MATERIAL DE LABORATORIO

 Probeta: Tiene base hexagonal permitiendo entregar volúmenes aproximados

 Matraz aforado: Tiene una base plana, puede contener volúmenes con bastante exactitud y también resiste
cambios de temperatura
 Pipetas: Son para medir y entregar con exactitud volúmenes menores desde 0,1 ml hasta 25 ml, y esta diseñado
para evitar la entrada de aire. Entrega el líquido gota a gota
 Pipeta aforada: Tienen una parte central mas dilatada, permitiendo entregar volúmenes exactos, de demora hasta
15 segundos en vaciar la solución total
 Buretas: entregan un volumen exacto y contienen una llave llamada teflón.
 Matraz de Erlenmeyer: Contiene volúmenes aproximados y son usados para titulaciones, reacciones y para calentar
soluciones, evitando una gran cantidad de evaporación por su diseño
 Vasos de precipitados: Son usados comúnmente para soluciones y solo se pueden estimar volúmenes.
 Botellitas shot: resisten altas temperaturas y puede almacenar liquidos por años
 Tubos falcon: con tapita, no se evapora y permite centrifugar

BALANZA DE LABORATORIO

 Balanza de precisión: Su capacidad de carga es desde 200 grs hasta 500 grs, con una exactitud al centésimo del
gramo
 Balanza analítica: Instrumento de alta precisión para objetos livianos(mg), su diseño permite que ninguna vibración
deforme el peso del objeto.

APLICACIÓN DE CALOR

 Instrumentos que resisten el calor: vasos precipitados, matraz de Erlenmeyer y tubos de ensayo
 Baño termorregulado: no puede sobrepasar los 90°c y tiene una ventaja de aplicar calor de forma pareja a la
solución. Poseen exactitud en la regulación térmica y tiene una manejo seguro

La aplicación de frio ayuda en la caracterización de sustancias puras por su punto de fusión,

M= n/V(L) Ci*Vi= Cf*Vf m= n/Kg solvente

N= peso soluto/PE PE= peso molecular/n° de H+ o OH-

m: 0.001 µ: 0.000001 n: 0.000000001

METODO CIENTIFICO

 Observacion: A partir de esta se formulan preguntas

 Hipotesis: suposición basada en la observación previa, respuesta a preguntas hechas anteriormente(predicción),
proporcionan conocimiento y permiten reformular la hipotesis anterior
 Discusión: Se pueden incluir datos específicos del trabajo, explicación lógica y se discute la hipotesis
 Experimentos: Resultados que refutan o apoyan la hipótesis
 Experimentacion: estudio de investigación con uno o mas variables independientes(supuestas causas) para
analizar consecuencias de esa manipulación sobre una o mas variables dependientes(supuestos efectos)
 Variables: propiedad que puede adquirir diversos valores cuantitativos o cualitativos
 Grupo control: sin la variable
 Grupo experimental: con la variable
 Conclusion: Respecto a los resultados obtenidos(acotado)
MICROSCOPIO

1. Sistema mecanico._ pie y columna del microscopio, que sostendrán partes de éste; el tubo que sostiene
oculares,revolver portaobjetivos, platina y sistema de enfoques (macrométrico y micrometrico)
2. Sistema de iluminación._ Lampara ubicada en el pie que se regula por medio de un diafragma en la parte
inferior del microscopio
3. Sistema óptico._ Los oculares ( aumenta imagen proyectada por objetivos) y objetivos (aumentan e invierten la
imagen) , en los lentes objetivos hay dos tipos, los secos (entre los dos lentes y la muestra hay una capa de aire)
o de inmersión (entre ellos y la muestra se coloca una sustancia que permite lograr un aumento mayor)
 Cuando la luz llega a una superficie que separa dos medios transparentes, parte de ella se refleja y volviendo a
por el mismo medio, mientras que otra parte pasa a refractarse al segundo medio cambiando su velocidad y
dirección. Si es convergente,los rayos se juntan en un punto que se llamara distancia focal.
 A medida que el objeto se acerque mas a la distancia focal, aumenta su tamaño
 El microscopio forma una imagen virtual, invertida y de mayor tamaño

