Técnicas de Elución y Adsorción

Prof. María José Pino

2018-1
 Elución
Libera las moléculas de anticuerpos de los
glóbulos rojos sensibilizados.
Los anticuerpos pueden liberarse por
modificación de termodinámica de las
reacciones Ag-Ac, neutralización o reversión
de las fuerzas de atracción que mantienen
unido los complejos Ag-Ac o por alteración de
la concordancia estructural entre los Ag y
puntos de fijación de loa Ac.
 Elución
Existen varias técnicas de elución, pero
NINGUNA es ideal como método único para
todas las situaciones.
La técnica permite interferir con los enlaces
no covalentes que fijan los complejos Ag-Ac.
en la superficie del glóbulo rojo.
 Elución
En EHRN y Reacciones Hemolíticas transfusionales,
se puede detectar anticuerpos específicos en el
Eluado, que pueden o no detectarse en el suero del
paciente.
Cuando el Eluado reacciona con TODAS las células
del panel, lo mas probable es que estemos frente a
la presencia de un autoanticuerpo.
 Elución
METODOS

• FISICAS: Calor, congelamiento/descongelamiento,

detergentes o solventes orgánicos.

• QUIMICAS: Utilizando alteraciones de pH o

concentraciones de sales.
 Elución ácida en frío

La disociación de anticuerpos desde los glóbulos

rojos permite la identificación de
auto/aloanticuerpos.
El método de elución utilizado junto con adsorción
permite también detectar expresiones antigénicas
débiles en los glóbulos rojos adsorbentes y para
separar las mezclas de anticuerpos antieritrocitarios.
 Elución ácida en frío
1. Los glóbulos rojos con TCD positivo se lavan 3-4 veces (PBS).
2. Siempre se debe guardar el ultimo lavado, para luego comparar
con el Eluado obtenido.

IMPORTANTE
1. Mantener Glicina-HCL en baño con hielo para mantener pH (3.0).
2. El agregado del amortiguador fosfato restablece la neutralidad del Eluado
acido. La acidez no neutralizada provoca hemolisis de los glóbulos rojos
reactivos utilizados para evaluar el Eluado. Añadir Albumina 22% ayuda a
disminuir la hemolisis.
 Elución por calor

➢ La técnica utiliza un aumento de temperatura para disociar

los anticuerpos de los glóbulos rojos.
➢ Es la mas apropiada para investigar la Enfermedad Hemolítica
del Recién Nacido por Incompatibilidad ABO (EHRN-ABO).
➢ También se utiliza para la elución de anticuerpos IgM.
➢ NO debe emplearse en el estudio de alteraciones causadas
por auto o aloanticuerpos IgG.
 Elución por calor
1. Los glóbulos rojos con TCD positivo se lavan 3-4 veces (PBS).
2. Siempre se debe guardar el ultimo lavado, para luego comparar con el Eluado
obtenido.

IMPORTANTE

Para la mejor recuperación de los anticuerpos reactivos en

frio, se deben lavar los glóbulos rojos en PBS helada, para
prevenir la disociación de los anticuerpos fijados antes de la
elución.
Elución por congelación/descongelación

➢ Cuando los glóbulos rojos se congelan, se forman cristales de

hielo extracelular, atrae el agua cercana, aumenta la
osmolalidad del liquido extracelular, lo que genera la salida
de liquido desde el intracelular, provocando la lisis del
glóbulo rojo.
➢ Dicho lo anterior, los anticuerpos se disocian.
➢ La técnica es también utilizada para EHRN-ABO
 Elución con cloruro de metileno

❖ Los solventes orgánicos pueden afectar la disociación de

Ac/Ag mediante varios mecanismos; incluyendo la alteración
de la estructura terciaria de las moléculas de anticuerpos y el
daño de la membrana eritrocitaria.
❖ La técnica se utiliza para la elución de auto y aloanticuerpos
IgG
 Adsorción

Los anticuerpos pueden extraerse del suero por

adsorción mediante glóbulos rojos portadores del
antígeno correspondiente.
Cuando los anticuerpos se fijan a los antígenos de
membrana y se separa el suero de las células, los
anticuerpos específicos permanecen unidos a los
glóbulos rojos.
 Adsorción
IMPORTANTE

o Previo al procedimiento es necesario conocer la especificidad

del o los anticuerpos, clase de Ig y su temperatura optima …..
Con el objetivo de elegir el fenotipo de glóbulos rojos que se
utilizaran y la técnica mas adecuada.
 Adsorción
APLICACIONES

I. Separar múltiples anticuerpos para su posterior

identificación.
II. Confirma la presencia de antígenos débiles en los
eritrocitos, por medio de su habilidad por remover el
anticuerpo especifico.
III. REMUEVE AUTOANTICUERPOS, de manera que podremos
identificar la presencia de un posible aloanticuerpo.
IV. En combinación con técnicas de elución permite separar
anticuerpos múltiples.
 Adsorción
METODOS
• No existe un método único, dependerá de los
objetivos que se quieran lograr, del tipo de Ig y T°
optima de esta.
• Es importante también conocer si hay mezcla de
auto o aloanticuerpos, así como también de mas de
autoanticuerpo.
• Los glóbulos rojos a usar deben estar libres de Igs y
complemento. (TCD negativo)
 Adsorción
METODOS
• En caso de autoanticuerpos estos se absorben con
glóbulos rojos autólogos, permitiendo así la detección
de posibles aloanticuerpos coexistentes.

IMPORTANTE
No podemos realizar esta técnica si el paciente ha sido transfundido
recientemente, es decir en los últimos 3 meses.
 Referencias ….

• Manual AABB, Capitulo 20 y Métodos.

• www.sochihem.cl