La selección del método de pretratamiento eficaz para explotar la biomasa lignocelulósica juega

un papel importante.

papel importante para la producción sostenible de biocombustibles, ya que representa la mayor

parte de la producción costo. El presente estudio tiene como objetivo comparar la eficiencia del
pretratamiento térmico de glicerol (GTP) sobre pretratamientos hidrotérmicos y alcalinos de paja
de arroz (arroz) como materia prima. La eficacia de El pretratamiento se evaluó analizando el
rendimiento del azúcar reductor (RS), la digestibilidad de la holocelulosa y degradación de
componentes. El estudio se elaboró para cinética enzimática, espectros FTIR, cristalinidad, balance
preciso de masa y energía. GTP mostró un rendimiento de RS del 71.52% con 94.36% digestibilidad
de holocelulosa, que fue mayor que la de los pretratamientos alcalinos e hidrotermales.

GTP fue más eficaz en la eliminación de lignina y hemicelulosa con poco daño a la celulosa. Los
estudio cinético enzimático demostró aún más la efectividad de GTP y mostró la enzima mejorada
adsorción e hidrólisis al exponer sitios de unión a enzimas. Se revela la cristalinidad de la celulosa.

La efectividad de GTP por los estudios de DRX. El estudio FTIR enfatiza la alteración en estructura
de lignocelulosa debido al pretratamiento. Los balances de masa y energía confirmaron aún más la
fiabilidad del pretratamiento con GTP.

Introducción

El combustible derivado de biomasa se ha convertido en una alternativa prometedora al

combustible fósil, ya que responde a tres principales problemas, es decir, crisis energética,
contaminación ambiental y gestión de residuos [1,2]. India es un nación basada en la agricultura, y
genera una gran cantidad de residuos agrícolas de aproximadamente 600 TM / año Prueba previa
de diario [3,4]. El arroz es uno de los principales cultivos cultivados en la India y representa el 20%
de todo el arroz mundial.

producción que genera casi 100-110 TM de paja de arroz (arroz) por año [5]. La paja de arroz tiene
varias características que la convierten en una materia prima potencial para la producción de
biocombustibles.

Tiene un alto contenido de celulosa y hemicelulosa, que puede hidrolizarse en fermentable.

azúcares En términos de composición química, la paja contiene predominantemente celulosa (32–
47%), hemicelulosa (19–27%), lignina (5–24%) y sílice (10-18%) [6,7]. Sin embargo, la paja de arroz
es un precursor atractivo para la producción de bioetanol, su alto contenido de lignina, cenizas y
sílice lo hacen Una materia prima inferior para la producción de etanol. Uno de los principales
desafíos en el desarrollo.

La tecnología para la producción de bioetanol a partir de la paja de arroz es una selección de un

técnica de pretratamiento.

El pretratamiento es uno de los pasos más importantes, que se requiere para eliminar la lignina y
hemicelulosa, para reducir la cristalinidad de la celulosa, para separar las fibras de celulosa y para
aumentar el área de superficie de celulosa accesible para la sacarificación enzimática. En otras
palabras, El tratamiento previo es necesario para aumentar la eficiencia de la hidrólisis enzimática
[8]. La elección de método de pretratamiento juega un papel importante en el aumento de la
eficiencia de enzima sacarificación, por lo tanto, haciendo que todo el proceso sea
económicamente viable. Mosier y col. [9] informó que el pretratamiento es uno de los pasos de
procesamiento más caros en Producción de bioetanol que representa el 19% del costo total de la
producción de etanol celulósico. Muchos Los métodos de pretratamiento están documentados,
tales como físicos o mecánicos (molienda, ultrasonidos, extrusión, etc.), químico (hidrotermal,
ácido, alcalino, líquido iónico, etc.), fisicoquímico (explosión de fibra de amoníaco, álcali asistido
por microondas, álcali asistido por energía solar, etc.) y biológico [10-15]. Sin embargo, se han
propuesto los diferentes tipos de métodos de pretratamiento, los principales.

El desafío sigue siendo el desarrollo de tecnología de pretratamiento rentable para economía

producción de etanol celulósico. Hoy en día, los pretratamientos de álcali y ácidos aceptados
globalmente no son solo costoso pero también peligroso para el medio ambiente [16]. Por lo
tanto, el uso de El método alternativo barato para el pretratamiento lignocelulósico es la
"necesidad de la hora".

El pretratamiento térmico de glicerol (GTP) es uno de los mejores métodos alternativos de

pretratamiento como el El glicerol es ambientalmente seguro. Alta capacidad térmica y punto de
ebullición (290 ºC) con extrema La estabilidad a altas temperaturas hace que el glicerol sea
adecuado para el pretratamiento lignocelulósico [17]. El glicerol es el principal subproducto de las
industrias de biodiésel y representa el 10% del biodiésel total. salida [18,19]. Según la Agencia
Mundial de la Energía (AIE), la producción mundial de biodiesel en 2017 se alcanza a 143 mil
millones de litros y el crecimiento promedio de producción de alrededor del 2.5% anual previsto
para los próximos 5 años, lo que implica que aproximadamente 16 mil millones de litros de glicerol
crudo Se puede producir en un año.

