Seminar 1

Presented By : Laleh Mehryar (871101007)

Dear Professor : Dr. Rezazadeh

Department of Food Science, Urmia University 1

Father of the Biosensor

Professor Leland C Clark Jnr

1918–2005

2
Review

3
 What is a Biosensor?
International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) defines biosensor
as a “device that uses specific biochemical reactions mediated by isolated
enzymes, immunosystems, tissues, organelles or whole cells to detect
chemical compounds usually by electrical, thermal or optical signals”.

in : Biosensor (www.google.com) 4
INTRODUCTION

 What Is a Biosensor?
 Biosensor = bioreceptor + transducer

 The bioreceptor is a biomolecule that recognizes the

target analyte whereas the transducer converts the
recognition event into a measurable signal.

 Enzyme is a Bioreceptor

in : Biosensors (www.egtoget.com) 5
Block Diagram of a Biosensor

odor

Olfactory Olfactory Brain

Membrane Nerve Cell

Sample Signal
Biorecognition
(Analyte or Transducer Processing
Element
Substrate) Device

Introduction to Biophotonics – Prasad - John Wiley & Sons © 2003

6
Block Diagram of a Biosensor
a) Biocatalyst
b) Transducer
c) Amplifier
d) Processor
e) Monitor

7
•Specificity
With biosensors, it is possible to measure specific analytes with great accuracy.

•Speed
analyte tracers or catalytic products can be directly and instantaneously measured

• Simplicity
receptor and transducer are integrated into one single sensor& the measurement of
target analytes without using reagents is possible

• Continuous monitoring capability

Biosensors regenerate and reuse the immobilized biological recognition element

in : Biosensors (www.egtoget.com) 8
Applications of Biosensor

 Health Care
 Measurement of Metabolites
 Market Potential
 Diabetes
 Insulin Therapy
 Artificial Pancreas

 Industrial Process Control

 Bioreactor Control

 Military Application

 Environmental Monitoring
 Air and Water Monitoring

in : Biosensors (www.egtoget.com) 9
123456789

Affinity analyte
reaction
Signal BM
transducer

How it works ???

10
The ability to determine the occurrence of food contamination
due to foodborne pathogens at every stage
of food production, processing, and distribution is
crucial to improving the safety of our food supply.
There are more than 250 known food borne diseases
caused by bacterial and viral infections in the United
States. Annually, these foodborne diseases result in an
estimated 76 million illnesses, 325,000 hospitalizations,
5,000 deaths, and 6 billions dollars in unneeded
expenditure. Bacterial contamination accounts for 91%
of total foodborne diseases. Salmonella sp.,
Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Staphylococcus
aureus, Campylobacter jejuni, Campylobacter coli
and Bacillus cereus were found to be main source of
bacterial contaminations in our food supply.

11
12
13
14
15
16
17
 A microbial biosensor consists of a transducer in conjunction with
immobilised viable or non-viable microbial cells. Non-viable cells
obtained after permeabilisation or whole cells containing
periplasmic enzymes have mostly been used as an economical
substitute for enzymes. Viable cells make use of the respiratory
and metabolic functions of the cell, the analyte to be monitored
being either a substrate or an inhibitor of these processes.
Bioluminescence-based microbial biosensors have also been
developed using genetically engineered microorganisms
constructed by fusing the lux gene with an inducible gene
promoter for toxicity and bioavailability testing (7).

18
Advantages
• able to metabolise a wide range of chemical compounds
• have a great capacity to adapt to adverse conditions and to develop
the ability to degrade new molecules with time.
• are also amenable for genetic modifications through mutation or
through recombinant DNA technology and serve as an economical
source of intracellular enzymes.

