04 - Columnas en Cromatografía

Columnas CG
Material de capacitación –Cromatografía

de Gases- versión 01. Abril 26 de 2010
En esta sección aprenderá
La diferencia entre columna empacada y capilar.
El efecto de la longitud de la columna, el diámetro y
espesor de película, en la separación.
Como elegir las dimensiones de la columna
Como elegir la fase estacionaria
El cuidado de la columna.
Introducción al tiempo de retención

Tipos de columnas
empacadas capilar
Porous Layer Open Wall Coated Open

Tubular (PLOT) Tubular (WCOT)
capilar
empacada
WCOT
Megabore WCOT (wide)
(narrow)
longitud 0.5-10 5-100 5-100 5-100

(metros)
d.i. (mm) 2-4 0.530 0.25-0.32 .05-0.2
Velocidad de flujo 10-60 4-30 1-15 0.3-8.0

(ml/min.)
Presión (psi) 10-90 1-20 1-40 5-90
Capacidad de muestra 100 ng/peak 10 ng/peak 1 ng/peak <1 ng/peak

Tipos de Columnas
12 4
Análisis con columna 6
7
9
5
empacada 8 10
11&12
5% OV101
on 80/100
Chromosorb
1 2 9
Análisis con columna 1011

12
7&8
capilar: 4
5 6
30m X 0.53mm X
.88µm
Análisis con columna

capilar:
30m X 0.32mm X
.25µm

Columnas capilares
(WCOT- WALL COATED OPEN TUBULAR)
ID's 100, 200, Pared del tubo

250,320, 530 µm Silica fundida
Capa del fase Liquida

polímero 0.05 - 5 µm
Longitud 5-100
metros
Silica fundida
• Flexible.
• Envoltura de poliimida.
• Muy inerte.

Parámetros de la Columna
2)Longitud
1) Diámetro interno
5) flujo
Fase estacionaria :
3) Espesor de la película
4) Composición
Fase estacionaria – películas gruesas
VENTAJAS
1.0 µm AUMENTA LA RETENCION PARA SUSTANCIAS

VOLATILES.
CAPACIDAD CRECIENTE PARA CG/MS, CG/ IR
DESVENTAJAS
BAJA EFICIENCIA.
REQUIERE ALTA TEMPERATURA – CONDUCE AL
RUIDO.

Espesor de la película contra tiempo de retención
Gasoline Premium
Column 15 m/0.3 mm SE-52
film thickness
(um)
0.05
2 3 4
5
6
0.15
1 2 3
0.80
5
20 programmed 2 /min 80
Análisis de gasolina con variación del espesor de la pelicial de la fase
esatcionaria. (K. Grob and G. Grob, HRC & CC, 2 (1979) 109, reprinted
with permission)
Fase estacionaria– pelicuals delgadas
VENTAJAS
ALTA EFICIENCIA
< 0.2 µm BAJA TEMPERATURA DE ELUCIÓN
(MENOS CORRIMIENTO)
ANALISIS RAPIDOS
DESVENTAJAS
BAJA CAPACIDAD
ANALISIS LIMITADO

Ejemplo : película fina
Análisis de hidrocarburo con columna de 100m x 0.25mm
FID1 B, (C:\DHACRYO\201B0103.D) FID1 B, (C:\DHACRYO\201B0103.D)
Norm.
Norm.
100
80
60
800 40
20
28.6 28.8 29 29.2 29.4 29.6 29.8 min
600
400
200
0
0 20 40 60 80 100 min

Espesor de la película de la fase estacionaria
• 0.25um – buen punto de

0.25 µm partida
• Resolución y capacidad.
• Temperatura de operación
práctica sin preocuparse por
corrimientos.
• Puede optimizarse para la

velocidad o resolución

Fase Liquida - Selectividad
5% fenil metilpolisiloxano
3
(e.j. DB-5)
2 • C11
1
6
• 4- clorofenol
4 7 • 1-decilamina
8
9 • C-13
5
• metil caprato
• C14
• acenaftileno
50 % fenil • 1-dodecanol
36
metilpolisiloxano • C15
14 2
(e.j. DB-17)
9
Structure of acenaphthylene.
8
7

Fase estacionaria
Tipos
DB-1 DB-5
dimetilpolisiloxano (50% -fenil)

metilpolisiloxano
Fase típica siloxano

Fase estacionaria
Tipos
DB- 23 DB-5 ms
DB-5
Poli(dimetilsiloxi)poli(1,4-
bis(dimetilsiloxi)fenilen)siloxano
(
cianopropilmetilpolisiloxano

Fase estacionaria
Tipos
DB- 200 HP-88
trifluoropropilmetilpolisiloxano cianopropilaril-polisiloxano

Fase estacionaria
Tipos
HP Innowax Columnas quirales
30% heptakis (2,3-di-O-metil-6-O-t-butil

polietilenglicol
dimetilsilil)- b-ciclodextrina

Selección de la columna /consideraciones
• Fin del análisis.
• Muestra a separar.
• Diámetro de la columna .
• Fase estacionaria .
• Longitud
• Espesor de la película ó % loading:
– Capacidad.
– Retención.
– Inercia
– Eficiencia
– Corrimiento.