Poderes del microscopio

1. Poder de aumento: razón entre el tamaño original y el aumentado

2. Poder de definición: capacidad de formar imágenes nítidas y bordes definidos
3. Poder de penetración: capacidad de visualizar diferentes planos de una preparación (macrométrico y
micrométrico)
4. Poder de resolución: permite distinguir dos puntos que se encuentran muy cercanos entre si
 Se utiliza xilol para limpiar el lente objetivo 100X cuando se agrega aceite de inmersión

Preparaciones

1. Permanentes: son sometidas a un largo proceso de preparación para permitir un largo tiempo de observación.
Incluye etapa de fijación, deshidratación, inclusión en parafina, corte de capas muy finas con microtomo. Se colocan
en un portaobjetos con disolución de parafinas y tinciones
2. Temporales: corresponden a muestras frescas que se realizan en el momento y tienen una corta duración. Se coloca
una gota de agua en el portaobjetos y se coloca el corte de la muestra
 Reacción de millón: Detecta proteínas con residuos de tirosina en sus cadenas laterales, a través de un reactivo que
forma un precipitado rojo
 Reacción de diazonio: El agente cromogenico es el hidróxido de diazonio, que reacciona con tres grupos, tirosina,
histidina y el triptófano, formando soluciones coloreadas
 Reacción de schiff: Detecta ácidos nucleicos, lípidos y carbohidratos que contienen grupos de aldehídos
 Reaccion de feulgen nuclear: es especifico para el ADN, ocupa la reacción de schiff
 Tincion de Lugol: tiñe granos de almidon de color azul-morado
 Tincion con floroglucina: tiñe paredes celulares lignificadas de color rojo-violeta
 Tincion azul de metileno: tiñe protoplasma y paredes celulares celulósicas

Tipos de microscopio

1. Microscopio de contraste de fases. _ permite examinar objetos vivos y permite aumentar el contraste de imágenes
claras y oscuras de la célula sin colorear, ya que las partes invisibles son atravesadas por la luz cambiando su fase,
pero no su amplitud
2. Microscopio de fluorescencia. _ Algunas moléculas emiten parte de la luz absorbida a mayores longitudes que las
recibidas. La clorofila es un ejemplo de fluorocromo natural
3. Microscopio electrónico. _ al calentar un filamento de un tubo al vacío, se obtienen electrones, que son desviados
en un campo electromagnético(condensador) y se concentran en el plano del objeto. Las muestras tienen una
densidad muy baja por lo que se debe aumentar el contraste con metales pesados para aumentar la interacción de
esta con los electrones incidentes. Se observan solo muestras permanentes
COMPONENTES QUIMICOS DE LA CELULA

