FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO

BACTERIOLOGÍA II-2020-10

GUIA DE LABORATORIO N° 8.
IDENTIFICACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DE IMPORTANCIA MÉDICA.

INTRODUCCIÓN.

Las Enterobacterias constituyen una amplia familia de Bacilos Gramnegativos, Aerobios y

Anaerobios Facultativos, Fermentadores de Glucosa y Oxidasa Negativos; los géneros
presentes se encuentran relacionados por sus propiedades bioquímicas y genómicas. Este
grupo de bacterias están distribuidas en la naturaleza, en el hombre se encuentran como flora
comensal localizadas en el intestino, por lo cual se ha visto que son responsables del 50% de
los casos de septicemia, del 60-70% causa enteritis bacteriana aguda y el 70% infecciones del
tracto urinario.

Las muestras de sangre, líquidos orgánicos, heridas infectadas, procesos respiratorios

infecciosos y orina son procesadas generalmente para el aislamiento de enterobacterias sobre
medios de cultivo no selectivos, pero las muestras de materia fecal deben ser inoculadas sobre
medios selectivos diferenciales con el objeto de inhibir el crecimiento exuberante de flora
entérica normal.

 Los Medios Primarios para las enterobacterias como agar sangre, MacConkey, Endo,
Eosina-Azul de Metileno (EMB) pueden ser utilizados para la recuperación de estos
gérmenes.
 Los Medios Diferenciales más selectivos como agar sulfito-bismuto, Hecktoen entérico,
Xilosa-Lisina-Desoxicolato (XLD), Salmonella-Shigella (SS) proveen una buena batería
de medios primarios para el aislamiento de enteropatógenos importantes.

LACTOSA:
La prueba de fermentación de lactosa puede ser determinada a partir de la siembra sobre agar
Macconkey, si existe un conocimiento claro de cuáles son los géneros lactofermentadores:
E. coli, Klebsiella, Enterobacter y cuáles NO lo son: Salmonella, Shigella, Proteus, se puede
hacer una clasificación inicial para facilitar la identificación final. Todos los microorganismos
entéricos pueden ser identificados por una serie de reacciones bioquímicas, como:

 La fermentación de hidratos de carbono.

 Descarboxilación o Deaminación de aminoácidos.

 Reducción de nitratos.

 Presencia o ausencia de flagelos.

Y otras características de la célula bacteriana son utilizadas para identificar género y especie.

OBJETIVOS
 Conocer los medios habituales para el aislamiento de enterobacterias, y las pruebas
bioquímicas que permiten su identificación.
 Identificar por medio de las pruebas bioquímicas algunas de las bacterias de la familia
Enterobacteriaceae.
 Determinar las pruebas de identificación específicas para cada género y especie de
enterobacterias.

MATERIALES.
 Asa de argolla y recta
 Colorantes (coloración de Gram)
 Cultivos de Enterobacterias.
 Agares: MacConkey, Eosina-azul de metileno (EMB), Hecktoen entérico, Xilosa-lactosa-
desoxicolato (XLD), Salmonella-Shigella (SS).
 Medios para identificación bioquímicas: oxidasa, citrato, agar hierro triple azúcar (TSI),
agar hierro lisina (LIA), urea, sulfuro-indol-motilidad (SIM), Voges Proskauer, rojo de
metilo.
 Reactivos: Oxidasa y reveladores según sea el caso
 Sistema API para gramnegativos

PROCEDIMIENTO.

A partir de las colonias aisladas en medios sólidos (agar sangre) hacer:

 La descripción macroscópica de la colonia.
 Una coloración de Gram para la cepa problema.
 Posteriormente realizar la identificación por medio de la identificación primaria, medios
selectivos y diferenciales utilizados por estos microorganismos y las características
bioquímicas para la identificación de especies:

Esquema de identificación: microorganismos de la familia Enterobacteriaceae



Agar XLD Agar XLD. USAR GUANTES A.Hecktoen E.coli (Izq)Salmonella

sp(Der)
 Repique la cepa dada en medios entéricos selectivos y diferenciales (ver tabla) y
además inocúlelo en una batería bioquímica, incube en Aerobiosis a 35-37°C por 24
horas.
  Teniendo en cuenta los resultados obtenidos post- incubación, comparar con las
siguientes tablas, para de este modo llegar a la identificación de género y especie.

 MEDIOS ENTÉRICOS DIFERENCIALES.

Agente
MEDIO bacteriostático para Carbohidrato Indicador Color del Color del no
grampositivos fermentable fermentador fermentador
Agar Cristal violeta, sales Lactosa Rojo neutro Violeta Incoloras
MacConkey biliares
Eosina azul de Lactosa y Eosina y azul Rojas o negras
Agar EMB metileno Sacarosa de metileno brillantes Incoloras
Sulfito de sodio y Fuchina Colonias con
Agar ENDO fuchina básica Lactosa básica brillo metálico Incolora

 MEDIOS ENTÉRICOS SELECTIVOS.

Agente
MEDIO bacteriostático para Carbohidrato Indicador Color del Color del no
grampositivos fermentable fermentador fermentador
Rojo fenol y
Citrato férrico
Agar XLD Sales biliares Xilosa, lactosa, amónico Amarillas Rosadas o
(Xilosa Lactosa sacarosa (indicador de rojas
Desoxicolato) H2S)

Agar SS Sales biliares Lactosa Rojo neutro Rosado-rojas Incoloras

(Salmonella Verde brillante
Shigella)

Azul de
Salicina, lactosa, bromotimol y
Agar Sales biliares sacarosa Citrato férrico Amarillo - Verde o azul
Hecktoen amónico naranja verdoso
entérico (indicador de
H2S)
 ACTIVIDADES
PRELABORATORIO:

1. Basándose en el ejemplo complete el siguiente cuadro:

PRUEBA SIEMBRA FUNDAMENTO INDICADOR REVELADOR REACCIONES
Se utiliza para determinar si
Se inocula con asa un microorganismo es capaz Negativo: Ningún
recta no por de utilizar el citrato como cambio en el color
CITRATO punción, sino por única fuente de carbono para Azul de bromotimol No es requerido inicial (verde)
estría en la parte el metabolismo y el
inclinada del agar. crecimiento con alcalinidad Positivo: viraje de
resultante color a azul oscuro
indicando la
utilización de citrato.

TSI

LIA

ÚREA

SIM

VOGES
PROSKAUER
 ROJO
METILO
2. Buscar la tabla de lectura de pruebas bioquímicas de las Enterobacterias de
importancia clínica, indicando qué géneros dan positivo y negativo respectivamente,
imprimirla para realizar la lectura de la bacteria que identificará en el laboratorio.

Actividades durante el laboratorio

 Realizar el procedimiento indicado para la identificación de la cepa bacteriana

entregada por medio de la utilización de los recursos que posee en el laboratorio.
Tener en cuenta la forma de siembra de cada prueba.

Post-laboratorio

 Revelar las pruebas bioquímicas que requieran de este procedimiento

 Leer y reportar los resultados obtenidos durante la identificación de la cepa

correspondiente, correlacionándolos con los cuadros de identificación descritos en
la guía y explicar las características metabólicas de la cepa entregada y analizada.

BIBLIOGRAFÍA

1. Konemann, Elmer. Diagnóstico microbiológico: texto y atlas a color. Editorial

médica Panamericana. Bogotá. 2001.

2. MacFaddin, Jean F. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de

importancia clínica. Editorial Médica Panamericana. Bogotá. 2003.

3. Sánchez, María Piedad. Manual de procedimientos en Bacteriología Clínica. 5

edición. Bogotá. 1998.