19
 ‫انواع عناصر بیولوژیکی‬

‫‪ .1 ‬آنزیم های خالص شده‬

‫زنده و غیر‬ ‫‪ .2 ‬سلولهای کامل‬

‫زنده‬

‫‪20‬‬
 ‫آنزیم های خالص شده‬

‫آنزیلم های خاللص شده در سلاخت بیوسلنسورها بعللت فعالیت و‬ ‫‪‬‬

‫آنالیزهای اخت صاصی بال بطور متداول مورد استفاده قرار میگیرند ‪.‬‬
‫که بع لت گرا نی و ناپایداری کاربردهای آن ها در زمی نه بیوسنسورها‬
‫محدود ملی شود ‪ .‬بیلش از ‪ %90‬آنزیلم های شناخته شده درون‬
‫سلولی ه ستند به ا ین ترت یب ا ستفاده از سلول های کامل بعنوان‬
‫من بع آنز یم های دا خل سلولی در فرایندهای صنعتی مخت لف بهترین‬
‫آلترناتیو می باشد که مانع فرایند طولنی و گرانقیمت خالص سازی‬
‫آنزیم شده آنزیم ها در دا خل سلول باقی مانده و با ترکیبات سمی‬
‫از جمله فلزهای سنگین واکنش نمیدهند )‪.(7‬‬

‫‪21‬‬
 ‫سلولهای‬
‫کامل‬
‫‪ ‬سللولهای کاملل هلم در فرم زنده و هم غیرزنده‬
‫مورد ا ستفاده قرار میگیرند ‪ .‬سلولهای زنده اهمیت‬
‫قابلل ملحظله ای در سلاخت بیوسنسورها دارند‪.‬‬
‫میکروبهای زنده ترکیبهای ارگانی للک مختلفی را‬
‫متابول یز میکنند‪ .‬ب صورت هوازی یا غیرهوازی منجر‬
‫به تولیلد محصلولتی از جملله آمونیاک‪ ،‬دی اکسید‬
‫کر بن‪ ،‬ا سیدها و ‪ ...‬میشود که با استفاده از مبدل‬
‫های مخت لف مونیتور میشوند ‪ .‬سلولهای زنده زمانی‬
‫اسلتفاده میشونلد کله ظرفیلت جذب ه مه سوبسترا‬
‫توسلط میکروارگانیسلم بعنوان شاخلص فعالیت‬
‫متابولیکلی تنفسلی در نظلر گرفته شود‪ .‬در مواردی‬
‫از جمله محاسبه نیاز اکسیژن بیولوژیکی ‪.‬‬

‫‪22‬‬
 ‫محدودیتهای‬
‫سلولهای کامل‬

‫‪ .1 ‬مهمتریلن محدودیلت اسلتفاده از سللولهای کامل نفوذ‬

‫سوبسترا و محصلولت از دیواره سللولها کله منجلر به‬
‫طولنلی شدن زمان پاسلخ در مقایسله بلا سنسورهای‬
‫آنزیمی میشود‪.‬‬

‫‪ .2 ‬ی کی دی گر از محدودیتهای سلولهای کا مل پائین بودن‬

‫عملکرد اختصلاصی آنهلا در مقایسله بلا بیوسنسورهایی‬
‫است از آنزیم های خالص شده استفاده شده که اساسا‬
‫به عللت واکنشهای کاتالیلز شده ناخواسلته توسلط دیگر‬
‫آنزیم های موجود در سلول میباشد)‪.(7‬‬

‫‪23‬‬
‫یکلی از روشهای غلبله بر ایلن مشکلل استفاده از‬ ‫‪.1‬‬
‫سلولهای نفوذپذی لللر اس لللت که از روشهای‬
‫فیزیکللی) انجماد( ‪ ،‬شیمیایللی) حللهای ارگانیک( و‬
‫آنزی می) لیزوزوم یا پاپای ین( ا ستفاده میشود‪ .‬را یج ترین‬
‫روش اسلتفاده حللهای ارگانیلک از جملله تولوئن‪،‬‬
‫کلروفرم‪ ،‬اتانول و بوتانول میباشد‪ .‬ا ین تیمار شیمیایی‬
‫باع للث ایجاد منفذهای کوچک للی بوس للیله جداسازی‬
‫لیپیدهلا از سلطح سللول میشود کله باعلث نفوذ سریع‬
‫سوبسترا یا مح صولت از ا ین منفذهای کو چک غشایی‬
‫شده و از خروج آنزیلم های درون سلولی جلوگیری‬
‫میشود ‪ .‬هر چنلد انجام ایلن فراینلد باعلث مرگ سلول‬
‫میشود املا بعنوان یلک منبلع از آنزیم های درون‬
‫سلولی عمللل میکند‪ .‬برای عملکردهای ساده‬
‫بیوسنسورها مورد استفاده قرار میگیرند‪.‬‬
‫‪24‬‬
‫‪ .2‬روشها یی برای کا هش ا ین واکنش ها برر سی شده است‪.‬‬
‫نفوذپذیری سلللول باعث خارج شدن تعدادی از‬
‫کوفاکتورهلا بلا وزن مولکوللی کلم شده کله ایلن عمل‬
‫واکنشهای ناخوا سته را کا هش میدهد‪ .‬گر چه یک سلول‬
‫کامل مخمر شامل بتاگلکتوزیداز داخل سلولی لکتوز را‬
‫به اتانول و ‪ co2‬تبدیل میکند در حالی که همان سلول در‬
‫شرایلط نفوذپذیرلکتوز را فقلط بله گلوکز و گالکتوز‬
‫بعلت از دست رف تن کوفاکتورها تبد یل میکند‪ .‬یکی دیگر‬
‫از روشهای غیرفعال کردن آنزیم ها استفاده از روشهای‬
‫فیزیکلی بوده زمانیکله از سللولهای مرده استفاده‬
‫شود‪ .‬روش دیگلر در کاهلش واکنشهای ناخواسته در‬
‫سلولهای زنده بلو که کردن راههای متابولی کی ناخواسته‬
‫یا سیستم انتقال است‪.‬‬