 Carbohidratos: conformado por carbono, hidrogeno y oxigeno, su enlace es el glucosídico, que se establece entre el
carbono hidroxilo(-COOH) y el carbono aldehído
 Proteínas: compuestas por carbono, oxigeno, hidrogeno y nitrógeno. Sus monómeros son los aminoácidos y se unen
por el enlace peptídico el grupo carboxilo(-COOH) y el grupo amino (-NH2). Al perder la conformación de la cadena
polipeptídica, también perdera su función. Las enzimas aceleran reacciones
 Lípidos: la parte hidrofóbica solo tiene carbono e hidrógenos y son constituyentes de las membranas. Son
importantes para procesos de señalización celular, tanto como hormonas esteroidales como moléculas mensajeras
 Ácidos nucleicos: almacenan y transmiten información genética , estos acidos nucleicos se unen por enlace
fosfodiéster. ARNm transporta info+ hasta el citoplasma, ARNr forma parte estructural y catalítica de los ribosomas y
ARNt molecula adaptadora que tranforma info a proteína
 Sales minerales: moléculas inorgánicas que forma parte de los seres vivos, los fosfatos, cloruros y carbonatos de
calcio, sodio, potasio y magnesio son los mas abundantes. Su función puede ser homeostática o el mantenimiento
constante de medio celular interno, regulación osmótica(concentración de la disolución)
 RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS:
 MONOSACARIDOS: tienen capacidad reductora que permite su reconocimiento en distintos tipos de muestras. La
reacción somogyi permite la detección rápida de azucares basada en la capacidad que tienen los monosacáridos de
reducir algunas moléculas como los hidróxidos metalicos. Esta reacción esta compuesta por sulfato de cobre e
hidróxido de sodio que forma el hidróxido de cobre, al calentar el reactivo con presencia de un carbohidrato aparece
un precipitado rojo ladrillo.(oxido cuproso Cu2O)
 POLISACARIDOS: reacción de Lugol es una mezcla de yoduro de potasio(KI) con una solución de yodo(I2) y posee
una coloración rojiza-marron. Al interactuar el yodo con el almidon se produce un color azul-violeta. Cadena
amilosa(azul) y la cadena amilopentina(violeta)
 RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS: Prueba de biuret no se calienta, esta compuesto por sulfato de cobre y tartrato
doble de potasio y sodio. El Cu2+ reacciona con grupos amino del enlace peptídico, este enlace es el responsable de
la coloración azul-violeta
 RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS: Las grasas son insolubles en agua pero el eter, benceno, xilol, cloroformo, etc son
solventes solubles
 RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS: presencia de catalasa, esta es una enzima que se encuentra en tejidos animales y
vegetales y tiene como función descomponer el H2O2 en agua y oxigeno, disminuyendo la toxicidad celular

ORGANIZACIÓN SUBCELULAR

 Núcleo: organelo mas grande de la celula que tiene una envoltura nuclear que contiene poros que tienen como
función la comunicación con el citosol
 RE: están a continuación de la membrana nuclear, el rugoso está asociado a ribosomas que se unen en su parte
externa y se encargan de la síntesis de proteínas. El liso esta constituido por un laberinto de túbulos irregulares
que no contienen ribosomas y se encargan del metabolismo de lípidos.
 Ribosomas: son grandes complejos de ARN y proteínas. Tienen una subunidad mayor y menor que permite llevar
a cabo el proceso de la traducción en la síntesis de proteínas
 Mitocondrias: tienen dos membranas, el espacio intermembrana y la matriz mitocondrial. Estas tienen su propio
ADN, sintetizan proteínas y pueden dividirse en dos; este organelo es responsable de los procesos de respiración
celular y producción de energía
 Cloroplastos: contienen su propio ADN y se encuentran solo en vegetales, son plastidios que contienen clorofila
y están rodeados de una membrana doble. Tienen envoltura, estroma y tilacoides.
 Aparato de Golgi: esta constituidos por cisternas discoidales aplanadas. Se encarga de la destinación,
modificación y empaquetamiento de macromoléculas de secreción y alrededor de el se encuentran pequeñas
vesículas que transportan sustancias entre el mismo organelo y los diferentes compartimentos de la celula
 Lisosomas: son vesículas membranosas que tienen enzimas hidrolíticas para la digestión de moléculas al interior
de la célula, de esta manera las enzimas se encuentran aisladas para evitar la degradación de ácidos nucleicos y
proteínas
 Peroxisoma: son vesículas que producen peróxido de hidrogeno durante la oxidación de moléculas, esta
sustancia es peligrosa y gracias a los peroxisomas estas se aíslan del resto de la célula
 Citoesqueleto: esta constituido por filamentos de proteínas que forman un enrejado en el citoplasma, esta
formada por microtúbulos, filamentos de actina y filamentos intermedios; este organelo le da forma a la célula y
provee la base de movimientos de esta
 Membrana plasmática: es la envoltura externa de la celula y corresponde a la bicapa de fosfolípidos. En ella hay
proteínas integrales y periféricas

Fraccionamiento subcelular: se separan los organelos por su densidad y tamaño. Primero hay una ruptura u
homogenización de la muestra, se logra por sonicación(sonidos de alta frecuencia), shock osmotico o moliendo las
células por homogenizadores mecánicos. Se rompe la membrana celular, quedando pequeños fragmentos que dan
origen a la fracción microsomal. La suspensión de células rotas se llama homogenizado y a partir de esta, se
comienza a centrifugar.

