Determinación de fármacos mediante HPLC

1. Se desea determinar Paracetamol, cafeína y ácido acetilsalicílico en productos

farmacéuticos de dos marcas, utilizando como estándar interno ácido benzoico,
para este análisis se realizó el procedimiento experimental descrito a
continuación:

1 DISOLUCIÓN ESTÁNDAR DE LOS FÁRMACOS Y ESTÁNDAR INTERNO

Disoluciones STOCK de los analitos. (Preparar una por grupo)

Pesar por separado 25 mg de cada analito (paracetamol, cafeína, ácido acetilsalicílico y ácido
benzóico) en vasos de precipitados de 30 mL. Cada estándar se disuelve en
aproximadamente 15 mL de MeOH con agitación. Transferir a diferentes matraces
volumétricos de 25 mL y aforar con el mismo disolvente.

25 mg Paracetamol 25 mg Cafeína 25 mg de Ác. Acetilsalicílico 25 mg Ác. Benzóico

25 mL 25 mL 25 mL 25
mL
Figura 1. Preparación de disoluciones Stock

• Mezcla estándar de fármacos + EI (MF+EI).

Preparar la mezcla como se indica en la siguiente tabla:
Volumen
(mL) de Conc. en la mezcla estándar
Analito
disolución MF+EI (ppm)
stock
Paracetamol 0.5

Cafeína 0.5
Ác. Acetilsalicílico 0.5
 Ác. benzóico 0.5
MeOH 2 ---
Aforo con Agua ácida
10 ---
hasta

2 SOLUCIÓN PROBLEMA
a) Pesar 5 tabletas y registrar el peso.

b) Pulverizar las tabletas en un mortero.

c) Se pesaron 0.2 g de tableta pulverizada y disolver con una mezcla de 10 mL de metanol y 5

mL de agua ácida. En caso de ser necesario, colocar la muestra en el sonicador por 5 minutos
para disolver el polvo.

d) Trasferir la mezcla a un matraz volumétrico de 25 mL y aforar con agua ácida.

e) Preparar la mezcla problema con estándar interno (MP+EI) como se muestra en la siguiente
tabla:
Volumen (mL) Conc. en la mezcla (ppm)
Disolución A 0.5
Stock Ác. benzóico 0.5
MeOH 2 ---
Aforo con Agua ácida 10 ---

Colocar en diferentes viales para Automuestreador 1 mL de la mezcla estándar MF+EI y 1 mL de

cada uno de las muestras problema MP+EI.

Datos de estándares

Masa de reactivo del STD Paracetamol real pesada: ______25 mg___________

Especificaciones: Masa molecular: _____151.16 g/mol__________________
% Pureza: _________99.65%_______________________
Masa de reactivo del STD Cafeína real pesada: _________25 mg____________
Especificaciones: Masa molecular: _____194.19 g/mol__________________
% Pureza: ____99.63%___________________________
Masa de reactivo del STD Ác. acetilsalicílico real pesada: ___________25 mg_
Especificaciones: Masa molecular: ____180.158 g/mol_________________
% Pureza: ________99.5%____________________
Masa de reactivo del STD Ác. benzóico real pesada: ________25 mg_________
 Especificaciones: Masa molecular: ___122.12 g/mol__________________
% Pureza: _____99.6%_______________________

Datos muestra
Nombre comercial: Excedrin y quimofeina
Presentación: Tabletas
Lote y fecha de caducidad: T68NM5
Marbete: 250 mg Paracetamol, 250 mg Ácido acetilsalicílico y 65 mg cafeína
Peso promedio de tabletas: 0.669 g
Peso de muestra 0.2 g

Llenar la siguiente tabla con los resultados obtenidos.

Sistema Analito Concentración tr W1/2 Área FR N Rs
(ppm) (min) (s)

Paracetamol

Cafeína

MF+EI
Ác.
Acetilsalicílico
Ác. Benzóico
(EI)
Paracetamol

Cafeína
MP+EI
Excedrin Ác.
Acetilsalicílico
Ác. Benzóico
(EI)
Paracetamol

Cafeína
MP+EI
Quimofeína Ác.
Acetilsalicílico
Ác. Benzóico
(EI)
tr= tiempo de retención, Wb= ancho de pico a la base, W1/2 = ancho de pico a la mitad de la altura,
N= Número de platos teóricos, FR = factor de respuesta.
 𝟐
𝒕𝒓 𝟐 𝒕𝒓 𝟐(𝒕𝒓𝟐 − 𝒕𝒓𝟏 )
𝑾𝒃 = 𝟏. 𝟕 ∗ 𝑾𝟏/𝟐 𝑵 = 𝟏𝟔 ( ) = 𝟓. 𝟓𝟒 ( ) 𝑹𝒔 =
𝑾𝒃 𝑾𝟏/𝟐 𝑾𝒃𝟏 + 𝑾𝒃𝟐

𝑳
𝑨𝑬𝑷𝑻 = 𝑯 =
𝑵

To = 1.1 min

Analito tR (min) W (min) k’ N AEPT Rs

(mm)
Paracetamol

Cafeína

Ác. Acetilsalicílico

Ác. benzóico

L = 150 mm

a) Cálculo de la concentración en ppm de la solución stock para cada analito:

b) Cálculo de la concentración en ppm de la mezcla estándar MF+EI que se inyectó:
c) Cálculo de los factores de respuesta con respecto al estándar interno:

FR Paracetamol/Benzóico = _____________ FR Cafeína/Benzóico = _____________

FR Ác. acetilsalicílico/Benzóico = _____________

d) Cálculo del contenido de los fármacos en la muestra en las mismas unidades como
está reportado en el marbete, regresándose a las diluciones realizadas.
e) Cálculo de los % de principio activo con respecto al Marbete
f) ¿Son aceptables? ¿Porqué?