‫‪25‬‬
 ‫تثبیت مواد‬
‫بیولوژیکی‬
‫پیوند‬ ‫‪ ‬روشهای شیمیایی‬
‫کووالنسی‬

‫اتصالت‬
‫عرضی‬

‫جذبی‬ ‫‪ ‬روشهای فیزیکی‬

‫تله اندازی‬
‫‪26‬‬
 ‫پیوند‬
‫کووالنسی‬
‫‪ ‬پیو ند کووالن سی یک تکن یک را یج برای تثب یت آنزیم‬
‫ها و آنتلی بادی هلا اسلت کله برای تثبیلت سلول‬
‫روش منا سبی نی ست‪ .‬ی کی از مشکلت ا ساسی این‬
‫تکنیلک اینسلت کله سلولها در معرض گروههای‬
‫عا مل واک نش دهنده قوی و شرا یط سخت واکنش‬
‫قرار گرفتله کله باعلث آسلیب رسلیدن بله سلولهای‬
‫زنده شده و همینطور آنزیمهای درون سلولی‬
‫کاهش پیدا میکند‪.‬‬

‫‪27‬‬
 ‫روشهای فیزیکی‬

‫روشهای جذب و بله دام انداختن‬

‫وقتیک لله از س لللولهای زنده استفاده‬
‫میشونللد مفید میباشند‪ .‬راه معمول‬
‫نگهداری سلولها در نزدی کی سطح مبدل‬
‫ا ستفاده از غشاها یی م ثل غ شا دیالیز‬
‫میباشد‪ .‬در حالت کلی غشا باید از لحاظ‬
‫شیمیایللی و مکانیکی پایدار بوده‬
‫و اندازه منافذ‬ ‫ضخا مت آن ‪μm 15-10‬‬
‫آن ‪ μm 0.1-1‬باشد‪.‬‬

‫‪28‬‬
 ‫تله اندازی‬
‫‪ ‬پلیمرهای سنتزی‬

‫پلی آکریل آمید‪ -‬هیدروژلهای بر اساس پلی اورتان و پلی وینیل الکل‬
‫میباشد‪ .‬یکی از مهمترین محدودیتهای این ترکیبات احتمال آسیب‬
‫رسیدن به سلولهای زنده است‪.‬‬

‫‪ ‬پلیمرهای طبیعی‬

‫مورد استفاده برای به دام انداختن سلولها شامل آلژینات‪ -‬کاراگینان‪-‬‬

‫آگارز با نقطه ذوب پائین‪ -‬کیتوزان ‪ ...‬میباشد که این پلیمرها برای‬
‫تثبیت سلولهای زنده بسیار مفید هستند‪.‬‬

‫‪29‬‬
‫کاربردهای بیوسنسورهای میکروبی در‬
‫غذا‬

‫‪ ‬در سلالهای اخیلر تقاضلا برای ابزارهای آنالیتیکی‬

‫سریع و اخت صاصی برای آنال یز غذا و فرمانتاسیون‬
‫افزایلش یافتله اسلت‪ .‬آنالیزها برای نشان دادن‬
‫پارامترهای مغذی ‪ ،‬افزودنیهای غذا یی ‪ ،‬آلودگیها ‪،‬‬
‫شمارش میکروبلی و تعیین مدت زمان نگهداری و‬
‫دیگر خصوصیات بویایی موردنیاز است‪.‬‬

