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MICROBIOLOGÍA GENERAL
Autores:
11.CONTROL MICROBIANO 1
11.1. Introducción . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
11.2. Objetivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
11.3. Materiales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
11.4. Procedimiento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
11.4.1. Temperatura y Tiempo de Exposición . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
11.4.2. pH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
11.4.3. Presión Osmótica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
11.5. Preparación de la cepa a estudiar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
11.5.1. Efecto del cloruro de sodio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
11.5.2. Efecto de la sacarosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
11.6. Pruebas de sensibilidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
11.6.1. Antibiograma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
11.6.2. Agentes quı́micos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
11.7. Radiación Ultravioleta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
11.8. Cuestionario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
BIBLIOGRAFÍA 12
11 CONTROL MICROBIANO
11.1. Introducción
La conservación de materiales, el mejoramiento de sustratos mediante cultivos iniciadores y
una buena salud pública se logra, gracias a la combinación de diferentes métodos de control
ya sean fisicos, quı́micos y/o biológicos. Es ası́, como existen varias técnicas para controlar
las poblaciones microbianas como el efecto del calor, el pH, la luz ultravioleta, la presión
osmótica, los antibióticos, entre otros.
11.2. Objetivo
Emplear diferentes métodos para reducir, inhibir o eliminar poblaciones microbianas.
Evaluar la capacidad de inhibición, destrucción de cada uno de ellos sobre cepas Gram
negativas, Gram positivas y esporuladas.
11.3. Materiales
Cepas bacterianas Gram negativas: Escherichia coli, Klebsiella sp, Serratia sp.
Mecheros
Asas
Escobillones
Pinzas estériles
2 11 CONTROL MICROBIANO
Pipetas
Medidores de pH.
Termómetros
Incubadora
11.4. Procedimiento
11.4.1. Temperatura y Tiempo de Exposición
Tomar 12 tubos de ensayo con Caldo Nutritivo, marcar cada uno con la respectiva cepa
y temperatura a trabajar ası́: 50◦ C, 60◦ C, 70◦ C, 80◦ C;
• Inocular cada tubo con 1 mL del caldo bacteriano (cepas Gram Positivas), mar-
cados previamente.
• Inocular otros cuatro tubos con el caldo bacteriano (cepas Gram Negativas), mar-
cados previamente.
• Inocular los cuatro tubos restantes con el caldo bacteriano (cepas esporuladas),
marcados previamente.
• Tomar doce cajas de petri con Agar Nutritivo y marcar cada una con la respectiva
cepa y la temperatura a trabajar ası́: 50◦ C, 60◦ C, 70◦ C, 80◦ C.
◦ Dividir la base de cada caja en cinco cuadrantes. Marcar cada cuadrante con
el tiempo de exposición ası́: Control, 5 min, 10 min, 15 min, 20 min.
◦ Inocular cada caja de Agar en el segmento marcado como control, con uno de
los caldo bacteriano cepas (Gram positivas, Gram negativas y esporuladas)
contenidas en los tubos.
◦ Tomar los respectivos tubos con caldo bacteriano, previamente marcados con
la cepa y llevarlos al Baño Marı́a en la temperatura respectiva 50◦ C, 60◦ C,
70◦ C, 80◦ C.
◦ Tomar el tubo con el caldo bacteriano sometido a 50◦ C y dejar actuar por un
lapso de 5 minutos y Proceder a inocular en el segmento de la caja de petri
destinada al tiempo de exposición requerido.
11.5 Preparación de la cepa a estudiar 3
◦ Luego someter el mismo tubo con caldo bacteriano por 10 minutos pero par-
tiendo de cero tiempo y ası́, respectivamente hasta terminar todos los tiempos
y temperaturas.
11.4.2. pH
Tomar 5 tubos de ensayo con 6 mL de Caldo nutritivo cada uno.
Ajustar, el pH para cada tubo respectivamente en: 3.0, 5.0, 7.0 ,9.0 y 11.0 con HCl o
NaOH según el caso.
Inocular, cada uno de los tubos con 0.1 mL de la muestra del Microorganismo de
interés.
Evaluar el crecimiento.
NOTA: repetir el mismo procedimiento para cada tipo de cultivo bacteriano. Gram
positivas, Gram negativas y esporuladas.