El catalogo proporciona :
• Nombre comercial de la fase.

• Nombre químico de la fase.
• Fases equivalentes.
• Temperatura mínima y máxima
• Ejemplos de aplicación .

Notas de aplicación :
Tipo de columna
Condiciones del gas
horno
inyección
detector
Inf de la muestra

Acondicionamiento de la Columna :
Protocolo de muestra
• Instale la columna en la entrada y presurice con el gas portador
• Asegurarse que el flujo en la columna es estable.
• No conectar al detector si es este proporciona contaminación
• Lleve el horno a 50º C y permita el flujo en la columna por 5 minutos
• Incrementar la temperatura del horno a 200 ºC y dejar el flujo por 5
minutos más
• Aumentar la temperatura del horno al máximo del análisis y dejar el flujo
de la columna una hora más
• Enfriar el horno y conectar la columna al detector.
• Fijar la temperatura del horno al máximo del análisis y determinar si la
columna esta limpia para utilizar
• Si no es así repetir el ciclo una hora más.

Almacenar la columna
• Guardar la columna cuando no se use
• Para guardar la columna tenga en cuenta.
– Colocar los septa de GC encima de los extremos
para prevenir que entren restos en el tubo.
– Las columnas capilares se guardaran en la caja
original cuando se desinstalan.
* Nota: las columnas polares (ej DB-WAX) son
menos resistentes que las no polares (ej DB-
1) a la degradación de oxigeno
Eficiencia y velocidad lineal del gas portador
• La eficiencia es función de la
HETP = A +
B
+Cµ velocidad lineal media o del
µ flujo del gas portador
• HETP (altura equivalente de

platos teóricos) es definida
HETP
como la longitud de la columna

dividida por el número de
C term = RESISTANCE TO MASS platos teóricos (L/N).
TRANSFER
• HETP vs. Velocidad lineal es

A term = EDDY DIFFUSION conocido como el diagrama de
Van Deemter
Velocidad lineal media
• El mínimo de la curva
representa el valor más
• El valor de la velocidad lineal en pequeño para HETP ( o
mayores platos por metro)
el mínimo de la curva es el valor óptimo
esto es mejor eficiencia
para alcanzar la mejor eficacia. .

Flujo óptimo
Flujo del portador Velocidad óptima
Diámetro de columna óptimo Del portador
1/
4” 50-60 ml/min. 2.6-3.2 cm/sec.
1/
8” 20-30 ml/min. 4.2-6.3 cm/sec.
Columna capilar
Series 530 (megabore) 3-5 ml/min. 22-38 cm/sec.
0.320 mm (wide bore) 1-3 ml/min. 20-41 cm/sec.
0.200 mm (narrow bore) 0.5-1 ml/min. 21-32 cm/sec.
0.100 mm (high speed) 0.2-0.5 ml/min. 42-106cm/sec.
Generalmente la guía proporciona un valor

óptimo para un diámetro de columna en particular:
Medida de la velocidad lineal media
Longitud columna (cm)
Velocidad lineal =
Tiempo de retención de un compuesto
no retenido (sec)
Estimar la longitud de la columna usando la formula
Longitud = pdk
Donde:
d = diámetro (en cm.)
k = número de vueltas de la columna
p = 3.14
• El tiempo de retención puede ser estimado:
• Usando el tiempo de retención del primer componente que eluya
• Inyectando 5 cm3 de vapor de butano de un encendedor
desechable y usando el tiempo del pico del butano
Tipo de gas portador efectos sobre la eficiencia
y la resolución
HETP C17 at 175º C Nitrogeno Helio hidrogeno
(mm) (58 cm/sec)
(58 cm/sec) (58 cm/sec)
k' = 4.95
1.2 N2 WCOT Column
OV-101 0.4µ
1.0
25 m x 0.25 mm
He 15 m x 0.25 mm
.8
Glass WCOT
.6 SE - 52
H2
.4 Isothermal, 150º C
.2
10 20 30 40 50 60 70 80 90
R = 1.17 R = 1.37
Velocidad lineal promedio (cm/sec)
Cuvas de eficiancia para una columna Efectos del gas portador sobre la resolución
25 m x 0.25 mm WCOT columna con 0.4 um
de OV-101.

Juzgando la Eficiencia
2mm x 5m 0.2 mm x 30m
Columna empacada Columna capilar
Eficiencia
N/m Total Platos N/m Total Platos
Columna
Mayor >2000 10,000 >5000 150,000
Media 1500 7,500 4000 120,000
Inferior 1000 5,000 3000 90,000

Disminuir el tiempo de la corrida.
Parámetros de la Parametros del Instrumento:

Columna:
• Gas portador diferente (H2).
• Una longitud de la • Programar rampa de temp.
columna más corta. • Análisis isotermico a alta
temperatura.
• Diámetro más pequeño.
• Alta velocidad de flujo del gas
portador.