‫‪30‬‬
 ‫کنترل کیفیت شیر‬

‫‪ ‬کنترل کردن کیفیلت شیریلک پارامتلر مهملی است‬

‫رانسلیداسیون یلا ‪ off- flavour‬در شیرومحصولت‬
‫شیری بعل للت آزاد شدن اسیدهای چرب کوتاه‬
‫زنجی للر) ‪ (C4- C12‬ایجاد میشود‪ .‬بر خلف سایر‬
‫میکروارگانیسم ها آرتروباکتر نیکوتیان دارای آنزیم‬
‫هایلی از نوع بتلا اکسلیداسیون بوده کله نسلبت به‬
‫ا سیدهای چرب کوتاه زنج یر اختصاصی عمل میکند‪.‬‬
‫بنابر گزارش اشمیلت و همکاران یلک بیوسنسور‬
‫میکرو بی بر ا ساس تکنولو ژی فی لم ضخ یم که از‬
‫آرنروباکتلر نیکوتیان تثبیلت شده در کلسیم آلژینات‬
‫بر روی سلطح الکترود اکسلیژن استفاده شده‬
‫ا ست‪ .‬این سنسور در سیستم ناپیو سته برای تعیین‬
‫میزان ا سید چرب آزاد در ش یر مورد استفاده قرار‬
‫گرف ته ا ست‪ .‬در ا ین روش ه یچ پیش تیماری برای‬
‫نمونله هلا انجام نگرفتله و سلنسور نتیجه را در ‪3‬‬ ‫‪31‬‬
 ‫تعیین اسیدآمینه ها‬

‫‪ ‬تعدادی از بیوسلنسورهای میکروبلی برای تعیین‬

‫آمینواسللیدها از جمللله تیروزین)‪phenologens‬‬
‫‪ (Aeromonas‬تریپتوفان) ‪ ( Ps.fluorescens‬و گلوتامیک‬
‫ا سید) ‪ (B.subtilis‬وجود دارد‪ .‬تعی ین فن یل آلنین برای‬
‫کنترل فرای ند تخم یر فن یل آلن ین مورد نیاز ا ست که‬
‫یک بیوسلنسور میکروبلی بر اسلاس سلولهای‬
‫پروتئوس وولگار یس تثب یت شده در کلسیم آلژینات‬
‫بر روی الکترود اکسلیژن بله منظور تعییلن فنیل‬
‫آلنیلن تهیله شده اسلت‪ .‬فنیل آلنین دآمیناز موجود‬
‫در سللول فنیلل آلنیلن را بله فنیلل اسلتیک اسید‬
‫اکسید میکند‪.‬‬

‫‪32‬‬
 ‫تعیین ویتامینها‬

‫‪ ‬بیوسلنسورهای میکروبلی برای تعییلن ویتامینها از‬

‫اسید‬ ‫و‬ ‫‪(B-12‬‬ ‫‪(E.coli L15‬‬ ‫جمل لللله‬
‫آسللکوربیک)‪ ( Enterobacteragylomerans‬توسعه‬
‫یافتله اسلت‪ .‬برای تشخیلص سلریع ویتامیلن ‪ B-6‬یک‬
‫سیستم بیوسلنسور بر اسلاس فعالیلت تنفسلی یک‬
‫مخملر تثبیت شده) )‪ Saccharomyces uvarum‬بر‬
‫روی الکترود اک سیژن وجود دارد‪ .‬که تشخ یص سریع‬
‫و ساده ویتام ین ‪ B-6‬در مح صولت دریا یی در حد‬
‫‪ ng/ml‬را امکانپذیر ساخته است‪.‬‬

