 2,4-D a 360 ppm

Se incubó a 37ºC por 8 días.

Purificación

Se realizaron repiques en agar nutritivo

La siembra se realizó en superficie, posteriormente por estría

Se realizaron sets de coloración de Gram con el fin de verificar la pureza de las

agrupaciones.

3. Identificación de P. fluorescens
Para llevar a cabo esta prueba se hizo uso del equipo de fluorescencia de rayos X, donde se
confirmó que los microorganismos con fluorescencia de color verde significan positivos
para pseudomonas flourescens y las colonias que no presentaban fluorescencia eran
negativas para el género objeto de estudio.
La identificación se realiza con base en las características fenotípicas descritas en el
manual de Berguey de bacteriología sistemática 1984. Donde se da usó de medios
específicos para la determinación de especies de P. fluorenscens. En Caldo glutamato se
verifica la presencia de pigmentos, en la que se observó la producción de la pioverdina
(verde fluorescente), característico de P. fluorenscens y P.putida. Luego al caldo glutamato
se le agrega cloroformo, para el descarte de la presencia de piocianina, característico de P.
aeroginosa. En TSI (agar triple azúcar hierro) se comprobó la no fermentación de azucares
(lactosa, glucosa y sacarosa); manteniéndose su color inicial (rojo). En LIA (Agar de hierro
y lisina) se comprueba la ausencia enzima Lisina descarboxilasa, y por tanto se mantuvo el
color original del medio (morado). En Citrato se verifica la degradación del citrato
mediante el viraje de color verde a color azul. En SIM (medio de sulfuro inol para
movilidad) se verificó la movilidad (flagelo). En la prueba de citocromo oxidasa se verifico
descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, mediante el desprendimiento
de burbujas procedentes del oxígeno. En la prueba de la gelatinasa se diferenció P.
fluorenscens de P. putida, mediante la presencia de la enzima proteolítica (gelatinasa);
donde P. fluorescens produce la licuefacción de la gelatina.

RESULTADOS
De las colonias elegidas y llevadas a crecimiento como cultivo puro se identificaron 3
colonias positivas para pseudomonas flourescens en el suelo de bosque, mientras que para
el suelo de jardín no se presentaron colonias positivas para tal prueba.
Con ayuda de estas pruebas se pudo definir que el suelo con mejor biota (mayor cantidad
de microorganismos) fue el de bosque, ya que presento mayor UFC/gr con una cantidad
de 30 UFC/gr en comparación de la muestra de jardín que presento una totalidad de 15
UFC/gr, esto se puede dar debido a que los suelos de jardinería son sometidos a procesos
de adecuación y también se les aplica químicos para control de plagas los cuales no
discriminan matando también la biota presente como los microorganismos, los suelos de
bosque a no estar sometidos a procesos de adecuación presentan biota en mejor estado.

REFERENCIAS

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