Microbiología General Nubia Pilar Sarmiento Torres Universidad de Pamplona 2018 MEDIOS SELECTIVOS
Permiten el crecimiento de determinadas
bacterias e inhiben el desarrollo de otras ya que poseen sustancias inhibidoras. MEDIOS DIFERENCIALES
Permiten diferenciar microorganismos de una
misma especie debido a que por sus componentes ponen de manifiesto características especiales de las bacterias. MEDIOS SELECTIVOS AGAR BAIRD PARKER AGAR BAIRD PARKER
• En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el
extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos. • Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinásica. • Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas externa. • Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de colonias pero sin la zona opaca y clara. • Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioquímicas. AGAR SALADO MANITOL AGAR SALADO MANITOL • Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. • En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH. AGAR SALADO MANITOL • Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. • Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. • Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. • Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura. AGAR SELECTIVO Bacillus cereus AGAR SELECTIVO Bacillus cereus • Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias, particularmente asociado al consumo de arroz contaminado, y también en algunos procesos infecciosos en seres humanos y animales. • En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio. AGAR SELECTIVO Bacillus cereus
• El diagnóstico primario se basa en la morfología y color
de la colonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus. • Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubación presentan el color con centro grisáceo. AGAR MOSSEL AGAR MOSSEL • Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias, particularmente asociado al consumo de arroz contaminado, y también en algunos procesos infecciosos en seres humanos y animales. • El medio de cultivo, contiene los nutrientes necesarios para el apropiado desarrollo bacteriano. • Es diferencial debido a la presencia de manitol. Bacterias fermentadoras de manitol, acidifican el medio produciendo el viraje del indicador de pH rojo de fenol del rojo al amarillo, mientras las bacterias que no lo fermentan, producen colonias del color del medio. • La adición de emulsión de yema de huevo, mejora el aislamiento y la esporulación de esta bacteria, además favorece y facilita la visualización de las colonias de B. cereus ya que se produce un halo de precipitación de la lecitina hidrolizada alrededor de las mismas. • Puede lograrse el aislamiento selectivo de B. cereus, inhibiendo el desarrollo de la flora acompañante presente en la muestra, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio. AGAR MOSSEL
• Bacillus cereus presenta colonias de tamaño
aproximado de 5 mm, rojas, rugosas y secas, con halo de precipitación sobre fondo rosa-púrpura. • Estas características son útiles para diferenciar B. cereus de bacterias que utilizan el manitol (colonias amarillas), pero no permiten diferenciar Bacillus cereus de Bacillus anthracis, Bacillus mycoides, Bacillus pseudomycoides y Bacillus thuringiensis, por eso será necesario realizar pruebas bioquímicas para la identificación de este microorganismo. AGAR EMB AGAR EMB • Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. • Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. AGAR XLD AGAR XLD • XLD Agar es un medio selectivo y de diferenciación. Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas.
• Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y,
por consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie. La lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin lisina, Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las especies no patógenas. Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reacción de Shigella. • Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos a la lisina, se añaden lactosa y sacarosa para producir ácido en exceso . Para aumentar la capacidad de diferenciación de la fórmula, se incluye un sistema indicador de H2S, formado por tiosulfato sódico y citrato férrico amónico, para la visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina la formación de colonias con centros de color negro. Los organismos no patógenos no productores de H2S no descarboxilan la lisina; por tanto, la reacción ácida producida por dichos organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo que sucede sólo con pH alcalino o neutro . AGAR BISMUTO SULFITO AGAR BISMUTO SULFITO • Es una modificación del Medio Wilson Blair, utilizado para la detección de Salmonella, en particular Salmonella typhi de muestras clínicas.
• La Peptona y el Extracto de carne aportan nitrógeno, vitaminas,
minerales y amino ácidos esenciales para el crecimiento. La Dextrosa es el carbohidrato fermentable y provee de carbono y energía. El indicador de Bismuto sulfito y el verde Brillante son inhibidores de bacterias Gram positivas y de algunas bacterias del grupo coliformes. El Agar bacteriológico es el agente solidificante.
• El sulfato ferroso se incluye para la producción de H2S. Cuando
el H2S esta presente, el hierro es precipitado dando colonias positivas características de color marrón a negro con brillo metálico. Las placas deben ser uniformes, opacas, de color crema-verde palo. AGAR HEKTOEN AGAR HEKTOEN • Este medio se considera moderadamente selectivo y es particularmente útil para el aislamiento de las especies de Shigella. La presente formulación difiere de la original en la eliminación del desoxicolato de sodio y la reducción de la concentración de sales biliares. Además, la concentración de peptona ha sido aumentada, a fin de compensar los efectos inhibitorios de las sales biliares.