‫‪33‬‬
 ‫کاربردهای بیوسنسورهای میکروبی‬
‫در محیط‬

‫‪ ‬بیشتریلن کاربرد بیوسلنسور میکروبلی در زمینه‬

‫محیطلی اسلت‪ .‬مزیلت سلنسورهای ‪ BOD‬واکنش‬
‫بالی میکروارگانیسمها در تماس با الکترودها بوده‬
‫که نسلبت اکسلیژن مصرف شده را اندازه گیری‬
‫میکنند ‪ .‬سنجش ‪ BOD‬احتیاج به ‪ 5‬روز دارد که در‬
‫آنالیزهای انجام شده بر اسلاس بیوسنسور ‪15‬‬
‫دقی قه زمان لزم ا ست‪ .‬ی کی از مهمتر ین معیارها‬
‫در انتخاب میکروبهلا اینسلت کله آنهلا بایلد بتوانند‬
‫دامن للله وس لللیعی از س لللوبستراها رامصرف‬
‫کنند‪ .‬بیوسلنسورها بایلد نسلبت بله عواملل نامساعد‬
‫محیطی از جمله سمیت و شوری مقاوم باشند‪.‬‬

‫‪34‬‬
Biosnsors for detection of:

L. monocytogenes

35
Salmonella

 Ye et al. (1997) described a piezoelectric biosensor for

detection of Salmonella typhimurium. The device consists of
a quartz crystal wafer sandwiched between two metal
electrodes. These electrodes provide a means of
connecting the device to an external oscillator circuit that
drives the quartz crystal at its resonant frequency. A
change in mass on the surface of the electrode thus
changes the resonant frequency of the quartz crystal
microbalance (QCM) device (Following Fig.)(1).

36
37
Salmonella

 The antibody against Salmonella was immobilised onto

the gold electrode-coated quartz crystal surface through a
polyethylenimine–glutaraldehyde technique. The
Salmonella cells reacted specifically and bound to the
crystal surface resulting in an increase in mass that was
directly related to the concentration in the solution.

 The biosensor responded to concentrations of

S.typhimurium in the range of 5.3*105 to 1.2*109 CFUml-1
in 25 min (1).

38
Salmonella

 Another biosensor technique for Salmonella detection

developed by Seo et al. (1999) was a direct method, in
which Salmonella binding to specific antibodies attached to
a waveguide surface were detected in minutes by
measuring interferometrically the alteration in phase
velocity of a guided optical wave (1).

39
Magnetoelastic biosensor for the detection of
Salmonella typhimurium in food products

40
Salmonella(2)

 Existing biosensor technologies such as surface acoustic

wave devices, optical and thickness-shear mode
resonators offer sensitivity, but are limited by their need
for direct physical contacts. For example quartz crystal
microbalance (QCM) needs direct physical contacts (i.e.
electrical wiring) to obtain sensor response which prohibit
their usage in the sealed containers. Magnetoelastic
sensors don’t need direct electrical contacts for the
actuation and data acquisition; this makes magnetoelastic
sensors suitable for the remote detection of pathogens.
The current investigation mainly focuses on the
development of a biosensor that addresses these
limitations through remote and real-time sensing of
pathogens in food products. The Langmuir Blodgett (LB)
technique was used for antibody immobilization on the
magnetoelastic sensors(2).

41
Salmonella

Fig. Schematic drawing illustrating the wireless nature of the magnetoelastic biosensors and the
basic principle for detecting bacterial cells. The fundamental resonant frequency of the
biosensor is f0 without antigen binding, which shifts (decreases) to fanalyte due to the increased
mass of antigen binding to antibody immobilized on the sensor surface(2).

42
Bacterial binding measurements

After the preparation of biosensors, they were exposed to

increasing concentrations (5 * 101 cfu/ml–5 * 108 cfu/ml) of S.
typhimurium spiked in different media (distilled water, fat-free
milk and apple juice) at a flow rate of 100 µl/min. A peristaltic
pump (Ismatec Reglo Digital peristaltic pump) was used to
control the flow rate of the media containing the pathogens.
The resonance frequency of the sensors was measured using an
HP network analyzer 8751A with S-parameter test set both
before and after the binding of bacterial cells to the
immobilized antibody on the sensor. About of 801 points were
recorded over the frequency range with an 11.31 s sweep time.
A standard open circuit calibration was used to minimize
experimental errors in the test set up. A personal computer was
used to acquire data at 2 min intervals. Each data point (Fig. 3)
represents the mean values obtained from five independent
sensors, subjected to study under identical conditions(2).