5 Tubos de 16X 150 mm, en cada uno 10 mL de caldo nutritivo que se diferencia según
la concentración de NaCl ya sea al 0 %, 5 %, 10 % y 15 %.
5 Tubos de 16X 150 mm, en cada uno 10 mL de caldo nutritivo que se diferencia según
la concentración de sacarosa ya sea al 0 %, 5 %, 10 % y 15 %
Pipetas de 5 mL y de 1 mL estériles.
Inocular en cada tubo con el caldo nutritivo 0.l mL de la suspensión bacteriana corres-
pondiente.
11.6.1. Antibiograma
Tomar las cajas de petri con Agar Müeller Hinton o Agar Nutritivo.
Marcar cada caja en su base con la cepa de interés y con los respectivos antibióticos a
estudiar.
Tomar la caja de petri y proceder a inócular sobre el medio de cultivo con escobillón
de algodón estéril, por el metódo de agotamiento en superficie.
Empleando pinzas previamente esterilizadas coger los discos sensitive con el respectivo
antibiótico.
Marcar cada caja en su base con la cepa de interés y con los respectivos agentes
quı́micos a estudiar.
Coger la caja de petri y proceder a inócular sobre el medio de cultivo con escobillón de
algodón estéril, por el metódo de agotamiento en superficie o diseminación con hisopo.
Coger otra caja de petri con cuatro divisiones y depositar en cada cuadrante los agente
quı́micos a estudiar previamente marcados.
Coger con la pinza previamente estéril, los discos de papel filtro y colocarlos en cada
cuadrante de la caja de petri para impregnarlos del respectivo agente quı́mico.
Tomar con las pinzas individualmente los discos de papel filtro impregnados con los
agentes quı́micos a estudiar.
Colocar los discos de papel filtro sobre la superficie del cultivo bacteriano de manera que
haya una distribución uniforme entre cada disco y con espacios prudenciales mı́nimo
de 2 cm (Figura 11-2).
Inocular la cepa a estudiar con escobillón de algodón estéril sobre la superficie del
medio de cultivo.
Colocar una hoja de papel filtro estéril, a la cuál se le ha hecho un recorte central en
forma de estrella, sobre el cultivo bacteriano.
8 11 CONTROL MICROBIANO
11.8. Cuestionario
1. ¿Qué diferencia hay entre desinfectar y esterilizar?
2. ¿Que sucedió con el cultivo microbiano cuando se incremento la concentración del NaCl
y sacarosa en los distintos caldos nutritivos?
3. ¿Que nombre reciben las bacterias que soportan grandes presiones osmóticas?
6. ¿Menciona dos causas del porque los microorganismos pueden llegar a hacerse resis-
tentes a los antibióticos?
10 11 CONTROL MICROBIANO
2*Microorganismo TEMPERATURA
1.
2.
3.
4.
Determine las con-
diciones óptimas
de crecimiento y
de control para los
diferentes genéros
bacterianos.
2*Microorganismo DIFERENTES pH
1.
2.
3.
4.
Determine las con-
diciones óptimas
de crecimiento y
de control para los
diferentes genéros
bacterianos.
2*Microorganismo % NaCl
1.
2.
3.
4.
Determine las con-
diciones óptimas
de crecimiento y
de control para los
diferentes genéros
bacterianos.
11.8 Cuestionario 11
1.
2.
3.
4.
Determine las condicio-
nes óptimas de crecimien-
to y de control para los
diferentes genéros bacte-
rianos.—
Microorganismo RADIACIÓN
Respuesta: Sensible (S) ó Resistente (R)
1.
2.
3.
4.
Determine las condicio-
nes óptimas de crecimien-
to y de control para los
diferentes genéros bacte-
rianos
BIBLIOGRAFIA
VERA GARCÍA. Introducción a la microbiologı́a. Editorial Universidad estatal
a distancia. p, 229. http://books.google.com.co/books?id=K_ETVnqnMZIC&pg=
PA50&dq=estructura+del+esporo&hl=en&sa=X&ei=ZLUeUuuOO6fTsAStuIHoBw&ved=
0CEkQ6AEwBQ#v=onepage&q=estructura%20del%20esporo&f=false ALVÁREZ, Li-
liana y otros. Manual de Laboratorio de Bacteriologı́a. Universidad de Antioquia, 1990.