Se ha informado poca investigación sobre la utilización de glicerol en el pretratamiento de

biomasa lignocelulósica. El primer intento fue realizado por Kucuk y Demirbas [21] y informó una
alta designificación de la biomasa de madera. El estudio de Demirbas [22] también apoya estos
hallazgos e indica que la producción de pulpa acuosa de glicerol organosolv puede conducir a una
alta eliminación de lignina de biomasa lignocelulósica con cadena lateral de hemicelulosa, que
mejora la celulosa recuperación.

Sin embargo, hasta la última década se realizó poco trabajo probablemente debido al alto costo de
la purificación glicerol. Por el desarrollo de las industrias de biodiesel y oleoquímicos, el costo del
glicerol podría reducirse varias veces, lo que aumenta el interés en el uso de glicerol para el
pretratamiento de lignocelulosas. Sun y Chen [19] estudiaron el glicerol acuoso atmosférico
autocatalítico pretratamiento de organosolv (AAGAOP) para mejorar la hidrólisis enzimática de
lignocelulósico biomasa y en comparación con la explosión de vapor y concluyó que el glicerol en
alto la temperatura es una herramienta más poderosa para eliminar la barrera de lignina [23].
Recientemente, Zhang et al. 17] y Díaz et al. [24] han estudiado GTP y pretratamiento de glicerol
asistido por microondas para biomasa lignocelulósica y reportaron sus impactos positivos en la
hidrólisis enzimática.

Aunque, algunos estudios se informan sobre la aplicación de glicerol para el pretratamiento de

lignocelulosas, un estudio exhaustivo sobre el comportamiento enzimático relacionado con la
adsorción y reacción de hidrólisis, y se requieren cambios composicionales, químicos y
estructurales, que es El objetivo principal de la presente investigación. El presente estudio
también apunta a la masa y la energía. saldos para el desarrollo de tecnología industrialmente
aplicable.

2.0 Materiales y métodos

2.1 Recolección y procesamiento de paja de arroz.

La paja de arroz (PS) se recolectó de las granjas agrícolas cercanas a Sardar Swaran Singh Instituto
Nacional de Bioenergía, Kapurthala, Punjab, India. El PS secado al sol se secó más en un horno a 70
ºC durante aproximadamente 92 h. El PS seco se cortó en trozos pequeños de tamaño de 2 a 3 cm
y almacenado para su uso posterior en bolsas de muestra selladas en lugar seco. Todos los
experimentos se llevaron a cabo en Los valores triples y medios se informan en el presente
estudio.

2.2 Condiciones de pretratamiento

2.2.1 Pretratamiento térmico de glicerol (GTP)

Se tomaron aproximadamente 50 g de PS picado en un reactor de alta presión y alta presión

(HTHP) de Amar Equipment fabrica y mezcla bien en 500 ml de glicerol comercial con 99.9% de
pureza. Los Se procesaron diferentes conjuntos en el reactor a diferentes temperaturas (130-250
ºC a intervalos de 20 oC) y tiempo de proceso (10, 20 y 30 min). El tiempo requerido para alcanzar
la temperatura deseada. También se observó. Después de alcanzar la temperatura deseada
durante el tiempo seleccionado, el reactor se enfrió inmediatamente a temperatura ambiente y
recogió el material del reactor. El pretratado la biomasa se lavó a fondo con el agua destilada
hasta la eliminación completa del adherente glicerol. El PS pretratado se secó a 50 ºC en un horno
de aire caliente y se almacenó en un recipiente de plástico para uso adicional para hidrólisis
enzimática, análisis de composición y otros estudios confirmatorios.

2.2.2 Pretratamiento hidrotérmico (HTP)

Se tomaron aproximadamente 50 g de PS picado en un reactor HTHP y se mezclaron bien en 500

ml destilados. agua. Los diferentes conjuntos se procesaron en el reactor a diferentes
temperaturas (100 y 130-210 ºC a un intervalo de 20 oC) y tiempo de proceso (10, 20 y 30 min) en
el reactor. El tiempo requerido para alcanzar la temperatura deseada también se observó.
Después del pretratamiento, el material fue procesado según la sección 2.2.1.

2.2.3 Pretratamiento de álcalis (ALP).

Se tomaron aproximadamente 50 g de PS picado en un reactor HTHP y se mezclaron bien en 500

ml de 0,5%. NaOH El reactor se calentó a 100 ºC durante 30 minutos según el estudio anterior de
Gabhane et al. [10] Después del pretratamiento, el material se procesó según la sección 2.2.1.