43
44
 When the test temperature and humidity are constant, the resonant
frequency change of the magnetoelastic sensor depends only on
the mass change (Δm) on its surface. If the mass increase is small
compared to the mass of the sensor the shift in the resonant
frequency is given by:

 where f is the initial resonance frequency, M is the initial mass, Δm

is the mass change, and Δf is the shift in the resonant frequency of
the sensor. Equation shows that the resonance frequency shifts
linearly, decreasing with increasing mass on the sensor surface.
Hence binding of the target organism onto the biosensor surface
causes a mass increase with a corresponding decrease in
fundamental resonance frequency(2).

45
Sensor surface bacterial densities of 0.105, 0.075 and 0.105
cells/µm2 were observed on the samples which were exposed to S.
typhimurium suspensions in water, fat-free milk, and apple juice
respectively at the highest bacterial concentrations(2).

46
E. Coli (2)

The Escherichia coli O157:H7 DNA detection on a

gold nanoparticle-enhanced piezoelectric biosensor

47
 E. coli O157:H7 is most well known to both microbiologists
and general public. This organism was first recognized in 1982,
and has the ability to cause life threatening complications
hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS) in
humans(6). Illness due to E. coli O157:H7 infection is often
misdiagnosed and generally needs invasive and expensive medical
tests before it is correctly diagnosed. Primary sources for exposure
to E. coli O157:H7 are consumption of ground beef, sprouts
lettuce, salami, unpasteurized milk, and juice contaminated by
pathogens. Since the loss caused by E. coli O157:H7 is enormous
in terms of medical cost and product recall, it is extremely urgent
to develop some rapid and sensitive methods to detect the bacteria
in food or water supplies(6).

48
 As to the selectivity, DNA is an ideal target for specific detection
of pathogenic bacteria. The DNA probe, which is an
oligonucleotide sequence immobilized on a fixed support and able
to hybridize the complementary strand present in solution, is a
powerful molecular tool for monitoring and detecting specific
microorganisms in the environment or in food. It is well known
that QCM is a very sensitive mass-measuring sensor, and the
crystal resonance frequency decreases with a mass increase on the
Au electrode surface.

49
Nanoparticles are a new class of materials, which has been
adopted for improving the detection limit and sensitivity of the DNA
biosensors. In order to form a more effective and sensitive system,
we adopted the gold nanoparticles in the construction of E. coli
O157: H7 DNA biosensor for the goal of signal amplification,
because (i) colloidal Au has a good biocompatibility; (ii) gold
nanoparticle has a larger surface area, and helps to immobilize
more biofunctional molecules onto the surface of the sensor; (iii)
avidin-conjugated Au nanoparticle could be used as “mass
enhancer” to amplify the frequency change depending on its
relatively large mass compared to DNA target.

50
The whole detection course of this QCM DNA sensor mainly included
two parts: sensor fabrication and detection. During the process of sensor
fabrication, how to immobilize more ssDNA probes was pivotal for the
following bacteria DNA detection, so two important routes for DNA
probes immobilization were introduced to this part, which were:
• Self-assembled monolayers (SAMs).
• Au-thiol binding.
A stepwise decrease of Δf was observed in each fabrication step(6).

51
52
E. coli

Detection of E.coli in foods

 One of the many applications of surface plasmon

resonance (SPR) technology is the detection of E.
coli O157:H7. Surface plasmon resonance is a
quantum optical-electrical phenomenon based on
the fact that energy carried by photons of light
can be transferred to electrons in a metal. The
wavelength of light at which coupling occurs is
characteristic of the particular metal and the
environment of the metal surface illuminated. This
transfer can be observed by measuring the
amount of light reflected by the metal surface (1,
in, 2).
53
The following Fig. shows how a change in the chemical
environment 100 nm above the thin metal layer results in a shift in
the wavelength of light, which is absorbed rather than reflected.
The most common practical implementation of SPR is to use a
metal-coated optical prism, but other practical implementations
have been demonstrated including metal-coated diffraction
gratings, optical fibres and planar waveguides. The SPR biosensor
has potential for use in rapid, real-time detection and identification
of bacteria, and to study the interaction of organisms with different
antisera or other molecular species (Fratamico et al., 1998). The
lower detection limit of the BIAcore system (a commercial
example of an SPR system) is approximately 10 pg of analyte
mm-2.

