Taller de microbiología medios de cultivo

Aprendiz
David Correa

Tecnología en control de calidad de los alimentos

Ficha 1905781

Instructora
Olga Beatriz Ladino Soto

Sena-CAB
Guadalajara de Buga
2020

Que es un medio de cultivo

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo; Para que las
bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

Factores que afectan el desarrollo de los microorganismos en los

medios de cultivo

Los factores que afectan el crecimiento y desarrollo de microorganismos son los

siguientes:

 Efecto del PH: Algunos microorganismos no soportan grados de acidez o

alcalinidad muy altas.
 Oxigeno: Algunos microorganismos necesitan oxigeno para vivir como son
los aerobios
 Temperatura: Si las temperaturas exceden las máximas tolerancias los
microorganismos mueren por esta acción de calor.
 Sustancias químicas: en algunos casos hay microorganismos que requieren
de nutrientes o sustancias para sobrevivir.
 Actividad de agua: la deshidratación fijándola como la sal o el azúcar se
evaporan, los microorganismos no pueden sobrevivir a estas actividades de
agua.

Evolución de los medios de cultivo

Los dos importantes puntos de inflexión en su evolución, La primera noticia de la

utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió aislar
y cultivar esporas de hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina,
luego el año 1878 cuando Lister popularizó un método enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio líquido.
Koch realizó sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de
patata como soporte nutritivo sólido, Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina,
logrando un medio sólido transparente ideal para la observación de la morfología
macroscópica de las colonias microbianas.
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en
relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el
agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante.

Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones

sobre las bacterias quimio autótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre
todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de
enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial
composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos
que, en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar
para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales, incorporando
indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se podía
observar la producción de ácidos en la fermentación en ciertos
microorganismos.

Medios de cultivo de acuerdo a su estado físico

1. Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo
bacteriano de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden
sustituir por los medios sólidos, por ejemplo, en la síntesis de exotoxinas,
pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada, Caldo común, Caldo
Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud, etc.
2. Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología
de las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se diferencian porque
tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Común,
Agar SS, Agar Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.
3. Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias.
Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la
temperatura ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.
Los medios sólidos tienen generalmente agar–agar como agente solidificante,
espesante o gelificante. El agar-agar es una sustancia hidrofílica de carácter
coloidal procedente de diversas especies de algas marinas, especialmente del
géneroGelidium, que tiene la propiedad de formar un gel. Químicamente el agar-
agar es un polisacárido de cadena larga, dependiendo de su tamaño el poder
gelificante.
El agar-agar se expende en forma granulada o en polvo, es insoluble en agua fría,
se disuelve solamente a temperatura de ebullición, se mantiene en forma viscosa
a 60–80 °C y solidifica en forma de un gel estable a 40–45 °C. Resiste
perfectamente la esterilización a 121 °C y por su capacidad de retener agua no se
deshidrata fácilmente, lo que permite almacenar los medios por un largo período
de tiempo a 5 °C.
La gelatina no puede reemplazar al agar en la preparación de medios sólidos, ya
que descompuesta por muchos tipos de bacterias. Se añade a los medios de
cultivo para estudiar si las bacterias son capaces de degradarla (presencia de
enzimas gelatinasas).

Medios de cultivo de acuerdo a su Uso

1. Medios corrientes, comunes o básicos 2. Medios especiales - Medios mejorados
- Medios selectivos o de diagnóstico - Medios diferenciales o indicadores
1. MEDIOS CORRIENTES: son aquellos medios apropiados para el cultivo y
mantención de la mayoría de las bacterias. Sirven de base para la preparación de
los medios especiales. - Ejemplo: Caldo común, Agua peptonada, Agar nutritivo,
etc.
2. MEDIOS ESPECIALES: son aquellos medios de cultivo que, por su riqueza
nutritiva, sirven para el cultivo de bacterias muy exigentes. Contienen en su
formulación sustancias inhibidoras para ciertas bacterias, que permiten el
aislamiento y diagnóstico precoz de aquellas bacterias que nos interesan por ser
los agentes etiológicos de las enfermedades infecciosas. También pertenecen a
este grupo aquellos medios que, por adicción de sustancias químicas
determinadas, facilitan el diagnóstico por características bioquímicas de algunas
especies microbianas.

Medios de cultivo de acuerdo a su Composición

los medios de cultivo pueden tener en su composición los siguientes ingredientes:
1) Aminoácidos, hidrolizado de proteínas (peptonas) 2) Extractos 3) Productos
biliados 4) Carbohidratos 5) Productos bioquímicos 6) Colorantes e indicadores
1) Productos Bioquímicos A los medios de cultivo se les agrega generalmente una
diversa variedad de sustancias bioquímicas, que pueden tener el efecto de
estimular el desarrollo bacteriano o ser agentes selectivos, como es el caso de los
antibióticos.
2) Colorantes e indicadores Estas sustancias se utilizan en los medios selectivos y
diferenciales. Los colorantes actúan como agentes bacteriostáticos o como
inhibidores del crecimiento. Se utilizan principalmente: Fucsina básica, Verde
brillante, Verde de Malaquita, Cristal Violeta, Eosina, Azul de Metileno, Tionina,
etc.
Los indicadores son sustancias químicas que varían de color según el pH del
medio. Se utilizan en los medios diferenciales y permiten visualizar, por cambios
de color del medio de cultivo o de las colonias, la ocurrencia de distintas
reacciones bioquímicas.

Medios de cultivo de acuerdo a su Origen

1. Origen animal (Caldo Cerebro Corazón)
2. Origen vegetal (Caldo papa, Caldo Levadura)
3. Sintéticos (Medios deshidratados)
Los medios de cultivo comerciales deshidratados son productos a los cuales se le
ha eliminado el agua y todas las interferencias de tipo químico, con un pH
ajustado, que se han controlado física, química y bacteriológicamente. Es decir, es
un producto estandarizado.

Principales medios de cultivo

Son los medios de cultivo más corrientemente utilizados y son los más conocidos
en un laboratorio de Microbiología:
1. Agar nutritivo:
El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a relativas
altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas.
2. Agar sangre:
Es un medio enriquecido que se utiliza además para la investigación de los
diversos tipos de hemólisis (α, ß ó gamma). Se utiliza para el crecimiento de
estreptococos. Para la preparación del agar sangre se puede utilizar el agar
nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado enriquecido con otras
sustancias como Columbia o el triplicase de soja.
3. Agar C.L.E.D.
El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está recomendado para
el recuento e identificación presuntiva de los microorganismos de las vías
urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasión de los cultivos por
Proteus.La presencia de lactosa en su composición le confiere el carácter de
medio diferencial, aunque la interpretación sea diferente al anterior medio por la
incorporación de otro indicador: el azul de bromotimol. Las colonias lactosa
positivas aparecerán de color amarillo y las lactosas negativas lo harán con un
color verdoso, blanco o azulado
4. Agar S.S.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.