DETERMINACIÓN DE VARIANTE DU

INTRODUCCION

Algunos individuos presentan una disminución cuantitativa en la expresión de su

antígeno D, llamados D débiles (antiguamente D u). Otros, en cambio, presentan
una variación cualitativa en la expresión de dicho antígeno, denominados como D
parcial. Dentro de este grupo se encuentra la categoría “D”, caracterizada por
poseer una mínima cantidad de epitopes; por lo tanto, se trata de una cuestión
simplemente cuantitativa en la que el número de lugares antigénicos D en la
superficie de los hematíes Du es tan pequeño que no permite la aglutinación de
los mismos al enfrentarlos a sueros anti-D, por lo que debe recurrirse a métodos
indirectos para detectarlos. De esta manera, en ocasiones, los hematíes que
muestran un factor Rh poco reactivo, denominado “Rh o variante Du”, reaccionaran
negativamente en la prueba de tipificación Rh. Todas las sangres que den
resultado negativo en la determinación del antígeno D por cualquier técnica directa
(placa, tubo, microplaca o gel) deben ser confirmadas mediante una prueba de
antiglobulina indirecta o Coombs directo, el cual se fundamenta en detectar Ac que
recubren los hematíes del paciente, donde previamente los hematíes lavados se
tratan con suero antihumano y se observa si produce aglutinación. La
Determinacion del Du en el banco de sangre es imprescindible, ya que el antígeno
D es altamente inmunogénico siendo responsable de severas reacciones post-
transfusionales y de la enfermedad hemolítica del recién nacido.

La metodología consiste en que los glóbulos rojos del paciente se ponen en

contacto con suero anti-D (anti-Rho) el cual tiene como componente IgG anti-D
capaz de detectar las variantes de antígeno débiles, de tal modo que si existe en
la superficie del eritrocito el antígeno correspondiente, se producirá una
aglutinación visible macroscópicamente.
RESULTADOS

SUSPENSION DE ERITROCITOS AL 5%
(tubo izquierdo: para muesra A Rh+, Tubo derecho: para
muestra O Rh-)

Observaciones:

- Al inicio de la practica, tal como lo especifica el método se hicieron

suspensiones de eritrocitos al 5 %, emplando 950µl de SSF + 50µl de
muestra) las cuales sirvieron como material de trabajo para realizar las
pruebas correspondientes.
- Se sometieron las muestras problema a una prueba de tipificación de grupo
sanguíneo ABO para corroborar la identidad su factor Rh.

Primera fila: tipificación de sangre O-

Segunda fila: tipificación de sangre A+

DISCUSION

El procedimiento que se siguió para llevar a cabo la determinación de la variante

Du consistió primero en efectuar una prueba de determinación en tubo del antígeno
D, mezclando dos gotas de eritrocitos problema al 2% con dos gotas de reactivo
Anti-D (Rho), seguido del ciclo de centrifugación correspondiente, no se observó
aglutinación macroscópica en el tubo por lo que se obtuvo una reacción
aparentemente negativa para el Ag D, esto guarda una relación con el
componente IgM anti-D del reactivo el cual produce aglutinación directa de los
glóbulos rojos portadores del antígeno D normal, por lo que, en los casos de los D
débiles no se aglutinan directamente con este reactivo. De tal modo, se siguió con
el esquema de la determinacion de la variante del antígeno D débil en el que se
acondicionó la reacción antígeno-anticuerpo ahora agregando 2 gotas de Suero
Anti-humano (poliespecífico) cuyo componente es la IgG anti-D la cual puede
detectar las variantes débiles del Ag D; esto gracias a la bivalencia que presenta la
IgG anti-D, a diferencia de la IgM que es pentamerica, lo que permite establecer
una reacción bimolecular in vitro Ag-Ac pudiéndose generar como producto la
aglutinación como fenómeno físico observable a nivel macroscópico. De acuerdo a
los resultados obtenidos, en el presente caso no se observó la aglutinación en el
tubo con los eritrocitos problema; por lo tanto la reacción es negativa y el individuo
se clasificaría como Rh negativo.
 LECTINAS

INTRODUCION

Las lectinas son proteínas o glicoproteínas llamadas también

"Fitohemoaglutininas" que presentan la propiedad de unirse a los azúcares de la
superficie celular y aglutinar células animales y vegetales y/o precipitar
polisacáridos, glicoproteínas o glicolípidos. Dicha unión es semejante a la de las
enzimas con su sustrato y/o a las de anticuerpo con su antígeno. Respecto a la
propiedad de aglutinar glóbulos rojos humanos hay lectinas específicas para los
grupos sanguíneos A, A1, B, M, N y H, que se unen a los determinantes
antigénicos presentes en la superficie de los eritrocitos.

Los antígenos A y B son productos génicos fácilmente detectables y constituyen

marcadores genéticos de gran valor. Entre los individuos A, se distinguen 2
categorías: A1, definido por un anticuerpo particular (anti-A1), y A2, que no es
reconocido por este anticuerpo. Los glóbulos rojos de los individuos A1 presentan
aproximadamente 106 sitios antigénicos por célula; en cambio, los A2 sólo poseen
entre 0,2 y 0,4 x 106 sitios por glóbulo. Existen otros subgrupos de A considerados
débiles (A3, Ax, Aend, Am, Ael), en los que la reactividad antigénica es inferior a la
de los glóbulos A2.

La distinción entre A1 y A2 corresponde a una diferencia en el número y

distribución de los receptores A en la membrana eritrocitaria y a una diferencia
cualitativa de estructura. La diferenciación entre ambas se realiza mediante la
utilización de anticuerpos monoclonales y lectinas específicas de grupo sanguíneo
Dolichos biflorus (anti-A1) y Ulex europaeus (anti-H). Determinar la presencia
de subgrupos del tipo de sangre A y AB evitará problemas no solo a nivel de
transfusión sanguínea en los banco de sangre, sino también en casos de
trasplantes ABO incompatibles que provocan la denominada enfermedad huésped
contra injerto.

DISCUSION

Se sometio la prueba de las lectinas a una muestra sanguínea tipificada como A

Rh+ que se llevó a cabo para la determinacion de los subgrupos sanguíneos A1 y
A2. El procedimiento consistió primeramente en lavar con solución salina los
eritrocitos problema con el fin de eliminar las proteínas séricas interferentes,
posteriormente se añadió una gota del reactivo de lectinas (H), suponiendo una
reacción tipo Ag-Ac en la que las lectinas reaccionan con los polisacáridos de la
superficie de los eritrocitos en caso de estar provistos del antígeno eritrocitario del
subgrupo A2, ya que las lectinas H tienen especificidad por dicho sustrato en la
reacción. En este caso particular, mo se observó aglutinación alguna, por lo que
basándose en criterios de exclusión a falta de reactivos, se determina que la
muestra problema es del subgrupo tipo A1.