54
E. coli

55
L. monocytogenes

 L. monocytogenes causes listeriosis,

listeriosis and has been detected in a
variety of environments, including foods. Listeriosis occurs around
the world, with an annual incidence of approximately 7 cases per
million of the normal population. Its incidence tends to be higher
in pregnant women, the elderly, and people with weakened or
suppressed immune systems. The traditional culture – based
technique for the detection of L. monocytogenes requires 5 ~10
days for complete identification, and is a fairly labor intensive
process. Several alternative detection methods have been
developed for the rapid and sensitive detection of L.
monocytogenes , including ELISA, PCR, DNA microarray, and
biosensor methods(4).

56
 SPR biosensor technology is one of the most promising detection methods
currently in use for rapid pathogenic identification. It is sensitive to changes
in the thickness or refractive indices of biomaterials at the interface between
a thin gold film and an ambient medium, & is thus capable of characterizing
biomolecular interactions in real time without the need for labeling.

57
As SPR sensors are capable of detecting changes in a refractive index of several
hundred nanometers over the sensor surface, bacterial cell particles specifically
bound to an antibody can induce a large SPR angle shift, as compared with
biomolecules covering an identical surface area(4). The direct detection of
microbial cells is often difficult, owing principally to their large size. In order to
assay whole L.monocytogenes cells with an SPR biosensor, it is first necessary to
find a high-affinity antibody [monoclonal anti- L.monocytogenes mouse antibody]
for the cell and to optimize the detection surface.
In this study, a specific monoclonal antibody against L.monocytogenes was
screened using an SPR biosensor. Monoclonal antibodies were bound to protein
L, after which the L.monocytogenes cells were subjected to an affinity assay.
Protein L was immoblized on a carboxymethyl dextran surface via an amine
coupling method, and utilized repeatedly by regeneration. The monoclonal
antibody, ‘A 18’, was selected and employed for the high sensitivity detection of
L.monocytogenes. specific antibodies were screened via direct binding to cells
using an SPR biosensor. It was determined that the screened antibody evidenced a
high degree of sensitivity for the direct detection of L.monocytogenes.

58
 In a study that was done in year 2007 by Joung Hyou- Arm et al.,
they selected a specific monoclonal antibody (mouse IgG1) against
L. monocytogenes , and also attempted to detect it directly. The
direct detection of microbial cells is often difficult, owing to
principally large size. In order to assay whole L. monocytogenes
cells with a SPR biosensor, it is first necessary to find a high-
affinity antibody for the cell & to optimize the detection surface
(4).

59
References
Maria N. Velasco-Garcia; Toby Mottram (2003). Biosensor Technology
addressing Agricultural Problems. Biosystems Engineering , 84 (1), 1–12
e Guntupalli, R., Lakshmanan, Ramji S., Johnson, Michael L., Hu, J., Huang,
Tung-Shi., Barbaree, James M., Vodyanoy, Vitaly J., Chin, Bryan A. (2007).
Magnetoelastic biosensor for the detection of Salmonella typhimurium in food
products. Sens. & Instrumen. Food Qual. 1:3–10 DOI
10.1007/s11694-006-9003-8
0 SKLADAL, P., SYMERSKA, Y., POHANKA, M., SAFAR, B., MACELA, A.
(2005). ELECTROCHEMICAL IMMUNOSENSOR FOR DETECTION OF
FRANCISELLA TULARENSIS. Detection Technologies, Implementation
Strategies and Commercial Opportunities, 221–232.
o Joung, H., et al. (2007). Screening of a Specific Monoclonal Antibody against
and Detection of Listeria monocytogenes Whole Cells Using a Surface Plasmon
Resonance Biosensor. Biotechnology and Bioprocess Engineering, 12 : 80-85.
d Nayak, M., Kotian, A., Marathe, S., Chakravortty, D. (2009). Detection of
microorganisms using biosensors—A smarter way towards detection techniques.
Biosensors and Bioelectronics 25, 661–667.
i LiJiang, W., QingShan, W., ChunSheng, W., ZhaoYing, H., Jian, J. & Ping, W.
(2008). The Escherichia coli O157:H7 DNA detection on a gold nanoparticle-
enhanced piezoelectric biosensor. Chinese Science Bulletin, vol. 53 | no. 8 |
1175-1184.
B D’Souza, S.F.(2001). Microbial biosensors. Biosensors & Bioelectronics 16, 337–
353.

60
Any Questions???

61
The End
Thanks

62