 Si dos componentes de distinta masa e igual tamaño y forma en un mismo medio, el cuerpo de mayor masa se
ira al fondo
 Las centrifugas aumentan el campo gravitatorio, estos tienen cavidades para los tubos, ya que los hacen girar a
distintas velocidades, aumentando el campo gravitatorio a medida que aumenta la velocidad. Al término de esta
centrifuga se obtiene un sedimento
 La primera etapa consiste en una centrifugación a baja velocidad, por lo que solo sedimentan las células enteras
como los nucleos
 El sobrenadante se somete a una segunda centrifugación a velocidades intermedias en la que sedimentan
mitocondrias, cloroplastos, lisosomas y peroxisomas
 El nuevo sobrenadante se centrifuga a una alta velocidad obteniendo un pellet enriquecido en membrana
plasmática y RE(fracción microsomal)
 La última centrifugación se hace a velocidades mayores permitiendo sedimentar los ribosomas, dejando un
sobrenadante solo la porción soluble del citoplasma y citosol
 Las fracciones obtenidas no son totalmente puras, hay otras modalidades que permiten realizar el proceso de
separación en gradientes de densidad, obteniendo organelos con altos grados de pureza
 Mediante marcadores celulares se determinan los fraccionamientos de organelos
 La obtención de organelos celulares aislados permite estudiar en forma especifica cada uno de procesos
celulares que ocurren en compartimentos, aislándolos de reacciones que ocurren en otros organelos

MITOSIS, MEIOSIS Y FECUNDACION

 Ciclo celular: se divide en la interfase y la division celular (mitosis o meiosis)

 Interfase: es el periodo mas largo en la que la celula se prepara para dividirse, durante este tiempo la celula
aumenta su tamaño y duplica su material genético (G1,S Y G2)
 G1: durante esta etapa la celula retoma su actividad biosintética que durante la mitosis es muy baja, retomando
sus niveles normales
 G0: Célula en reposo, se detiene proceso de ciclo celular
 S: la célula sintetiza el ADN y este se duplica
 G2: es el punto de control que repara daños y es en la cual se prepara para la división por un periodo de rápido
crecimiento
 Apoptosis: muerte celular

 MITOSIS: una célula se divide y da origen a dos células hijas diploides genéticamente iguales entre si
 1. Profase: en el núcleo la cromatina se condensa para formar los cromosomas, los centriolos se duplican y se
encuentran en polos opuestos de la celula, al final la envoltura nuclear se rompe
2. Metafase: los cromosomas condensados al máximo se ubican en el ecuador de la celula gracias a la ayuda del
huso mitotico(conjunto de microtúbulos que se van a los polos cerca de los centriolos). Los microtúbulos se
insertan en el cinetocoro de cada centromero. En esta etapa los cromosomas estan compuestos por dos
cromátidas
3. Anafase: movimiento de cromosomas hacia los polos de la celula, esto ocurre gracias al acortamiento de los
microtúbulos del huso mitotico
4. Telofase: sobre los cromosomas que estan en los polos se forma loa envoltura nuclear. La cromatina se
descondensa y el núcleo aumenta de tamaño por hidratación
5. Citodieresis:división del citoplasma en células animales y ocurre por estrangulamiento entre los dos nucleos
gracias a una gran concentración de microfilamento, lo que implica un gasto de energía
 MEIOSIS: producción de células haploides, a través de la duplicación del ADN nuclear, apareamiento de los
cromosomas homólogos, dos divisiones celulares sucesivas y la formación de células hijas haploides
 Hay activa transcripción y síntesis de proteínas produciéndose una gran variabilidad genética a través del crossing
over y permutación cromosómica
 Un núcleo diploide tiene dos jugos de cromosomas muy similares(cromosomas homólogos), cuando los
cromosomas se duplican por replicación se llaman cromátidas hermanas
 Cada cromosoma homologo tiene la mitad de ADN
 En la meiosis I cada celula hija tiene dos copias de uno de los cromosomas homólogos
 En la meiosis II los cromosomas no se duplican, solo se ubican en el centroen el huso mitotico y las cromátidas
hermanas se dividen como en una mitosis normal