Rápida CG
toluene
C8 C9 plus arom atics
arom atics
0.32 m m i.d., helium
benzene
0.5µl, 200/1
naphthalenes
5 m in 18.2 m in
0.10 m m i.d., hydrogen

0.1µl, 800/1
1.2 m in 3.5 m in

Consideraciones en rápida CG
• Usar columnas de diámetro pequeño.

– Proporciona Separaciones rápidas, alta eficiencia en análisis de
muestras complejas
• Method Translation software

– Predice parámetros de operación apropiados.
– Disponible en www.chem.agilent.com/ ayuda técnica
• Ediciones del Hardware
– Programas de temperatura rápidos .
– Requiere alta presión a la entrada (EPC necesario).
– Requiere rápida adquisición de datos.
– Limitaciones en la capacidad de muestra (alto radio split).
– Longitud de columna de 10-20 metros (o cortas).
– Cambiar el gas de arrastre pude disminuir el tiempos de análisis

Gasolina reformulada
El hidrogeno como gas portador reduce el tiempo de análisis.
Aumentando la velocidad del análisis.
A 30m x 0.32, 0.5µm HP-Wax

helium
0 5 10 15 min
10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax

B helium
0 1 2 3 4 5 min
10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax

C hydrogen
0 1 2 3 4 min
Fijar el tiempo de retención /Retention
Time Locking (RTL)
• Software que permite comparar los tiempos de retención en un sistema CG
7890 o 6890 con otro instrumento que tenga el mismo tipo de columna.
• Se usa durante los desarrolladores demetodos Used by method developers
who are responsible for developing, transfer ring, and maintaining methods
for routine analysis.
• Requiere la construcción de un método y curva de calibración presión –

tiempo de retención para el tipo de columna usada.
• El método se puede transferir a otro instrumento con el mismo tipo de
columna y el tiempo de retención de un compuesto target puede ser
bloqueado sobre el tiempo de retención deseado
• Varias bases de datos están de RTL disponibles ahora, por ejemplo una
base de datos de 567 pesticidas

Problemas con la columna
No hay Picos Respuesta pobre
• Debe examinarse todo el sistema y • Adsorción de la muestra en la
el proceso de inyección columna
• Fugas • Pérdida de fase líquida (columna
• Control de flujo vieja)
• Puerto de Inyección dañado • Poca muestra
• Problemas con el detector o el • Puerto de inyección defectuoso
sistema de integración • Mala técnica de inyección
• Fugas
Uno ó más picos desaparecidos • Temperaturas del puerto de
• Muestra muy diluida inyección o de la columna
• Adsorción por la columna incorrectos
• Temperaturas del puerto de • Sensibilidad incorrecta del detector
inyección o de la columna incorrectos Picos con “cola”
• Flujos incorrectos • Adsorción de la muestra en la
• Fugas columna
• Temperatura del puerto de
inyección o de la columna muy bajos


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Porous Layer Open Wall Coated Open

longitud 0.5-10 5-100 5-100 5-100

d.i. (mm) 2-4 0.530 0.25-0.32 .05-0.2

Velocidad de flujo 10-60 4-30 1-15 0.3-8.0

Presión (psi) 10-90 1-20 1-40 5-90

Capacidad de muestra 100 ng/peak 10 ng/peak 1 ng/peak <1 ng/peak

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Análisis con columna 1011

Análisis con columna

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(WCOT- WALL COATED OPEN TUBULAR)

ID's 100, 200, Pared del tubo

Capa del fase Liquida

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1.0 µm AUMENTA LA RETENCION PARA SUSTANCIAS

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28.6 28.8 29 29.2 29.4 29.6 29.8 min

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• 0.25um – buen punto de

• Puede optimizarse para la

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dimetilpolisiloxano (50% -fenil)

Fase típica siloxano

Fase típica siloxano

DB- 200 HP-88

Fase típica siloxano

HP Innowax Columnas quirales

30% heptakis (2,3-di-O-metil-6-O-t-butil

Fase típica siloxano

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• Nombre comercial de la fase.

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• HETP (altura equivalente de

como la longitud de la columna

• HETP vs. Velocidad lineal es

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0.320 mm (wide bore) 1-3 ml/min. 20-41 cm/sec.

0.200 mm (narrow bore) 0.5-1 ml/min. 21-32 cm/sec.

0.100 mm (high speed) 0.2-0.5 ml/min. 42-106cm/sec.

Generalmente la guía proporciona un valor

Estimar la longitud de la columna usando la formula

Material de capacitación –Cromatografía

Mayor >2000 10,000 >5000 150,000

Media 1500 7,500 4000 120,000

Inferior 1000 5,000 3000 90,000

Material de capacitación –Cromatografía

Parámetros de la Parametros del Instrumento:

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0.10 m m i.d., hydrogen

Material de capacitación –Cromatografía

• Usar columnas de diámetro pequeño.

• Method Translation software

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A 30m x 0.32, 0.5µm HP-Wax

10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax

10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax