AISLAMIENTO DEL ADN

(DNA INSULATION)

AUTORES: Juan Camilo Pérez Castro, Carlos Andrés Hoyos Acuña, Estefanía Ruiz,
Ronald Charris Parejo.
Universidad del magdalena, estudiantes del programa de ingeniería ambiental y sanitaria e
ingeniería agronómica, facultad de ingeniería.
Carrera 32 No 22-08 Santa Marta Colombia, juanc092017@gmail.com

RESUMEN

El ADN es una macromolécula química, ésta pertenece al grupo de los ácidos nucleicos.
Forma los cromosomas del núcleo presentes en las células y es portador de la información
genética de cada individuo. En el laboratorio, se tomó una muestra de tomate, ajo y
cebolla, después de la trituración se tomó cada uno en tubos de ensayo y se aisló en ADN
con ayuda de la centrífuga, al final agregándole alcohol isoamílico. Esto con el objetivo de
poder observar aislado totalmente el ADN. Se logro el objetivo, gracias a elementos como
la centrifuga y el alcohol isoamílico.
PALABRAS CLAVES: ADN, núcleo, células.

ABSTRACT
DNA is a chemical macromolecule, it belongs to the group of nucleic acids. It forms the
chromosomes of the nucleus present in the cells and is the carrier of the genetic information
of each individual. In the laboratory, a sample of tomato, garlic and onion was taken, after
the crushing each was taken in test tubes and was isolated in DNA with the help of the
centrifuge, at the end adding isoamyl alcohol. This with the aim of being able to observe
the DNA completely isolated. The goal was achieved, thanks to elements such as centrifuge
and isoamyl alcohol.
KEY WORDS: DNA, nucleus, cells.
 INTRODUCCIÓN
El aislamiento consiste en la extracción
y purificación de moléculas de ADN y se
basa en las características fisicoquímicas
de la molécula. El ADN está constituido
por dos cadenas de nucleótidos unidas
entre sí formando una doble hélice. Los
nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y
una base nitrogenada (adenina, guanina,
timina o citosina). La unión de los
nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato
y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster,
dando lugar al esqueleto de la molécula.
Las bases de cadenas opuestas se unen
mediante puentes de hidrógeno y
mantienen estable la estructura helicoidal.
Los grupos fosfato están cargados
negativamente y son polares, lo que le
confiere al ADN una carga neta negativa
y lo hace altamente polar, características
que son aprovechadas para su extracción.
Los grupos fosfato tienen una fuerte
tendencia a repelerse, debido a su carga
negativa, lo que permite disolver al ADN
en soluciones acuosas y formar una capa
hidratante alrededor de la molécula. Pero,
en presencia de etanol, se rompe la capa
hidratante y quedan expuestos los grupos
fosfato. Bajo estas condiciones se
favorece la unión con cationes como Na+
que reducen las fuerzas repulsivas entre
las cadenas de nucleótidos y permiten que
el ADN precipite (Sambrook et al. 1989).
Por otro lado, la carga neta negativa del
ADN le permite unirse a moléculas y
matrices inorgánicas cargadas
positivamente (Nasón 1965, Travaglini
1973, Sambrook et al. 1989, Sinden
1994). A lo largo del tiempo se han
diseñado distintos protocolos con la
finalidad de obtener una cantidad y
calidad de ADN adecuados, así como
garantizar la eliminación de inhibidores
potenciales que dificulten el tratamiento
posterior de la molécula. Los métodos
tradicionales, desarrollados en los años
50, utilizan solventes orgánicos para
separar a las proteínas del ADN y, una
vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo
por precipitación con etanol. Estos
métodos requieren preparar soluciones y
la extracción puede tomar desde unas
horas hasta varios días por los numerosos
pasos que deben realizarse. En general,
los protocolos tradicionales consisten de
cinco etapas principales:
homogeneización del tejido, lisis celular,
separación de proteínas y lípidos,
precipitación y redisolución del ADN.
Extracción y purificación de ADN 3
Estructura del ADN. En la estructura
helicoidal del ADN, las cadenas se unen
por puentes de hidrógeno dos entre
adenina y timina, tres entre guanina y
citosina. El enlace fosfodiéster que une a
cada nucleótido, se forma entre el fosfato
(H3PO4) que se encuentra en el carbono
5 y el grupo hidróxilo (–OH) del carbono
3 de la desoxirribosa. Los grupos fosfato
son la parte hidrofílica del ADN y tienen
carga negativa. Teniendo en cuenta el
objetivo de esta práctica este es aislar y
observar ADN extraído de forma cacera
y práctica.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/li
bros/710/extraccion.pdf
MATERIALES Y MÉTODOS 3. En este paso se trituró la muestra con
un poco de agua en el mortero accionando
MATERIALES: las cuchillas a impulsos de 10 segundos.
Así se romperán muchas células y otras
Materiales de Materiales por quedarán expuestas a la acción del
laboratorio equipo detergente.
Mortero con pilón Ajo, cebolla,
4. Asimismo se mezcló en un recipiente
tomate limpio 5 ml del triturado celular con 10
4 tubos de ensayo Bicarbonato de
ml del tampón frío y se agitó
Sodio vigorosamente durante al menos 2
Pipeta de 10ml Sal de mesa minutos, para luego separar después los
Pipeta Pasteur Champú restos vegetales más grandes del caldo
Tubos para
molecular haciéndolo pasar por un
centrífuga colador lo más fino posible.
Alcohol isoamílico
5. Posteriormente se retiraron 5 ml del
0°C
caldo molecular a un tubo de ensayo y fue
Centrífuga
añadido con una pipeta 10 ml de alcohol
Agua destilada
Bandeja de metal isoamílico enfriado a 0ºC. Se dejó
Hielo escurrir lentamente el alcohol por la cara
interna del recipiente, teniendo éste
inclinado. El alcohol quedará flotando
METODOS: sobre el tampón.

1. Se preparó el tampón con los siguientes 6. Se introdujo la punta de una varilla

ingredientes y se mantuvo en la nevera o estrecha hasta justo debajo de la
en un baño de hielo triturado: 120 ml de separación entre el alcohol y el tampón,
agua, 1,5 g de sal de mesa, esta fue removida hacia delante y hacia
preferiblemente pura, 5 g de bicarbonato atrás y poco a poco se fueron enrollando
sódico, 5 ml de champú. los fragmentos de mayor tamaño de
ADN. Pasado un minuto retirar la varilla
2. Se eligió la muestra que atravesando la capa de alcohol con lo cual
proporcionaría el ADN entre los el ADN quedo adherido a su extremo con
vegetales que estaban disponibles el aspecto de un copo de algodón mojado.
(cebolla, ajo, tomate) y cortarla en
cuadraditos.

RESULTADOS
 Observación de las muestras antes de pasarlas a
Observación de la muestra de tomate triturado. la centrifuga.

.
Muestra de tomate, ajo y cebolla, después de la
trituración y separación de los restos más Observación de las muestras de ajo, cebolla y
grandes del caldo molecular tomate llevadas a la centrífuga.
 . Observación de la muestra de cebolla después de
Observación de la muestra de cebolla, después de haber agregado el alcohol isoamilico.
pasar por la centrífuga.

Observación de la muestra de tomate después de

Observación de la muestra de ajo después de haber agregado el alcohol isoamilico
agregado el alcohol isoamilico.

Observación de la muestra de ajo a la que se le
introdujo un aza.
Observación del material genético extraído del
tubo de ensayo
DISCUSION
Se logro observar el ADN pero el
resultado obtenido de la extracción de
este puro ya que, entremezclado con él,
hay fragmentos de ARN. Una vez que
estas membranas se han roto, el ADN es
liberado de la célula. El alcohol además
de permitirnos ver el ADN, este separa el
ADN de otros componentes celulares, los
cuales son dejados en la solución acuosa
y así el ADN se precipita en el alcohol
fuera de la solución, donde puede ser
visto.
Las membranas celulares son rotas por el
detergente debido a que los detergentes
rompen la barrera lipídica solubilizando
las proteínas e interrumpiendo la
interacción lípido-lípido, lípido-proteína y
proteína- proteína. Los detergentes, al
igual que los lípidos, se asocian entre
ellos y se unen a superficies hidrofóbicas.
Se componen de una cabeza polar
hidrofílica y una cola no polar
hidrofóbica. Es indispensable el alcohol
etílico ya que el alcohol debe ser de una
concentración establecida sino podría
romper moléculas de las células y
entonces no se podría observar el ADN.
El alcohol precipita (solidifica) el ADN
fuera de la solución y separa así los
componentes de las células. El ADN es
soluble en agua, pero cuando se encuentra
en alcohol se desenrolla y precipita en la
interface entre el alcohol y el agua. El
alcohol forzó al ADN a agruparse en
hebras las cuales subieron a la parte
superior del tubo de ensayo.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
¿Qué dificultades se presentaron para
la realización de la práctica?
En la realización de la práctica de
aislamiento y observación de ADN no se
presentó problema de ningún tipo,
contando con los materiales necesarios y
ejecutando el proceso de manera clara y
adecuada.
¿Qué observaste en las fibras?
Las fibras de ADN, no se pudieron
observar de manera muy clara, debido a
que como era una práctica elemental y
estas fueron vistas de manera directa al
ojo. Lo que si se pudo observar fueron
ciertas características como la textura
viscosa de estas y su color claro.
¿Cuál es la función del detergente y
agentes quelantes en la purificación del
ADN?
Existen muchos productos de interés para
estudios científicos