2.3 Hidrólisis enzimática de paja de arroz cruda y pretratada

Las PS crudas y pretratadas se hidrolizaron enzimáticamente usando las enzimas Cellic CTec2
proporcionadas por Novozyme La carga sólida se mantuvo al 6% (p / v) en tampón citrato 0,05 M
de pH 4,8 con un carga enzimática de 10 FPU / g de paja de arroz cruda / pretratada. La hidrólisis
enzimática fue llevado a cabo en un agitador de incubadora (INNOVA 43R) a una temperatura de
50 ºC y 150 rpm durante 72 h. También se agregaron aproximadamente 25 mg / L de tetraciclina
para prevenir la contaminación microbiana durante hidrólisis encimática. Después de 72 h de
incubación a 50 oC, se retiraron aproximadamente 10 ml de hidrolizado. y se filtró a través del
papel de filtro Whatman 42. El filtrado se analizó para determinar la reducción de azúcar
concentración por método DNS [25]. El rendimiento de azúcar reductor (%) se calculó como:

Reducción del rendimiento de azúcar (%) =Concentración de azúcar reductor en mg / ml ×

Volumen en ml Sustrato en mg × 100

Adsorción de enzimas

La adsorción de la enzima (celulasas) en la biomasa pretratada se realizó en 5 ml de 0.05 M

tampón de citrato (pH 4,8), equilibrando 50 mg de sólidos pretratados con la enzima Cellic CTec2 a
una carga de 5 mg / g de PS pretratada en tubos de centrífuga de 15 ml según el método descrito
por Willies [26]. Los tubos se incubaron a 4 ° C para evitar la hidrólisis con agitación moderada
(150 rpm) durante 3 h en baño de agua con agitación. Después de la incubación, los tubos se
centrifugaron durante 15 minutos en un centrifugar a 4.000 rpm. Luego, el sobrenadante que
contiene proteína libre se estimó para proteína contenido por el método Folin -Lowry [27]. La
enzima adsorbida se calculó como [28]:

Enzima unida = enzima total cargada - Enxima libre (2)

Existe un equilibrio entre la adsorción y la desorción de las celulasas, que puede determinarse
estudiando la isoterma de adsorción de celulasas. Por lo tanto, en la presente investigación, la
adsorción las capacidades se estudiaron más a fondo determinando las isotermas de adsorción de
celulasas en pretratados PD. Según Bernardez et al. [29], la adsorción de celulasas sigue el modelo
de Langmuir, que ha sido aplicado ampliamente para correlacionar las isotermas de adsorción de
celulasas:

Donde, [ES] es la concentración de celulasas adsorbidas (mg / g-sustrato), Pmax es el

máximocapacidad de adsorción, Kd es la constante de disociación (mg / ml) y [Ef] es la
concentración de libre celulasas en la solución en equilibrio (mg / ml).

La cinética de enzimas

Las diferentes cantidades de PS pretratadas entre 1 y 3.125 mg se tomaron en 50 ml cónicos

matraz y añadió tampón citrato 0,05 M (pH 4,8) manteniendo el 4% de la carga sólida.
Aproximadamente 3.75 FPU Se añadió enzima (Cellic CTec2) a cada matraz con 25 mg / L de
tetraciclina para prevenir microbios. contaminación. La reacción se llevó a cabo en una incubadora
con agitador (INNOVA 43R) a temperatura de 50 ºC y 150 rpm durante 60 min. La reacción se
detuvo cambiando el pH a 8 con NaOH 0,1 M y seguido de centrifugación inmediatamente a 4.000
rpm. El hidrolizado
fue analizado para reducir la concentración de azúcar por el método DNS [25]. Velocidad inicial de
reacción o la velocidad (Vo) se calculó como la reducción de la producción de azúcar (mg) por
minuto y se trazó contra concentración de sustrato [S]. El inverso de reducir el rendimiento de
azúcar (1 / Vo) se trazó contra inversa de la concentración del sustrato (1 / [S]) según el gráfico
recíproco doble Lineweaver-Burk [30]. X la intersección indica -1 / Km, mientras que la
intersección Y indica 1 / Vmax, que se calculó adicionalmente para Km y Vmax como:

Análisis proximal y composicional de PS en bruto y pretratados

Las PS crudas y pretratadas se analizaron para análisis próximos y de composición. Próximo

El análisis se realizó por el método de combustión [31]. Las composiciones (celulosa, hemicelulosa
y contenidos de lignina) fueron analizados por el método de etanol HNO3 [32]. La degradación real
(%) de celulosa, hemicelulosa y lignina en PS pretratada se calculó sobre la base de recuperación
sólida de acuerdo con Gabhane et al. [10]:

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