ESPERIMENTI STORICI GRIFFITH la capsula è un fattore di virulenza
AVERY, McLOAD, Mc CARTHY
l’informazione genetica risiede nel DNA
1. Estratti purificati di ceppi S per caratterizzare il principio che transforma.
2. Il materiale era resistente alle proteasi; non containeva lipidi o carboidrati. 3. Se il DNA nell' estratto viene distrutto, si perde il principio che trasforma. 4. Il DNA purificato isolato dagli estratti dei ceppi S transforma i ceppi R. 5. Avery suggerì che il DNA era il materiale genetico. 6. Questa è stata la prima prova sperimentale che il DNA è il materiale genetico Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
LURIA, DELBRUCK teoria costitutiva Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
piastre di replicazione per la selezione dei mutanti
piastre di replicazione per la selezione dei revertanti
Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
LEDERBERG, TATUM trasferimento genetico
CAVALLI-SFORZA HFR (high frequency of recombination) Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
JACOB, MONOD operone Si conoscevano tre tipologie di controllo dell’espressione genetica: - controllo costitutivo (alcuni geni devono essere sempre espressi, ma la cellula non ha sempre lo stesso bisogno del prodotto genico; es. la forza del promotore) - controllo adattativo (alcuni geni devono essere accesi o spenti in risposta a stimoli ambientali; sono necessarie specifiche proteine regolatorie; es. la risposta di crescita di E. coli in terreno con lattosio) - controllo per un programma genetico (le cellule alterano l’intero pattern di espressione, tramite differenti operoni; es. la sporulazione in B. subtilis)
Tre loci sono importanti per il
metabolismo del lattosio, e codificano per tre enzimi coregolati: - LacZ codifica per la β-galattosidasi - LacY codifica per la lattosio-permeasi - LacA codifica per la transacetilasi Questi sono controllati da LacI, che causa l’induzione. I batteri LacI+ (normali) erano inducibili, i mutanti LacI- erano costitutivi.
PAJAMO operone
LacI+ è dominante su LacI-, e LacI- non codifica per un induttore interno. Quindi: - il repressore è altamente specifico (mutazioni in LacI causano effetti solo nel sistema Lac) - il repressore è pleiotropico (mutazioni in LacI causano effetti in tre distinti geni) - un operatore deve esistere, visto che esiste un repressore
L’operone Lac ha un gene regolatorio (LacI) che codifica per la proteina
regolatoria, “lattore repressor”. Esistono tre operatori che agiscono su LacI: - O1, a +11 - O2, a +401, all’interno del gene LacZ - O3, a -82, downstream a LacI Inoltre, un secondo promotore (LacP2) si trova 22bp upstream al normale promotore Lac. Un sito di legame per CRP si trova a 61,5bp upstream al sito di inizio. Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
Il repressore per il lattosio (lactose repressor) è un tetramero; si lega con
elevata affinità al proprio operatore, ma ha anche un buon legame non specifico per altre sequenze del DNA. Il dominio N-term è la regione che si lega al DNA, e contiene un tipico motivo HLH (helix-loop-helix). La parte centrale della proteina lega l’induttore. Il dominio C-term permette la formazione di tetrameri. Il repressore avvolge il DNA, formando un superavvolgimento negativo che impedisce l’inizio della trascrizione. Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
LEDERBERG, ZINDER trasduzione Microbiologia ESPERIMENTI STORICI Antonio Nenna
LWOFF trasformazione lisogenica I raggi UV causano l’attivazione di un batteriofago in colonie lisogeniche di Bacillus megaterium. I raggi UV danneggiano il DNA e inducono il sistema di riparazione SOS, la cui proteina RecA, quando complessata con ssDNA, attiva una proteasi latente. La lisogenia è quindi il potere ereditario di produrre batteriofagi. La moltiplicazione del profago è correlata alla riproduzione del batterio.