• . Esta formulación se recomienda como uno de diversos medios de
placas para el cultivo de la familia Enterobacteriaceae a partir de muestras fecales. Las sales biliares hacen que el medio sea selectivo, inhibiendo los microorganismos grampositivos y reduciendo el crecimiento de algunos microorganismos gram- negativos diferentes de Salmonella y Shigella. Se incluyen lactosa, sacarosa y salicina para una óptima diferenciación según el color de las colonias y del medio adyacente a éstas. AGAR HEKTOEN
• La Salmonella y la Shigella no fermentan estos
compuestos de carbono y, por tanto, no ocasionan un cambio de color en el sistema indicador del pH, en tanto que los microorganismos como la E. coli, por ejemplo, que fermentan uno o más de tales compuestos hasta convertirlos en ácidos, causan un cambio de color a amarillo o anaranjado. • El citrato férrico de amonio y el tiosulfato sódico del medio permiten detectar la producción de sulfuro de hidrógeno por la Salmonella. El sistema indicador del pH consta de fucsina ácida y azul de bromotimol. AGAR CROMOGENICO Salmonella AGAR CROMOGENICO Salmonella • AGAR CROMOGENICO SALMONELLA es un medio cromogenico selectivo, utilizado para la detección y presunta identificación de especies de Salmonella a partir de muestras clínicas. • Los medios utilizados tradicionalmente, para diferenciar especies de Salmonella del resto de la familia Enterobacteriaceae, basados en la capacidad de producir H2S asociada a su inhabilidad de fermentar la lactosa no son realmente adecuados, ya que existen más de 2000 especies de Salmonella que no tienen estas características • La peptona de Caseína y el Extracto de carne aportan nitrógeno, vitaminas y aminoácidos esenciales par el crecimiento. La mezcla de cromogenicos y el citrato sódico, inhiben microorganismos gram positivos, Proteus y Coliformes. El Agar bacteriológico es el agente solidificante. AGAR CROMOGENICO Salmonella
• Los medios cromogenicos para identificar especies de
Salmonella, están basados en la combinación de dos substratos cromogenicos diferentes, que facilita su rápida identificación. El magenta-caprilate que es hidrolizado por las especies de Salmonella y el X-gal sustrato de la enzima β- D galactosidasa. AGAR CROMOGENICO E. coli AGAR CROMOGENICO E. coli • MUG PLUS® agar es un medio cromogénico selectivo para la detección simultánea confirmativa de coliformes totales/fecales y E.coli en aguas y alimentos (cromógenos según ISO 16649- 1:2001, AFNOR V08053)
• Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó
44,5 ºC aproximadamente para C. fecales), los resultados que se obtienen son:
• E.coli: Colonias de azul oscuro a añil (Salmon GAL y X-
Glucurónido positivo) que resultan indol positivas (puede comprobarse directo en la colonia).
• Coliformes: Colonias rosas- rojas (Salmon GAL positivo) + las
azules (E.coli). AGAR CROMOGENICO E. coli
• Otras enterobacterias, incluidas algunas Salmonellas:
Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color azul claro a turquesa.
• Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen
con colonias verdes, pero también son interesantes al ser microorganismos propios de aguas no potables.
• Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con
colonias rojas, pero también indican contaminación fecal del agua. AGAR CHROMOCULT AGAR SALMONELLA - SHIGELLA AGAR SALMONELLA - SHIGELLA • El agar Salmonella-Shigella es una modificación del agar citrato desoxicolato descrito por Leifson. Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de inhibición de los microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y Shigella, que inhibe por contenido de sales biliares, verde brillante y citratos. • La diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante la incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan lactosa producen ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, propicia la formación de colonias de color rojo. Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. • El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las colonias con centros de color negro. . AGAR MAC CONKEY AGAR MAC CONKEY
• El agar MacConkey es un medio de cultivo
selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos en base a la fermentación de la lactosa. El cristal violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos grampositivos, lo que permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro. AGAR MAC CONKEY
• Los ingredientes necesarios para este medio son los
siguientes: sales biliares (medio inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus), colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de bacterias Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos que fermenten la lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.