Profase I: es la de mayor duración, ocurre el crossing over en el que los cromosomas homólogos intercambian parte
de su ADN

Leptoneno: Los cromosomas son hebras finas desapareadas que consisten en dos cromátidas hermanas unidas entre
sí.

Zigoteno: los homólogos materno y paterno se aparean para formar bivalentes.

Paquiteno: los cromosomas se engrosan y se produce el entrecruzamiento (crossing-over).

Diploteno: Los homólogos se separan pero se mantienen unidos por un quiasma.

Diaquinesis: bivalentes más condensados comprende migración de cromosomas hacia la periferia del núcleo,
desaparición de quiasmas, formación del huso y disolución de la membrana nuclear.

Metafase I: En esta etapa desaparecen los quiasmas, centriolos se duplican y se mueven hacia los polos. Se organiza
el huso mitotico y los cromosomas se ubican por pares homólogos en el centro de la celula, lo que genera diferentes
distribuiciones posibles de cromosomas, aumentando la variabilidad genética

Anafase I: los cromosomas migran hacia polos opuestos de la celula, gracias a la depolimerizacion y polimerización de
microtúbulos del huso mitotico

Telofase I: Se reconstituye la envoltura nuclear

Profase II: La cromatina se condensa y la envoltura nuclear desaparece

Metafase II: los cromosomas se ubican al centro y el huso mitotico se une a ellos de modo que cada cromátida
hermana se orienta hacia un polo distinto

Anafase II: cada cromátida migra a un polo distinto

Telofase II: se reconstituye la envoltura nuclear, se descondensan los cromosomas y ocurre la división del citoplasma
Fecundación: los gametos haploides se fusionan para dar origen a un nuevo organismo diploide, estos se reconocen a
través de moléculas especiales de adhesión lo que impide que espermios de una especie fertilice ovulos de otra
especie(especie-especifico).

 La poliespermia se encuentra bloqueada gracias a la despolarización rápida de la membrana del ovulo y el

cambio de carga a través de la membrana impide que un segundo espermio pueda fusionarse
 La fertilización comienza cuando la cabeza de un espermio contacta la cubierta gelatinosa de un ovulo, esto
causa que la vesicula del acrosoma libera su contenido.
 Al entrar en contacto las dos membranas plasmáticas, se fusionan y así se produce la entrada del núcleo del
espermio hacia el interior del ovulo. Una vez fecundado el ovulo pasa a llamarse cigoto
 Cuando los dos pro-nucleos se encuentran en el interior del ovulo, estos migran para encontrarse y fusionarse.
Este movimiento se realiza por el citoesqueleto, los cromosomas se juntan cuando las envolturas nucleares
desaparecen, en preparacion de la primera división celular

Gametogénesis: proceso en el cual se lleva a cabo la producción de los gametos(espermatozoides y ovulos)

 Para la producción de gametos femeninos(ovogénesis) y ocurre en los ovarios; mientras que para los gametos
masculinos es espermatogénesis, que ocurre en los testículos, en los tubulos seminíferos
 Ambos procesos inician con células germinales diploides, en dos divisiones sucesivas (meiosis I y meiosis II)