Universidad del Valle

Practica virtual de Metabolismo – LABORATORIO II

ENZIMOLOGIA I

Pasos para llevar a cabo la practica:

- Conformar virtualmente grupo de máximo 5 personas
- Cada uno de los estudiantes deberá elaborar el flujograma de la práctica
basado en el laboratorio virtual
- Una (1) persona encargada por cada grupo deberá subir el archivo al
campus, el cual el cual contendrá los flujogramas de sus compañeros junto
con la solución de la guía asignada (En total enviarán 5 flujogramas + 1
guía)
- Si tienen algún inconveniente no duden en contactarme
daniela.arturo@correounivalle.edu.co
- Plazo de entrega: Viernes 24 de abril 2020

Actividad A.
1. Resolver a manera de informe las preguntas asignadas “para investigar
antes de la práctica” “Guía de Laboratorio Metabolismo -LABORATORIO
II ENZIMOLOGIA I (página 14)
2. Ingrese a http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
3. Lea las instrucciones
4. Realice la Actividad #1
5. Anote sus resultados en tablas de Word
6. A partir de la gráfica, resuelve la pregunta propuesta
7. Escriba las conclusiones principales del ejercicio realizado.
1. Escriba un ejemplo de una reacción biológica catalizada por una
fosfatasa:
Las fosfatasas son una subclase de las enzimas hidrolasas (EC 3.1). Las
fosfatasas son enzimas que catalizan la hidrolisis de esteres fosfóricos de
alcoholes y fenoles. La Fosfatasa Alcalina es una enzima que está en todo el
cuerpo, transforma un Fosfato monoéster más agua, en alcohol y un fosfato .
Describa en qué tejidos existe una alta actividad de fosfatasa alcalina:
La Fosfatasa Alcalina es una enzima que está en enzimas que se encuentran
presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en
huesos, hígado, placenta, intestinos y riñon. Tanto el aumento, así como su
disminución en plasma tienen significado clínico. Cuando el hígado está dañado,
la FA puede filtrarse al torrente sanguíneo. Los niveles elevados de FA pueden
indicar daño en el hígado o enfermedades de los huesos.

De acuerdo con la ecuación A=−logT

SOLUCIÓN
TUBO (mL)
Blanco 1 2 3
Agua Destilada 3,0 2,0 1,0 ---
PNF 2.0 mM --- 1,0 2,0 3,0
Absorbancia 0,1 0,527 1,075 1,605
Transmitancia 0,297 0,084 0,024

De acuerdo con la ecuación V 1 C 1=V f Cf

V C
Cf = 1 1
Vf

Cubeta C(μm) A405

1 26,67 0,527
2 53,33 1,075
3 80 1,605
 1.8

1.6

1.4

1.2

1
A405

0.8

0.6

0.4

0.2

0
20 30 40 50 60 70 80 90
C pNF (μm)

¿Cómo puedes describir lo que observas? Presenta un comportamiento lineal,

porque son cantidades reciprocas. Cuando una onda de luz pasa a través de un
medio absorbente su intensidad disminuye y la medida que la concentración del
medio absorbente aumenta.

Actividad B.
¿Cuál es el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimática? Elabore
un ejemplo práctico en donde incluya un gráfico explicativo. Respuesta de máximo
2 paginas
Las enzimas son catalizadores orgánicos que no se alteran de forma irreversible
durante la reacción, lo que les permite participar en varias reacciones individuales
a las condiciones funcionales de la célula: pH 7 y 37°C.
La especificidad de una enzima dadas las interacciones no covalentes del sitio
activo con el sustrato, impulsan al complejo a alcanzar rápidamente el estado de
transición para una rápida formación de los productos, por la alta efectividad y
eficiencia de sus colisiones. La mejor forma de elevar la probabilidad de choques
efectivos -con la energía suficiente y orientación correcta para reaccionar- entre
las moléculas de reactivo en un laboratorio es subir la temperatura; sin embargo,
la aplicación de calor en una reacción mediada por enzimas conduce a una rápida
inactivación de enzima porque la desnaturaliza. En condiciones corporales el
conjugado proteínico no se desnaturalizará además, la concentración de los
reactivos necesitados es relativamente baja. El rango de temperatura en el cual
una enzima mantiene una conformación estable, competente desde el punto de
vista catalítico en enzimas de seres humanos, es a temperaturas de hasta 40 a
55°C.

Como previamente se menciona el complejo enzima-sustrato tiene un ajuste

inducido por sus interacciones químicas. El pH del medio actúa sobre la actividad
enzimática a través de producir una modificación química selectiva. Los grupos
activos de las enzimas se forman, a menudo, con grupos ionizables que deben
encontrarse en la forma iónica adecuada. Además, uno o más de sus sustratos
pueden también contener grupos ionizables y sólo una forma iónica del sustrato
puede unirse a la enzima o experimentar la catálisis. De aquí que la actividad de
un enzima se debe medir a un pH óptimo, siendo un mecanismo por el que las
enzimas regulan su especificidad.

Actividad C. Responda las siguientes preguntas.

1) Entre los factores que pueden modificar la actividad de una enzima se
encuentran
A) pH
B) temperatura
C) su contenido en aminoácidos no polares
D) su peso molecular
2) Las enzimas aceleran la velocidad de las reacciones bioquímicas porque
A) aumentan la energía de activación
B) debilitan los enlaces de la molécula de sustrato
C) pueden funcionar a temperaturas muy altas
D) hacen que aumente el orden de la reacción

3) La unión del sustrato a la enzima

A) se realiza con una orientación determinada, que facilita la reacción
B) tiene lugar en cualquier zona de la enzima
C) desestabiliza sus enlaces químicos
D) es más fuerte cuanto mayor es la energía de activación

4) En la formación del complejo enzima-sustrato

A) el sustrato se une a la enzima en un lugar cercano al centro activo

B) el sustrato se suele unir al centro activo por complementariedad de estructuras
C) el sustrato puede provocar cambios conformacionales en el centro activo
D) se debilitan los enlaces químicos de la molécula de sustrato

5) En una reacción catalizada por una enzima

A) disminuye la energía de activación

B) el DG entre productos y reactantes es mayor que cero
C) la unión del sustrato a la enzima debilita sus enlaces químicos
D) llega un momento en que se consume la enzima y la reacción se detiene